实时荧光定量聚合酶链式反应

摘要： 目的:分析间接免疫荧光法与实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)在诊断EB病毒(EBV)相关传染性单核细胞增多症(EBV–IM)患儿中的价值。方法:选取宁德市蕉城区医院2019年4月至2021年4月期间收治的94例疑似EBV–IM患儿为研究对象,所有患儿均接受间接免疫荧光法与qPCR检测。以临床诊断+实验室诊断结果为金标准,比较间接免疫荧光法与qPCR联合以及单独检测对EBV–IM的诊断价值。结果:94例疑似EBV–IM患儿中,金标准检测出阳性90例,阳性检出率为95.74 %,阴性4例,阴性检出率为4.26 %。与金标准比较,两种方法联合的一致性最好(κ=0.883,P0.05)。结论:间接免疫荧光法与qPCR对EBV–IM患儿均具有一定的诊断价值,而两种方式联合检测对EBV–IM的诊断价值较单一检测更高,且检测结果不受患儿性别影响。

摘要： 目的探析实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)联合酶联免疫吸附试验(ELISA)在乙型肝炎检测中的临床价值。方法180例乙型肝炎患者,根据检测方法不同分为对照1组(59例)、对照2组(59例)及观察组(62例)。对照1组行FQ-PCR检测,对照2组行ELISA检测,观察组行FQ-PCR+ELISA检测。对比三组检测结果。结果观察组诊断乙型肝炎的准确率为96.77%,对照1组诊断乙型肝炎的准确率为84.75%,对照2组诊断乙型肝炎的准确率为81.36%。观察组诊断乙型肝炎的准确率明显高于对照1组与对照2组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论相对于单一检测手段,FQ-PCR联合ELISA在乙型肝炎检测时诊断准确率更高,可为临床治疗提供准确依据,具有临床应用价值。

摘要： 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术对重组毕赤酵母基因组中左聚糖蔗糖酶基因(SacB)的拷贝数及信使核糖核酸(mRNA)转录水平进行检测分析,并用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定菌株不同诱导时间下左聚糖蔗糖酶水解活力。结果表明,在BMMY液体培养基中经甲醇诱导24 h时,样品转录水平皆达到最大值,此时多拷贝菌株转录水平(2.13)为单拷贝菌株(0.42)的5.1倍;左聚糖蔗糖酶活力在甲醇诱导24 h后均随诱导时间不断上升,多拷贝菌株酶活(13.96 U/mL)较单拷贝菌株(5.48 U/mL)提高1.5倍。重组毕赤酵母整合的左聚糖蔗糖酶基因在1~3个拷贝范围内,随着拷贝数增加,多拷贝菌株较单拷贝菌株的mRNA转录水平及相应的蛋白表达量均显著增加(P<0.05),说明毕赤酵母是表达基因SacB的良好宿主。

摘要： 目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。

摘要： 为研究不同生长阶段小尾寒羊股二头肌中肌球蛋白与肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)异构体相关基因的内在变化规律,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对自然放牧条件下1~18月龄小尾寒羊股二头肌MyHC进行分离,测定其相关基因的相对表达量。结果表明:小尾寒羊股二头肌中肌球蛋白含量总体呈现上升趋势,9月龄达到最大值;MyHCⅠ基因相对表达量随着月龄的增加呈现下降趋势,MyHCⅡa基因相对表达量与月龄呈正相关,MyHCⅡb基因相对表达量总体呈现先减后增的趋势,MyHCⅡx基因相对表达量9月龄最低,12月龄最高;MyHCⅠ基因相对表达量在6~9月龄变化较大,说明6~9月龄生长变化较快,9~12月龄变化较小,说明9~12月龄生长缓慢。

