转录水平

摘要： 本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因(PocMMP2)的虫体转录水平,及建立针对重组PocMMP2(rPocMMP2)蛋白抗体的间接ELISA检测方法(iELISA)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平,采用原核表达系统获得rPocMMP2,经方阵滴定法优化反应条件,建立rPocMMP2-iELISA,并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清。结果显示:PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达,且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体(P<0.05);rPocMMP2约72 ku,主要存在于包涵体中;rPocMMP2-iELISA临界值为0.223,敏感性和特异性分别为86.0%和83.3%,受试者工作曲线下面积(AUC)为0.876,批内与批间重复性变异系数均小于10.00%;该方法的临床检测呈现74.42%的血清阳性检出率(64/86),高于病原学检出率(10.47%,9/86)。PocMMP2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程,且所建立的rPocMMP2-iELISA有良好的敏感性、特异性和较高的重复性,可用于兔痒螨病的血清抗体检测。

摘要： 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术对重组毕赤酵母基因组中左聚糖蔗糖酶基因(SacB)的拷贝数及信使核糖核酸(mRNA)转录水平进行检测分析,并用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定菌株不同诱导时间下左聚糖蔗糖酶水解活力。结果表明,在BMMY液体培养基中经甲醇诱导24 h时,样品转录水平皆达到最大值,此时多拷贝菌株转录水平(2.13)为单拷贝菌株(0.42)的5.1倍;左聚糖蔗糖酶活力在甲醇诱导24 h后均随诱导时间不断上升,多拷贝菌株酶活(13.96 U/mL)较单拷贝菌株(5.48 U/mL)提高1.5倍。重组毕赤酵母整合的左聚糖蔗糖酶基因在1~3个拷贝范围内,随着拷贝数增加,多拷贝菌株较单拷贝菌株的mRNA转录水平及相应的蛋白表达量均显著增加(P<0.05),说明毕赤酵母是表达基因SacB的良好宿主。

摘要： 目的:通过比较检测HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA两种HPV检测方法对宫颈高级别病变的检出能力,探讨HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的预警分流价值。方法:采集2016年7月至2017年6月就诊于我院接受宫颈癌筛查的1515例女性宫颈脱落细胞,利用转录介导扩增法检测高危型HPV E6/E7 mRNA(n=505)和PCR+膜杂交法检测HPV DNA(n=1010),以组织病理学诊断为金标准,比较两种检测方法对宫颈高级别病变检出率。结果:利用HPV E6/E7 mRNA检测组阴道镜转诊率32.69%(17/52)、HPV DNA检测组阴道镜转诊率10.62%(12/113),差异有统计学意义(P=0.001);HPV E6/E7 mRNA检测组CIN2+的检出率42.42%;HPV DNA组CIN2+的检出率28.16%,差异有统计学意义(P=0.034)。结论:与HPV DNA检测方法相比,HPV E6/E7 mRNA检测对CIN2+病变预警分流价值较高。

摘要： RNAi干涉小麦TaDEP1基因导致小穗密度下降以及小穗数减少,表明该基因转录水平的降低会引起基因功能的丧失。为挖掘影响TaDEP1转录水平的作用元件,通过特异扩增D组TaDEP1基因启动子并进行测序,发现不同品种间存在132 bp序列差异,该序列位于TaDEP1基因起始密码子上游1529~1660 bp处。利用小麦微核心种质材料,鉴定到132 bp序列与TaDEP1基因的转录水平呈正相关,即启动子序列中含有132 bp序列的TaDEP1基因转录水平明显高于不含该序列的转录水平。启动子顺式作用元件分析结果显示,该132 bp序列未包含特殊的顺式作用元件。结合荧光素酶(LUC)活性试验,在小麦原生质体中证明该序列能够显著提高LUC的转录活性,表明该序列可作为小麦基因转录增强序列。本研究鉴定到新的小麦基因转录增强序列,为小麦分子标记辅助选择育种提供了基因资源与技术支持。

