重组表达

摘要： 对来源于Thermoanacrobacterium thermosaccharolyticum的糖苷水解酶39家族的β-木糖苷酶基因Tt-xyl39进行了重组表达和酶学性质的研究,为新型β-木糖苷酶的研发及应用奠定基础。通过比对T.thermosaccharolyticum 571的全基因组序列,从中克隆出一个新型β-木糖苷酶基因Tt-xyl39,并实现了在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中的成功表达。通过Ni-NTA亲和柱层析纯化,得到纯化后的β-木糖苷酶TtGH39。该酶最适温度为50°C,最适pH为5.5,在50和60°C下的半衰期(T_(50))分别为30和6 h,显示出极好的热稳定性;1500 mmol/L的葡萄糖浓度和1000 mmol/L木糖浓度可将酶活力分别提升2.41倍和1.47倍。这不仅表明葡萄糖和木糖对TtGH39具有显著的激活作用,还表明该酶在实际应用中具有很强的耐糖及抗水解产物的反馈抑制能力。TtGH39能有效水解木二糖生成木糖,在50°C、pH 5.5、酶量0.5 U/mg条件下水解0.2和4.0 mg/mL木二糖,3 h后木糖得率分别为99.1%和61.6%。因此,克隆表达的TtGH39是一种热稳定性较高、耐糖性能极强的β-木糖苷酶,有望能为木聚糖降解及其木糖衍生产品的开发利用提供一种新型生物催化剂。

摘要： 由于限制性内切酶在重组表达时具有切割宿主DNA的细胞毒性,生产难度大,其供应一直被国外企业垄断。实验室前期通过广谱甲基化保护,初步实现了部分限制性内切酶的国产化,但工艺仍停留在低密度摇瓶培养水平,产量无法满足市场需求。研究以限制性内切酶Pst Ⅰ为对象,通过单因素试验筛选了诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、补充碳源、pH值与诱导时机等多个发酵条件。结果表明,在37°C下,开始发酵后6 h,添加终浓度1.4 mmol/L IPTG进行诱导发酵8 h,以甘油为补充碳源,控制发酵体系pH为8.0时Pst Ⅰ的表达量最高,Pst Ⅰ蛋白产量为0.0129 g/L,为未优化的2.15倍,同时酶产率为1.926×10^(6)U/L,为未优化的3.74倍。

摘要： 由糖基转移酶参与的糖基化反应是植物次生代谢产物合成中最广泛的一种修饰方式,也是次生代谢产物结构多样性的机制之一。该研究基于石榴(Punica granatum L.)转录组数据,以石榴果皮为材料,采用RT-PCR克隆得到石榴UDP-糖基转移酶(UDP-glycosyltransferase,UGT)基因(PgUGT);采用生物信息学技术对编码蛋白的基本特性进行分析,并构建系统发育树;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因在果实发育期内的表达模式;结合果实发育期内的总类黄酮和总花色苷含量,分析了基因表达与总类黄酮和总花色苷合成的关系;构建PgUGT的原核表达载体,对其进行原核重组表达。结果表明:(1)成功克隆得到石榴PgUGT基因(GenBank登录号为MW414607);PgUGT基因具有一个1557 bp的开放阅读框(ORF),编码518个氨基酸,预测蛋白分子质量为55.9 kD,等电点为6.55,为不稳定的亲水蛋白;PgUGT具有糖基转移酶家族保守的PSPG基序,属于GT-B糖基转移酶基因家族。进化树分析表明,该编码蛋白属于拟南芥UGT的F类群,与葡萄和草莓的UGT亲缘关系较近。(2)qRT-PCR结果表明,石榴PgUGT基因的表达量在果实发育期内呈先升后降的模式,与总类黄酮含量的逐渐下降和总花色苷含量的逐渐上升趋势并不完全一致。(3)成功构建原核表达载体pCZN1-PgUGT;重组原核表达结果显示,重组质粒在大肠杆菌中为可溶性表达,表达的蛋白分子量约为58 kD。该研究结果为PgUGT基因在石榴类黄酮糖基化反应中的作用及功能奠定了基础。

