纳豆激酶

摘要： 纳豆是由大豆经纳豆芽孢杆菌发酵而成,营养价值丰富,具有多种生理功能。纳豆芽孢杆菌作为益生菌,环境适应能力强,广泛应用于微生态制剂、抗菌剂和水质改良剂等研究领域。文章简述了纳豆起源与制作及其营养保健作用、纳豆芽孢杆菌的生物学特性、多样性及菌株筛选,并展望了纳豆和纳豆芽孢杆菌的应用前景,以期为提高纳豆的大众认知度、推动纳豆产业和充分发挥纳豆芽孢杆菌的作用提供参考。

摘要： 纳豆激酶(nattokinase,NK)作为保健食品,与其他保健食品相比具有相对较多的研究文献。研究范围包括基础与动物实验、对健康人群研究、对具有血管病危险因素人群以及对血管病患者的研究。相关研究显示纳豆激酶具有一定的抗血小板聚集、体外溶解血栓、降血压、降血脂等作用。本文综合近2年最新研究文献,对《纳豆激酶在血管病危险人群应用专家建议(2019版)》进行更新,目的在于不断吸收该领域最新研究成果,持续对内容进行更新,提供全面、最新和客观的研究理念及证据。

摘要： 目的 构建一种具有降糖和抗栓活性的双功能降糖抗栓肽(HAP),并研究其功能活性。方法 通过重组聚合酶链反应克隆5rolGLP-1-NK融合肽基因,构建其高表达工程菌株并制备HAP样品,采用链唑霉素诱导法构建的糖尿病小鼠模型和K型角叉菜胶腹腔注射法构建的小鼠尾部血栓模型,研究其降糖和抗栓活性。结果 成功构建了HAP融合肽基因及其高效表达大肠杆菌工程菌株,通过对小鼠尾部血栓模型灌服HAP多肽,实验证明HAP能显著延缓模型小鼠的血栓形成;用构建的糖尿病小鼠模型对HAP降血糖活性的实验表明,经15 d HAP灌胃治疗的小鼠空腹血糖几乎降低到接近正常水平。结论 HAP具有显著的降糖和抗栓双重功能,为研发降糖抗栓肽双功能药物奠定了基础。

摘要： 研究应用芯片灌注模型成功模拟体内环境分析不同管径对血栓形成和溶解的影响,并通过荧光显微镜实时检测了溶栓药物对血栓溶解的作用。通过对比研究,发现血栓容易在细小管道内生成,且溶栓所需时间较长。两种不同溶栓药物纳豆激酶(NK)和蚓激酶(LK)对血栓的溶解情况有明显不同,在相同管径和流速条件下,NK和LK质量浓度均为2.5 mg/mL时溶解血栓时间分别为21、12 min;高质量浓度药物溶解血栓速度更快,且LK作用效果比NK较为显著。通过荧光标记,LK可同时减少纤维蛋白原和纤维蛋白,从而高效溶解血栓。

摘要： 采用复合诱变的方法筛选高产纳豆激酶的突变菌株。以前期实验室从纳豆食品中筛选并保存的纳豆枯草芽孢杆菌XD2为出发菌株,对其进行甲基磺酸乙酯诱变试验和紫外诱变实验,确定0.1 mol/L EMS最佳处理时间为40 min,紫外线最佳照射时间为120 s;通过复合诱变及添加LiCl的初筛培养基进行初筛及摇瓶发酵复筛,筛选到纳豆激酶能力提升的6株菌株;进一步通过遗传稳定性试验,确定成功筛选到一株高产纳豆激酶且产酶稳定性良好的突变菌株YC4,发现其发酵时间48 h,纳豆激酶酶活力为8450.55 IU/mL,是出发菌株XD2的2.42倍,说明复合诱变效果良好,显著提高了产酶效益,降低了生产成本。

