几丁质酶

摘要： 丰年虾是一种小型甲壳类动物,孵化后的幼虫是水产动物的优质饵料,残留的卵壳则作为废弃物处理。然而丰年虾卵壳含有丰富的蛋白质和几丁质,具有极大的应用潜力。为了从丰年虾卵壳中制备几丁寡糖,选择了水解产物分布宽泛和含有几丁质结合域的维氏气单胞菌来源的几丁质酶ChiB565,将其在毕赤酵母Pichia pastoris中进行重组表达,对其酶学性质和高密度发酵条件进行研究后,建立了以中性蛋白酶和重组几丁质酶ChiB565为主协同处理丰年虾卵壳以制备几丁寡糖的绿色工艺。结果显示,重组菌发酵的最高酶活为13.2 U/mL,是摇瓶发酵酶活的3.88倍;当先以中性蛋白酶(30 mg/g(以底物质量计),4 h)处理丰年虾卵壳以脱除蛋白质,再用重组几丁质酶ChiB565(40 U/g(以底物质量计),5 h)来水解几丁质时,水解产物主要为几丁二糖到几丁四糖,伴随少量几丁五糖和几丁六糖,且水解产物对DPPH自由基和ABTS自由基清除率分别为59.94%和53.15%。上述研究表明以丰年虾卵壳为底物采用生物酶法制备几丁寡糖相较于传统化学法回收率更高,时间更短。该研究为几丁寡糖的工业化制备奠定了重要基础。

摘要： 【目的】几丁质是昆虫外骨骼和围食膜的主要成分,其合成始于海藻糖酶(trehalase,TRE),终于几丁质合成酶(chitin synthase,CHS),蜕皮与外表皮重塑过程则需要依靠几丁质酶(chitinase,CHT)完成。本研究通过注射3种新型化合物,检测草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)体内海藻糖酶和几丁质酶活性、相关基因表达量并观察其生长发育,验证新型化合物对海藻糖酶及几丁质酶的抑制效果,对效果显著的化合物进行筛选,探究其调控草地贪夜蛾生长发育的机理。【方法】利用显微注射法向草地贪夜蛾3龄幼虫分别注射丁烯内酯类化合物ZK-I-21、ZK-I-23和胡椒碱类似物ZK-PI-4。注射后48 h检测其海藻糖酶活性、几丁质酶活性及相关糖含量的变化情况,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)在分子水平上测定4个关键基因(SfTRE1、SfTRE2、SfCHS2、SfCHT)的相对表达量;观察注射后草地贪夜蛾幼虫至成虫期间的表型变化,记录发育过程中的死亡率及畸形情况。【结果】与对照组相比,注射ZK-I-21和ZK-PI-4后草地贪夜蛾膜结合型海藻糖酶活性分别为极显著下降(P<0.01)和显著下降(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,注射ZK-I-21后SfTRE1表达量极显著上升,SfCHT表达量极显著下降;注射ZK-I-23后SfTRE1表达量极显著下降,SfCHT表达量极显著上升;注射ZK-PI-4后SfCHT表达量极显著下降。发育历期观察结果显示,ZK-I-21使草地贪夜蛾6龄幼虫发育历期极显著延长,同时蛹重变轻、蛹长变短;ZK-I-23使5龄和6龄幼虫长度显著缩短;ZK-PI-4使成虫羽化率显著降低。3种抑制剂均可紊乱草地贪夜蛾的海藻糖代谢进而紊乱几丁质代谢,造成草地贪夜蛾蜕皮困难甚至死亡。【结论】ZK-I-21与ZK-PI-4是膜结合型海藻糖酶抑制化合物,ZK-I-23可抑制可溶性海藻糖酶基因的表达,3种化合物均通过影响海藻糖代谢过程进而导致几丁质代谢的紊乱,导致昆虫蜕皮困难、畸形、生长发育受影响。以上结果可为将来利用新型抑制剂调控害虫生长发育从而防控害虫提供理论依据,为绿色、高效杀虫剂的研发提供支持。

