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农业生物技术学报

农业生物技术学报

北大核心

CSCD

CSTPCD

Journal of Agricultural Biotechnology
《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
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  • 发文量：3926
  • 被引量：1511
  • H指数：3
  • 开始收录时间：
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  • 创刊时间：
  • 国内刊号/CN：11-3342/S
    国际刊号/ISSN：1674-7968
  • 发行周期：月刊
    邮发代号：2-367
  • 主管单位：中华人民共和国教育部
    主办单位：中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报-联系信息
  • 主编：武维华
  • 电话：010-62733684
  • 邮箱：nsjxb@cau.edu.cn
  • 地址：北京市海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室
  • 邮编：100193
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农业生物技术学报 >2021年第012期

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共4384条结果
  • 摘要：从2005～2006年中国部分地区鸡场疑似鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus)感染鸡分离到12株鸡传染性支气管炎病毒,并对其部分生物学特性及基因型进行了研究.发现其中11株病毒分属于LX4和CK/CH/LSC/99 Ⅰ型.通过S1基因比较、进化树分析、BLAST搜寻和动物试验研究发现,CK/CH/LSD/05 Ⅰ是一株新型变异毒株.动物感染试验表明,CK/CH/LSD/05Ⅰ感染鸡的肾脏病变不明显,仅有20%的感染鸡肾脏病毒分离呈阳性,但100%感染鸡呼吸道病毒分离阳性,表明该病毒不是中国普遍流行的肾型毒株,而其对呼吸道具有较强嗜性.同时,实验应用弱毒疫苗H120和本实验室致弱的3株异种毒株进行了动物保护试验,结果显示,用CK/CH/LSD/05Ⅰ攻毒后,这4株异种传染性支气管炎病毒的免疫对气管的保护率很低.初步揭示该毒株可能属新的血清型病毒.
  • 摘要：采用PCR-RFLP技术对中国荷斯坦牛生长激素受体(GHR)基因第8外显子进行单核苷酸多态性分析.结果表明,GHR基因经Tas I酶切后产生2种等位基因和3种基因型.等位基因A和T的频率分别为0.6339和0.3661.基因型AA、AT和TT的频率分别为0.4558、0.350和0.191.测序分析表明TT型和AA型相比在GHR基因第4962位碱基处发生T→A突变,该突变导致氨基酸由苯丙氨酸(TTT)变为酪氨酸(TAT).χ<'2>适合性检验表明,GHR基因的Tas I酶切位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05).最小二乘分析表明:基因型TT所对应的乳脂率最小二乘均值显著高于基因型AA所对应的最小二乘均值(P<0.05).
  • 摘要：采用77对微卫星引物对奥利(Oreochromis aureus)、尼罗(O. niloticus)和橙色莫桑比克(O.mossambicu)3种罗非鱼基因组DNA进行PCR扩增,筛选出17个微卫星鉴定位点,其中奥利亚罗非鱼的特异位点6个(UNH636、UNH117、UNH172、UNH738、UNH878和UNH896);尼罗罗非鱼的特异位点5个(UNH913、UNH907、UNH222、UNH980和UNH880)和橙色莫桑比克罗非鱼的特异位点6个(UNH876、UNH899、UNH853、UNH932、UNH933和UNH773),任意一个位点可在其中一种罗非鱼中扩增出其它两种罗非鱼不具有的条带,从而将这种罗非鱼与其它两种区分开来.利用这17个位点检测三种罗非鱼的遗传结构,共检测到142个等位基因,平均等位基因8.35个,数据经Popgen32计算和MEGA4软件作图,进行聚类分析,确立了三种罗非鱼的亲缘关系.结果奥利亚、尼罗和橙色莫桑比克三种罗非鱼的平均观测杂合度分别为0.0941、0.5490和0.2588,平均期望杂合度分别为0.1089、0.7230和0.2608,平均多态信息含量分别为0.0869、0.7149和0.1643.结果表明,尼罗罗非鱼群体的遗传多样性水平较高,奥利亚罗非鱼群体遗传多样性较低;聚类分析显示奥利亚和橙色莫桑比克罗非鱼群体的亲缘关系近.