摘要： 目的:分析并比较用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法与痰涂片法检测结核分枝杆菌的效果。方法:选取麻城市人民医院2020年1月至2021年6月期间收治的肺结核患者200例作为研究对象。在这些患者入院后分别采用实时荧光定量PCR法、痰涂片法与痰培养法对其进行结核分枝杆菌检测,以痰培养法的检测结果作为参考依据,比较用实时荧光定量PCR法、痰涂片法检测结核分枝杆菌的效能(包括灵敏度、特异度和准确率)。结果:用实时荧光定量PCR法和痰培养法对200例患者进行结核分枝杆菌检测的阳性率均高于痰涂片法,差异有统计学意义(P0.05)。用实时荧光定量PCR法对200例患者进行结核分枝杆菌检测的灵敏度、特异度和准确率均高于痰涂片法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与用痰涂片法检测结核分枝杆菌相比,用实时荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌的灵敏度、特异度和准确率均更高,与痰培养法的一致性更好,更适用于结核病的早期筛查与诊断,值得在临床上推广应用。

摘要： 目的前期研究发现脾虚证患者的肠道菌群发生显著变化,针对其中丰度明显改变的艾克曼菌ATCC BAA-835(Akkermansia muciniphila ATCC BAA-835,AKK)和单形拟杆菌(Bacteroides uniformis,BU)建立实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,QPCR)检测方法,通过体外孵育和体内动物实验考察补中益气汤对其的影响。方法采用模拟人体胃肠道代谢方法,将补中益气汤水煎剂与人工胃/肠液孵育后,与健康人群/脾虚证患者粪便共孵育,将粪便样品、24 h孵育样品进行微生物多样性测序;筛选AKK和BU特异性引物并建立其QPCR分析方法,检测补中益气汤与健康人群/脾虚证患者粪便共孵育后AKK和BU菌不同时间点的动态变化;采用番泻叶灌胃塑造脾虚证小鼠模型并给予补中益气汤治疗,考察补中益气汤对脾虚证小鼠体内AKK和BU菌含量的影响。结果测序结果表明,健康人群和脾虚证患者肠道菌群结构存在明显差异,补中益气汤对粪便孵育液中肠道微生物具有一定的调节作用。方法学考察结果表明,建立的AKK和BU的QPCR定量检测方法重复性、稳定性良好,定量结果可靠。补中益气汤体外与健康人群/脾虚证患者粪便共孵育,其中AKK和BU呈现动态变化过程,其对健康人群/脾虚证患者粪便中AKK和BU均具有一定影响。孵育24 h,补中益气汤对脾虚证患者粪便样本中的AKK菌无显著影响,但可显著降低脾虚证患者粪便中BU菌含量(P<0.01)并恢复至健康人的水平。体内动物实验结果表明,补中益气汤体内可显著增加脾虚证小鼠粪便样本中AKK菌含量(P<0.01)并降低BU菌含量(P<0.01)。结论补中益气汤体内外可直接调节BU菌含量,降低BU菌含量可能是其治疗脾虚证的分子作用机制之一。

摘要： 目的目前临床上尚缺乏一种准确、高效检测鲍曼不动杆菌(AB)的临床手段。文中探讨实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)快速检测重症监护室(ICU)下呼吸道感染患者痰标本中AB的临床价值。方法回顾性分析2018年1月至2020年12月南京市第一医院ICU痰培养结果为AB患者临床资料及耐药情况。以痰培养结果为参照,分析qPCR的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值,计算ROC曲线下面积以评价诊断效能。结果本研究共获得376株AB,对头孢他啶等3种抗菌药物的耐药率均≥80%,对环丙沙星、亚胺培南等4种抗菌药物的耐药率均接近80%;而对多粘菌素B的敏感率高达87.5%,对替加环素及复方新诺明的敏感率也均超过50%。qPCR检测痰标本AB的阳性率明显高于痰培养(15.90%vs 7.67%,P=0.000)。以痰培养结果作为对照,qPCR检测的灵敏度为88.06%,特异度为90.09%,阳性预测值为42.45%,阴性预测值达到98.91%,ROC曲线下面积为0.795。结论qPCR可快速检测ICU下呼吸道感染患者的AB,及时调整用药有助于改善预后。

