亚细胞定位

摘要： MAPKKs是促丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联反应主要成员之一,位于该级联反应通路中间,对信号传递起着收集和发散的关键作用。有研究表明马铃薯StMAPKK4基因响应干旱胁迫,为进一步探究该基因的生物学功能,本研究对StMAPKK4基因进行了生物信息学分析。结果表明,StMAPKK4与科民茄亲缘关系最近。其含有蛋白激酶家族的Protein kinase domain(PF00069)结构域,位置定位于64~302 aa之间。StMAPKK4含有多个激素(茉莉酸甲酯、乙烯、脱落酸、ABA)及胁迫相关响应元件。qRT-PCR分析结果表明,StMAPKK4基因在马铃薯茎中表达量最高,且在干旱及盐处理下均上调表达。亚细胞定位表明该基因定位于细胞膜上。利用酵母双杂交方法筛选出8个与StMAPKK4相互作用的蛋白,并通过回转试验验证了其互作的真实性。对互作蛋白进行Blast比对结果显示,StMAPKK4与多酚氧化酶、藻蓝蛋白、天冬氨酸转氨酶、渗透素、磷酸盐转运蛋白等多种蛋白互作,初步判断StMAPKK4可能参与光合作用响应机制、植物体低温、干旱及盐胁迫等一系列非生物胁迫、促进根系对磷元素的吸收等生理生化过程。

摘要： [目的]通过构建分离群体定位并克隆水稻雌雄不育基因OsFMA2,并对其在水稻育性调控中的功能进行探究.[方法]通过EMS诱变水稻宁粳4号得到稳定的不育突变体,对突变体进行表型及细胞学观察,利用精细定位和Mut-map相结合的方法克隆了水稻雌雄不育基因OsFMA2,通过实时荧光定量PCR检测其在各组织表达水平差异,利用水稻原生质体表达系统进行OsFMA2蛋白的亚细胞定位.[结果]细胞学观察发现突变体为雌雄不育.利用极端个体将其精细定位于水稻第6染色体长臂448 kb的区间内.结合全基因组重测序结果,最终确定OsFMA2为目标基因.该基因编码一个复制蛋白,在单子叶植物中高度保守.OsFMA2具有组织特异性,在幼穗中高表达.亚细胞定位结果显示OsFMA2蛋白定位于细胞核中.[结论]OsFMA2在幼穗中高表达,可能参与了水稻雄配子第一次减数分裂前期同源重组过程,同时,OsFMA2的表达对雌配子发育也产生了不利影响.

摘要： 通过怀玉山三叶青试管苗转录组数据库筛选到怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2 A基因的核心片段,利用RT-PCR技术克隆怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2 A基因,并采用生物信息学方法、转基因瞬时表达和实时定量PCR进行序列分析、亚细胞定位和器官表达分析。结果表明,怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2 A基因cDNA总长度为858 bp,G+C含量为49.53%;怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2 A由285个氨基酸组成,分子量31437.53 Da,等电点5.77,为亲水性蛋白;二级结构由α-螺旋(28.77%)、β-片层(16.14%)、无规则卷曲(55.09%)构成;三级结构为单体;预测怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2 A主要存在细胞核、线粒体、叶绿体和细胞质中;怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白2 A在进化上与硬粒小麦、节节麦、乌拉尔图小麦、大麦、二穗短柄草的亲缘关系较近,尤其是与硬粒小麦未命名蛋白产物(VAH 15508.1)在进化上具有最高的亲缘关系。通过烟草叶片亚细胞定位分析表明,烟草病毒增殖蛋白2 A定位于细胞质和细胞核中。实时定量PCR结果显示,烟草病毒增殖蛋白2 A基因在怀玉山三叶青2个栽培种中的表达存在器官特异性,怀玉2号和怀玉1号均在叶中表达量最高。

摘要： 环境胁迫严重影响花生的产量和品质。筛选并研究花生中胁迫响应相关基因,对深入解析花生响应胁迫的分子机理具有重要意义。本研究从花生果腐病转录组文库中筛选并克隆得到花生基因AhMAPK14,对其进行了生物信息学分析及亚细胞定位,并利用qRT-PCR技术分析了其组织表达特异性及在不同处理下的表达模式。结果表明,AhMAPK14具有MAPK家族的典型结构域,并且在多数植物中高度保守;定位于细胞质与细胞核中,与多数MAPK家族成员的定位一致。因此推测AhMAPK14在花生中发挥的作用与其他植物相类似。此外,AhMAPK14在不同组织中的表达量差异性较大,在下胚轴中的相对表达量最高,并且能响应干旱、低温等非生物胁迫和ABA、JA等多种植物激素及信号分子的刺激。以上结果初步表明AhMAPK14在花生应对逆境胁迫中发挥作用,为深入揭示AhMAPK14的功能和花生抵御环境胁迫的分子机理打下了基础。