摘要： 目的克隆、表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.japonicum)带电多泡体蛋白5(CHMP5),并对其生物学特性进行研究。方法利用PCR扩增S.japonicum CHMP5基因目的片段,构建重组质粒pET28a(+)-CHMP5,并对该基因进行生物信息学分析。利用荧光定量PCR检测CHMP5在不同时期虫体中的转录水平。对体外表达的重组CHMP5蛋白进行纯化与质谱鉴定,并通过Western blotting检测其反应原性。利用免疫组化实验分析CHMP5在虫体中的分布。以小鼠为动物模型,评估重组CHMP5蛋白抗日本血吸虫病的免疫保护效果。结果S.japonicum CHMP5的开放阅读框为675 bp,编码224个氨基酸,具有6个B细胞抗原表位;主要定位于S.japonicum虫体的体被上。CHMP5基因在35 d和42 d虫体中的转录水平高于其它检测时期,且42 d雌虫中的转录水平约是42 d雄虫的3倍。克隆表达的重组CHMP5蛋白其理论分子量约为29 kDa,具有较好的反应原性;用其免疫小鼠24 d,即可使小鼠产生较高水平的IgG抗体,并最终诱导产生18.96%的减虫率和42.98%的肝脏减卵率。结论成功克隆、表达了S.japonicum体被蛋白CHMP5,其在不同发育时期虫体中均有表达,获得的重组CHMP5蛋白可诱导小鼠产生部分的免疫保护效果,为深入探讨S.japonicum CHMP5的生物学功能提供了基础。

摘要： 为初步探究禽呼肠孤病毒(ARV)σC蛋白对天然免疫信号通路的影响,本研究将构建好的真核质粒pEF1α-HA-σC(实验组)及pEF1α-HA(对照组)转染DF1细胞进行表达,通过RT-qPCR检测不同时间点DF1细胞中天然免疫相关因子在转录水平的变化。检测后统计发现,TLR3、TLR7、MDA5、TLR15、TRIF、NF-κB、IRF7、MyD88、MAVS、IFN-α、IFN-β、IL-1β及IL-6天然免疫相关因子在转录水平上都发生了不同程度的上调或下调,提示这13种天然免疫相关因子在ARVσC蛋白引起的天然免疫中发挥着重要作用。研究结果及分析为进一步揭示ARVσC蛋白在宿主抗病毒的天然免疫反应中发挥的作用及ARV的致病机理提供了研究基础,为研制新型高效靶向抗ARV疫苗及疫苗佐剂提供了理论依据。

摘要： 保加利亚乳杆菌是发酵乳制品常用主要菌种,经常受到多种环境胁迫。为了深入揭示其抗逆保护机制,在确定保加利亚乳杆菌模式菌株ATCC 11842不同环境胁迫(酸、盐、胆盐、氧、冷)下的亚致死与最低致死条件的基础上,通过比较不同环境胁迫亚致死条件处理后的菌体细胞的存活率变化,研究菌体细胞在多重胁迫环境下的交互保护作用。根据前期ATCC 11842菌株在酸胁迫和酸冷胁迫条件下转录组学测序结果,从响应酸胁迫的基因中选取与糖代谢、氨基酸代谢、转运系统、分子伴侣、应激等相关11个基因,利用RT-qPCR技术分析11个基因在不同环境胁迫下转录水平的表达量变化。结果表明:ATCC 11842菌株经酸胁迫和氧胁迫亚致死条件(pH 4.8,40 min;15 mmol/L H_(2)O_(2),1 h)预处理后,均可显著提高最低致死条件下的存活率,在ATCC 11842菌株体内响应酸胁迫的11个基因中,有10个基因也响应其它不同环境胁迫,并探明这10个响应酸胁迫的基因(LDB_RS02110、LDB-RS00810、LDB_RS04920、LDB_RS05285、LDB_RS00230、LDB_RS06340、LDB_RS05615、LDB-RS01180、LDB_RS06995、LDB_RS03130)在不同环境胁迫下的表达变化。

