基因克隆

摘要： [目的]通过构建分离群体定位并克隆水稻雌雄不育基因OsFMA2,并对其在水稻育性调控中的功能进行探究.[方法]通过EMS诱变水稻宁粳4号得到稳定的不育突变体,对突变体进行表型及细胞学观察,利用精细定位和Mut-map相结合的方法克隆了水稻雌雄不育基因OsFMA2,通过实时荧光定量PCR检测其在各组织表达水平差异,利用水稻原生质体表达系统进行OsFMA2蛋白的亚细胞定位.[结果]细胞学观察发现突变体为雌雄不育.利用极端个体将其精细定位于水稻第6染色体长臂448 kb的区间内.结合全基因组重测序结果,最终确定OsFMA2为目标基因.该基因编码一个复制蛋白,在单子叶植物中高度保守.OsFMA2具有组织特异性,在幼穗中高表达.亚细胞定位结果显示OsFMA2蛋白定位于细胞核中.[结论]OsFMA2在幼穗中高表达,可能参与了水稻雄配子第一次减数分裂前期同源重组过程,同时,OsFMA2的表达对雌配子发育也产生了不利影响.

摘要： 自交不亲和性(self-incompatibility,SI)是指植株的雌蕊对自身花粉和异体花粉进行识别从而抑制自身花粉萌发的特性,PUB(Plant U-Box)蛋白在植物抗逆及信号转导过程中起着重要的作用.本研究通过分析甘蓝自花授粉0～60 min的柱头转录组数据,筛选到1个受自花授粉诱导上调表达的PUB蛋白编码基因BoPUB9.BoPUB9 cDNA序列长度为1368 bp,gDNA序列全长1720 bp,含有1个臂重复结构域和1个U-box结构域.荧光定量PCR结果显示,BoPUB9基因在甘蓝的不同组织中均有表达,在萼片中的表达量最高,花瓣、雄蕊、柱头表达量次之,在花粉花蕾中表达量相对较低,同GUS染色结果保持一致.BoPUB9基因在自花授粉0～30 min内快速上调表达,15 min后为异花授粉后表达量的20多倍,在30 min后达到差异最大,自花授粉后的表达量为异花授粉的40多倍.亚细胞定位结果显示,BoPUB9蛋白在细胞核和细胞质中均有表达,且BoPUB9蛋白在大肠杆菌中被成功诱导表达,相对分子质量为51 kD,与预测结果一致.酵母双杂交与poll-down结果显示,SRK胞内域与PUB9蛋白存在相互作用.推测BoPUB9可能是一种参与甘蓝自交不亲和反应过程的新基因,这为甘蓝自交不亲和的进一步研究和利用提供了新内容.

摘要： 自交不亲和性(self-incompatibility,SI)是指植株的雌蕊对自身花粉和异体花粉进行识别从而抑制自身花粉萌发的特性,PUB(Plant U-Box)蛋白在植物抗逆及信号转导过程中起着重要的作用。本研究通过分析甘蓝自花授粉0~60 min的柱头转录组数据,筛选到1个受自花授粉诱导上调表达的PUB蛋白编码基因BoPUB9。BoPUB9 cDNA序列长度为1368 bp,gDNA序列全长1720 bp,含有1个臂重复结构域和1个U-box结构域。荧光定量PCR结果显示,BoPUB9基因在甘蓝的不同组织中均有表达,在萼片中的表达量最高,花瓣、雄蕊、柱头表达量次之,在花粉花蕾中表达量相对较低,同GUS染色结果保持一致。BoPUB9基因在自花授粉0~30 min内快速上调表达,15 min后为异花授粉后表达量的20多倍,在30 min后达到差异最大,自花授粉后的表达量为异花授粉的40多倍。亚细胞定位结果显示,BoPUB9蛋白在细胞核和细胞质中均有表达,且BoPUB9蛋白在大肠杆菌中被成功诱导表达,相对分子质量为51 kD,与预测结果一致。酵母双杂交与poll-down结果显示,SRK胞内域与PUB9蛋白存在相互作用。推测BoPUB9可能是一种参与甘蓝自交不亲和反应过程的新基因,这为甘蓝自交不亲和的进一步研究和利用提供了新内容。