  • 摘要：利用102对微卫星引物对5份黑麦(Secale)、4份普通小麦(Triticum aestivum)和1份分枝小黑麦(Triticalc)进行SSR分析,引物Xgwm614能在分枝小黑麦中扩增出一个387 bp的特异DNA片段(记为FZ387,GenBank登录号为EF179137),而黑麦未能扩增出.序列比对结果显示该片段与一粒小麦(T. monococcum)(AY485644)和栽培二粒小麦(T.turgidum)(AY494981)A基因组中Gypsy Ty3-LTR反转座子fatima的一部分分别有94%和95%同源性.根据序列同源性比对结果,在FZ387内部设计1对特异引物FaF和FaR.引物Xgwm614F和FaR能在含有A基因组的物种中扩增出约350 bp的条带(记为A350),而其不含A基因组的物种都未扩增出该条带.利用小麦二体和端体代换系材料对其进行定位,结果显示该片段分布在所有A染色体的长臂和短臂上.此外,引物FaF和Xgwm614R能在含有A、S或AB基因组的物种中扩增出约350bp的条带(记为AB350),而不含AB基因组的材料未扩增出目标条带.利用这两对特异引物对小麦属近缘物种进行PCR扩增,发现只有中国春能够扩增出A350和AB350.序列比对结果和FZ387两侧SSR引物结合区的变化表明,该反转座子类似序列在进化上可能存在基因组间多样性和相似性.A350和AB350也可以分别作为分子标记检测A和AB染色体组.
  • 摘要：类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(calcineurin B-like protein interacting protein kinase,CIPK)在植物非生物胁迫信号转导中起重要作用.应用TR-PCR的方法在玉米(Zea mays)中克隆了一个cDNA全长为1395 bp的蛋白激酶基因ZmCIPK1(GenBank登录号为EF158034).其编码的蛋白含有465个氨基酸,分子量为51.98 kD,等电点为6.92.推断的ZmCIPK1催化结构域中包含蛋白激酶催化结构域保守的11个亚结构域,蛋白C端具有植物CIPK蛋白家族特有的包含24个氨基酸的NAF结构域.半定量RT-PCR结果表明,在甘露醇、氯化钠、ABA和4℃低温诱导时,ZmCIPK1在玉米幼苗叶片中表达量明显上调,在24 h内保持较高的转录水平.ZmCIPK1是一个新的玉米蛋白激酶基因,响应多种非生物胁迫信号.
  • 摘要：同地2年种植种间杂交组合协青早a(Oryza sativa)//协青早B/东乡野生稻(O. rufipogon)的202个BC1F5株系,利用含149个DNA标记的连锁图谱,检测到23个产量性状QTLs,包括每株穗数2个、每穗实粒数4个、每穗总粒数6个、结实率5个、千粒重4个和单株产量2个;有9个QTLs的增效等位基因来自东乡野生稻,包括每株穗数2个、每穗实粒数1个、每穗总粒数5个和千粒重1个,其中6个与前人应用野栽群体检测到的产量性状QTLs位于相似区间.这23个QTLs分布除第11染色体外的所有水稻染色体中,其中18个形成8个QTL簇,含增效等位基因来自野生稻的2个、来自协青早B的4个,效应方向发生变化的2个.
  • 摘要：BIB0830是将泰乐菌素转化为乙酰异戊酰泰乐菌素(ARC)的耐热链霉菌(Streptomyces thermotolerans)I业菌株.以plJ8600为载体分别构建了acyB1-B2基因整合型表达载体pB1B425和带红霉素突变启动子ermEp*的红霉素抗性ermE基因整合型表达载体pBIB304.通过大肠杆菌(Escherichia coli)-链霉菌属间接合转移分别将pBIB425、pBIB304和pBIB308(耐热链霉菌的nsdA基因中断载体)导人工业菌株BIB0830,抗性筛选分别得到接合子BIB425、BIB304和BIB308.经PeR验证均为阳性克隆.摇瓶发酵结果表明,与出发菌株BIB0830相比,BIB425和BIB308泰乐菌素转化率分别提高了14%和22%,而BIB304则无明显影响.