摘要： DNA甲基化是一种在DNA甲基转移酶催化条件下发生的重要共价修饰作用,DNMTs是植株中重要的DNA甲基转移酶。DNMT2甲基转移酶基因最早发现于拟南芥中,即AtDNMT2。文章通过在美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库进行序列比对获得番茄中DNMT2基因序列,并命名为SlDNMT2。通过比较11个物种中DNMT2保守域、进化树分析以及DNMT2结构域分析,发现不同物种中DNMT2具有较高同源性;通过同源克隆获得番茄SlDNMT2基因cDNA全长序列;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术分析SlDNMT2基因在番茄植株中的组织特异性表达情况,结果显示SlDNMT2在不同组织中均有表达,尤其是在花和叶中SlDNMT2的表达量较高;构建SlDNMT2融合表达载体pART-27-35S::SlDNMT2-eGFP,利用农杆菌介导的烟草瞬时表达系统确定SlDNMT2蛋白定位于细胞核。此外,该文还探究不同非生物胁迫条件对转基因RNAi植株生长发育状态的影响,结果显示转基因RNAi植株对300μmol/L Zn^(2+)胁迫条件更加敏感。该文为研究SlDNMT2基因在植物生长发育过程中的生物学功能及其作用的分子机制提供了科学依据,并为进一步研究植物应对非生物胁迫时SlDNMT2基因的功能作用奠定了一定的理论基础。

摘要： 热激转录因子(heat shock transcription factor,Hsf)在真核生物中广泛存在,通过调控下游转录因子、功能酶以及分子伴侣的表达从而响应多种非生物胁迫。该研究以小麦(Triticum aestivum)品种‘沧6005’幼苗为材料,采用同源克隆技术从37°C热胁迫处理的二叶一芯幼叶中克隆目的基因TaHsfA2-5,并分析该基因的亚细胞定位,经农杆菌介导、利用蘸花法转化拟南芥野生型植株,筛选阳性苗进行基础耐热性和获得耐热性分析,并对热胁迫后转基因拟南芥HSR基因的表达进行分析,以探讨小麦热激转录因子TaHsfA2-5基因的生物学功能。结果表明:(1)成功获得小麦热激转录因子基因TaHsfA2-5,该基因编码405个氨基酸,分子量为44.9 kDa;序列比对分析显示,小麦TaHsfA2-5蛋白与大麦HvHsfA2b蛋白相似性最高,达到88.07%。(2)激光共聚焦显微镜观察表明,小麦TaHsfA2-5蛋白定位于细胞核。(3)qRT-PCR分析发现,TaHsfA2-5在小麦成熟的根、雄蕊、雌蕊、萼片、成熟种子以及幼胚中呈现出较高的表达水平;在热胁迫条件下,TaHsfA2-5在小麦叶片以及根中呈现出不同程度的上调表达趋势。(4)表型观察发现,与野生型拟南芥相比,转小麦TaHsfA2-5基因拟南芥能够提高热胁迫下植株的基础耐热性和获得耐热性,同时能够恢复拟南芥缺失突变体AtHsfA2的耐热表型,热胁迫下不同株系叶绿素含量与表型相一致。(5)HSR基因表达分析发现,过表达TaHsfA2-5拟南芥均能够不同程度地上调所检测的HSR基因的表达量,表明小麦TaHsfA2-5基因可能通过调控多个拟南芥热胁迫相关基因的表达,从而增强其热胁迫耐性。