摘要： 为了提高分离自酸橙果实中的一株内生细菌Bacillus thuringiensis Bt028产几丁质酶的性能。采用单因素实验方法考察了培养基组成和发酵条件对该菌株产几丁质酶的影响,并在此基础上采用响应面方法对该菌株产几丁质酶的摇瓶发酵条件进行了优化。单因素实验结果表明胶体几丁质浓度、培养温度和初始pH对该菌株产几丁质酶影响明显;响应面试验结果表明,当胶体几丁质浓度为0.8%、酵母粉浓度为1%、初始pH为6.9、接种量3%、装液量为100 mL/250 mL、30°C培养48 h时,该菌株产几丁质酶性能最佳,发酵液中几丁质酶酶活可达10.48 U/mL。研究结果为该菌株几丁质酶的进一步开发与应用奠定了基础。

摘要： 为揭示酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的基本酶学性质,采用离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对菌株Bt028发酵液中的几丁质酶进行分离纯化鉴定,并考察该几丁质酶的最适温度、最适pH、催化动力学参数等性质。结果表明,Bt028菌株发酵液经离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析分离纯化后获得电泳纯几丁质酶比活力为681.78 U/mg,纯化倍数为3.21,回收率15.52%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,几丁质酶的分子质量为65 kDa。酶学性质研究结果表明,该酶的最适反应温度为60°C,最适反应pH为6.5,在温度低于60°C、pH5.5~7.5时有较好的稳定性;Mg^(2+)、Ca^(2+)、Hg^(2+)、Co^(2+)对该酶活力有抑制作用,而Cu^(2+)和Fe^(3+)有一定的促进作用;低浓度的甲醇、乙醇、正丙醇和二甲亚砜使酶的活性增加,但当浓度继续增大,反而会抑制酶的活性;丙酮对几丁质酶有激活作用,而甲醛对几丁质酶有抑制作用。在最适催化条件下,几丁质酶催化反应的米氏常数Km、最大反应速率Vmax、酶的转换数Kcat分别为29.533 mg/mL、108.696μmoL/(L·min)和0.527/min。研究结果可为该酶的实际应用提供必要的工艺参数。

摘要： 采用平板稀释法从海南橡胶园16份根际土壤中分离获得6株拮抗木霉,通过对峙培养、非挥发性和挥发性物质及几丁质酶活测定,从中筛选出一株对橡胶树胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides和多主棒孢菌Corynespora cassiicola均有较好抑制作用的菌株T008;采用分子生物学鉴定方法,结合形态学特征,明确了拮抗菌T008为棘孢木霉Trichoderma asperellum。通过室内防效测定,棘孢木霉T008预防处理对胶孢炭疽菌和多主棒孢菌的抑制率分别达61.02%和58.60%。该研究结果可作为防治橡胶树炭疽病和棒孢霉落叶病的潜力生防菌株。

摘要： 目的:提高几丁质酶降解几丁质生产几丁寡糖产量。方法:利用基因工程方法对淀粉酶链霉菌几丁质酶进行克隆、原核表达、酶学性质探究,并通过同源建模、催化域氨基酸比对、定点突变等方法探究几丁质酶活性位点。结果:克隆和原核表达后,产酶周期由7 d缩短至24 h,酶活可达132 U/L,较原始菌酶活性(100 U/L)提高了32%。决定几丁质酶活性的氨基酸为催化域的128,130位的天冬氨酸和132位的谷氨酸。结论:对几丁质酶基因克隆表达后,其产酶周期缩短、酶活性提高。