  • 摘要：利用具有猝灭植物青枯菌(Ralstonia solanacearum)群体感应信号分子功能的aac基因构建高效植物表达载体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的方法转化烟草(Nicotiana tabacam),获得了卡那霉素抗性植株57株.经PCR及RT-PCR检测,筛选得到30株阳性转基因再生苗,并证实了目的基因已经整合到烟草基因组中,且在转录水平上得到表达.转基因植株苗期抗青枯病试验表明,16 d后转基因烟草较对照植株病情指数降低了51,相对病情指数为56.5%.
  • 摘要：研究克隆了玉米大斑病菌(Setosphearia turcica)G蛋白β亚基编码基因Stgb-1.Stgb-1基因全长1296bp,由5个外显子和4个内含子组成;开放阅读框(ORF)为1056 bp,编码351个氨基酸,蛋白质计算分子量为39.081 kD.其推导氨基酸序列与Cochliobolus heterostrophus、Cryphonectria parasitica和Aspergillus fumigatus的G蛋白β亚基编码基因均具有较高的同源性,分别为100%、80%和81%.将该序列提交GenBank登录号为No.EF407555.利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)和Genomic walking技术获得了Stgb-1基因3'末端cDNA和3'端DNA侧翼序列,BlastN结果表明其cDNA 3'-UTR为136bp,poly(A)由9个A构成.构建了pET28a-Stgb-1原核表达载体,SDS-PAGE检测和Western blot鉴定结果表明,目的蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中诱导表达.
  • 摘要：2000年以来,RNA特别是非编码RNA的研究取得了很多引人瞩目的新成果.本文综述了2000年以来非编码RNA的序列数据资源、结构数据资源、在线工具和分析软件资源取得的新进展;总结了至2007年5月非编码RNA的序列综合、专门数据库及其数据,实测、预测、二次挖掘结构数据库及其数据,二级结构预测、功能预测和同源进化分析软件.还分析了目前非编码RNA网络资源存在的问题和不足,并展望了未来的研究方向.
  • 摘要：据中国科学技术信息研究所“2007年引证报告”及“中国知网”发行与传播统计报告，其中《农业生物技术学报》2007年各项指标统计结果如下。在此我们谨对高贡献文章作者和高贡献机构表示由衷的感谢!希望你们一如既往，继续关注和支持我刊的发展，不断提供高质量的学术论文。
  • 摘要：大白菜-结球甘蓝异附加系是利用结球甘蓝(Brassica oleracea L.var. capitata)的优良基因对大白菜(Brassica compestris L.ssp.pekinensis)进行品种改良的中间材料.研究以大白菜-结球甘蓝异源三倍体(AAC,2n=29)与二倍体大白菜(AA,2n=20)回交一代的自交后代为材料,经过细胞学鉴定,从中筛选出大白菜-结球甘蓝4号单体异附加系CO-4-1.终变期联会以10个二价体和1个单价体(10Ⅱ+Ⅰ)为主,约占85%;中期Ⅰ,绝大多数细胞中有染色体游离于赤道板外;后期Ⅰ多以11-10方式分布;后期Ⅱ多以11-10-11-10形式分离.叶背有轻微腊粉,叶面光滑无皱褶以及抽薹晚等田间性状与结球甘蓝相似.减数分裂和田间性状均可以说明额外染色体为甘蓝染色体.该异附加系的获得为研究芸薹属A、C基因组的亲缘关系,以及向大白菜中导入结球甘蓝的优良基因,扩大种质遗传背景具有重要意义.