摘要： 碱性螺旋环螺旋(basic/Helix-Loop-Helix,bHLH)转录因子是植物最大的转录因子家族之一,其广泛参与植物逆境胁迫响应。该研究从野生‘潘那利’番茄(Solanum pennellii Correll)中成功克隆出bHLH转录因子基因SpbHLH89(Sol Genomics登录号Sopen04g001150),采用qRT-PCR分析其在干旱胁迫下的表达模式,并利用异源表达初步分析其对非生物胁迫的响应。结果表明:(1)SpbHLH89编码区包含684 bp,编码227个氨基酸,具有典型的碱性螺旋环螺旋区,主要定位于细胞核中;进化树结果显示,SpbHLH89转录因子高度保守,与拟绒毛烟草NtbHLH94(Nicotiana tomentosiformis)存在高度相似性。(2)qRT-PCR结果显示,SpbHLH89在‘潘那利’番茄的茎、叶和花中均有表达,其表达量受干旱胁迫诱导。(3)SDS-PAGE与Western bloting结果显示,pET-30a-SpbHLH89重组蛋白大小约为31 kD。(4)在盐胁迫(400 mmol/L NaCl)和干旱胁迫(600 mmol/L甘露醇)条件下,异源表达重组蛋白的E.coli BL21(DE3)重组菌生长速度提高,说明异源表达SpbHLH89转录因子基因可提高细菌对非生物胁迫的耐受性。

摘要： DNA甲基化主要是通过在甲基转移酶的催化下修饰基因组DNA来响应外界环境的胁迫,是表观遗传学的重要手段之一,参与植物中DNA甲基化起始的主要DNA甲基转移酶是DRM2。文章通过美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库,在番茄中发现了一个与拟南芥胞嘧啶甲基转移酶DRM2同源性较高的序列,即SlDRM2L。通过GenBank(登录号NM-001246974)获得番茄DNA甲基转移酶SlDRM2L基因的cDNA全长序列。实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结果表明SlDRM2L在所有组织中均有表达,叶和花的表达量最高。同时利用烟草瞬时表达系统将构建的绿色荧光瞬时表达载体35S::SlDRM2L-GFP用于亚细胞定位实验,通过激光共聚焦显微镜观察可知SlDRM2L蛋白定位于细胞核中;此外,在高温条件下(39°C,4 h),番茄SlDRM2L的基因转录水平明显提高,表明SlDRM2L介导的DNA甲基化可能受高温诱导。该文为发现SlDRM2L在植物生长发育中的作用提供了相关的科学依据,为深入研究SlDRM2L的功能奠定了理论基础。

摘要： 【目的】研究北美鹅掌楸LtuHMGS基因的结构特性、亚细胞定位及表达模式,为从分子水平探究北美鹅掌楸萜类合成途径提供理论基础。【方法】从北美鹅掌楸转录组数据库中鉴定出一条HMGS基因序列,采用RACE技术克隆其全长cDNA,将其命名为LtuHMGS。对LtuHMGS基因的ORF进行生物信息学分析,探究其理化性质及与同源基因的系统进化关系;利用烟草瞬时转化系统对LtuHMGS基因编码蛋白进行亚细胞定位;采用RT-qPCR技术分析LtuHMGS基因在北美鹅掌楸的组织表达谱。【结果】LtuHMGS基因的ORF全长1425 bp,共编码474个氨基酸,蛋白质分子式为C_(2340)H_(3608)N_(614)O_(721)S_(24),分子量为52.65 kD,α-螺旋为其氨基酸序列的主要二级结构且该蛋白不含信号肽和跨膜区域,是一种非分泌型蛋白。对LtuHMGS蛋白的保守结构域预测分析发现其氨基酸序列含有羟甲基戊二酰辅酶A合酶保守结构域,亚细胞定位表明LtuHMGS蛋白可能更多地存在于细胞质膜中。同源序列比对和系统进化树分析表明,北美鹅掌楸LtuHMGS蛋白序列与其他物种的序列高度相似且与樟科的沉水樟和山鸡椒的HMGS蛋白的进化关系更近。RT-qPCR结果发现,LtuHMGS基因在北美鹅掌楸雌蕊中的表达量远高于其他组织。【结论】从北美鹅掌楸中克隆得到1条编码羟甲基戊二酰辅酶A合酶的候选基因(LtuHMGS),该基因可能参与北美鹅掌楸萜类物质的合成,是研究北美鹅掌楸萜类合成机制的关键酶基因之一。