摘要： 几丁质酶是催化降解几丁质的水解酶,在防治植物真菌病害与虫害方面的应用越来越广泛,是一种重要的生防蛋白。棘孢木霉TD3104是一株优良的植物病害生防菌,几丁质酶在抑菌防病过程中发挥重要作用。为克隆表达棘孢木霉TD3104几丁质酶基因gene02514,明确酶学性质和抑菌活性,利用毕赤酵母表达系统对目的蛋白进行表达,并通过SephadexG-100凝胶进行纯化,对序列进行分析并研究其酶学性质及进行体外抑菌试验。本研究成功地构建了pPIC9K/gene02524重组载体,并且经过比对发现其包含GH18家族的特征氨基酸序列,获得了毕赤酵母转几丁质酶基因工程菌,表达的重组几丁质酶表观分子量44.4 ku,K_(m)=2.0482 g/L,V_(max)=0.6355×10^(3)μmol/(L·min),最适反应温度为50°C,最适pH值为5.0,在pH值为3.5时稳定性最高;金属离子Cu^(2+)、Hg^(2+)可强烈抑制酶活性;可抑制金黄壳囊孢菌等病原真菌的生长。研究结果为解析棘孢木霉几丁质酶在生防中的作用及功能奠定了基础,并为植物病虫害的防治提供了新的基因资源。

摘要： 将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的几丁质酶基因blchiA在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中进行重组表达,构建了枯草芽孢杆菌工程菌株(B.subtilisWS9/pHY300PLK-blchiA),发酵上清液的酶活为0.73 U·mL^(-1)。对重组酶BLCHIA的酶学性质进行表征,其在pH 6.0和60°C时表现出最佳活性,比活为3.68 U·mg^(-1)。10 mmol·L^(-1)的铜离子(Cu^(2+))和亚铁离子(Fe^(2+))对其活性有一定促进作用,在pH 5.0~8.0和50~60°C下稳定性较好。此外,研究表明重组酶对脱乙酰度>95%的壳聚糖的催化能力明显优于胶体几丁质,并且水解胶体几丁质和壳聚糖的产物类型具有明显差异,以胶体几丁质为底物主要生成几丁二糖,以壳聚糖为底物可生成聚合度为2~7的壳寡糖。研究获得的重组酶BLCHIA在壳聚糖降黏和制备不同聚合度的低聚糖方面具有良好的应用前景。

摘要： 真菌的细胞壁由几丁质、葡聚糖等成分构成,几丁质酶在真菌细胞壁的重构过程起到重要作用。分析显示,人类条件致病真菌构巢曲霉的几丁质酶B(Aspergillus nidulans Chitinase,AnChiB)属于糖基水解酶家族18(glycosyl hydrolases family 18)二型(type II)几丁质水解酶。结构分析显示,AnChiB的N端18个氨基酸残基为信号肽,蛋白质三维结构为由8个α-螺旋和8个β-折叠组成的(β/α)8 TIM桶状结构,催化位点位于第4个β-折叠上;在第7个α-螺旋和β-折叠间存在一个插入序列,与桶状结构形成一条狭长的底物结合沟,底物结构位点延底物结合沟分布。本研究利用大肠杆菌(Escherichia coli)重组表达系统重组表达并纯化了AnChiB。酶学性质分析显示AnChiB能够水解晶体几丁质,最适pH为5。同时表达量分析显示AnChiB在构巢曲霉生长早期表达量升高,并在48 h达到最高峰。本研究表明AnChiB可能参与构巢曲霉生长过程中的细胞壁重构。

摘要： 建立一种几丁质酶(chitinase,ChiA)和β-N-乙酰基己糖胺酶HJ5N协同催化体系,可实现一步反应降解胶体几丁质制备N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine,GlcNAc),探讨不同因素对双酶协同催化体系的影响和双酶协同作用机制。结果表明,双酶协同催化体系的最适反应温度为30°C,最适反应pH值为6,ChiA与HJ5N添加比(加酶量(U)计)为2∶1。在最优反应条件下以90 g/L虾壳几丁质(胶体几丁质30.3 g/L)为底物时,GlcNAc产量为17.55 mg/mL,收率达到58%。ChiA与HJ5N的协同作用机制主要表现在HJ5N可保证中间产物几丁二糖(GlcNAc)_(2)快速被转化为GlcNAc,有效解除(GlcNAc)_(2)对ChiA的抑制作用,从而实现双酶协同高效催化降解胶体几丁质制备GlcNAc。这为酶法降解胶体几丁质制备GlcNAc的工业应用提供了一种有效策略。