摘要： 以香菇(Lentinula edodes)为材料,对谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPX)进行基因的鉴定、编码序列克隆、蛋白生物信息学分析以及基因表达模式分析。结果表明:成功鉴定并克隆1个LeGPX基因,该基因开放阅读框(Open reading frame,ORF)621 bp,所编码蛋白包含206个氨基酸残基;系统发育分析显示LeGPX蛋白与小皮伞(Marasmius fiardii)和灰色果腐菌(Moniliophthora roreri)的GPX亲缘关系较近,同源比对结果显示LeGPX蛋白包含GPX特征序列和催化位点。生物信息学分析表明:LeGPX为亲水性不稳定蛋白,蛋白分子质量22.81 kD,理论等电点8.83;二级结构以无规则卷曲为主,不含信号肽和跨膜结构。通过原核表达和纯化成功获得了LeGPX可溶性蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)显示蛋白大小符合预期。荧光定量PCR分析表明,香菇褐变发生过程中LeGPX基因表达量快速上升,并且与菌盖相比,LeGPX在香菇菌柄部位表达更为活跃。

摘要： CONSTITUTIVE PHOTOMORPHOGENIC 1 (COP1)作为一种E3泛素连接酶,能够介导拟南芥光信号转导中HY5、LAF1、HFR1和CO等正调控因子的泛素化降解,从而调控幼苗光形态建成、花青素合成和开花等生物学过程。为了探索玉米COP1基因的功能,本文以玉米自交系B73为研究材料,利用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆了2个ZmCOP1基因,分别命名为ZmCOP1a和ZmCOP1b。通过生物信息学相关软件和网站对ZmCOP1进行理化性质分析、结构域预测和系统发育树分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进一步分析2个ZmCOP1基因在不同组织中的转录丰度,以及其在幼苗期对不同光质和光周期处理的响应。研究发现, ZmCOP1a和ZmCOP1b的开放阅读框(ORF)分别包含2082个和2061个核苷酸,编码693个和686个氨基酸。玉米、水稻、高粱、谷子和拟南芥的COP1蛋白具有相同的结构域和较高的氨基酸序列一致性,暗示它们可能具有相似的功能。2个ZmCOP1基因主要在玉米地上组织中表达,均能迅速响应不同光质处理,且ZmCOP1a的转录丰度普遍高于ZmCOP1b,表明ZmCOP1a可能在不同光质处理下具有更重要的作用。在长日照和短日照条件下,ZmCOP1a和ZmCOP1b在黑暗阶段的转录丰度整体高于光照阶段,有趣的是,二者在光照阶段的表达模式相似,但是在黑暗阶段, ZmCOP1b的转录丰度高于ZmCOP1a。这说明在不同光周期条件下,ZmCOP1b可能比ZmCOP1a更重要。综上这些研究结果表明,ZmCOP1a和ZmCOP1b具有功能冗余和分化。二者可以参与不同光信号通路,可能在玉米光形态建成和花期调控中发挥重要作用。本研究为进一步探明ZmCOP1a和ZmCOP1b基因的功能及其在玉米育种中的应用提供了研究基础。

摘要： 【目的】水稻早衰突变体是研究水稻衰老机制的良好载体。定位和克隆水稻早衰相关基因,有助于理解水稻早衰的遗传规律和分子机制,为相关基因的作用机制研究奠定基础。【方法】用EMS化学诱变处理粳稻云引,获得一个稳定遗传的早衰突变体w14,与日本晴杂交构建F;分离群体,并在群体中各选择100个隐性单株和显性单株的DNA等量混合,利用BSA-seq分析两个DNA池之间的差异位点,定位水稻早衰相关基因。【结果】突变体w14的早衰表型受单隐性基因控制,对两个DNA池测序结果进行单基因定位和突变基因的鉴定,发现单基因主峰位于Chr3,候选区间为Chr3:27.5~29.5 Mb,进一步在目标区域内找到2个符合条件的候选因果变异。【结论】候选基因LOC_Os03g49210突变位点是由野生型的C突变为T,且该突变位于候选基因的第2外显子上,属于错义突变,造成了该基因编码的第20个氨基酸由T(苏氨酸)变成I(异亮氨酸),从而可能导致了基因功能的改变,因此,将该基因定为本研究的候选基因,因与人类BRCA1同源,命名为OsBRCA1。