摘要： SPL存在于所有绿色植物中,在植物生长发育及叶片形成中起着重要的作用。该研究以‘改良香菇’芥蓝为材料,采用生物信息学方法,对芥蓝SPL家族(BoSPL)进行全基因组鉴定及分析;采用PCR技术克隆BoSPL3-1、BoSPL10-2和BoSPL11-2基因,并对芥蓝不同生长时期及不同组织部位进行定量分析,为揭示‘改良香菇’芥蓝叶片发育过程的分子机制以及培育芥蓝新品种奠定基础。结果表明:(1)BoSPL家族共有31个成员,编码区蛋白质氨基酸长度在157~1028 aa之间,BoSPL蛋白质的氨基酸均没有信号肽,属于非分泌蛋白;亚细胞定位预测结果显示,所有的BoSPL家族成员均有定位在细胞核上,少数成员有定位在液泡、叶绿体和细胞质中;BoSPL家族基因包含内含子数量为1~9个,所有成员均包含SBP保守结构域;系统进化分析显示,BoSPL可以分为8个进化群亚组,各群基因数量不等,且BoSPL进化关系与AtSPL相似。(2)成功克隆到BoSPL3-1、BoSPL10-2和BoSPL11-2基因,并成功构建pCAMBIA1302-35S-BoSPL3-1-GFP、pCAMBIA1302-35S-BoSPL10-2-GFP和pCAMBIA1302-35S-BoSPL11-2-GFP重组质粒,经根癌农杆菌GV3101介导瞬时转化烟草下表皮细胞,激光共聚焦显微镜检测表明,BoSPL3-1、BoSPL10-2和BoSPL11-2均定位在细胞核中,与预测结果一致。(3)qRT-PCR分析显示,BoSPL3-1、BoSPL10-2和BoSPL11-2在‘改良香菇’芥蓝叶片中相对表达量均较高,但3个基因在叶肉中的相对表达量无明显差异,而BoSPL10-2在花状变形叶中却显著高表达,推测其可能与花状变形叶形成相关。

摘要： 目的：分析烟草NbGRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能. 方法：在前期研究中,从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因NbGRX1,并对其表达特性进行了研究.在此基础上,对NbGRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究.利用病毒介导的基因沉默,在烟草中沉默了该基因,并调查NbGRX1基因沉默后烟草对干旱的响应.同时采用农杆菌介导法,将NbGRX1基因转化至拟南芥中,筛选单拷贝插入的纯合转基因拟南芥进行后续研究,对转基因拟南芥及对照进行干旱处理,并分析其表型. 结果：亚细胞定位研究表明,空载体中的GFP蛋白定位在细胞质和细胞核中,GFP:NbGRX1的融合蛋白均匀分布在细胞质和细胞核中,因此可以推测NbGRX1蛋白能定位在植物的细胞核和细胞质中.病毒介导的基因沉默研究表明,NbGRX1基因沉默烟草与对照相比对干旱胁迫更为敏感,更容易出现黄化和萎蔫的症状,叶片相对含水量下降;NbGRX1基因超量表达的株系干旱能力明显高于对照. 结论：烟草NbGRX1基因能够提高植物的抗旱性.

摘要： 我国南方春大豆在种子成熟过程中,常处于高温、高湿季节,加之种子本身富含蛋白(约40％)和脂肪(约20％),导致我国南方春大豆种子极易发生劣变,从而导致种子活力降低、产量和品质下降,严重制约了我国南方春大豆的发展.开展春大豆种子田间劣变机制研究是培育抗性品种、降低春大豆种子田间劣变程度和提升我国大豆产业市场竞争力的前提和基础.本项目组在春大豆种子响应高温高湿胁迫的差异蛋白组学研究中发现,种子田间劣变抗性品种湘豆3号发育种子中MMP1蛋白呈上调表达,为进一步从分子水平了解GmMMP基因的表达以及响应高温高湿胁迫的特性,本研究从种子田间劣变抗性品种湘豆3号及不抗品种宁镇1号中扩增出两个GmMMP基因(GmMMP1和GmMMP2).荧光定量PCR分析表明:种子田间劣变抗性品种湘豆3号GmMMP1和GmMMP2基因在高温高湿胁迫下,表达量显著上升,不抗品种宁镇1号GmMMP1和GmMMP2基因表达量呈先降后升的趋势.组织特异性显示GmMMP1和GmMMP2基因在不同品种及组织间表达存在差异.亚细胞定位结果表明GmMMP1蛋白定位在细胞膜上,GmMMP2蛋白定位在细胞膜和细胞核中.以上结果表明GmMMP1和GmMMP2基因可能参与了大豆种子田间劣变抗性,这将从一个侧面丰富我们对大豆种子田间劣变性和劣变抗性的认识,并为高抗种子田间劣春大豆品种的选育奠定理论基础.