摘要： 目的探讨微小膜壳绦虫(H.nana)感染对美国癌症研究所(ICR)小鼠小肠中干细胞相关基因信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。方法取野生小鼠小肠内获取的H.nana虫体于显微镜下观察其形态,同时利用保守引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增细胞色素C氧化酶亚基I基因(COX 1)部分序列(PCOX 1),并与GenBank中记录的H.nana的COX 1参考株核苷酸序列进行同源性比对分析;60只ICR雌鼠随机均分为实验组(灌胃H.nana虫卵500个)和对照组(灌胃等量生理盐水),灌胃处理后1~10 d分别取2组小鼠距离回盲部6~8 cm处小肠肠段,观察2组小鼠小肠组织内虫体检获情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测2组小鼠小肠组织内G蛋白偶联受体5基因(Lgr 5)、多梳复合蛋白基因(Bmi 1)、武藏RNA结合蛋白基因(Msi 1)及淋巴细胞抗原6复合物基因(Ly 6 a)的mRNA相对表达量。结果野生小鼠体内获取的虫体符合H.nana的形态学特征,PCOX 1基因与GenBank中记录的H.nana的COX 1参考株核苷酸序列同源性为99%;qRT-PCR结果显示H.nana发育的似囊尾蚴阶段Lgr 5和Bmi 1表达上调、Ly 6 a表达下调(P<0.05或P<0.01),成虫阶段Lgr 5和Bmi 1表达下调、Ly 6 a上调(P<0.05或P<0.01),Msi 1在虫体发育的似囊尾蚴阶段和成虫阶段表达均下调(P<0.05)。结论H.nana感染可明显影响ICR小鼠Lgr 5、Bmi 1、Msi 1及Ly 6 a基因的mRNA水平,基因表达差异主要分2个阶段,分别对应H.nana虫体发育的似囊尾蚴阶段和成虫阶段。

摘要： 目的 探讨微小膜壳绦虫(H.nana)感染对美国癌症研究所(ICR)小鼠小肠中干细胞相关基因信使核糖核酸(mRNA)表达的影响.方法 取野生小鼠小肠内获取的H.nana虫体于显微镜下观察其形态,同时利用保守引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增细胞色素C氧化酶亚基I基因(COX1)部分序列(PCOX1),并与GenBank中记录的H.nana的COX1参考株核苷酸序列进行同源性比对分析;60只ICR雌鼠随机均分为实验组(灌胃H.nana虫卵500个)和对照组(灌胃等量生理盐水),灌胃处理后1～10 d分别取2组小鼠距离回盲部6～8 cm处小肠肠段,观察2组小鼠小肠组织内虫体检获情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测2组小鼠小肠组织内G蛋白偶联受体5基因(Lgr5)、多梳复合蛋白基因(Bmi1)、武藏RNA结合蛋白基因(Msi1)及淋巴细胞抗原6复合物基因(Ly6a)的mRNA相对表达量.结果 野生小鼠体内获取的虫体符合H.nana的形态学特征,PCOX1基因与GenBank中记录的H.nana的COX1参考株核苷酸序列同源性为99％;qRT-PCR结果显示H.nana发育的似囊尾蚴阶段Lgr5和Bmi1表达上调、Ly6 a表达下调(P<0.05或P<0.01),成虫阶段Lgr5和Bmi1表达下调、Ly6 a上调(P<0.05或P<0.01),Msi1在虫体发育的似囊尾蚴阶段和成虫阶段表达均下调(P<0.05).结论 H.nana感染可明显影响ICR小鼠Lgr5、Bmi1、Msi1及Ly6a基因的mRNA水平,基因表达差异主要分2个阶段,分别对应H.nana虫体发育的似囊尾蚴阶段和成虫阶段.

