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毕赤酵母

毕赤酵母的相关文献在1988年到2022年内共计2843篇,主要集中在分子生物学、畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂、基础医学 等领域,其中期刊论文1781篇、会议论文190篇、专利文献12729篇;相关期刊462种,包括生物工程学报、生物技术通报、生物技术通讯等; 相关会议118种,包括中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会、2013中国生物发酵产业年会、2012工业生物过程优化与控制研讨会等;毕赤酵母的相关文献由7614位作者贡献,包括林影、韩双艳、张莉等。

毕赤酵母—发文量

期刊论文>

论文:1781 占比:12.12%

会议论文>

论文:190 占比:1.29%

专利文献>

论文:12729 占比:86.59%

总计:14700篇

毕赤酵母—发文趋势图

毕赤酵母

-研究学者

  • 林影
  • 韩双艳
  • 张莉
  • 郑穗平
  • 叶燕锐
  • 储炬
  • 堵国成
  • 周新莹
  • 陈坚
  • 高敏杰
  • 期刊论文
  • 会议论文
  • 专利文献

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排序:

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作者

    • 牛硕; 朱梅君; 魏子贡
    • 摘要: 利用转座子突变技术构建毕赤酵母菌株突变库,并分离出能够在含雷帕霉素(10 ng/mL)培养基中生长的突变株mut375.通过热不对称交错PCR(TAIL-PCR)获取转座子侧翼序列,对转座子的插入位点进行定位.转座子插入PAS_Chr2-2_0375基因,破坏了其开放阅读框的完整性,将该基因命名为kFPR1.本研究利用同源重组敲除kFPR1基因使毕赤酵母产生了雷帕霉素抗性,回补该基因功能的菌株则不能在含雷帕霉素的培养基上生长.基于kFPR1基因的特性,建立了一种适用于毕赤酵母的无标记基因操作方法.以kFPR1作为反向筛选标记成功构建了表达EGFP的重组菌株并且回收了ZeoR筛选标记,为毕赤酵母的遗传操作提供了新的筛选工具.
    • 杨聪; 郭丽琼; 叶志伟; 邹苑; 余颖豪; 林俊芳
    • 摘要: 谷氨酰胺转氨酶(TGase或TG)是一种可催化蛋白质间形成异肽键,使蛋白质改性的天然酶制剂。本文以蛹虫草基因组为模板,通过PCR扩增得到TGase相似蛋白的基因片段tgM,将其与大肠杆菌-毕赤酵母穿梭表达载体pPIC9K连接,构建重组表达载体pPIC9K-TG,在毕赤酵母中进行表达,实现目的蛋白的胞外分泌表达,结果发酵液中重组TGase的酶活力为100 U/L。本研究为TGase的异源表达及潜在的工业应用提供参考。
    • 冯梦茹; 周化岚; 张建国
    • 摘要: 胶原蛋白是结缔组织中一种重要蛋白质,具有抗皱、抗老化和补钙壮骨的功效,在食品工业中应用广泛。由于胶原蛋白的需求量大,因此利用重组微生物生产胶原蛋白成为近年来的研究热点。该文采用重组有类人胶原蛋白基因的毕赤酵母,通过优化培养基成分,使其在无机盐培养基中表达胶原蛋白。首先,类人胶原蛋白在每24 h补加体积分数1.5%甲醇诱导120 h后的产量可达18.87 mg/L,进而将无机盐培养基中盐浓度降至1/3,有效避免了类人胶原蛋白的水解,也减少了重组毕赤酵母菌株分泌的杂蛋白量。进一步添加1 g/L L-脯氨酸等辅助营养物使类人胶原蛋白的产量提高至40.26 mg/L,为初始类人胶原蛋白表达量的2倍。结果表明,添加氨基酸等氮源能显著提高重组毕赤酵母的类人胶原蛋白分泌量,为重组类人胶原蛋白的发酵生产提供了指导。