摘要： 氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,简称EC)是一种存在于黄酒中的潜在致癌物,酶法降解EC及其前体物质尿素因此备受关注。该研究通过基因挖掘获得了解淀粉芽孢杆菌IT-45的脲酶(Ba-urease)基因并在食品级系统枯草芽孢杆菌中实现了表达与应用。通过密码子优化、核糖体结合位点优化重构脲酶基因簇后,酶活力从6.85 U/mL提升至9.01 U/mL;通过调整基因ureC的位置,脲酶活力进一步提升至10.15 U/mL。研究发现,重组脲酶的最适反应温度为37°C;最适反应pH范围为6.5~7.0,为中性脲酶。摇瓶发酵的最佳培养条件为:TB培养基、接种体积分数5%、诱导温度28°C、Ni^(2+)添加量4 mmol/L。在最佳发酵条件下,酶活力达到12.5 U/mL,在酶法降解黄酒中的尿素具有应用前景。

摘要： 目前主要通过生物发酵制备腈水合酶催化3-氰基吡啶合成烟酰胺,但在反应过程中,发酵酶活低并且催化过程中极易生成副产物烟酸,因此通过自主构建的产腈水合酶重组大肠杆菌M910001-pMh1229,对其发酵条件进行了系统研究,采用单因素法对发酵过程中培养基进行优化。通过氮源、碳源的筛选,确定最优的碳氮源、诱导剂浓度。优化后的培养基对该菌发酵产腈水合酶酶活可以达到8653 U/mL,OD600达到了210,酶活对比优化前提高了45%。

摘要： 将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的几丁质酶基因blchiA在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中进行重组表达,构建了枯草芽孢杆菌工程菌株(B.subtilisWS9/pHY300PLK-blchiA),发酵上清液的酶活为0.73 U·mL^(-1)。对重组酶BLCHIA的酶学性质进行表征,其在pH 6.0和60°C时表现出最佳活性,比活为3.68 U·mg^(-1)。10 mmol·L^(-1)的铜离子(Cu^(2+))和亚铁离子(Fe^(2+))对其活性有一定促进作用,在pH 5.0~8.0和50~60°C下稳定性较好。此外,研究表明重组酶对脱乙酰度>95%的壳聚糖的催化能力明显优于胶体几丁质,并且水解胶体几丁质和壳聚糖的产物类型具有明显差异,以胶体几丁质为底物主要生成几丁二糖,以壳聚糖为底物可生成聚合度为2~7的壳寡糖。研究获得的重组酶BLCHIA在壳聚糖降黏和制备不同聚合度的低聚糖方面具有良好的应用前景。

摘要： 真菌的细胞壁由几丁质、葡聚糖等成分构成,几丁质酶在真菌细胞壁的重构过程起到重要作用。分析显示,人类条件致病真菌构巢曲霉的几丁质酶B(Aspergillus nidulans Chitinase,AnChiB)属于糖基水解酶家族18(glycosyl hydrolases family 18)二型(type II)几丁质水解酶。结构分析显示,AnChiB的N端18个氨基酸残基为信号肽,蛋白质三维结构为由8个α-螺旋和8个β-折叠组成的(β/α)8 TIM桶状结构,催化位点位于第4个β-折叠上;在第7个α-螺旋和β-折叠间存在一个插入序列,与桶状结构形成一条狭长的底物结合沟,底物结构位点延底物结合沟分布。本研究利用大肠杆菌(Escherichia coli)重组表达系统重组表达并纯化了AnChiB。酶学性质分析显示AnChiB能够水解晶体几丁质,最适pH为5。同时表达量分析显示AnChiB在构巢曲霉生长早期表达量升高,并在48 h达到最高峰。本研究表明AnChiB可能参与构巢曲霉生长过程中的细胞壁重构。