摘要： 目的：建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应方法,快速定量检定临床标本中的白色念珠菌并进行抗真菌药物敏感性分析. 方法：针对白色念珠菌内转录间隔区和26S核糖体核糖核酸基因设计特异性引物和探针,构建含有上述基因的标准质粒进行定量分析,建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,评价其特异性、灵敏度、重复性和稳定性.对1185份临床标本中的白色念珠菌进行检测,同时进行真菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定.对所有真菌分离株进行抗真菌药物敏感性试验. 结果：研究结果显示,建立的白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法专属性强,能准确检出白色念珠菌,而与其他念珠菌属真菌、非念珠菌属真菌、细菌、寄生虫和病毒均无交叉反应,特异性为100％.该技术灵敏度高,能精确定量检测白色念珠菌DNA线性范围达11个数量级,白色念珠菌最低检测限度为5个菌落形成单位.该方法重复性非常好,组内和组间相对标准偏差均小于2％.测试中相关系数、斜率和效率没有显著变化,表明该方法稳定性好,精密度高.将其成功应用于临床标本中白色念珠菌载量的定量检测,用普通PCR和基因克隆测序分析进行了确证.整个检测过程可在2h内完成,可以用作定量分析快速诊断方法.应用TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应从1185份临床标本中检出94份白色念珠菌阳性标本,真菌培养获得8株存活的白色念珠菌,抗真菌药物敏感性试验分析结果显示：这些白色念珠菌分离株对制霉菌素、咪康唑、克霉唑、益康唑、氟康唑、沃尔康唑均敏感,但对两性霉素B、酮康唑、特比萘芬、氟胞嘧啶已经产生了耐药性. 结论：本研究新开发评价的TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应,可以快速简易,精准稳定,特异灵敏地定量检定白色念珠菌,适用于动物源性产品中白色念珠菌检测、食品药品生物制品医疗器械安全检查、环境监测、流行病学调查.

摘要： 本文通过介绍实时荧光定量聚合酶链式反应、原位聚合酶链式反应、多重聚合酶链式反应三种PCR技术,以及它们在医学领域的应用及前景,证明PCR技术在未来基础医学理论研究和医学临床实践中,将起到不可估量的作用.随着PCR技术在医学领域的广泛应用,必将极大促进医学事业的发展.

摘要： 目的：建立实时荧光定量Alu-PCR方法,检测SIV/SHIV感染恒河猴体内整合的前病毒DNA. 方法：提取SIV/SHIV感染猴PBMCs中的DNA,Alu-PCR扩增DNA上病毒LTR U3区域内长度为188bp的片段,将该片段与pGEM T载体连接,构建pGEM-SIV LTR188质粒.扩增纯化质粒并进行定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR的标准品. 结果：建立的质粒标准品可精确定量到10copies/μL,利用该方法对4只SIV/SHIV感染猴PBMCs中整合型前病毒DNA进行检测,阳性率为100％,高于Alu-PCR62.5％的阳性率. 结论：TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR方法能够定量检测整合入宿主基因组中的前病毒DNA,灵敏度高,可以用于评价SIV/SHIV潜伏库的大小.

摘要： 目的：建立实时荧光定量Alu-PCR方法,检测SIV/SHIV感染恒河猴体内整合的前病毒DNA. 方法：提取SIV/SHIV感染猴PBMCs中的DNA,Alu-PCR扩增DNA上病毒LTR U3区域内长度为188bp的片段,将该片段与pGEM T载体连接,构建pGEM-SIV LTR188质粒.扩增纯化质粒并进行定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR的标准品. 结果：建立的质粒标准品可精确定量到10copies/μL,利用该方法对4只SIV/SHIV感染猴PBMCs中整合型前病毒DNA进行检测,阳性率为100％,高于Alu-PCR62.5％的阳性率. 结论：TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR方法能够定量检测整合入宿主基因组中的前病毒DNA,灵敏度高,可以用于评价SIV/SHIV潜伏库的大小.