摘要： 为了解大蒜PEX7基因及其编码的蛋白质结构特性,分析该基因对不同非生物胁迫的响应情况,从大蒜品种徐紫1号的叶片RNA中克隆获得AsPEX7基因。序列分析结果表明,AsPEX7基因含有1个长度为951 bp的开放阅读框(ORF),编码316个氨基酸,其相对分子质量为35.57 ku,理论等电点为5.55,为亲水性蛋白。氨基酸组成中脂肪族氨基酸的比例最高,其次为碱性氨基酸,酸性氨基酸和芳香族氨基酸最低。AsPEX7蛋白含有25个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构,二级结构由α-螺旋、延伸主链和随机卷曲组成,比例分别为5.06%、40.19%和47.15%。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)结果显示,在高温(38°C)、低温(4°C)、干旱(质量体积分数为20%的PEG 6000)和高盐(200 mmol/L NaCl)4种非生物胁迫处理条件下,AsPEX7基因的相对表达水平总体升高,表明该基因可能在抵抗非生物胁迫中发挥重要作用。本研究结果为深入解析PEX7基因调控大蒜生长发育及非生物胁迫的分子机制提供了理论参考基础。

摘要： MYB转录因子参与植物细胞形态与模式建成、次级代谢的调控以及生物和非生物胁迫应答等反应。该研究采用RT-PCR方法扩增了番茄SlMYB86基因,并进行了聚类分析和保守域序列分析,构建原核表达载体和诱导纯化蛋白,利用qRT-PCR和Western blot检测SlMYB86在缺氮复氮下的表达水平,为深入探究番茄MYB86转录因子在缺氮胁迫下的功能奠定基础。结果表明:(1)番茄SlMYB86与番茄SlMYB26在进化树上属于同一分支,亲缘关系较近,且SlMYB86含有2个Myb_DNA-binding保守结构域,属于R2R3-MYB型转录因子。(2)qRT-PCR分析发现,SlMYB86基因在番茄根和叶中均有表达,缺氮胁迫下SlMYB86表达较对照显著增加。(3)成功构建pET-28a-SlMYB86原核表达载体并转化E.coli BL21(DE3),SDS-PAGE和Western blot结果表明,SlMYB86蛋白的最佳诱导条件为0.5 mmol/L的IPTG、37°C诱导8 h;目的蛋白相对分子量大约为41 kD,与预期大小一致,并获得较高纯度的SlMYB86原核蛋白。(4)将纯化的SlMYB86蛋白免疫小白鼠获得抗体,利用该抗体进行Western blot分析发现,番茄中SlMYB86蛋白在缺氮胁迫后表达上调,表明番茄SlMYB86基因参与了缺氮胁迫的应答。

摘要： 花青素还原酶(ANR)是类黄酮代谢途径下游合成原花青素的关键酶,对花青素含量有一定的负调控作用。为探索ANR基因在红花(Carthamus tinctorius L.)中的序列特征及其与红花花色的关系,采用反转录PCR方法从红花中克隆ANR基因,对其进行生物信息学和系统进化分析,并检测了其在不同花色红花品种的不同组织部位及不同花期的表达量。结果表明,CtANR最长开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,分子量为37958.28,理论等电点为5.87,为不稳定的亲水性蛋白,属于NADB-Rossmann超家族,二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成。CtANR和刺菜蓟ANR的同源性最高,为83.98%,与刺菜蓟ANR的亲缘关系最近,与梅花、欧洲甜樱桃ANR的亲缘关系较远,模体基序相差较大。定量分析表明,红色和白色红花品种中,CtANR基因都是在果球形成初期表达量最低,其次是根和茎中表达量较低,而在花中的表达量相对较高。在花发育的不同时期,红色红花品种中CtANR基因的表达呈现降低-升高-降低的趋势,而白色红花品种中CtANR基因的表达呈现降低-升高的趋势。在不同花色的红花品种中,CtANR基因的表达量在花发育的S1、S3和S5时期差异极显著(P<0.01),S4、苞片、根、叶中差异显著(P<0.05),其他时期与其他组织中差异不显著。本研究为解析红花类黄酮生物合成的分子机制及红花花色相关基因的研究提供了理论基础。