摘要： 该研究以富含纳豆激酶(NK)的纳豆豆浆和复原乳为主要原料,研制富含NK的抹茶纳豆酸奶。分别探究纳豆豆浆、白砂糖、抹茶粉添加量、乳酸菌接种量对富含NK抹茶纳豆酸奶感官评分的影响,采用正交试验优化富含NK抹茶纳豆酸奶发酵工艺,并对富含NK抹茶纳豆酸奶的品质进行评价。结果表明,富含NK抹茶纳豆酸奶最适发酵工艺条件为:纳豆豆浆添加量6%,白砂糖添加量8%,抹茶粉添加量0.7%,乳酸菌接种量0.3%。在此优化条件下,酸奶的感官评分为88.6分,脂肪、蛋白质、非脂乳固体含量、酸度、NK活性及乳酸菌数分别为3.15 g/100 g、3.08 g/100 g、8.25 g/100 g、82°T、688.6 U/mL、5.8×10^(8) CFU/mL。其各品质指标均符合国标GB 19302—2010《发酵乳》要求,且具有一定的保健功能。

摘要： 纳豆激酶是纳豆杆菌(Bacillus natto)产生的具有溶栓作用的酶,纳豆杆菌液体发酵时产生的聚谷氨酸(polygutamic acid,γ-PGA)使发酵液黏度升高,导致纳豆激酶分离纯化困难,成本较高,限制了其规模化生产。该研究采用同源重组双交换技术,敲除纳豆杆菌中合成γ-PGA的关键基因pgsB,降低发酵液中γ-PGA的含量和发酵液黏度,提高后续纳豆激酶的分离纯化效率。结果表明pgsB基因缺失株与野生型菌株相比,发酵液中γ-PGA产量显著下降,在发酵24 h时γ-PGA含量下降了57.9%。此外两者的细胞密度无明显差异,说明pgsB基因的缺失可显著降低发酵液黏度且对菌体的生长没有影响。使用超滤法纯化纳豆激酶的过程中,基因缺失株的纳豆激酶回收率比野生型提高了19.2%。因此,敲除pgsB基因后,纳豆激酶分离纯化的效率得到了提高,为纳豆激酶的工业化生产提供了新方法。

摘要： 随着人们生活水平的提高,血栓病患者呈逐渐增多的趋势。现有的溶栓药物中,纳豆激酶因其半衰期长、特异性强、副作用小、可直接口服等优点而引起了广大关注。本文结合近年来国内外的相关研究成果,详述了纳豆激酶的结构特征、纤溶活性和抗血栓活性的作用机制,总结了纳豆激酶的现有生产菌株及利用发酵优化及基因工程和蛋白质工程提高酶产量或改善酶学特性等方面的进展,阐述了纳豆激酶的生理功能,最后对纳豆激酶应用面临的挑战和未来发展趋势进行了展望,以期为纳豆激酶的进一步研究提供理论依据。

摘要： 以豆粕为原料,研究枯草芽孢杆菌固体发酵产纳豆激酶的发酵工艺。以纳豆激酶酶活为指标,采用单因素试验及响应面试验设计优化发酵工艺。确定利用豆粕进行固体发酵产纳豆激酶的最优条件:初始含水量55%、干豆粕装量90 g/250 mL、接种量6%、pH自然为初始培养条件,发酵温度36°C、发酵时间25 h,在此条件下,纳豆激酶酶活可达5421 IU/g,为工业化固体发酵产纳豆激酶提供了理论基础。

摘要： 以我国云南、贵州、陕西、湖南4个不同产地的豆豉为材料,分离出30株具有不同纳豆激酶酶活的纳豆菌。经复筛获得4株纳豆激酶活性较高的菌株,分别为N2、G1、S3和H3,其纳豆激酶酶活力分别为1926.41U·mL-1、1791.41U·mL-1、2079.65U·mL-1和1616.28U·mL-1,对上述菌株的温度和pH耐受性进行研究,结果显示,N2和S3菌株对温度、pH具有良好的耐受性。

摘要： 纳豆激酶是一种由纳豆菌产生的碱性丝氨酸蛋白酶,该酶能显著溶解体内、体外的血栓,是一种很有潜力的溶栓药物.目前临床上批准使用的溶栓药物链激酶和尿激酶等有易引起出血、药效时间短等缺点,而来源于传统食品的纳豆激酶,具有低成本、安全性高,可被肠道吸收,体内半衰期长,不易引起出血等优点.