摘要： 苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)除了能够形成杀虫晶体蛋白外,也普遍产生几丁质酶.该酶不但可以增效Bt的杀虫活性,还能有效抑制真菌的生长.研究发现多数Bt菌株的几丁质酶能够组成型表达,又兼具诱导特性,表现出酶合成的多态现象.为了深入研究Bt几丁质酶表达调控机理,选择了几丁质酶诱导表达现象明显的Bti75菌株作为研究对象.研究发现该菌株具有chiA和chiB两种几丁质酶基因.通过5'-RACE技术,我们界定了其chiA和chiB基因的转录起始位点;构建了一系列chiA和chiB调控序列缺失突变子,借此确定了chiA和chiB的核心启动子区;发现chiB上游调控序列中存在dre位点(转录因子YvoA的结合位点)和cre位点(CcpA结合位点)的相似序列,而chiA中仅存在dre位点.

摘要： 几丁质(chitin)又名甲壳素,是乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)单糖脱水缩合通过β-1,4糖苷键聚合而成的大分子多糖.几丁质酶可将大分子的几丁质催化水解成小分子的几丁寡糖或乙酰-D-氨基葡萄糖.通过酶法降解贝壳类废弃物生产几丁寡糖能够实现废弃物的高价值利用,增加经济效益.本文从15个环境样品中筛选得到40株产几丁质酶微生物，获得了25条几丁质酶基因片段，克隆其中两条基因全长，并对这两条基因进行表达和性质研究，研究结果如下:rn 1、从一些特殊环境(如广西北海红树林、大布苏盐碱湖等)采集样品，从中筛选得到40株能够分解几丁质产生透明圈的菌株。经分子生物学鉴定，筛选到的产酶微生物主要有弧菌属(Vibrio Sp.)，产微球茎菌属(Microbulbifer sp.)，气单胞菌属((Aeromonas sp.)等。对几丁质酶粗酶性质研究表明，其最适反应温度普遍在40°C-60°C之间，最适pH在5.0-6.0之间。rn 2、选择酶活力较高或酶学性质特异的菌株，设计简并引物，扩增几丁质酶基因片段，通过测序分析，共得到25条基因片段。序列分析表明这些基因片段与已知序列的一致性在67%-100%。其中，chiG31-2基因的一致性只有67%，属于比较新颖的基因。rn 3、利用TAIL-PCR方法从菌株Vibrio sp. GR52中克隆得到两个几丁质酶全长基因chiGR52-1和chiGR52-2。序列分析表明这两个基因全长分别为2553 bp与2385 bp，各编码850与794个氨基酸。Blastp分析表明这两个几丁质酶蛋白均与Vibrio fluvialis来源的几丁质酶一致性最高，分别为80%和78%属于比较新颖的酶蛋白。rn 4、几丁质酶基因chiGR52-1和chiGR52-2分别在大肠杆菌中实现了异源表达，并利用镍柱对重组蛋白进行纯化。重组蛋白rChiGR52-1最适反应pH和温度分别为6.0和50°C，在45°C以下及pH5.0-10.0稳定性良好：以胶体几丁质为底物时Vmax为4.829 μmol/(mg·min), Km为1.302 mg/mL。 rChiGR52-2最适反应pH和温度分别为6.0和50°C，以胶体几丁质为底物时Vmax为0.9606μmol/(mg·min), Km为2.777 mg/mL。rn 本课题通过从不同环境中筛选产几丁质酶微生物，并进行基因克隆表达以及酶学性质的研究，旨在为寻找新的几丁质酶基因和几丁质酶的开发应用奠定基础。

摘要： 本文以一株产几丁质酶细菌Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1为材料,通过硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose阴离子交换介质和Sephadex G-100分子筛层析柱处理其所产几丁质酶,获取纯度为95％以上的几丁质酶.考查了其部分酶学性质及其稳定性.结果表明,该酶的最适温度为40°C,最适pH值为6.5,温度在50°C以下较为稳定,在pH值为5.0时最稳定,β-巯基乙醇有利于防止或打开形成二硫键增加酶稳定性,EDTA可增加该酶稳定性, Na+,K+对几丁质酶有明显的激活作用,Zn2+,Mn2+,Fe2+,Fe3+对几丁质酶有较大的抑制作用.SYBC-H1几丁质酶可把虾皮水解为N-乙酰氨基葡萄糖,水解率为21.8％.