摘要： 通过怀玉山三叶青试管苗转录组数据库筛选到怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因的核心片段,利用RT-PCR技术克隆该病毒增殖蛋白3基因,并进行序列分析、亚细胞定位、器官表达分析和功能分析。结果表明:怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因cDNA总长度为873 bp,G+C含量为44.22%;怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3由290个氨基酸组成,分子量33374.79 u,等电点9.72,为疏水性蛋白;二级结构由α-螺旋(57.24%)、β-片层(10.69%)、无规则卷曲(32.07%)构成;三级结构为单体;预测怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3主要存在质膜、液泡膜、内质网中;怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3与葡萄烟草病毒增殖蛋白3(GenBank:XP_002275179.1、GenBank:XP_034684444.1)的同源性最高,同源性达到94.83%。通过烟草叶片亚细胞定位分析表明,烟草病毒增殖蛋白3定位于细胞质(可能包括细胞膜)和细胞核膜中。实时定量PCR结果显示,烟草病毒增殖蛋白3基因在怀玉山三叶青2个栽培种中的表达存在器官特异性,怀玉2号和怀玉1号均在叶中表达量最高;烟草病毒增殖蛋白3转基因阳性烟草的三叶青花叶病毒表达量显著高于烟草病毒增殖蛋白3转基因阴性烟草;与烟草病毒增殖蛋白3转基因阴性烟草相比较,烟草病毒增殖蛋白3转基因阳性烟草的净光合速率(P_(n))、气孔导度(G_(s))、蒸腾速率(T_(r))、最大光化学效率(F_(v)/F_(m))、实际光化学量子效率(ΦPSⅡ)、光化学淬灭系数(q_(P))及电子传递效率(ETR)显著下降,而非光化学淬灭系数(NPQ)显著上升。怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3具有典型烟草病毒增殖蛋白3的结构特征,氨基酸序列及核酸序列与同源物种相似度高,进化上高度保守,且可促进三叶青烟草花叶病毒的增殖,降低植株的光合作用效率。

摘要： 马铃薯是仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物,其营养丰富、实用方法多样,深受人们的喜爱.钾素是植物生长发育所必须的大量元素之一,参与植物体内多种生理过程,钾离子能通过活化多种酶来促进同化产物的代谢和运输.马铃薯是喜钾作物之一,对钾素的需求量较大,钾素对马铃薯的光合同化、品质及产量方面有重要影响.钾离子通道AKT是典型的Shaker家族成员,在拟南芥中研究较多,鉴定出该通道对植物低钾耐受性和体内的转运利用具有重要作用.马铃薯高效钾利用率和耐低钾一直是研究热点,而AKT家族在马铃薯中的研究报道较少.试验成功克隆一个马铃薯StAKT5基因,并利用生物信息学手段对序列进行分析,以及利用Real-Time PCR技术对该基因的组织表达情况、非生物胁迫表达水平进行了初步分析,为后续对该基因的进一步研究奠定了基础.

摘要： 马铃薯是仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物,其营养丰富、实用方法多样,深受人们的喜爱.钾素是植物生长发育所必须的大量元素之一,参与植物体内多种生理过程,钾离子能通过活化多种酶来促进同化产物的代谢和运输.马铃薯是喜钾作物之一,对钾素的需求量较大,钾素对马铃薯的光合同化、品质及产量方面有重要影响.钾离子通道AKT是典型的Shaker家族成员,在拟南芥中研究较多,鉴定出该通道对植物低钾耐受性和体内的转运利用具有重要作用.马铃薯高效钾利用率和耐低钾一直是研究热点,而AKT家族在马铃薯中的研究报道较少.试验成功克隆一个马铃薯StAKT5基因,并利用生物信息学手段对序列进行分析,以及利用Real-Time PCR技术对该基因的组织表达情况、非生物胁迫表达水平进行了初步分析,为后续对该基因的进一步研究奠定了基础.