摘要： 采用响应面法优化了解淀粉芽孢杆菌CAUNDJ118产纳豆激酶液体发酵培养基及发酵条件.首先用单因素实验确定最佳氮源和碳源,然后用Placket-Burman对发酵条件的8个因素进行筛选,确定对产酶影响显著的3个因素:燕麦麸皮含量、MgSO4·7H2O、发酵时间.然后利用最陡爬坡路径法逼近最大产酶区域,进一步确定3因素的最佳取值范围,在此基础之上,用Box-Behnken实验进行响应面分析考察3因素之间的交互作用并确定最佳产酶条件,结果表明当发酵条件为(g/L):玉米淀粉10、燕麦麸皮29.9、酵母提取物5、MgSO4·7H2O1.3、Na2HPO4·12H2O5、NaH2PO4·2H2O1、CaC120.2、pH7.2、发酵时间71.8h时预测最大纳豆激酶活力为52.1FU/mL,实际测得为50.8FU/mL,较优化前提高了约9倍.

摘要： 纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)是枯草芽孢杆菌的一个亚种,经过发酵后可以得到多种生理活性物质,包括维生素K2,纳豆激酶,生物表面活性剂,生物多糖等.维生素K2(menaquinone,简写为MK,甲萘醌类)是一种具有叶绿醌生物活性的萘醌基团衍生物,具有治疗和预防骨质疏松症,预防肝硬化进展为肝癌,强化肝脏的解毒功能,及治疗维生素K2缺乏性出血症等作用.本研究以实验室菌株纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)BN-2-5-3为出发菌株，研究了发酵过程中维生素K2合成与纳豆激酶酶活之间的关系，并开发了通过分阶段调控pH提升维生素K2及纳豆激酶产量的发酵工艺。采用pH调控发酵过程，纳豆激酶较未优化前产量提高了50%，维生素K2较未优化前产量提高了60%。利用纳豆芽孢杆菌液体发酵联产维生素K2和纳豆激酶，同时提高两种物质产量，有效提高纳豆芽孢杆菌发酵过程中附加值，提高了发酵产率。

摘要： 目的:分析并总结纳豆激酶对血栓预防及临床应用.方法:综述了日本国居民对纳豆食用历史及现状,分析纳豆菌食品里面含有溶解血栓的纤溶酶也称纳豆激酶,它对纤维蛋白有强烈的溶解能力,并具有激活体内弹性酶和尿激酶原活性的作用.结果:通过动物测试和人体测试试验显示:它不仅具有直接溶血栓作用,还有间接激发机体自身纤溶系统的溶栓作用.结论:纳豆激酶可用作口服型溶血栓的药物,或作为预防血栓形成的保健食品.

摘要： 纳豆激酶具有很强的体内外溶栓作用,并具口服吸收溶栓的优点。rn 是一具有开发潜力的食源性溶栓药物。rn 对纳豆激酶分离纯化技术的研究现状和发展趋势进行了综述,讨论了传统的柱层析与新型的超顺磁性聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球、膨胀床吸附和反胶团萃取等分离方法,提出了将新型分离技术应用于纳豆激酶的分离以提高其纯度和产率,对大规模生产的分离纯化有一定的指导意义。

摘要： 本文介绍了纳豆激酶的作用机理，探讨了纳豆激酶的分子结构、稳定性，分析了纳豆激酶的发醉条件、分离纯化、酶活的测定方法，以及纳豆激酶的研究中存在的问题及应用前景展望。

摘要： 纳豆激酶(Nattokinase, NK)是由纳豆菌产生的一种具有强烈溶栓功能的蛋白酶,是一种枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)。日本学者须见洋行等于1987年首次在日本传统食品纳豆中发现、提取并命名。近年来，研究者们对纳豆激酶开展了广泛的研究，本文就纳豆激酶的理化特性、功能、作用机理及其基因工程研究等方面进行了综述。