摘要： 目的:探讨siRNA-HIF1α干扰结直肠癌SW480细胞对细胞转录水平的作用。方法:人结直肠癌细胞系SW480接种于6孔板中,分为siRNA-HIF1α实验组和对照组。提取各组RNA,进行RNA-Seq,分析差异表达基因及其优势KEGG通路。同时进行qPCR对RNA-Seq的结果进行转录水平的验证。结果:与对照组比较,siRNA-HIF1α-934转染细胞的伪足明显减少,同时HIF1α低表达诱发上调内质网蛋白加工通路、肌动蛋白细胞骨架及黏附调节通路和FoxO转录因子信号通路等通路基因的表达。结论:通过生物信息学分析发现,沉默转录因子HIF1α的表达,可通过激活FoxO转录因子等信号通路,调节肿瘤细胞的增殖和转移。

摘要： 研究揭示白菜驯化表型变异的重要推手日前,中国农业科学院蔬菜花卉研究所王晓武团队揭示了转座子插入变异在不同类型白菜驯化中的重要作用。研究发现,发生在基因区的转座子插入变异与基因的转录水平、编码区长度和编码区数量均高度相关,转座子插入到基因区后可以行使内含子的功能,并导致基因表达量改变。

摘要： 慢性牙周炎作为一种以菌斑为始动因素的慢性感染性疾病,临床表现为硬组织的不可逆丧失以及周围软组织的破坏,包括深牙周袋、附着丧失,最终导致牙齿的丢失。白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)具有促进炎症和调节免疫功能,在介导宿主免疫应答及炎症反应中发挥重要作用。体内IL-18的升高可诱导干扰素及炎症因子如白细胞介素、肿瘤坏死因子、基质金属蛋白酶的生成,从而介导免疫与炎症的双重反应,这些炎症因子均参与慢性牙周炎的发生发展。许多临床研究已表明,慢性牙周炎患者的血清、唾液、龈沟液以及牙龈组织样本中的IL-18水平可能与牙周炎严重程度成正相关;而IL-18作为候选基因参与牙周炎的易感多态性研究至今结论不一。如何在临床研究中量化IL-18的水平并将其应用于诊断工具,以及利用全基因组关联研究、组学研究等新方法甄别出新的位点,将有助于加深对IL-18在慢性牙周炎的致病机制的认识,可为未来的精准医疗和制定个性化方案提供新思路。

摘要： 本课题旨在研究断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning Multisystemic WastingSyndrome，PMWS）感染过程中免疫抑制性受体的转录水平及其对免疫效应影响，以期进一步揭示PMWS的免疫致病机制。发病猪的血浆、肺脏和脾脏中分别扩增出PCV2381bp特异性目的条带，未扩增出PRV、PPV、PRRSV和CSFV的特异性目条带，根据临床症状和病原检测，确诊发病猪患PMWS。PD-L1（p＜0.01）和PD-L2（p＜0.05）转录水平显著升高，自然感染PMWS过程中可以引起PD-/PD-Ls通路改变，抗病毒细胞免疫功能降低，提示PD-Ls的过量表达是PMWS造成免疫抑制的重要分子机制。