摘要： 目的：建立实时荧光定量Alu-PCR方法,检测SIV/SHIV感染恒河猴体内整合的前病毒DNA. 方法：提取SIV/SHIV感染猴PBMCs中的DNA,Alu-PCR扩增DNA上病毒LTR U3区域内长度为188bp的片段,将该片段与pGEM T载体连接,构建pGEM-SIV LTR188质粒.扩增纯化质粒并进行定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR的标准品. 结果：建立的质粒标准品可精确定量到10copies/μL,利用该方法对4只SIV/SHIV感染猴PBMCs中整合型前病毒DNA进行检测,阳性率为100％,高于Alu-PCR62.5％的阳性率. 结论：TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR方法能够定量检测整合入宿主基因组中的前病毒DNA,灵敏度高,可以用于评价SIV/SHIV潜伏库的大小.

摘要： 目的：建立实时荧光定量Alu-PCR方法,检测SIV/SHIV感染恒河猴体内整合的前病毒DNA. 方法：提取SIV/SHIV感染猴PBMCs中的DNA,Alu-PCR扩增DNA上病毒LTR U3区域内长度为188bp的片段,将该片段与pGEM T载体连接,构建pGEM-SIV LTR188质粒.扩增纯化质粒并进行定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR的标准品. 结果：建立的质粒标准品可精确定量到10copies/μL,利用该方法对4只SIV/SHIV感染猴PBMCs中整合型前病毒DNA进行检测,阳性率为100％,高于Alu-PCR62.5％的阳性率. 结论：TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR方法能够定量检测整合入宿主基因组中的前病毒DNA,灵敏度高,可以用于评价SIV/SHIV潜伏库的大小.

摘要： 目的：建立实时荧光定量Alu-PCR方法,检测SIV/SHIV感染恒河猴体内整合的前病毒DNA. 方法：提取SIV/SHIV感染猴PBMCs中的DNA,Alu-PCR扩增DNA上病毒LTR U3区域内长度为188bp的片段,将该片段与pGEM T载体连接,构建pGEM-SIV LTR188质粒.扩增纯化质粒并进行定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR的标准品. 结果：建立的质粒标准品可精确定量到10copies/μL,利用该方法对4只SIV/SHIV感染猴PBMCs中整合型前病毒DNA进行检测,阳性率为100％,高于Alu-PCR62.5％的阳性率. 结论：TaqMan-MGB探针实时荧光定量Alu-PCR方法能够定量检测整合入宿主基因组中的前病毒DNA,灵敏度高,可以用于评价SIV/SHIV潜伏库的大小.

摘要： 目的：建立舒伯特气单胞菌的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法,用于水产养殖过程中病害早期舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)的快速检测. 方法：根据已经发表的舒伯特气单胞菌的rpoD基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价.用建立的方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量进行检测. 结果：成功建立舒伯特气单胞菌TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法,该方法标准曲线有较好的线性关系;最低可以检测到18copies·μL-1rpoD基因拷贝,30个平行样品重复性试验组内变异系数为0.44％;对其他10种水产养殖常见细菌均无扩增反应.应用该方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量检测结果与活菌计数结果有较好的一致性. 结论：建立的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于养殖水环境和鱼体组织中舒伯特气单胞菌的检测.

摘要： 目的：建立舒伯特气单胞菌的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法,用于水产养殖过程中病害早期舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)的快速检测. 方法：根据已经发表的舒伯特气单胞菌的rpoD基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价.用建立的方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量进行检测. 结果：成功建立舒伯特气单胞菌TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法,该方法标准曲线有较好的线性关系;最低可以检测到18copies·μL-1rpoD基因拷贝,30个平行样品重复性试验组内变异系数为0.44％;对其他10种水产养殖常见细菌均无扩增反应.应用该方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量检测结果与活菌计数结果有较好的一致性. 结论：建立的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于养殖水环境和鱼体组织中舒伯特气单胞菌的检测.