摘要： 目的：衣藻RSP3(radial spoke protein3)是一个鞭毛结构蛋白,目前有关RSP3相关研究主要集中在衣藻上,而对其在哺乳动物中的同源基因研究甚少.衣藻RSP3在哺乳动物中的同源基因主要表达于中枢神经系统,然而目前尚缺乏对其功能的研究.rn 方法：本研究通过构建小鼠RSP3表达载体,转染CHO和293T细胞,应用荧光共定位技术研究小鼠RSP3在哺乳动物细胞中的亚细胞定位.运用子宫内电击转染和免疫荧光染色等技术研究小鼠RSP3在大脑皮层的特殊定位及其对大脑皮层发育的影响.rn 结果：体外实验结果表明,小鼠RSP3并不直接与微管结合,也不定位到内质网或高尔基体,而是聚集分布于细胞核的周围.利用子宫内电击转染技术,成功的标记了室管膜细胞,并发现RSP3特异性分布于室管膜细胞的纤毛上.进一步的研究表明RSP3特异性分布于放射状胶质细胞的纤毛上,并能促进放射状胶质细胞的分裂和大脑皮层的形成.rn 结论：以上结果表明,RSP3在神经系统发育中具有非常重要的功能,可能与大脑皮层的发育及智力的形成有密切的关系.

摘要： 热激蛋白90(Heat shock protein 90,Hsp90)作为一类高度保守的分子伴侣,不仅能够协助蛋白折叠,在信号转导、细胞周期循环、蛋白降解、蛋白运输等过程中也起重要作用.本研究在基因组水平上对杨树Hsp90基因家族的成员进行分析,对杨树10个Hsp90基因进行系统进化、基因结构、亚细胞定位及表达特性分析.分析发现PtHsp90s分布于杨树的不同组织并有不同的亚细胞定位,表明其可能参与不同的生物学过程.PtHsp90s部分成员表达受高温及干旱等非生物胁迫的诱导,表明其可能在不同的胁迫响应中起作用.本研究为进一步研究杨树Hsp90基因功能奠定了基础.

摘要： 为了研究猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的表达对宿主细胞的功能的影响,本研究通过构建猪传染性胃肠炎病毒的N基因的重组表达质粒pEGFP-C1-N,然后在LipofectamineTM2000介导下转染猪睾丸细胞ST细胞,活细胞状态下直接观察EGFP-N蛋白在ST细胞中的表达与定位.结果显示,转染后4～5h出现荧光蛋白表达,24h达到高峰,TGEV的N蛋白主要定位于细胞质中,进一步的激光共聚焦共定位显示TGEV N蛋白主要定位于ST细胞的内质网上面.G418筛选4周后细胞形成稳定的单个克隆,进一步的挑选和扩大化后,RT-PCR和Western-blot验证TGEV N蛋白的mRNA及其蛋白在ST细胞中稳定表达,提示本研究建立了稳定表达的TGEV N蛋白的ST细胞株,为进一步研究TGEV N蛋白对ST细胞的生理功能的影响及其在TGEV致病过程中的作用打下了基础.

摘要： 拟南芥VERNALIZATION1(VRN1)基因是一个介导春化途径调控开花时间的基因.为了研究竹类植物中VRN1同源基因的功能,本文采用同源克隆技术从雷竹中分离到一个VRN1同源基因,并将其命名为PvVRN1.序列分析表明该基因编码245个氨基酸,与小麦、水稻中VRN1同源基因相似性分别为86.56％和88.98％.实时荧光定量PCR结果表明PvVRN1在开花雷竹中的表达量高于未开花雷竹;在开花雷竹中,PvVRN1在秆、花、叶芽中表达量相对较高.亚细胞定位分析表明PvVRN1主要定位在细胞核.PvVRN1在拟南芥中的过表达使转基因植株矮小,花瓣和萼片比野生型的短,但是在开花时间上与野生型没有差异,表明PvVRN1基因可能参与雷竹花形态建成以及其它发育过程.本研究的结果为阐明竹子开花机制奠定了理论基础.