摘要： 褐藻寡糖有着丰富的生物学功能,酶法制备功能性褐藻寡糖具有重要实践应用价值。为发掘高活性及稳定性的褐藻寡糖制备酶,对浅海热液嗜热菌Yeosuana marina sp.JLT21中的海藻酸裂解酶YMA-1的基因在大肠杆菌中进行表达、纯化及酶活鉴定。结果发现YMA-1由306个氨基酸残基构成,是多糖裂解酶家族7(PL7)新成员;重组YMA-1酶的最适催化条件是55°C,pH 9.0,比活力1.3×10^(4) U/mg,Cu^(2+)可有效促进酶活;在37°C,pH 9.0条件下,该酶对海藻酸钠、聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的比活力分别达到(5201.21±86.46)U/mg、(6399.73±253.12)U/mg和(3751.68±116.25)U/mg,酶解海藻酸钠终产物多为不饱和三糖和四糖,表现出内切双功能型海藻酸裂解酶活性。YMA-1酶作为PL7家族中较宽底物谱、高活性及稳定性的内切海藻酸裂解酶,在高效绿色生产功能性褐藻寡糖上有着潜在应用价值。

摘要： 目的:利用重组毕赤酵母高效表达抑菌活性较好的牡蛎抗菌肽Molluscidin。方法:按照毕赤酵母密码子偏好性优化合成牡蛎抗菌肽Molluscidin,利用生物信息学方法分析其基本理化性质,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后与表达载体pPICZαA连接,构建重组质粒pPICZαA-CgMoCo,电转至毕赤酵母X-33,利用博来霉素抗性和PCR筛选阳性转化子,利用甲醇诱导表达并结合SDS-PAGE和Western blot分析验证,通过甲醇浓度和培养时间优化诱导表达条件,利用滤纸片琼脂扩散法测定培养上清的抑菌活性。结果:获得优化核酸序列,生物信息学分析显示Molluscidin的预期分子量为6521.87 Da,等电点为11.28,在酵母体内半衰期>20 h,理化性质较为稳定;成功构建重组质粒pPICZαA-CgMoCo,目的基因成功嵌入毕赤酵母,SDS-PAGE和Western blot验证获得1株高效表达的重组酵母,其优化表达条件为30°C、250 r/min、1.0%甲醇诱导表达48~72 h,滤纸片琼脂扩散法初步证明重组Molluscidin对大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌活性。结论:筛选到1株重组毕赤酵母X-33/pPICZαA-CgMoCo,能高效表达抑菌活性较好的重组牡蛎抗菌肽Molluscidin,为其生产应用奠定了基础,也为重组贝类来源抗菌肽的开发利用提供了可资参考的技术途径。

摘要： 丝氨酸羧肽酶能够剪切肽链C末端的氨基酸,在大豆蛋白脱苦中有着广泛的应用。该研究将黑曲霉中3个丝氨酸羧肽酶基因(CPG、CPF、CPA)在低背景的无孢黑曲霉HL-1中进行重组表达。利用启动子PnaⅡ、终止子Ttef和营养缺陷型筛选标记pyr G构建分别含自身信号肽和糖化酶信号肽的丝氨酸羧肽酶表达载体;利用PEG介导的转化法转化无孢黑曲霉宿主HL-1,构建了丝氨酸羧肽酶重组表达菌株。通过摇瓶发酵筛选得到高表达重组菌株HL-CPG,其丝氨酸羧肽酶酶活达到163.71 U/mL。利用6ⅹHis标签进行镍柱亲和层析得到单一的丝氨酸羧肽酶CPG并研究了其酶学性质,该酶最适反应温度为40°C,最适p H为3.5,Cu^(2+)具有明显抑制效果。另外,将重组表达的丝氨酸羧肽酶CPG与胃蛋白酶复配水解大豆蛋白,水解液中疏水性氨基酸Leu、Tyr和Phe的含量分别增加606.47μg/m L、434.06μg/m L和205.11μg/m L。综上所述,该研究在黑曲霉中成功实现丝氨酸羧肽酶的高效表达,对大豆蛋白水解液脱苦处理工艺具有一定的借鉴意义。