摘要： 为了了解嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus nematophila几丁质酶的功能,本研究通过PCR技术从X.nematophilaHB310菌株中克隆得到了几丁质酶基因chi70,对该基因进行了生物信息学分析.结果表明该基因全长1947bp,编码648个氨基酸,表达的Chi70蛋白不含信号肽.将chi70基因进行原核表达,获得大量重组Chi70蛋白.采用二硝基水杨酸法( DNS法) 测定重组蛋白酶活, 结果表明几丁质酶Chi70在pH7.0时活性最高, 为8.815U/mL.采用生测方法测定Chi70对苏云金芽孢杆菌HD -73(BtHD-73)的增效活性,结果表明单独使用BtHD-73时对2龄棉铃虫幼虫的LC50为14.80μg/mL,添加Chi70后的BtHD-73对2龄棉铃虫幼虫的LC50为5.66μg/mL,实验结果说明Chi70对Bt具有明显的增效作用.

摘要： 从土壤中筛选到一株产几丁质酶的菌株GWM1.5017，通过形态特征、生理生化及16S rDNA 序列分析对该菌进行鉴定，结果显示菌株GWM1.5017与标准枯草芽孢杆菌形成一个类群,同源性高达99.7%，故将其鉴定为Bacillus subtilis。并对其产酶活性条件进行了初步研究。

摘要： 基于几丁质酶和葡聚糖酶可以通过水解细胞壁的几丁质和葡聚糖,并且二者具有协同增效作用有效的抑制真菌的生长.利用来源于环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)β-1,3-葡聚糖酶编码基因gluW和来源于枯草芽孢杆菌Ap113的几丁质酶编码基因chi113(DQ661650),构建了可通过同源重组转化芽孢杆菌B1301的整合载体pBgl-chi113-glu13-16S,以B1301的16SrDNA作为同源重组指导序列(HRDS),通过双交换将几丁质酶编码基因chi113和β-1,3-葡聚糖酶编码基因gluW整合到B1301染色体中,实现了这两个基因在B1301中稳定遗传和表达.

摘要： 本文关于1.2万单位·L-1青霉素对苹果树β-1,3-葡聚糖酶与几丁质酶活性的影响进行了相关研究。研究结果表明：1.2万单位·L-1青霉素可以有效提高金红苹果树的β-1,3葡聚糖酶和几丁质酶活性,进而增强了苹果树的抗病性。