摘要： 目的：对疑似SMN1基因单拷贝的SMA病例进行运动神经元存活基因1(SMN1)的点突变检测,明确患儿的遗传学诊断.在mRNA水平分析这些SMN1点突变对全长SMN1基因(fl-SMN1)转录水平的影响.方法：来自5个无关家系的5例疑似SMN1基因单拷贝的SMA病例为研究对象.结果：①MLPA结果显示,5名患儿的SMN1基因拷贝数均为1.②在5名患儿中确定了5种突变(p.Val19GlyfsX21、p.Ala2Gly、p.Ser8LysfsX23、p.Leu228X和p.Gln15X),其中p.Val19GlyfsX21为新突变,p.Ala2Gly和p.Gln15X为国内首次报告,p.Ser8LysfsX23和p.Leu228X则为中国SMA较常见突变.结论：①本研究共确定了5种SMN1基因突变,移码突变和无义突变(p.Val19GlyfsX21、p.Ser8LysfsX23、p.Leu228X和p.Gln15X)明显影响fl-SMN1转录.而错义突变p.Ala2Gly对fl-SMN1mRNA转录水平影响不显著.②在SMN1基因单拷贝缺失的患儿中有必要进行SMN1基因突变检测,这是此类患儿获得诊断的必要手段.

摘要： 硝化菌是完成氮循环的关键细菌,硝化菌包括氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌.氨氧化菌将氨氮(NH4+N)转化为亚硝酸盐氮(NO2--N),亚硝酸盐氧化菌再将NO2--N转化成硝酸盐氮(NO3--N).由于硝化菌较低的增长速率及对pH、溶解氧浓度、温度、有毒化学品等极高的敏感性,硝化作用一直被视为脱氮过程中的限速步骤1.重金属铜(Cu)是一种重要工业原材料,被广泛用于制革、电镀、金属加工等行业.Cu对硝化菌的毒性作用有很多报道,Cu的抑制浓度范围很宽(5-50mg/L).然而这些研究多数都是根据硝化效率、呼吸速率活性来研究Cu的毒性效果.在有大量其他类细菌(例如异养菌)共存的混合系统中,硝化效率、呼吸速率活性的检测分析可能受到其它微生物的影响,其准确性值得探讨,而且这些表观参数很难深入反应Cu的毒性机理.本文针对典型的混合菌系统，即耗氧活性污泥系统，检测了Cu对硝化菌的代谢活性、微生物多样性、功能基因转率水平的毒性影响，并且分析了代谢活性和功能基因转率水平的相关性，进一步探索了Cu的毒性机理。硝化菌的呼吸速率活性和功能基因对Cu的投加都很敏感，而且二者之间具有相关性。混合菌系统中硝化效率不能真实反应硝化菌的活性。Cu对氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌的影响程度不同。在Cu的暴露下，氨氧化菌的功能基因amoA和亚硝酸盐氧化菌功能基因nxrB的各自转录特点表明氨氧化菌比亚硝酸盐氧化菌对Cu更敏感。Cu的投加改变了混合菌系统的微生物多样性和菌群结构。随着铜浓度的增加这种改变越加剧烈。

摘要： 目的：检测56日龄鸡部分免疫器官(脾脏、胸腺、法氏囊与盲肠扁桃体)中Th1类细胞因子(IFN-γ IL-2)以及Th2类细胞因子(IL-4、IL-10)的mRNA相对表达量并进行比较.rn 方法：本试验采用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法。rn 结果：结果显示4种细胞因子在盲肠扁桃体中的表达水平均高于法氏囊,其中IFN-γ、IL-2与IL-10在盲肠扁桃体中的表达量均极显著高于其它组织;而IFN-γ、IL-2与IL-4在法氏囊中的表达水平均低于其它免疫器官.脾脏中细胞因子表达水平总体上较同为外周免疫器官的盲肠扁桃体低.胸腺、脾脏与法氏囊中IFN-γ与IL-4的表达量呈明显负相关性,而IL-10的表达在各个组织中均处于较低水平.rn 结论：研究表明盲肠扁桃体作为可直接参与免疫反应的外周免疫器官,其免疫活性可能较中枢免疫器官法氏囊更强.IFN-γ与IL-4作为最具代表性的Th1与Th2类细胞因子,其关系为相互抑制.而IL-10的表达水平较低可能是由于其表达水平在机体受病毒或寄生虫感染的状态下才大量表达.