摘要： 田鼠巴贝斯虫分泌抗原(BmSAl)是一个重要的诊断抗原候选分子,但全长蛋白的表达量少,也不宜纯化.本研究在此基础上,通过生物信息学分析,选取N末端信号肽后,C-末端跨膜区前,包含CPSF73:100_C功能区的228个氨基酸所编码基因片段,重组高效表达了一个可溶性截短型抗原,解决了完整蛋白重组表达纯化的困难.纯化的截短型抗原作为酶联免疫试验(ELISA)诊断抗原可清晰地区分阴性及阳性鼠血清,并与其他病原感染无交叉反应,显示其诊断的特异性.鼠感染田鼠巴贝斯虫系列血清检测表明,该抗原可检测早期感染(5d)和感染(55d)以后的样本,显示其诊断的敏感性.通过对广西75份野鼠血清的检测,发现田鼠巴贝斯虫的感染阳性率达到10％以上,提示自然条件下,鼠感染的普遍性.结果表明,重组B.microti截短型抗原可作为一种诊断抗原,进行田鼠巴贝斯虫感染动物的抗体检测.

摘要： 在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SD16感染性克隆的基础上,在SD16基因组N基因和3'UTR之间插入PRRSV ORF6的转录调控序列(TRS6)和猪源GM-CSF或者IL-4,以及用甘氨酸和FMDV 2ALinker串联的猪源GM-CSF和IL-4,通过转染Marc-145细胞进行病毒拯救,将拯救的重组病毒在Marc-145细胞上连续代分析其生物学特性和遗传稳定性.结果显示,将不同重组全长质粒分别转染Marc-145细胞后可以观察到典型的细胞病变,IFA和western blot检测结果显示,引入的猪源GM-CSF和IL-4成功得到了表达,且拯救的重组病毒可以被PRRSV N蛋白特异性单抗识别,初步表明4株重组病毒被成功拯救,且重组病毒与亲本毒株具有基本一致复制动力学曲线,外源猪GM-CSF以及IL-4的插入并未影响病毒复制.遗传稳定性分析结果证明,重组病毒传代至第6代时,仍旧可以检测到猪源GM-CSF以及IL-4的表达.

摘要： 研究短蛸丝氨酸蛋白酶抑制剂及其功能将有助于深入了解短蛸先天性免疫防御机制。本研究在构建的短蛸转录组文库中，利用现代分子生物学技术分析得到了一个Serpin型蛋白酶抑制剂基因OoSerpin的cDNA序列全长。采用荧光定量PCR检测了OoSerpm在健康短蛸各个组织以及短蛸受到鳗弧菌或藤黄微球菌浸浴刺激后的表达规律。结果表明:rOoSerpin与胰蛋白酶或糜蛋白酶以质量比18:1比例混合时，能分别抑制86.5%和55.0%的胰蛋白酶和糜蛋白酶活性;rOoSerpin能够显著抑制大肠杆菌的生长，在抑制实验7.5h，抑制百分比为40.6%。

摘要： 目的:制备抗肝脏型脂肪酸结合蛋白(LFABP)的单克隆抗体(mAb)并进行亚型和特异性鉴定.方法:以重组的LFABP蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,获得分泌鼠抗人LFABP蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法检测其特异性.结果:纯化的LFABP重组蛋白免疫小鼠后经过筛选后得到2株稳定分泌抗人LFABP的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为3E6和5B7,其亚型分别为IgG1和IgG2a.通过Western blot分析能与细胞中表达的内源LFABP发生特异性免疫反应.结论:成功制备了鼠抗人LFABP的mAb,为进一步研究LFABP的生物学特性,并将为相关疾病的治疗奠定了基础.

摘要： 本研究合成了猪胰腺来源磷脂酶A2(pla2)基因序列,将pla2克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中,成功构建了重组质粒pPIC9K-pla2,并将其转化到毕赤酵母GS115中,构建获得毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-pla2.该菌株经诱导发酵后,发酵上清液中重组磷脂酶A2(PLA2)活力达到23.7U/mL.

摘要： 本研究合成了猪胰腺来源磷脂酶A2(pla2)基因序列,将pla2克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中,成功构建了重组质粒pPIC9K-pla2,并将其转化到毕赤酵母GS115中,构建获得毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-pla2.该菌株经诱导发酵后,发酵上清液中重组磷脂酶A2(PLA2)活力达到23.7U/mL.