摘要： 粘孢子虫(Myxosporidia)，粘孢子虫纲的通称，是变温动物体内常见的原生动物类寄生虫，种类很多，其中绝大多数是专性鱼类寄生虫。粘孢子虫的寄生引起的粘孢子虫病给水产养殖业造成了巨大的经济损失。但由于粘孢子虫的成熟孢子外有一层几丁质壳瓣，具有强耐药力，至今也未筛选出一种低廉、安全、效应快的药物，使粘孢子虫病的防治成为一个难题。本实验采用取白天津的水产养殖池塘底泥作为样品，该养殖池塘曾经爆发粘孢子虫病，粘孢子虫病过后该池塘的养殖状况又自行恢复正常，这一现象说明该池塘底泥中可能存在潜在的降解粘孢子虫微生物。由于粘孢子虫的主要抗药能力集中在其几丁质壳瓣上，因此本试验的目的是从这一环境中分离得到具有降解其壳瓣能力的微生物，并克隆相关的几丁质酶基因。试验中首先设计了一对以糖苷水解酶18家族几丁质酶为主要目标的简并引物(GH18F/GH18R)。以池塘底泥微生物的宏基因组DNA为模板进行简并PCR扩增。建立了几丁质酶基因片段文库，并在库中检测到8条450bp左右的几丁质酶基因片段。这些片段与分别18和19家族几丁质酶有较高的同源性。试验结果说明这对几丁质酶简并引物能够有效地从池塘底泥微生物宏基因组中扩增出几丁质酶基因片段，并且所得的基因片段以18家族为主。通过几丁质酶筛选培养基和以粘孢子虫为唯一碳源的培养基两次筛选，确定一株几丁质酶活最高的菌株为潜在的粘孢子虫降解菌Aeromonas veroniistrain CD3。使用简并引物(GH18F/GH18R)从这株菌的基因组中扩增到了相应的几丁质酶片段。用TAIL-PCR的方法获得了该几丁质酶基因ChiCD3的序列全长。该基因全长为3054bp,编码1018个氨基酸和一个终止密码子。几丁质酶ChiCD3具有一长33 aa的信号肽，属于分泌型蛋白。将来源于Aeromonas veronii strain CD3的几丁质酶基因构建了pET-30a(+)-ChiCD3表达载体，转化E.coil BL21(DE3)，并成功在细胞内表达。最适温度测定结果表明，ChiCD3的最适反应温度为60°C。当反应温度为20°C时，ChiCD3的相对酶活为55％。最适pH值为4.0，在pH7.0时的剩余酶活为66％。该酶性质显示其基本符合在养殖环境中应用的条件。试验中测定天津爆发的粘孢子虫样品的18s rDNA序列，比对后显示与粘孢子虫纲、双壳目、碘泡虫属、单极虫Thelohanellus hovorkoi具有96％的相似性。用ChiCD3基因在大肠杆菌中表达的几丁质酶对粘孢子虫孢子处理，进行光镜检测，试验结果显示几丁质酶能够对粘孢子虫孢子的几丁质壳瓣有侵蚀降解作用。

摘要： 杨树是重要的经济树种,同时也是林木中的模式物种.根据毛果杨全基因组信息,对杨树中与几丁质相关的几丁质酶基因家族以及LysM受体家族的分布特征、进化关系以及外显子-内含子结构进行了分析.通过RACE技术在加拿大杨中克隆到了5个几丁质酶基因、9个LysM受体激酶基因以及2个LysM非激酶受体基因的全长cDNA序列;利用实时定量PCR对这些基因在不同组织、不同诱导条件下的表达情况进行了研究,发现至少有一个几丁质酶基因和两个LysM受体基因在几丁质诱导以及杨生褐盘二孢菌侵染时均出现了表达量的明显上调.通过杨树原生质体瞬时转化体系作为平台,对部分LysM受体进行了细胞定位的研究,结果表明这些受体都定位在了细胞膜上.

摘要： 为了提高蚕蛹壳在综合利用过程中的降解率,从蚕蛹储藏车间及周围的土壤及水样中取样,经过富集培养和蚕蛹壳胶体几丁质驯化,分离并筛选出能产高活性几丁质酶的细菌菌株G-254。根据形态学观察、生理生化以及16S rDNA序列测定与系统发育分析,初步将该菌株归属为嗜麦芽寡养单胞菌( StenotrophomonasMaltDphilia)。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种几丁质脱乙酰酶基因、几丁质脱乙酰酶及其制备方法和应用。本发明几丁质脱乙酰酶基因cdaba的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus几丁质脱乙酰酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质脱乙酰酶CdaBa的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了几丁质脱乙酰酶的种类和来源途径，而且酶比活可达352U/mg，在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

摘要： 本发明提供了一种产几丁质酶的枯草芽孢杆菌菌株SH21、生产几丁质酶的方法、微生物制剂及应用。所述枯草芽孢杆菌菌株SH21具有产几丁质酶活性。所述枯草芽孢杆菌菌株经发酵后几丁质酶活性可达4.02U/mL，发酵产物通过盐析、凝胶过滤色谱和离子交换色谱的组合进行纯化后，几丁质酶纯化倍数提高了7.23倍，比活力为154.5U/mg。本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌菌株或微生物制剂在抑制腐皮镰孢生长中的应用。