    • 杨威; 伍茜; 程建国; 罗燕; 王印; 杨泽晓; 姚学萍
    • 摘要: 干扰素在病毒性疾病的防治上,具有很高的临床应用前景。为了林麝干扰素的研究与应用,使用同源克隆方法首次克隆得到9条林麝干扰素α基因序列,序列全长均为570 bp,编码189个氨基酸,前23个氨基酸为信号肽,具有4个保守的半胱氨酸残基和5个保守的脯氨酸残基。9种亚型之间,核酸序列同源性为97.0%-99.6%,氨基酸序列同源性为93.7%-99.5%。蛋白结构主要由5个α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构与牛和人干扰素α高度相似。结构域预测包含干扰素受体IFNAR结合位点。首次构建了林麝干扰素α表达质粒并成功使用毕赤酵母表达出林麝干扰素α,确定了1%的最佳甲醇诱导浓度与96 h的最佳诱导时间。使用qPCR首次确定了林麝干扰素α对林麝肺成纤维细胞FMD-C1干扰素刺激基因具有转录调控作用,并具有剂量依赖性,调控作用在6 h达到最强。CCK-8法确定了林麝干扰素α可以抑制FMD-C1细胞的增殖,抗增殖作用也具有剂量依赖性。以上结果为林麝干扰素α的抗病毒研究与临床应用提供了理论基础。
    • 杨国帅; 许颖; 詹晓北; 蒋芸; 李志涛; 高敏杰
    • 摘要: 低分子质量黄原胶具有抗氧化、抑菌等特殊生物活性,在食品、农业等领域都有所应用,具有较高的市场价值。黄原胶内切酶的高效表达是酶法水解生产低分子质量黄原胶的关键因素。该研究首次在毕赤酵母GS115中表达来自Microbacterium sp.XT11的黄原胶内切酶,随后对其发酵条件进行了优化,并对重组黄原胶内切酶的酶学性质进行了分析。结果表明,以GAP为启动子的重组毕赤酵母的最佳发酵条件为30°C、pH 6.0、220 r/min、接种量5%,在7-L发酵罐中重组黄原胶内切酶酶活力达到1230 U/L。重组黄原胶内切酶在pH 5.5~7.5、20~45°C下比较稳定,最适作用条件为pH 6.0、40°C。重组黄原胶内切酶可直接作用于黄原胶主链得到分子质量为1400 Da左右的低分子质量黄原胶,为低分子质量黄原胶的工业化生产提供了一个可行的途径。
    • 周紫薇; 项郑昊; 周化岚; 张建国
    • 摘要: 微流控技术已成为目前发酵工程中筛选和表征微生物性能的重要方法。本研究从微流控技术的理论出发,将计算流体力学、颗粒-流体两相流动和牛顿运动定律理论用于粒子追踪模型,建立了毕赤酵母微胶囊收集过程的数学模型。借助仿真软件模拟了毕赤酵母微胶囊的收集过程,设计了微流控芯片中收集器结构,并进行了进一步的数值模型模拟,最后搭建了用于分析毕赤酵母微胶囊的实验平台。本研究为研究毕赤酵母单细胞表达重组蛋白奠定了一定基础。
    • 王玥; 高庆华; 董聪; 罗同阳; 王庆庆
    • 摘要: 吡喃糖氧化酶(pyranose oxidase,PROD,简称P2O)在木质素降解、碳水化合物的生物转化合成中具有重要作用,还应用于生物燃料电池、生物传感器以及临床诊断分析中。本实验室进行了吡喃糖氧化酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究,为以后吡喃糖氧化酶的工业化高效生产提供理论依据。利用生物技术方法,基于毕赤酵母密码子偏好性优化吡喃糖氧化酶基因密码子。通过基因外源表达技术构建吡喃糖氧化酶重组毕赤酵母GS115菌株以实现吡喃糖氧化酶的高效表达,并对重组吡喃糖氧化酶的酶学性质进行研究。