  • 摘要：利用ELISA方法测定近等基因系玉米(Zea mays)对生、互生玉米的不同组织和不同生育期内源细胞分裂素ZRs(zeatin riboside group)、DHZRs(dehydro zeatin riboside group)、iPAs(isopentenyladenosine group)以及内源生长素IAA(indole acetic acid)含量差异.结果表明,不同叶序玉米在不同生育期幼胚、成熟花粉和成熟叶片的内源ZRs、DHZRs、iPAs和IAA均无显著差异;不同生育期对生叶序玉米幼苗顶端分生组织和成熟苗顶端雄幼穗ZRs、DHZRs和iPAs含量显著高于同期近等基因系的互生玉米,IAA含量在两者之间无显著差异;对生叶序玉米幼苗顶端分生组织、成熟苗顶端雄幼穗CTK/IAA(CTK表示ZRs、DHZRs和iPAs含量相加)比值显著高于同期近等基因系互生叶序玉米,但在不同生育期幼胚、叶片及花粉内均无显著差异.对生叶序的形成与生长点组织细胞分裂素含量增加密切相关.
  • 摘要：磷酸丙糖转移蛋白（triose phosphate translocator，TPT）是叶绿体内膜上的一种重要的转运蛋白，其作用是以细胞质中的无机磷酸为平衡离子，将光合作用的最初产物磷酸丙糖从叶绿体中转运到细胞质中转化为蔗糖或氨基酸（Flugge，1999），因此TPT活性的变化是改变碳水同化产物向细胞质分配的一条重要途径（Barnes et al．，1994；Poolman et al.2000）。本实验克隆了玉米TPT cDNA全长，构建表达载体转化烟草，为研究TPT在抗病毒病中的作用提供基本材料。
  • 摘要：为了构建由双CMV启动子调控的真核双顺反子表达载体peDNA3.1AB,首先在peDNA3.1(+)的基础上,构建出pcDNA3.1A和pcDNA3.1B,然后通过PCR方法扩增pcDNA3.1A上含PCMV-MCS-BGHpolyA表达单元的片段,再定向克隆入pcDNA3.1B,最后得到载体pcDNA3.1AB.将DsRed与EGFP基因插入pcDNA3.1AB,分别构建pcDNA-DsRed、pcD-NA-EGFP和pcDNA-DsRed-EGFP真核表达质粒,并转染COS-7细胞瞬时表达.用荧光显微镜进行检测,结果表明,双价质粒pcDNA-DsRed-EGFP能同时表达红色和绿色荧光蛋白基因,两基因表达强度无显著差异,且双价与单价质粒相比荧光蛋白表达强度相当.
  • 摘要：将缩胆囊素33基因四串体片段(4·CCK33)克隆到原核表达载体pBCX,成功构建了重组表达质粒pBCX-4·CCK33.将其转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中表达,SDS-PAGE检测到分子量约为53 kD的融合蛋白,最高表达量占菌体总蛋白的30.08%,融合蛋白主要以可溶性形式表达.Western blot证实,表达的融合蛋白与CCK 8阳性血清具有良好的免疫反应性.将纯化的可溶性融合蛋白制成油乳剂疫苗,主动免疫蛋鸡,ELISA检测结果表明,该融合蛋白能在鸡体内引起免疫反应.在肉猪饲料中添加100g/t含CCK抗体的蛋黄粉,试验期间平均日增重和采食量与阴性蛋黄粉组相比,分别提高6.64%和8.0%,差异显著(P<0.05).研究结果初步表明自制的含缩胆囊素抗体的蛋黄粉可作肉猪饲料添加剂,对肉猪生长具有一定的促进作用.
  • 摘要：以芥菜(Brassica Juncea Coss.)的子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的介导,将商陆抗病毒蛋白基因PAP导入到芥菜中.对所获得的40株抗性植株进行PCR扩增,其中阳性植株为29株;Southern blot分析结果证明PAP基因已被整合到芥菜基因组中,在大多数转基因植株中外源基因呈单拷贝,少数为双拷贝;Northern blot分析结果表明,PAP在转基因植株中正常表达.转基因植株接种病毒试验初步结果表明,转PAP基因的植株对芜菁花叶病毒TuMV的侵染有一定的抑制作用.