摘要： 目的：建立舒伯特气单胞菌的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法,用于水产养殖过程中病害早期舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)的快速检测. 方法：根据已经发表的舒伯特气单胞菌的rpoD基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价.用建立的方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量进行检测. 结果：成功建立舒伯特气单胞菌TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法,该方法标准曲线有较好的线性关系;最低可以检测到18copies·μL-1rpoD基因拷贝,30个平行样品重复性试验组内变异系数为0.44％;对其他10种水产养殖常见细菌均无扩增反应.应用该方法对池塘水和鱼体组织中的舒伯特气单胞菌含量检测结果与活菌计数结果有较好的一致性. 结论：建立的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于养殖水环境和鱼体组织中舒伯特气单胞菌的检测.

摘要： 本发明的一实施例涉及一种反复配置有图案加热器的聚合酶链式反应热块及包括其的聚合酶链式反应装置，由此，在反复配置有加热器的热块中，可防止从个别加热器中发生的放射形热分布及由此引起的相邻加热器之间不均匀的热重叠，来相当地改善聚合酶链式反应收率，且由于不需要额外的温度调节单元，因而可相当地贡献于装置的小型化及集成化，进而，可利用反复配置有加热单元的热块及板形状的聚合酶链式反应部，来同时且迅速扩增多个核酸样品，并测定连续的光学信号或电化学信号，来实时确认核酸扩增过程。

摘要： 本发明涉及生物实验设备技术领域，公开了一种荧光定量聚合酶链式反应384孔PCR板坐标加样盒。本发明中，包括：加样盒，加样盒为一个仅有四个侧面的长方体形状，加样盒与384孔PCR板大小相匹配，384孔PCR板可放置在加样盒内，在加样盒上设有可移动的横向标杆和可移动的纵向标杆，在横向标杆上带有1至24的数字标示，在纵向标杆上带有A至P的字母标示，其中，每一个数字及每一个字母都能与384孔PCR板上的某个微孔相对应；底座，用于放置384孔PCR板和加样盒，底座与加样盒可分离。可以实现PCR板上每个微孔的准确定位，及时跟踪加样微孔的位置，而且可以随时停止在某个位置而不会出错。

摘要： 本发明涉及一种便携式实时PCR装置及利用便携式实时PCR装置的PCR测量方法，根据本发明的实施例的便携式实时PCR装置包括：底座部，形成有设置空间；多个下部加热部，设置于所述底座部的所述设置空间中；下部光学测量部，设置于所述底座部，并布置在与所述下部加热部不同的位置，提供测量光或接收所述测量光；腔室组件，包括分别安置于所述下部加热部及所述下部光学测量部的多个腔室部，所述腔室部配备为能够从任意一个所述下部加热部移动到另一个所述下部加热部或所述下部光学测量部，其中，所述腔室部包括：腔室部主体，用于收容腔室单元，在所述腔室单元形成有在内部收容检体单元的检体单元收容空间，其中，所述腔室单元包括：腔室单元主体，形成有所述检体单元收容空间；及盖单元，从上方遮挡所述腔室单元主体的所述收容空间，其中，所述检体单元的作为宽度对比高度的比例的纵横比形成为大于0且小于1。

摘要： 本发明提供一种能够高效地进行聚合酶链式反应(PCR)的PCR装置以及PCR方法。上述PCR装置是如下的装置：向容器(30)填充比重比反应液(60)小且不与反应液(60)混和的液体(50)，控制部以容器(30)的上方部分的液体(50)成为第一温度，下方部分的液体(50)成为比第一温度低的第二温度的方式驱动控制第一加热部(151)和第二加热部(152)，以在液体(50)中成为球状的反应液(60)通过基于电场的库伦力在液体(50)的上方部分与下方部分之间反复进行上下移动的方式驱动控制电场产生部，在下侧电极(10)与上侧电极(20)之间产生电场。