摘要： 目的：研究不同长度TBX1基因启动子的活性,确定TBX1基因启动子关键区域.方法：①利用聚合酶链反应(Polymerse Chain Reaction,PCR)分离扩增TBX1基因转录起始位点上游不同长度片段,酶切连接至pGL3-Basic报告基因载体,构建含不同长度TBX1基因启动子调控荧光素酶的报告基因;②利用FuGene HD转染试剂将不同长度的TBX1基因启动子调控荧光素酶的报告基因载体瞬时转染293T、COS7细胞,42h后经荧光素酶检测,比较不同长度TBX1基因启动子的活性.结果：不同长度TBX1基因启动子活性不同,其中5Kb和1.2Kb的TBX1基因启动子活性较高;TBX1基因启动子在不同细胞中表现的活性不同,COS7细胞中5Kb的基因启动子活性最高,297T细胞中1.2Kb的基因启动子活性最高.结论：TBX1启动子在转录水平上可以驱动报告基因表达,不同长度启动子的活性不同,推测转录起始位点上游1.2Kb区域是TBX1基因启动子关键区域.

摘要： 为了研究家蚕（Bombyx mori） BmGST sigma家族基因经蜕皮激素诱导后的表达变化，用蜕皮激素溶液（2×10-3 μg/μL）浸泡的桑叶喂食家蚕5龄幼虫，以不用蜕皮激素处理的桑叶喂食家蚕为对照，采用双跟踪标定定量PCR（dual-spike-in qPCR）方法，检测在蜕皮激素诱导下家蚕各组织BmGST sigma家族基因的转录水平。结果表明：在家蚕中肠，脂肪体和马氏管中，BmGSTs1和BmGSTs2基因均受到了蜕皮激素的诱导，转录水平明显上升，说明二者均参与了家蚕体内蜕皮激素的代谢，为进一步研究BmGST sigma基因与内源物质的关系提供理论基础。

摘要： 热激蛋白（HSP）参与生物体细胞内多种生理生化反应，保护细胞在不良环境胁迫下免于受损或降低损害，起分子伴侣的作用。为了探讨小分子热激蛋白基因家族在家蚕组织与外源物质代谢的关系，给五龄家蚕添食用芸香苷溶液浸泡的桑叶，采用双跟踪标定定量PCR（dual-spike-in qPCR)方法，检测家蚕小分子热激蛋白BmHSP基因在家蚕中肠、脂肪体和马氏管内的表达特征。结果表明，BmHSP基因在刺激后均匀明显的上调或下调变化，BmHSP20.1在中肠的表达下降，在脂肪体的表达最高;BmHSP21.4在中肠和马氏管的转录水平高。脂肪体的基因表达水平明显高于中肠和马氏管。

摘要： 昆虫蜕皮激素受体（ecdysone receptor,EcR）是一种核内受体，它是蜕皮激素的分子靶标。为了研究家蚕Bombyxmori蜕皮激素受体（ecdysone receptor,EcR）基因和超气门蛋白基因(ultraspiracle，USP)经蜕皮激素诱导后的表达变化，用蜕皮激素溶液（2×10-3μg/μL）浸泡的桑叶喂食家蚕Bombyx mori5龄幼虫，以不用蜕皮激素处理的桑叶喂食家蚕为对照，采用双跟踪标定定量PCR（dual-spike-inqPCR）方法，检测在蜕皮激素诱导下家蚕马氏管、中肠和脂肪体内蜕皮激素受体基因和超气门蛋白基因的转录水平。结果表明：与对照相比，在蜕皮激素诱导下家蚕幼虫体内马氏管和脂肪体中BmECR-A和BmECR-B的转录水平显著提高，并且脂肪体中BmECR-A和BmECR-B的转录水平最高，BmECR-A在中肠中变化显著，BmECR-B在中肠中变化不显著。BmUSP在各个组织中均变化显著，并且在脂肪体中BmUSP的转录活性最高。BmECR-A、BmECR-B和BmUSP在脂肪体中的高量表达，揭示了脂肪体在蜕皮激素代谢过程的重要性。这为进一步研究蜕皮激素受体和超气门蛋白与蜕皮激素的关系及相互作用机理提供理论基础。