摘要： 马铃薯是仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物,其营养丰富、实用方法多样,深受人们的喜爱.钾素是植物生长发育所必须的大量元素之一,参与植物体内多种生理过程,钾离子能通过活化多种酶来促进同化产物的代谢和运输.马铃薯是喜钾作物之一,对钾素的需求量较大,钾素对马铃薯的光合同化、品质及产量方面有重要影响.钾离子通道AKT是典型的Shaker家族成员,在拟南芥中研究较多,鉴定出该通道对植物低钾耐受性和体内的转运利用具有重要作用.马铃薯高效钾利用率和耐低钾一直是研究热点,而AKT家族在马铃薯中的研究报道较少.试验成功克隆一个马铃薯StAKT5基因,并利用生物信息学手段对序列进行分析,以及利用Real-Time PCR技术对该基因的组织表达情况、非生物胁迫表达水平进行了初步分析,为后续对该基因的进一步研究奠定了基础.

摘要： 马铃薯是仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物,其营养丰富、实用方法多样,深受人们的喜爱.钾素是植物生长发育所必须的大量元素之一,参与植物体内多种生理过程,钾离子能通过活化多种酶来促进同化产物的代谢和运输.马铃薯是喜钾作物之一,对钾素的需求量较大,钾素对马铃薯的光合同化、品质及产量方面有重要影响.钾离子通道AKT是典型的Shaker家族成员,在拟南芥中研究较多,鉴定出该通道对植物低钾耐受性和体内的转运利用具有重要作用.马铃薯高效钾利用率和耐低钾一直是研究热点,而AKT家族在马铃薯中的研究报道较少.试验成功克隆一个马铃薯StAKT5基因,并利用生物信息学手段对序列进行分析,以及利用Real-Time PCR技术对该基因的组织表达情况、非生物胁迫表达水平进行了初步分析,为后续对该基因的进一步研究奠定了基础.

摘要： 本研究使用金鱼草'马里兰'为材料,利用同源克隆结合RACE技术得到一个12-氧-植物二烯酸还原酶(OPR)基因,命名为AmOPR.AmOPR基因组包含1128个碱基,编码375个氨基酸.同源比对分析结果表明AmOPR与其他植物的AOC基因有较高的同源性.AmOPR存在组织特异性,在花中表达量最高,其次为叶、茎、根.AmOPR基因在金鱼草不同花期相对表达量呈现先下降后上升的趋势,且败花期相对表达量最高,其次为花蕾期.

摘要： 本研究使用金鱼草'马里兰'为材料,利用同源克隆结合RACE技术得到一个12-氧-植物二烯酸还原酶(OPR)基因,命名为AmOPR.AmOPR基因组包含1128个碱基,编码375个氨基酸.同源比对分析结果表明AmOPR与其他植物的AOC基因有较高的同源性.AmOPR存在组织特异性,在花中表达量最高,其次为叶、茎、根.AmOPR基因在金鱼草不同花期相对表达量呈现先下降后上升的趋势,且败花期相对表达量最高,其次为花蕾期.

摘要： 本研究使用金鱼草'马里兰'为材料,利用同源克隆结合RACE技术得到一个12-氧-植物二烯酸还原酶(OPR)基因,命名为AmOPR.AmOPR基因组包含1128个碱基,编码375个氨基酸.同源比对分析结果表明AmOPR与其他植物的AOC基因有较高的同源性.AmOPR存在组织特异性,在花中表达量最高,其次为叶、茎、根.AmOPR基因在金鱼草不同花期相对表达量呈现先下降后上升的趋势,且败花期相对表达量最高,其次为花蕾期.

摘要： 本研究使用金鱼草'马里兰'为材料,利用同源克隆结合RACE技术得到一个12-氧-植物二烯酸还原酶(OPR)基因,命名为AmOPR.AmOPR基因组包含1128个碱基,编码375个氨基酸.同源比对分析结果表明AmOPR与其他植物的AOC基因有较高的同源性.AmOPR存在组织特异性,在花中表达量最高,其次为叶、茎、根.AmOPR基因在金鱼草不同花期相对表达量呈现先下降后上升的趋势,且败花期相对表达量最高,其次为花蕾期.