  • 摘要：根据GenBank发表的鸡和鸭等物种的脂联素基因序列的同源保守区域,设计了3对特异性引物,以鹅(Anserdomeatica)血液基因组DNA为模板,经扩增、测序及拼接得到了部分DNA序列,全长1062bp,包含2个外显子和1个内含子(GenBank Accession No.EU370686).该基因编码区长738 bp,编码245个氨基酸,编码区核苷酸序列及所编码氨基酸序列与鸭的同源性最高,分别为94.85%和95.51%,与鸡的同源性次之,而与哺乳类的同源性较低.蛋白预测的分子量和等电点分别为26603.3D和5.19,与鸡、鸭、人及小鼠的脂联素蛋白相似.半定量PCR结果显示鹅脂联素基因在骨骼肌、脂肪、心脏和肌胃中高度表达,在小肠、腺胃、肾和肺中中度表达,而在肝脏、脾、卵巢和间脑中低度表达.
  • 摘要：对表达乳糖诱导工程菌株BL-pET-hBD3-Brazzein(Bra)的人β防御素3(human β defensin, hBD3)和植物des-pGlu1-Brazzein融合蛋白进行了纯化和活性分析,并对工程菌株的乳糖诱导表达条件进行了优化.对目的蛋白的活性分析表明,hBD3-Bra融合蛋白有一定甜味,但是杀菌活性很弱,经凝血酶切割后,重组hBD3有明显抑菌活性,des-pGlu1-Brazzein的甜度大约为蔗糖的600倍.菌株生长和目的蛋白表达结果显示:0.5%～5.0%范围内高乳糖浓度会抑制菌株生长(P<0.01),但对目的蛋白表达无显著影响(P>0.05);诱导时间延长对菌株生长有利(P<0.01),对目的蛋白表达无显著影响(P>0.05);温度对菌株生长和目的蛋白表达均有显著影响(P<0.01).进一步研究表明,菌株最优生长温度是30～32℃,蛋白表达最优温度是30℃,乳糖和IPTG的诱导结果无显著差异(P>0.05).
  • 摘要：利用14对蓝孔雀(Pavo cristatus)和绿孔雀(p.muticus)的微卫星标记对白孔雀基因组DNA进行扩增,发现都能扩增出特异性条带,每对引物扩增的平均等位基因数为1.71,有7对引物具有较丰富的多态性,其中MCW0080和MCW0098标记期望杂合度分别为0.7207和0.7571,多态信息含量分别为0.658和0.695,表现出丰富的遗传多样性和较高的选择潜力.白孔雀×蓝孔雀和绿孔雀群体的遗传多样性分析结果表明,白孔雀、绿孔雀和蓝孔雀3个群体的杂合度和遗传多样性水平都很低,期望杂合度分别为0.2579、0.2482和0.2744,群体间的遗传分化系数为9.7%,群体间分化极显著(P<0.001),白孔雀与蓝孔雀的亲缘关系最近,Reynolds'遗传距离和基因流分别为0.0295和8.6112,表明白孔雀不是蓝孔雀一个亚种.
  • 摘要：苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白Cry7Ba1需要在强碱性缓冲液中(pH 12.5)才能溶解,而且只有溶解后才能对小菜蛾(Plutellaxvlostella)表现出毒力,其LC<,50>为1.33μg/mL.分别用Cry1Ac和Cry1C晶体蛋白的C-半段替换Cry7Ba1的C-半段,结果发现当Cry7Ba1的C-半段被替换后,重组晶体蛋白与Cry1Ac和Cry1C等其它晶体蛋白一样在弱碱性条件下(pH 9.5)能有效溶解,而且重组晶体蛋白对小菜蛾的杀虫活性没有发生明显变化,其LC<;50>分别为1.32和1.39μg/mL.结果还显示重组晶体蛋白不需要经过体外溶解就能对小菜蛾表现出杀虫活性.研究结果揭示Cry7Ba1晶体蛋白难溶的特性是由其C-半段结构决定的,通过改变其C-半段结构改善溶解性,为该晶体蛋白在害虫生物防治中的应用提供了可能.