摘要： 柱型苹果具有的“独干、节间极短、高萌芽率、极短枝、极紧凑”的树型，特别适合密植栽培和机械化管理，是苹果紧凑树型遗传改良的宝贵资源。本研究通过新一代高通量测序手段——转录组测序(RNA-Seq)技术，对苹果株型形成的相关基因进行分析。对于研究苹果株型形成的分子机理，以及通过基因工程改良苹果树型具有重要意义。

摘要： 为研究鸡体内细胞因子的基础转录水平,本试验利用双重荧光定量RT-PCR(dqRT-PCR)技术,对70日龄的5种主要组织相容性复合体(Majorhistocompatablity complex,MHC)单倍型无特定病原体(specialpathogen free,SPF)鸡群BW/G1、BW/G2、BW/G3、BW/G5和BW/G7的肺组织(包括气管)、胸腺、法氏囊、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中Thl型(IFN-γ、IL-18)和Th2型(IL-4、IL-10)细胞因子mRNA含量进行了定量检测。结果显示,IFN-γ和IL-4在各鸡群的胸腺中转录水平最高,IL-18和IL-10在法氏囊中最高,Th2型细胞因子在脾脏中最低;初级免疫器官(胸腺、法氏囊)中IFN-γ和IL-10转录水平在G3系中最高。本研究表明,70日龄时Th1型和Th2型细胞因子主要聚集于鸡的初级免疫器官中,且为制衡状态,胸腺中表现为IFN-γ和IL-4相互制衡,法氏囊申为IL-18与IL-10;不同MHC单倍型鸡体内细胞因子转录水平有所差异,但未达到显著水平。

摘要： 本发明是提供了一种具有转录和转录后双水平基因沉默功能的microRNA的筛选方法。通过上述方法筛选得到的microRNA既能够通过结合于5’侧翼区特异位点从而下调目的基因mRNA表达（具有转录抑制能力），又能够通过结合于3’非翻译区特异位点从而下调目的基因蛋白表达的作用（具有转录后/翻译抑制能力）。

摘要： 本发明公开了转录、转录后和翻译后多水平低氧调控基因、应用及其调控方法，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；转录、转录后和翻译后多水平低氧调控基因的用途，用于低氧靶向调控治疗基因的表达；一种转录、转录后和翻译后多水平低氧调控基因低氧靶向调控治疗基因的方法；本发明可以对低氧调控基因在常氧条件下或者正常组织中低表达甚至不表达，而在低氧条件下或者缺血组织中表达上调，进而在实现有效的治疗的同时，避免或者降低治疗基因过表达可能引起的不良副作用的风险。

摘要： 本发明是提供了一种具有转录和转录后双水平基因沉默功能的microRNA的筛选方法。通过上述方法筛选得到的microRNA既能够通过结合于5’侧翼区特异位点从而下调目的基因mRNA表达（具有转录抑制能力），又能够通过结合于3’非翻译区特异位点从而下调目的基因蛋白表达的作用（具有转录后/翻译抑制能力）。

摘要： 本发明涉及一种RNA结构检测方法及其应用，属于生物技术领域。本发明通过在RNA结构检测方法包括去除背景逆转录终止信号的步骤，降低了结构分数计算中的假阳性信号，从而提高检测方法的准确性，使得能够以非常低的样品量进行体内细胞的RNA结构分析，并进一步评估细胞的功能状态。