摘要： 本研究以紫丁香和白丁香为材料,通过同源克隆的方法,运用RT-PCR及RACE技术扩增得到了芳樟醇合酶基因SoLIS.SoLIS基因全长1671bp,编码556个氨基酸,理论分子质量为64.53KD,其氨基酸序列包含单萜合酶特有的DDxxD基序.运用实时荧光定量PCR技术对SoLIS基因的表达进行定量分析,发现了在不同花发育阶段、盛花期一天内不同时间点及不同组织间的基因表达变化趋势.同时进行了花香成分中基因表达产物的释放量的检测分析,发现基因表达水平与产物释放量存在密切关系.

摘要： 本研究以紫丁香和白丁香为材料,通过同源克隆的方法,运用RT-PCR及RACE技术扩增得到了芳樟醇合酶基因SoLIS.SoLIS基因全长1671bp,编码556个氨基酸,理论分子质量为64.53KD,其氨基酸序列包含单萜合酶特有的DDxxD基序.运用实时荧光定量PCR技术对SoLIS基因的表达进行定量分析,发现了在不同花发育阶段、盛花期一天内不同时间点及不同组织间的基因表达变化趋势.同时进行了花香成分中基因表达产物的释放量的检测分析,发现基因表达水平与产物释放量存在密切关系.

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种芒果HMGR基因、用于克隆芒果HMGR基因的引物及其克隆方法，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1；克隆步骤：对芒果的总RNA进行提取和逆转录合成cDNA第一链；芒果的HMGR基因5′‑RACE和3′‑RACE扩增；芒果的HMGR基因全长cDNA扩增；PCR克隆产物的纯化与筛选；本发明方法首次获得芒果HMGR基因的cDNA序列全长，同时通过一种克隆芒果HMGR基因的引物组和克隆方法，它能快速准确地克隆芒果HMGR基因的编码序列，为后续芒果HMGR基因分子研究提供了理论基础。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其是决明SoICS基因、用于克隆决明SoICS基因的引物及其克隆方法；该基因核苷酸序列为SEQ ID NO：1；克隆步骤包括：决明总RNA提取和反转录；3′‑RACE和5′‑RACE扩增；决明ICS基因全长cDNA序列扩增；PCR产物的克隆纯化与筛选。本发明方法首次获得决明SoICS基因的全序列，同时通过一种克隆决明SoICS基因的引物组和克隆方法，它能快速准确地克隆决明SoICS基因的全序列，为后续决明SoICS基因分子研究提供了理论基础。

摘要： 本发明目的是利用人类白细胞抗原(HLA)一致的活性淋巴细胞使造血干细胞移植后附着生长稳定。从末梢血或脐带血分离获得的单核球细胞中的HLA一致淋巴细胞经增殖、活化后，进一步分离提纯，制备以HLA一致淋巴细胞为主要成分的造血干细胞移植后附着生长稳定的组合物。该组合物可以广泛应用于预防造血干细胞移植后附着生长不全及促进造血干细胞移植后附着生长的治疗。本发明中组合物的给药量因患者的年龄、症状而异，对于包括人在内的哺乳动物，人源抗体的给药量为0.2－20毫克/千克体重·天。给药可经静脉注射，每日一次(单次给药或连续给药)或间隔性地每周1－3次，每2周或每3周1次。

摘要： 本发明公开了云锦杜鹃花TPS基因、用于克隆云锦杜鹃花TPS基因的引物及其克隆方法和应用，该云锦杜鹃花TPS基因为萜烯合酶基因RhTPS，所述的萜烯合酶基因RhTPS保守域的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，全长核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，全长氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明首次从云锦杜鹃花中克隆得到杜鹃花萜烯合酶基因RhTPS，该基因为杜鹃花花香形成的关键基因之一，可以通过转基因等生物技术方法培育有香型杜鹃花，为今后利用基因工程技术改良杜鹃花品质提供了重要的理论依据，具有广阔的应用前景和极大的经济价值。本发明为后续云锦杜鹃花瓣TPS基因的确切功能和参与的萜烯类化合物代谢调控途径等的研究奠定基础。