  • 摘要：对含有鸡白细胞介素-18(ChIL-18)基因的质粒在大肠杆菌(Escherichia coli)内进行诱导表达,经亲和层析法对表达产物进行纯化,用微量细胞病变抑制法CEF-VSV系统,检测其对SPF鸡脾淋巴细胞诱导产生γ-干扰素(IFN-γ)的活性和其对病毒的抑制效果;用3H-TdR掺入法和MTT法分别检测其对T淋巴细胞诱导转化和NK细胞杀伤活性的作用.结果表明,经诱导表达出分子量44kD的目的蛋白(与GST融合表达),纯化后得到去除菌体蛋白的高纯度目的蛋白;该蛋白能够诱导脾细胞产生IFN-γ,当浓度为250 ng/mL时诱导IFN-γ的活性最高,可达1x106 U/mL;但该蛋白不能直接抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长;能够刺激淋巴细胞显著增殖,浓度为250ng/mL时效果最佳;适当浓度的rChIL-18蛋白能促进NK细胞的杀伤活性,浓度为150 ng/mL时,作用最强.利用原核表达的重组鸡白细胞介素-18蛋白与天然鸡IL-18蛋白一样具有较广泛的生物学活性.
  • 摘要：采用比较基因组学和RT-PCR方法,根据人和小鼠SMAF1基因的保守序列,设计简并引物,克隆了猪SMAF1基因的cDNA序列,大小为256bp(GenBank登录号为DQ191892),包括一个编码81个氨基酸的完整编码区,该序列与人和小鼠的SMAF1基因序列的相似性分别为86%和78%,预测的氨基酸序列与人、小鼠、牛和大鼠SMAF1蛋白的氨基酸序列的相似性分别为81%、67%、84%和70%.半定量RT-PCR显示,猪SMAF1基因在脂肪组织中高丰度表达,在4月龄瘦肉型猪(大白猪)脂肪组织中的表达量显著低于脂肪型猪(梅山猪)(P＜0.05).研究结果表明,猪SMAF1基因可能具有和其它物种SMAF1基因相似的功能,推测其在脂肪细胞发生和/或脂肪细胞功能中具有重要的调控作用.
  • 摘要：将长的基因表达序列标签(LongSAGE)和结合标签的基因序列延伸(GLGI)技术相结合,对GLGI的方法进行改良.(1)将原始GLGI方法中正向引物中长为10 bp的SAGE标签特异序列改为17bp的LongSAGE标签;(2)针对不同LongSAGE标签,在PCR反应中给定相应不同的退火温度;(3)在PCR反应中用普通的DNA聚合酶代替高保真酶(Pfu);(4)在PCR反应的克隆中,使用普通的T载体和感受态细胞代替原始方法中特异的载体和感受态细胞.利用改良的GLGI方法分离的EST位于cDNA的3'末端并带有加尾信号和ploy(dA)尾巴.该方法在鉴定低丰度表达的基因时比普通的EST测序方法具有更高的灵敏性.%Combining with the long serial analysis of gene expression (LongSAGE) and the gene ration of longer cDNA fragments from serial analysis of gene expression tags for gene identification (GLGI) technique, a new strategy called modified GLGI(M-GLGI)was developed to isolate unknown 3'EST and discover novel genes: (1) A 17-base pairs LongSAGE tag was used as sense primer instead of 10-base SAGE tag; (2) PCR reaction was performed under an appropriate annealing temperature for each tag; (3) Universal DNA polymerase was used in PCR amplification instead of Pfu enzyme; (4) Common cloning strategy using pMD-18T vector and E. coli DH5α cell were used instead of a special vector and competent cells. Moreover, ESTs isolated by M-GLGI had 3' end with the polyadenylation signals and ploy (dA) tails. This method is more sensitive for identifying gene expressed in low abundance than conventional EST sequencing.