摘要： 采用酪蛋白平板初筛-摇瓶复筛的筛选策略,从日本传统食品纳豆中筛选获得了一株高产纳豆激酶的纳豆枯草菌菌株,与国内公开报道的不同菌株相比,有更好的产酶能力.菌株经过液体发酵后获得含酶发酵液,采用硫酸铵盐析及Sephadex G-75凝胶层析、Sepharose CM Fast Flow离子交换层析对纳豆激酶进行了分离纯化,两步层析的纯化倍数和酶活回收率分别达到4.75、74.3％和1.32、77％,获得了纯度很高的纳豆激酶。

摘要： 中压制备色谱具备柱效高，分离速度快等特点，是制备纯化天然产物和化学合成产物的极好手段。通常使用的快速中压制备色谱是由中压恒流泵、检测器、部份收集器、六通阀等组成的。现在快速中压制备色谱已用于中药和天然产物的提取。本文简单介绍了一种专利技术的气体驱动的快速制备色谱技术及其在各种中药和天然产物的提取、富集和提纯中的应用。具体包括茶叶中茶多酚的提取，纳豆中纳豆激酶的提取和柳珊瑚中活性物质的提取等。从而证明了快速中压制备色谱应用于中药和天然产物提取方面的优越性，通过提取分离条件的优化选择，可以达到较高的提取分离的目的，节省时间、提高效率。

摘要： 地龙，别名蚯蚓，味咸、性寒、有清热定惊、通络、平喘、利尿之功效，对高血压、抗血栓、心脑血管疾病，可改善症状，防止病情发展。

摘要： 本发明提供了一种纳豆激酶工程菌及提高纳豆激酶活力的方法，包括如下步骤：步骤一、分别提取枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的基因组DNA；步骤二、以转录调控因子sinR和纳豆激酶编码基因aprN为目的基因，以枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的DNA为模板，分别设计第一引物对和第二引物对进行PCR扩增，以得到sinR PCR产物和aprN PCR产物；步骤三、以sinR PCR产物和aprN PCR产物构建串联sinR与aprN的重组质粒；步骤四、将重组质粒转化感受态细胞，以得到阳性克隆菌落；步骤五、对阳性克隆菌落依次进行种子培养基培养和发酵培养。本发明将群体感应调控因子与纳豆激酶编码基因串联表达，提高纳豆激酶含量及活力。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，提供了一株产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法，所涉及的产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，菌株代码为YJY20‑05，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.20017。该菌株应用于纳豆激酶液体发酵中酶活较原始菌株发酵水平提高1倍、时间缩短1倍，纳豆激酶提取纯化后,先制成微胶囊后与卵磷脂复合制备纳豆激酶片，可获得纳豆激酶含量为2000FU/片、卵磷脂含量0.3g/片的纳豆激酶片剂，既保证了纳豆激酶的活性又强化了预防和治疗血栓性疾病的功能。

摘要： 一株产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌和用该菌生产纳豆激酶的方法，属于微生物基因工程和酶工程技术领域。本发明通过PCR技术扩增获得枯草芽胞杆菌MBS04‑6的纳豆激酶基因，利用地衣芽胞杆菌BL10作为表达宿主，以枯草芽胞杆菌168的启动子P43为启动子，以地衣芽胞杆菌WX‑02的胞外丝氨酸蛋白酶Vpr的信号肽为信号肽，以地衣芽胞杆菌WX‑02的α‑淀粉酶的终止子序列为终止子，将这些表达元件与穿梭载体pHY300PLK连接，构成表达载体，转化地衣芽胞杆菌BL10，即为产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌BL10(pP43SNT)，该菌株于2013年9月10日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2013401。本发明还提供了该菌株生产纳豆激酶的方法，在液体发酵培养基中最大酶活力达到11.37FU/mL。

摘要： 本发明涉及一种高效分离纯化纳豆激酶的方法及其在制备纳豆激酶粉中的应用，所述方法包括：取纳豆激酶发酵液或纳豆激酶粗品溶液依次进行Ⅰ级微滤处理、Ⅱ级超滤处理和Ⅲ级超滤处理，即得纯化的纳豆激酶。本发明所涉及的分离纯化纳豆激酶的方法简单易操作，无需借助大型仪器或设备，也无需使用化学试剂，成本低，整个流程耗时较短；且纯化得到的纳豆激酶能够长期有效保存，具有较高的纯度和酶活力，非常适合于大规模化的工业生产。