摘要： 目的：探讨NSCLC细胞中突变EGFR基因调节HR修复蛋白Rad51增加放射敏感的机制.rn 方法：构建稳定表达突变EGFR基因(delE746-A750 EGFR)的重组质粒(delE746-A750 EGFR-pIRES2-EGFP),采用脂质体Lipofectamine2000进行质粒转染EGFR野生型A549细胞,命名为A549del.并以高表达Rad51的野生型A549细胞作为阴性对照，低表达Rad51的突变株H820细胞作为阳性对照。Westernblot检测各细胞株放射诱导的Rad51蛋白的表达及亚细胞分布;Real-timeqPCR检测细胞内Rad51在mRNA水平的表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性，根据线性二次(LQ)模型拟合生存曲线并获得放射敏感参数。R值;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期分布。rn 结果：1)不同EGFR表型NSCLC细胞表达Rad51存在差异，EGFR突变型细胞H820较野生型细胞A549表达低。突变型EGFR细胞H820放射诱导核内Rad51蛋白较野生型A549更少。2)转染突变型EGFR基因后，A549细胞内放射诱导的Rad51蛋白的表达以及细胞核内Rad51蛋白的分布均减少。3)转染突变型EGFR基因后增加细胞的放射敏感性，A549细胞经转染后SF2从0.606降至0.448，但仍然高于突变型细胞株H820(SF2:0.361。R值4.02升至7.27，仍低于突变型细胞株H820(a/β:8. 23）。转染后细胞放射诱导凋亡较转染前明显增加，但仍低于突变细胞株H820。放射诱导后各细胞株G2-M期阻滞增多，S期阻滞减少，其中突变株H820周期改变幅度更大，转染后A549de1细胞较转染前G2-M期阻滞比例增多，S期阻滞进一步减少。rn 结论:突变EGFR基因影响NSCLC的放射敏感性，EGFR突变细胞株较野生型细胞株对放射更为敏感，转染突变型EGFR基因可增加细胞的放射敏感性，这与突变EGFR基因致放射诱导的Rad51蛋白表达更低，在细胞核内参与DNA损伤HR修复的Rad51蛋白更少以及增加细胞凋亡、改变细胞周期分布有关。

摘要： 目的:利用双分子荧光互补BiFC技术研究p12蛋白及其新的结合蛋白NBP在活细胞内的相互作用，并通过Pull-Down和CO-IP实验验证P12，与NBP蛋白之间的相互作用结果。rn 方法:利用分子克隆技术构建P12c0czP，蛋白与NBP蛋白的双分子荧光互补真核表达载体后，利用双分子荧光互补技术观察p 12c0czP.蛋白及其新的结合蛋白NBP在活细胞内的相互作用。利用pGEX 4T-1质粒，分别构建GST- p 12P，与GST-UPP融合蛋白，将其分别转染至BL21缺陷表达菌中，切除GST-NBP蛋白的GST标签后行Pull-Down实验，利用SDS-PAGE技术验证p12c0czP，与NBP相互作用的存在。利用真核质粒pCDNA3.1，使用HA及FLAG蛋白表达标签，分别构建pCDNA 3.1-HA- p12P，及pCDNA 3.1-FLAG-NBP表达质粒。经测序正确后，分别转染至293T细胞中，使用免疫共沉淀(CO-IP)技术验证真核细胞中p12c0czP与UPP存在相互作用。rn 结果:利用BiFC技术观察p12蛋白及其新的结合蛋白NBP在活细胞内的相互作用，并对相互作用进行了亚细胞定位，同时Pull-Down和CO-IP的实验结果验证了p12c0czP，与NBP蛋白之间存在着相互作用。rn 结论:本项实验研究发现p12蛋白与其新的结合蛋白NBP之间存在着相互作用，这为p12cnKZnP的临床治疗及生物治疗靶点的应用提供了理论依据。

摘要： 本文通过对软骨细胞蛋白质组的高通量检测，以发现与疾病相关的蛋白分子揭示软骨细胞在疾病影响下变化机制。在以往的研究基础上，获得大骨节病软骨细胞蛋白质表达谱，确定差异表达蛋白质及其生物功能和亚细胞定位。结果表明:大骨节病软骨细胞蛋白质表达不同于正常人。差异表达蛋白质的亚细胞定位结合分子功能，提示大骨节病软骨细胞存在代谢和合成机制异常。

摘要： 食管癌是最常见的恶性肿瘤之一.目前分子机制不明,预实验发现ESE3在食管鳞癌中可能存在异常胞质定位.本研究试图确认ESE3在食管鳞状细胞癌组织、细胞中的表达定位情况,并探讨其异常定位可能的分子机制及在食管鳞癌发病过程是否存在比较重要的意义.研究表明，ESE3在食管鳞癌中出现异常的细胞质定位.这种异常的从核定位变化为细胞浆定位的机制并非通过常见的细胞出核转运机制、转录依赖出核机制以及基因突变的机制.在食管鳞癌中外源性过表达ESE3恢复了其细胞核表达,并可抑制食管鳞癌细胞增殖,克隆形成能力和迁移、侵袭能力,但对细胞周期和细胞凋亡无明显影响.