摘要： 本研究合成了猪胰腺来源磷脂酶A2(pla2)基因序列,将pla2克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中,成功构建了重组质粒pPIC9K-pla2,并将其转化到毕赤酵母GS115中,构建获得毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-pla2.该菌株经诱导发酵后,发酵上清液中重组磷脂酶A2(PLA2)活力达到23.7U/mL.

摘要： 本研究合成了猪胰腺来源磷脂酶A2(pla2)基因序列,将pla2克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中,成功构建了重组质粒pPIC9K-pla2,并将其转化到毕赤酵母GS115中,构建获得毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-pla2.该菌株经诱导发酵后,发酵上清液中重组磷脂酶A2(PLA2)活力达到23.7U/mL.

摘要： 本研究合成了猪胰腺来源磷脂酶A2(pla2)基因序列,将pla2克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中,成功构建了重组质粒pPIC9K-pla2,并将其转化到毕赤酵母GS115中,构建获得毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-pla2.该菌株经诱导发酵后,发酵上清液中重组磷脂酶A2(PLA2)活力达到23.7U/mL.

摘要： 丁二胺是一种重要的化工原料,可与二元酸进行聚合反应生成性能优异的新型高分子聚合塑料,应用前景十分广泛.鸟氨酸脱羧酶是生物合成法丁二胺的关键酶,它催化鸟氨酸脱羧生成丁二胺.本论文克隆了大肠杆菌的3种鸟氨酸脱羧酶基因speF、speC1和speC2基因并在E.coli BL21进行了分泌表达,结果表明:重组酶SpeC1和SpeC2的酶活性分别为16.33U/mL和16.38U/mL,明显高于重组酶SpeF的酶活性6.38U/mL;重组菌株转化获得的丁二胺产量分别约为1.5g/L,1.6g/L和2.0g/L.本文在大肠杆菌中表达重组鸟氨酸脱羧酶,为利用大肠杆菌进行生物转化合成丁二胺奠定基础.

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种表达单元、重组慢病毒表达载体、重组慢病毒及其制备方法和应用。本发明合成了人源PIRT基因启动子序列和兔源RFT‑I最小启动子序列，并将切割SNARE的蛋白酶编码序列分别插入到这两个启动子下游，制备得到两种不同的重组慢病毒表达载体和病毒。本发明的慢病毒具备特异性抑制外周痛觉发生和信号传导的特点，有效切割了SNARE蛋白，抑制了痛觉神经递质的分泌，达到基因治疗疼痛的目的。

摘要： 本发明公开了一种分泌表达重组蝽防御素THA的重组毕赤酵母及其构建和表达方法。所述重组毕赤酵母通过在基因组两个不同位点插入THA表达盒构建获得，遗传性能稳定，THA表达量高，经检测可达1.5g/L以上，为现有技术的两倍以上。

摘要： 本发明涉及一种脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、重组抗原表达基因、重组表达载体及其制备方法和应用。脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原包括DGP‑1肽段、白介素15蛋白和DGP‑2肽段，所述DGP‑1肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DGP‑2肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原用于乳糜泄检测时灵敏度好、特异性高且制备成本低，可以测定血清中的IgG‑DGP抗体，特别是能够用于IgA缺陷患者以及婴幼儿人群中潜在乳糜泄患者的检测。

摘要： 本发明公开一种阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体和重组菌，并提供优化的表达条件的重组表达所述酶的方法。以出发载体是pGEX‑4T‑1构建含有本发明的阿魏酸酯酶BpFae基因表达载体，当以IPTG为诱导剂时，最优条件是：采用SOB培养基；初始pH：5.0；接种量：0.8％(v/v)；诱导时机：4h；IPTG浓度：0.05mM；诱导温度：26°C；摇床转速：240rpm；诱导时间：24h，如此获得的BpFae活性最高可达2.54U/mL；当以乳糖为诱导剂，采用LB培养基；乳糖浓度：6g/L；初始pH：5.5；诱导时机：5h；诱导温度：23°C；摇床转速：240rpm；装液量：50mL/250mL；接种量：0.2％(v/v)；诱导时间：32h，如此获得的BpFae活性最高可达7.43U/mL。本发明的最优诱导表达条件，可以更高效的制备阿魏酸酯酶BpFae。

摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用，属于基因工程领域。本发明通过优化鸡α干扰素基因序列并合成全基因，然后构建重组表达载体转化大肠杆菌，最后通过诱导表达和蛋白纯化获得纯度和含量较高的rChIFN‑α蛋白。重组干扰素rChIFN‑α在CEK细胞、鸡胚上和鸡体内对FAV‑4均具有抗病毒作用。其中，在CEK细胞上的抗病毒活性为4.17×10

摘要： 本发明提供了用于IGF‑1基因重组表达的重组细胞和重组表达方法，属于基因工程技术领域。所述重组细胞包含SP‑IGF1‑pET‑28b载体和质粒pATX‑4E，所述SP‑IGF1‑pET‑28b载体上包含有一种信号肽的基因，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示；所述质粒pATX‑4E上包含有SurA、Trx、DsbA和DsbC的基因。将所述重组细胞进行培养，使用IPTG进行诱导表达，最后收集得到有活性的IGF‑1。通过本发明提供的重组表达IGF‑1基因的方法得到的IGF‑1产量能达到10.56mg/L，与其受体IGF1R的结合效果很好。

摘要： 本发明公开一种阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体和重组菌，并提供优化的表达条件的重组表达所述酶的方法。以出发载体是pGEX‑4T‑1构建含有本发明的阿魏酸酯酶BpFae基因表达载体，当以IPTG为诱导剂时，最优条件是：采用SOB培养基；初始pH：5.0；接种量：0.8％(v/v)；诱导时机：4h；IPTG浓度：0.05mM；诱导温度：26°C；摇床转速：240rpm；诱导时间：24h，如此获得的BpFae活性最高可达2.54U/mL；当以乳糖为诱导剂，采用LB培养基；乳糖浓度：6g/L；初始pH：5.5；诱导时机：5h；诱导温度：23°C；摇床转速：240rpm；装液量：50mL/250mL；接种量：0.2％(v/v)；诱导时间：32h，如此获得的BpFae活性最高可达7.43U/mL。本发明的最优诱导表达条件，可以更高效的制备阿魏酸酯酶BpFae。

摘要： 本发明涉及一种脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原、重组抗原表达基因、重组表达载体及其制备方法和应用。脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原包括DGP‑1肽段、白介素15蛋白和DGP‑2肽段，所述DGP‑1肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DGP‑2肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的脱酰胺基麦胶蛋白多肽重组抗原用于乳糜泄检测时灵敏度好、特异性高且制备成本低，可以测定血清中的IgG‑DGP抗体，特别是能够用于IgA缺陷患者以及婴幼儿人群中潜在乳糜泄患者的检测。

摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌重组鸡α干扰素、重组表达载体、重组表达工程菌及其制备方法和应用，属于基因工程领域。本发明通过优化鸡α干扰素基因序列并合成全基因，然后构建重组表达载体转化大肠杆菌，最后通过诱导表达和蛋白纯化获得纯度和含量较高的rChIFN‑α蛋白。重组干扰素rChIFN‑α在CEK细胞、鸡胚上和鸡体内对FAV‑4均具有抗病毒作用。其中，在CEK细胞上的抗病毒活性为4.17×10

摘要： 本发明涉及一种表达猪3型干扰素的表达基因、重组表达载体、重组乳杆菌及其制备方法和应用。本发明根据LP18特有的密码子偏向性进行分子设计，将猪III型干扰素I进行密码子优化，通过分子设计，利用基因扩增、融合扩增等分子克隆手段及PCR、琼脂糖凝胶电泳、胶回收等技术对猪III型干扰素λ1序列进行优化，合成含有锚定型分泌肽1320和优化III型干扰素基因的序列载体，成功构建出优化的猪III型干扰素λ1重组表达载体，并电转化至植物乳杆菌LP18，获得能稳定表达猪源IFN‑λ1蛋白的重组植物乳杆菌，为猪源IFN‑λ1的进一步开发应用研究奠定了基础。