摘要： 本发明提供了一种纳豆激酶工程菌及提高纳豆激酶活力的方法，包括如下步骤：步骤一、分别提取枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的基因组DNA；步骤二、以转录调控因子sinR和纳豆激酶编码基因aprN为目的基因，以枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的DNA为模板，分别设计第一引物对和第二引物对进行PCR扩增，以得到sinR PCR产物和aprN PCR产物；步骤三、以sinR PCR产物和aprN PCR产物构建串联sinR与aprN的重组质粒；步骤四、将重组质粒转化感受态细胞，以得到阳性克隆菌落；步骤五、对阳性克隆菌落依次进行种子培养基培养和发酵培养。本发明将群体感应调控因子与纳豆激酶编码基因串联表达，提高纳豆激酶含量及活力。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，提供了一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法，所涉及的高产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，菌株代码为YJY20‑05，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.20017。该菌株应用于纳豆激酶液体发酵中酶活较原始菌株发酵水平提高1倍、时间缩短1倍，纳豆激酶提取纯化后,先制成微胶囊后与卵磷脂复合制备纳豆激酶片，可获得纳豆激酶含量为2000FU/片、卵磷脂含量0.3g/片的纳豆激酶片剂，既保证了纳豆激酶的活性又强化了预防和治疗血栓性疾病的功能。

摘要： 本发明公开一种纳豆激酶液态发酵培养基及生产纳豆激酶的发酵方法，其中，每100mL所述纳豆激酶液态发酵培养基中包括以下质量的组分：黄豆粉1～3g、蔗糖1～3g、甘油0.2～0.6g、磷酸二氢钾0.1～0.3g、磷酸氢二钾1～2g以及氯化钙0.01～0.03g，且所述纳豆激酶液态发酵培养基的pH值为7.2～7.6。本发明提供的纳豆激酶液态发酵培养基，用于对枯草芽孢杆菌进行发酵培养获得纳豆激酶时，显著提高了纳豆激酶的产量。

摘要： 本发明公开了一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，包括脱脂大豆粉、葡萄糖、L‑半胱氨酸、L‑丝氨酸、NaCl、MgSO

摘要： 一株可以高效分泌纳豆激酶的枯草芽孢杆菌菌株，利用PCR技术扩增纳豆枯草芽孢杆菌NK的aprN基因，并依据枯草芽孢杆菌的密码子偏爱性优化了起始30个氨基酸的密码子，构建重组表达质粒pHT01‑aprN，经限制性酶切、PCR扩增和测序验证其正确性。通过电击法将pHT01‑aprN导入枯草芽孢杆菌168(Bacillus subtilis 168)，利用氯霉素抗性筛选获得工程菌。优化发酵条件后，经IPTG诱导表达，摇床培养发酵液中最高酶活为289U/ml，高密度发酵发酵液中最高酶活达到7778U/ml，经亲和柱层析制备高纯纳豆激酶酶制剂最高酶活为981731U/g。

摘要： 一株产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌和用该菌生产纳豆激酶的方法，属于微生物基因工程和酶工程技术领域。本发明通过PCR技术扩增获得枯草芽胞杆菌MBS04-6的纳豆激酶基因，利用地衣芽胞杆菌BL10作为表达宿主，以枯草芽胞杆菌168的启动子P43为启动子，以地衣芽胞杆菌WX-02的胞外丝氨酸蛋白酶Vpr的信号肽为信号肽，以地衣芽胞杆菌WX-02的α-淀粉酶的终止子序列为终止子，将这些表达元件与穿梭载体pHY300PLK连接，构成表达载体，转化地衣芽胞杆菌BL10，即为产纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌BL10(pP43SNT)，该菌株于2013年9月10日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2013401。本发明还提供了该菌株生产纳豆激酶的方法，在液体发酵培养基中最大酶活力达到11.37FU/mL。