摘要： 本发明公开了一种几丁质酶的四膜虫表达载体及其在表达几丁质酶中的应用。本发明提供了一种表达盒，包括序列1自5’末端第9至1126位核苷酸所示HSP70-2基因启动子、序列2所示几丁质酶的编码基因和序列1自5’末端第3835至4312位核苷酸所示HSP70-1基因终止信号。本发明还提供了含有所述表达盒的重组质粒。该重组质粒电转到四膜虫后，在巴龙霉素药物筛选作用下，能替换掉四膜虫体内原有的大部分rDNA，使外源基因在四膜虫体内大量倍增，实现目标基因的遗传转化，在热激条件下，HSP70-2强启动子启动CBD3基因的高效表达，而且表达的几丁质酶具有生物活性(能水解几丁质)。综上所述，本发明具有广泛的应用前景。

摘要： 一株产几丁质酶菌株及高产几丁质酶的方法，属于生物技术领域。本发明提供了一株高产几丁质酶的菌株(Chitinolyticbactermeiyuanensis)SYBC-H1。已保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC 3483，保藏日期2009年11月30日。同时还发明了以该菌为出发菌种，经种子培养和已优化的产酶培养基发酵生产几丁质酶的方法，发酵液酶活最高可达6.0U/ml以上。所制备的酶可高效水解几丁质，生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖，可广泛用于化工、医药、食品、材料、染料等领域。

摘要： 本发明提供了一种产几丁质酶的枯草芽孢杆菌菌株SH21、生产几丁质酶的方法、微生物制剂及应用。所述枯草芽孢杆菌菌株SH21具有产几丁质酶活性。所述枯草芽孢杆菌菌株经发酵后几丁质酶活性可达4.02U/mL，发酵产物通过盐析、凝胶过滤色谱和离子交换色谱的组合进行纯化后，几丁质酶纯化倍数提高了7.23倍，比活力为154.5U/mg。本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌菌株或微生物制剂在抑制腐皮镰孢生长中的应用。

摘要： 本发明提供一种草酸青霉菌K10及其产的几丁质酶和利用几丁质酶制备几丁寡糖的方法，及利用草酸青霉菌K10产的几丁质酶对胶体几丁质进行酶解产几丁寡糖。一种草酸青霉菌K10，草酸青霉菌K10菌株已于2020年10月6日保藏在中国典型培养物保藏中心（武汉大学），保藏号为CCTCC NO：M 2020571。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种几丁质酶基因、几丁质酶及其制备方法和应用。本发明几丁质酶基因chiam的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于地中海拟无枝菌酸菌Amycolatopsis mediterranei几丁质酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质酶ChiAm的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了几丁质酶的种类和来源途径，而且酶比活为48U/mg，在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

摘要： 本发明涉及一株产几丁质酶细菌，经分类鉴定后命名为Chitinibactersp.GC72，目前该菌保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO：M2014113，保藏日期：2014年4月1日。本发明公开了该菌株适宜的培养条件和发酵产酶条件，并对其粗酶进行了酶学性质分析、水解产物分析，证实该菌分泌的几丁质酶能有效降解几丁质，降解产物主要为N-乙酰-D-氨基葡萄糖。

摘要： 本发明公开了一种提高桑氏链霉菌KJ40产几丁质酶的培养基及几丁质酶含菌制剂和应用，所述培养基为：溶度为2%（w/V）的胶体几丁质100ml/L，黄豆饼粉0.4wt%，K

摘要： 本发明属于基因工程领域，具体地说是一种利用毕赤酵母工程菌株表达棘孢木霉几丁质酶的方法。发明以棘孢木霉（Trichoderma asperellum）为材料获得了1个几丁质酶基因，命名为tachi1，DNA序列为1679bp，含有3个内含子、1个1275bp的ORF，编码424个氨基酸。构建重组表达载体pPIC9K/tachi1，利用电击法转化Pichia pastoris GS115，工程菌株GS-tachi1-K接种于含BMMY培养基中，在28°C、200 rpm/min振荡培养7.5 d，几丁质酶活达到17.93 U/mL，蛋白表达量为6.19 g/L。SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为44 kDa，酶反应最适的温度和pH分别为50 °C和5.5，50 °C以下保持较高的酶活力，在酸性条件下稳定。该酶活性高、稳定性好，有比较重要的经济价值和社会价值。