摘要： 本发明提供了一种在全基因组水平上预测植物生长发育转录因子调控的下游靶基因的方法，属于生物信息技术领域。本发明的方法基于植物转录因子的DAP‑seq测序数据，在全基因组中检测调控的启动子的Motif元件和位置，并以此为基础，预测转录因子下游调控的靶基因。本发明联合测序数据和生物信息学工具，大大增加了预测的精确度和通量，进而可在大数据量的基础上快速预测出靶基因，提高预测效率。并且本发明的方法普遍适用于植物学领域。

摘要： 本发明公开一种生物工程技术领域的用荧光标记核苷酸反转录检测菌体RNA转录水平的方法，步骤为：根据菌体目的基因序列设计并合成上游引物，提取总RNA后，运用反转录酶将荧光标记核苷酸整合到cDNA中，通过异丙醇沉淀得到DNA，并用乙醇洗涤游离荧光标记核苷酸，以使DNA信号测定准确，用荧光分析仪测定荧光信号。本发明方法新颖，与其他运用荧光标记探针测定菌体转录水平的方法相比，步骤简单，节约时间，不需要复杂的仪器。

摘要： 本发明公开了一种增强Subtilisin基因转录水平以提高TG酶发酵水平的方法，是通过在茂源链霉菌中，利用人工强启动子kasOp*过量表达内源Subtilisin编码基因，促进了谷氨酰胺转氨酶酶原的活化成熟，使谷氨酰胺转氨酶的发酵产量得以提高。本发明通过增强Subtilisin编码基因的转录水平，促进了谷氨酰胺转氨酶酶原的活化成熟，以此来提高谷氨酰胺转氨酶的发酵水平，最终谷氨酰胺转氨酶发酵产量在实验室摇瓶水平下较对照菌株提高22％。通过本发明可显著提高谷氨酰胺转氨酶的发酵产量，同时使发酵成大幅降低。

摘要： 本发明公开一种生物工程技术领域的用荧光标记核苷酸反转录检测菌体RNA转录水平的方法，步骤为：根据菌体目的基因序列设计并合成上游引物，提取总RNA后，运用反转录酶将荧光标记核苷酸整合到cDNA中，通过异丙醇沉淀得到DNA，并用乙醇洗涤游离荧光标记核苷酸，以使DNA信号测定准确，用荧光分析仪测定荧光信号。本发明方法新颖，与其他运用荧光标记探针测定菌体转录水平的方法相比，步骤简单，节约时间，不需要复杂的仪器。

摘要： 本发明公开了一种增强氨基酸合成基因的转录水平以提高TG酶发酵水平的方法，是通过在茂源链霉菌IPIO中，利用自身启动子分别过量表达内源脯氨酸、组氨酸、芳香族氨基酸、精氨酸合成途径中的基因，得到高产TG酶的突变株。本发明通过增强脯氨酸、组氨酸、芳香族氨基酸、精氨酸合成基因的转录水平，增强了这些氨基酸的合成，增加了TG酶合成过程中的氨基酸供应，以此来提高谷氨酰胺转氨酶的发酵水平。本发明所得的工程菌株WD15、WD18、WD19和WD22的谷氨酰胺转氨酶发酵产量在实验室摇瓶水平下较对照菌株分别提高22％、50％、48％和13％。

摘要： 本发明公开了一种增强Subtilisin基因转录水平以提高TG酶发酵水平的方法，是通过在茂源链霉菌中，利用人工强启动子kasOp*过量表达内源Subtilisin编码基因，促进了谷氨酰胺转氨酶酶原的活化成熟，使谷氨酰胺转氨酶的发酵产量得以提高。本发明通过增强Subtilisin编码基因的转录水平，促进了谷氨酰胺转氨酶酶原的活化成熟，以此来提高谷氨酰胺转氨酶的发酵水平，最终谷氨酰胺转氨酶发酵产量在实验室摇瓶水平下较对照菌株提高22％。通过本发明可显著提高谷氨酰胺转氨酶的发酵产量，同时使发酵成大幅降低。