摘要： 本发明涉及利用植物干细胞和植物去分化干细胞(愈伤组织)的提取物通过重新编程分化的成人细胞来诱导定制亚全能干细胞的方法；利用该方法制得的亚全能干细胞以及包含所述亚全能干细胞的细胞治疗剂。根据本发明，可克服伦理问题，因为没有使用卵来制备具有与胚胎干细胞类似功能的亚全能干细胞，并且可制备确保安全性的亚全能干细胞，因为利用尤其已经证实对身体无害的植物干细胞提取物，并且还可利用本发明来开发适合不同个体的免疫相兼容的细胞治疗剂。此外，预计本发明可在阐明病因以及研究通过诱导亚全能干细胞治疗疾病个体的医学病症的方法时具有很大优势。

摘要： 本发明提出一种用于亚细胞尺度细胞共定位的DNA纳米成像探针的制备方法及其产品和应用，将带有荧光的替换链DNA 1与207条订书钉链等量地溶解到MilliQ水中，使每条链的最终浓度为200nM，将M13mp18 单链DNA（100nM）与混好的208条短链(200nM)以摩尔浓度比1:5‑1：10的比例混合在1×TAE‑Mg2+溶液中，其中M13mp18 单链DNA的最终浓度为5 nM，短链最终浓度为50nM；将混好的溶液放入PCR仪中,设定反应程度95°C持续3分钟，然后缓慢降温至4°C，降温速率为0.2°C/10s。由于DNA折纸结构的小尺寸和较好的生物相容性，本发明在亚细胞尺度成像、肿瘤检测及药物机理研究领域有较大的应用前景。

摘要： 本发明涉及利用植物干细胞和植物去分化干细胞(愈伤组织)的提取物通过重新编程分化的成人细胞来诱导定制亚全能干细胞的方法；利用该方法制得的亚全能干细胞以及包含所述亚全能干细胞的细胞治疗剂。根据本发明，可克服伦理问题，因为没有使用卵来制备具有与胚胎干细胞类似功能的亚全能干细胞，并且可制备确保安全性的亚全能干细胞，因为利用尤其已经证实对身体无害的植物干细胞提取物，并且还可利用本发明来开发适合不同个体的免疫相兼容的细胞治疗剂。此外，预计本发明可在阐明病因以及研究通过诱导亚全能干细胞治疗疾病个体的医学病症的方法时具有很大优势。

摘要： 本发明属于生物技术领域，提供水稻E3泛素连接酶在检测植物细胞核亚细胞定位中的应用，本发明主要基于水稻泛素融合蛋白与荧光蛋白分子融合，结合荧光显微镜报告蛋白在细胞器中的定位。所述蛋白细胞核定位检测方法主要由指示蛋白UF和GFP组成的融合蛋白，所述融合蛋白与待测蛋白的荧光颜色不同，检测待测蛋白是否定位在细胞核。该方法可以通过农杆菌介导的瞬时表达系统，在植物细胞内瞬时表达融合蛋白，对融合蛋白进行荧光观察，能具体指示细胞核细胞器，结果判定简单、快捷，同时可消除在使用DAPI指示细胞核定位的过程中接触高毒致癌物质，提高操作的安全性等优势。

摘要： 本发明提供了一种mRNA亚细胞定位模型的训练方法包括以下步骤：获取mRNA亚细胞位置序列样本集；根据多种特征提取算法对mRNA亚细胞位置序列样本集进行特征提取，利用基分类器分别对特征识别，并对基分类器一层以上集成，再根据特征提取算法和集成分类器，得到目标mRNA亚细胞定位模型。本发明通过对多个分类器集成学习训练，不但可以提高训练的效率，使得模型在训练过程更容易得到全局最优解，从而得到训练完成后的目标模型会有更优秀的预测能力和泛化能力。