摘要： 本发明公开了比利时杜鹃花FLS基因、用于克隆该基因的引物组及其克隆方法和荧光定量引物组，该基因为黄酮醇合成酶基因RhFLS，其保守域的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，全长核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明首次从比利时杜鹃花中克隆得到杜鹃花黄酮醇合成酶基因RhFLS，黄酮醇合成酶基因RhFLS为杜鹃花花色形成的关键基因之一，可以用于通过转基因等生物技术方法培育不同花色杜鹃花，为今后利用基因工程技术改良杜鹃花品质提供了重要的理论依据，具有广阔的应用前景和极大的经济价值。

摘要： 一种草鱼补体C5基因、用于克隆草鱼补体C5基因的引物及克隆方法，其是设计扩增草鱼补体C5基因的保守结构域核苷酸片段的引物，将提取的草鱼RNA反转录成cDNA第一链，以此为模板PCR扩增得cDNA保守结构域核苷酸片段；并根据该保守结构域片段设计5’‑RACE下游内外巢引物和3’‑RACE上游内外巢引物，再分别以5′‑RACE‑Ready cDNA和3′‑RACE‑Ready cDNA为模板，扩增得到草鱼补体C5基因的cDNA 5′端和cDNA 3′端片段；将cDNA保守结构域核苷酸片段、cDNA 5′端和cDNA 3′端片段进行拼接得到草鱼补体C5基因的全长cDNA序列。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种芒果HMGR基因、用于克隆芒果HMGR基因的引物及其克隆方法，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1；克隆步骤：对芒果的总RNA进行提取和逆转录合成cDNA第一链；芒果的HMGR基因5′‑RACE和3′‑RACE扩增；芒果的HMGR基因全长cDNA扩增；PCR克隆产物的纯化与筛选；本发明方法首次获得芒果HMGR基因的cDNA序列全长，同时通过一种克隆芒果HMGR基因的引物组和克隆方法，它能快速准确地克隆芒果HMGR基因的编码序列，为后续芒果HMGR基因分子研究提供了理论基础。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其是决明SoICS基因、用于克隆决明SoICS基因的引物及其克隆方法；该基因核苷酸序列为SEQ ID NO：1；克隆步骤包括：决明总RNA提取和反转录；3′-RACE和5′-RACE扩增；决明ICS基因全长cDNA序列扩增；PCR产物的克隆纯化与筛选。本发明方法首次获得决明SoICS基因的全序列，同时通过一种克隆决明SoICS基因的引物组和克隆方法，它能快速准确地克隆决明SoICS基因的全序列，为后续决明SoICS基因分子研究提供了理论基础。

摘要： 本发明涉及基因克隆领域，特别涉及青虾甲壳类高血糖激素(Crustaceanhyperglycemichormone，CHH)基因和编码蛋白及其克隆方法。利用本发明提供的引物组从青虾眼柄组织中克隆到了一种CHH基因，为研究CHH基因参与血糖调节、脂代谢、离子转运、渗透压以及促进卵黄生成作用等提供理论参考，为青虾繁殖生理功能研究奠定理论基础。

摘要： 本发明涉及如下异种器官移植用转基因克隆猪及其制备方法：猪内源性逆转录病毒包膜C(PERV(Porcine Endogenous Retrovirus)EnvC)为阴性，α‑1,3半乳糖基转移酶(GGTA1，α‑1,3‑galactosyltransferase)、胞苷一磷酸‑N‑乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH，CMP‑N‑acetylneuraminic acid hydroxylase)、异球三己糖神经酰胺合酶(iGb3s，Isoglobotrihexosylceramide synthase)及β‑1,4‑N‑乙酰基‑半乳糖胺转移酶2(β4GalNT2，Beta‑1,4‑N‑Acetyl‑Galactosaminyl Transferase2)被敲除，表达人类CD46及血栓调节蛋白(TBM，Thrombomodulin)基因。本发明的转基因克隆猪不发生在异种器官移植中发生的猪内源性逆转录病毒的转移的同时，还可以克服超急性及抗原‑抗体介导的免疫排斥反应、由血液凝固引起的免疫排斥反应、由补体活性引起的免疫排斥反应，从而可以将其有效用作用于异种间器官及细胞移植的供体动物。