摘要： 本发明涉及一种用于聚合酶链式反应的检测机构及聚合酶链式反应装置，其中检测机构包括至少一个激发模块组，每个激发模块组包括两个激发模块，激发模块组能够提供两种波长的激发光；激发光纤，与激发模块组连接，激发光纤能够将激发光传输到至少一个反应试管，每个反应试管均接收两种波长的激发光；接收光纤，能够收集并传输反应试管的荧光信号；至少一个接收模块组，与接收光纤连接，每个接收模块组包括两个接收模块，以分别接收来自同一个反应试管的两种波长的荧光信号，并将荧光信号转换为电信号输出；检测机构分时地对所述反应试管进行检测，并复用所述接收模块组获得输出结果。

摘要： 本发明的一实施例涉及一种反复配置有图案加热器的聚合酶链式反应热块及包括其的聚合酶链式反应装置，由此，在反复配置有加热器的热块中，可防止从个别加热器中发生的放射形热分布及由此引起的相邻加热器之间不均匀的热重叠，来相当地改善聚合酶链式反应收率，且由于不需要额外的温度调节单元，因而可相当地贡献于装置的小型化及集成化，进而，可利用反复配置有加热单元的热块及板形状的聚合酶链式反应部，来同时且迅速扩增多个核酸样品，并测定连续的光学信号或电化学信号，来实时确认核酸扩增过程。

摘要： 本发明公开了一步法荧光探针实时定量逆转录聚合酶链式反应定量检测汉滩病毒载量的方法，该方法利用汉滩病毒的体外转录S全长片段作为定量检测标准品，通过检测病毒基因序列引物及探针的设计及方法的选择，建立一步法荧光探针实时定量逆转录聚合酶链式反应方法，来定量检测肾综合征出血热患者血浆或其他体液及组织的汉滩病毒载量。与常规PCR检测方法相比，具有标本检测操作步骤少，灵敏度高，并且具有良好的线性关系，实验表明本发明检测方法具有良好的特异性和重复性，将为肾综合征出血热的科学研究与防治提供有力工具。

摘要： 本申请提供了一种检测装置，包括：具有承载通孔的加热组件，承载通孔用于承载待测试管，加热组件用于从待测试管的侧壁给待测试管内的试剂提供热量；以及光学检测组件，用于从待测试管底部检测待测试管内的试剂。加热组件上的承载通孔承载待测试管时未完全包覆待测试管底部，使得加热组件加热待测试管的侧壁的同时将待测试管底部暴露出来，从而使得光学检测组件直接从待测试管底部检测待测试管内的试剂。光学检测组件距离真实反应区域近，检测光路短，荧光效果强，检测灵敏度高。此外，也由于光学检测组件从底部检测，无需在加热组件侧面开口，避免侧面开口影响加热和制冷的效率与均匀性导致的检测效率差的问题。

摘要： 本申请实施例提供了一种数字聚合酶链式反应芯片聚合酶链式反应芯片及其制备方法和数字聚合酶链式反应装置，以解决现有聚合酶链式反应芯片加工工艺复杂、操作复杂、容易产生气泡、以及使用起来工艺成本高的技术问题。该数字聚合酶链式反应芯片包括：第一功能层，所述第一功能层的表面构造为对聚合酶链式反应溶液具有排斥性；以及多个第二功能区域，分别设置在所述第一功能层的表面，构造为对所述聚合酶链式反应溶液具有亲和性。

摘要： 本实用新型属于生命科学实验技术领域，具体涉及一种实时荧光定量聚合酶链式反应孔板加样定位坐标系统，包括：孔板和用于固定孔板的固定装置，所述固定装置包括一透明玻璃底板，在透明玻璃底板上设置有塑料固定架，所述塑料固定架通过卡扣或卡槽固定孔板，在所述透明玻璃底板下方设置定位坐标移动装置，定位坐标移动装置的坐标臂上设置点状红色坐标点，所述定位坐标移动装置通过软线和直线模组连接脚踏坐标控制系统。本实用新型通过脚踏控制系统控制坐标点移动，准确定位加样孔位置。本实用新型能解决传统PCR实验过程中串孔，及操作人员视觉疲劳等问题，并可显著提高加样效率及准确率。