摘要： 本发明属于生物技术领域，提供水稻E3泛素连接酶在检测植物细胞核亚细胞定位中的应用，本发明主要基于水稻泛素融合蛋白与荧光蛋白分子融合，结合荧光显微镜报告蛋白在细胞器中的定位。所述蛋白细胞核定位检测方法主要由指示蛋白UF和GFP组成的融合蛋白，所述融合蛋白与待测蛋白的荧光颜色不同，检测待测蛋白是否定位在细胞核。该方法可以通过农杆菌介导的瞬时表达系统，在植物细胞内瞬时表达融合蛋白，对融合蛋白进行荧光观察，能具体指示细胞核细胞器，结果判定简单、快捷，同时可消除在使用DAPI指示细胞核定位的过程中接触高毒致癌物质，提高操作的安全性等优势。

摘要： 本发明提供基于多尺度深度特征的蛋白质亚细胞定位方法，属于生物信息处理技术领域，利用训练好的预测模型对获取的蛋白质免疫组织化学图像进行处理，获得最终的蛋白质亚细胞定位结果；其中，提取蛋白质免疫组织化学图像中蛋白质序列的多尺度特征，基于多尺度特征得到不同亚细胞位置的预测概率得分向量，结合多标签分类学习策略对预测概率进行判别，得到最终的蛋白质亚细胞定位结果；其中，训练好的预测模型为使用类别不平衡损失优化训练得到。本发明使用空间分布特征和语义特征进行融合，自动提取了更加全面的多尺度特征，提高了效率；基于类别不平衡损失和多标签学习策略，为不同类别施加权重以及考虑不同亚细胞位置的相关性，提高了预测的精度。

摘要： 本发明公开了一种葡萄果梗多酚氧化酶基因VvPPO1亚细胞定位检测研究方法，包括以下检测步骤：步骤S1、克隆，步骤S2、载体构建，步骤S3、烟草转基因，步骤S4、转基因烟草检测，步骤S5、转基因烟草观察，步骤S1：VvPPO1cDNA全长克隆，步骤S2：植物荧光表达载体的构建，步骤S3：农杆菌侵染烟草叶片表皮细胞实验，步骤S4：转基因烟草植株的获得及其PCR检测，步骤S5：转基因烟草的激光扫描共聚焦显微镜观察，所述步骤S2在构建时，将目的片段连接到载体pBI121(携带pENTER/D‑TOPO)上，该载体不包含终止密码子TGA的C末端融合物。本发明通过使用本方法对葡萄果梗多酚氧化酶基因VvPPO1亚细胞定位检测，可以为今后进一步挖掘VvPPO1基因功能提供实验材料，解决了现有对多酚氧化酶的亚细胞定位研究不足的问题。

摘要： 本发明公开了一种利用百合叶片检测亚细胞定位的方法，包括以下步骤：构建亚细胞定位载体pCAMBIA2300‑GFP和其重组载体，将亚细胞定位载体pCAMBIA2300‑GFP和其重组载体、辅助质粒P19分别转入三株EHA105农杆菌菌株中；摇菌；悬浮；抽真空侵染；叶片培养；荧光观察。本发明建立了一种利用百合叶片检测亚细胞定位的方法，具有周期短、成本低、易操作、不受基因型限制等优点，能够快速高效地将外源基因在百合叶片中瞬时表达，为百合基因功能研究提供了重要的技术支撑。

摘要： 本发明公开了一种蛋白质亚细胞定位的空间蛋白质组学深度学习预测方法，该方法包括：基于蛋白质亚细胞分离组分定量的空间蛋白质组质谱数据，使用差分矩阵捕获每个蛋白质在不同亚细胞分离组分中的变化轨迹来构建特征图谱；利用卷积神经网络的提取蛋白质特征图谱的深度图特征；利用卷积注意力机制模块对深度图特征进行自适应特征优化；进而使用深度神经网络来预测蛋白质亚细胞定位；使用已知亚细胞定位的蛋白质作为训练集进行五折交叉验证，对未知亚细胞定位的蛋白质进行预测；控制蛋白质亚细胞定位的错误发现率，获得高可信度的蛋白质亚细胞定位预测结果。本发明能高效、准确地实现蛋白质亚细胞定位预测，并促进空间蛋白质组学的未来发展和应用。