  • 摘要：根据GenBank已公布的植物谷胱甘肽硫转移酶基因EST序列设计引物,利用3'和5'RACE方法,获得紫杆柽柳GST基因(TaGST)全长cDNA序列,全长为1 175 bp,开放读码区672 bp,编码224个氨基酸(GenBank accission No.DQ683363).其所编码的蛋白与大豆的GST10同源性为48%.利用pET-28a(+)构建了紫杆柽柳(Tamarix androssowii)GST基因的原核表达载体,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21进行了原核表达.诱导表达蛋白的SDS-PAGE检测表明,所表达的蛋白分子量约为26kD.初步的酶学活性检测表明,所克隆的基因编码的肽段具有催化GST蛋白通用底物CDNB(1-氯-2,4-二硝基苯)和GSH(还原型谷胱甘肽)反应的活性.
  • 摘要：利用PCR方法从油菜(Brassica napus)基因组中扩增得到花瓣特异性启动子XY355,构建该启动子与玉米(Zea mays)花青素调节基因Lc的植物表达载体pXY60.通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将pXY60分别转化烟草(Nicotiana tabacum)和矮牵牛(Petunia hybrida).对再生植株进行PCR检测,结果表明,外源基因已经整合到转基因烟草和矮牵牛的基因组中.观察发现,转基因植株的表型发生了明显变化:转基因烟草的花色由浅红变成了红色,转基因矮牵牛的花色由白色变成了浅紫色.
  • 摘要：实验通过PCR程序从提取的土壤总DNA中扩增出草甘膦N-乙酰转移酶基因(gat),酶解后插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pGEX-6p-1,获得克隆株.基因测序表明,与GenBank中的AX543338核苷酸序列有99.3%的同源性.将GAT经亲和层析纯化后,对该酶的酶学性质进行了初步分析,结果表明,该酶的最适温度为30℃,最适反应pH 7.检测了6种金属离子对酶活性的影响,发现单价离子K+和Na+对GAT的激活作用高于双价离子Mg2+和Mn2+,其中Na+的激活作用最强,而Ca2+有明显的抑制作用.
  • 摘要：精子冷冻是保存动物种质资源和扩繁良种的一种有效方法，在家畜上有比较好的实际应用。但实验小鼠的精子冷冻有一定的难度。随着小鼠胞浆内单精子注射技术（ICSI）的出现，可以弥补小鼠精子冷冻技术的不足。Wakayama和Yanagimaghi（1998）用ICSI技术尝试了冻干精子生产小鼠的可行性，并且取得了成功。Liu et al．（2004）又证明冻干精子也能通过ICSI技术生产家兔。在我国，严阿勇等（2005）首例用新鲜精子生产的ICSI小鼠，随后又用ICSI技术成功地实现了转基因小鼠的生产（李明等，2006）。在此基础上，本实验进一步改进了显微操作技术，并且报道了用冻干精子生产ICSI小鼠的实例，为精子的冻干保存提供了依据。
  • 摘要：用网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染SPF鸡造成免疫抑制状态,用双抗体夹心ELISA对鸡脾淋巴细胞γ-干扰素(IFN-γ)的分泌量进行了测定.结果显示,SPF雏鸡接种REV后,除呈现生长缓慢症状外,并出现了中枢免疫器官严重萎缩等免疫抑制状态的典型表现.IFN-y ELISA显示,REV感染后7 d(7dpi),脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量显著升高,与对照组相比差异极显著,至15dpi,IFN-γ水平最高,以后逐渐下降,但至50dpi仍显著高于对照鸡.这是REV感染鸡后对IFN-γ影响的首次直接定量研究.
  • 摘要：Bt转基因棉花于1997年在我国商业化种植,到2006年种植面积已达棉花总面积的70%.环境影响监测表明,Bt棉花有效地控制了棉铃虫(Helicoverpa armigera)和红铃虫(Pectinophora gossypiella)的发生和为害,但盲蝽蟓(Hemiptera:Miridae)类害虫演化上升成为棉田的主要害虫.抗性分析显示,虽然棉铃虫自然种群对Bt棉花抗性基因频率没有明显的变化,但Bt棉花高强度种植地区的棉铃虫耐受性正逐年提高,已成为影响Bt棉花持续利用的主要因素.基于Bt棉花环境风险和影响因子的综合分析,讨论了Bt棉花环境风险的管理策略.

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