优化高产重组菌株的发酵条件,在10 L发酵罐中进行扩大培养。结果显示,吡喃糖氧化酶密码子优化后,其在毕赤酵母中实现了高效表达。在10 L发酵罐经过132 h诱导表达后,酶活达220 U/mL。酶学性质研究发现:重组吡喃糖氧化酶最适作用温度为55°C,在不超过60°C条件下热稳定性良好。该酶作用的最适pH为6.5,在pH 5-9条件下,其相对酶活高于50%。P2O在较广的pH范围内均表现出较高的稳定性,尤其是对碱性条件有较强的耐性。金属离子Cu^(2+)对酶活的抑制作用较大。底物特异性检测结果显示,该重组酶的最适底物为D-葡萄糖。该研究成功构建了密码子优化的吡喃糖氧化酶的重组表达质粒pPIC9K-P2O,并在毕赤酵母中实现了高效表达。
    • 陈硕昌; 仝秋平; 郭晓磊; 朱萍; 蒙健宗; 杨辉
    • 摘要: 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术对重组毕赤酵母基因组中左聚糖蔗糖酶基因(SacB)的拷贝数及信使核糖核酸(mRNA)转录水平进行检测分析,并用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定菌株不同诱导时间下左聚糖蔗糖酶水解活力。结果表明,在BMMY液体培养基中经甲醇诱导24 h时,样品转录水平皆达到最大值,此时多拷贝菌株转录水平(2.13)为单拷贝菌株(0.42)的5.1倍;左聚糖蔗糖酶活力在甲醇诱导24 h后均随诱导时间不断上升,多拷贝菌株酶活(13.96 U/mL)较单拷贝菌株(5.48 U/mL)提高1.5倍。重组毕赤酵母整合的左聚糖蔗糖酶基因在1~3个拷贝范围内,随着拷贝数增加,多拷贝菌株较单拷贝菌株的mRNA转录水平及相应的蛋白表达量均显著增加(P<0.05),说明毕赤酵母是表达基因SacB的良好宿主。
    • 尹义旭; 汤伟; 咸洪泉
    • 摘要: 几丁质酶是催化降解几丁质的水解酶,在防治植物真菌病害与虫害方面的应用越来越广泛,是一种重要的生防蛋白。棘孢木霉TD3104是一株优良的植物病害生防菌,几丁质酶在抑菌防病过程中发挥重要作用。为克隆表达棘孢木霉TD3104几丁质酶基因gene02514,明确酶学性质和抑菌活性,利用毕赤酵母表达系统对目的蛋白进行表达,并通过SephadexG-100凝胶进行纯化,对序列进行分析并研究其酶学性质及进行体外抑菌试验。本研究成功地构建了pPIC9K/gene02524重组载体,并且经过比对发现其包含GH18家族的特征氨基酸序列,获得了毕赤酵母转几丁质酶基因工程菌,表达的重组几丁质酶表观分子量44.4 ku,K_(m)=2.0482 g/L,V_(max)=0.6355×10^(3)μmol/(L·min),最适反应温度为50°C,最适pH值为5.0,在pH值为3.5时稳定性最高;金属离子Cu^(2+)、Hg^(2+)可强烈抑制酶活性;可抑制金黄壳囊孢菌等病原真菌的生长。研究结果为解析棘孢木霉几丁质酶在生防中的作用及功能奠定了基础,并为植物病虫害的防治提供了新的基因资源。
    • 韩铭海; 王未鲜; 于志海
    • 摘要: 毕赤酵母是目前工业上生产重组蛋白最常用的宿主之一,而蛋白高水平表达技术一直是该领域的研究热点。目前,成熟的分子生物学技术手段使改造N-糖基化修饰位点成为一种操作性较强的提高目标蛋白表达水平的策略。综述了毕赤酵母中蛋白N-糖链的结构、其介导的CNX循环和对蛋白折叠的作用以及通过N-糖基化修饰位点改造促进蛋白表达的应用研究。
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