绿色荧光蛋白
绿色荧光蛋白的相关文献在1995年到2022年内共计2053篇,主要集中在基础医学、分子生物学、肿瘤学
等领域,其中期刊论文1791篇、会议论文107篇、专利文献208440篇;相关期刊637种,包括生物工程学报、生物技术通报、生物技术通讯等;
相关会议85种,包括华东地区第13届实验动物科学学术交流会、第六次全国动物生物技术学术研讨会、2010广州-东莞首届国际小型猪学术论坛等;绿色荧光蛋白的相关文献由7242位作者贡献,包括刘波、王强、黄爱龙等。
绿色荧光蛋白—发文量
专利文献>
论文:208440篇
占比:99.10%
总计:210338篇
绿色荧光蛋白
-研究学者
- 刘波
- 王强
- 黄爱龙
- 姜晓丹
- 潘求真
- 刘伟
- 夏宁邵
- 张涌
- 刘勇
- 刘静
- 张军
- 张敏
- 张连峰
- 徐富强
- 步志高
- 潘登科
- 赵春礼
- 黄倩
- 齐义鹏
- 刘德莉
- 刘磊
- 张苏明
- 张莉
- 张颖
- 徐如祥
- 徐林
- 曹谊林
- 李娜
- 李莉
- 汪洋
- 潘兴华
- 王廷华
- 王晶
- 王芳
- 王超
- 陈溥言
- 傅建新
- 刘丹平
- 刘建伟
- 刘秀梵
- 周军
- 姚开泰
- 张杰
- 张玲
- 徐群渊
- 李侠
- 李黎波
- 杨健
- 杨慧兰
- 林月秋
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李岑;
刘松;
堵国成
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摘要:
黑曲霉(Aspergillus niger)是食品工业中重要的生产菌株,广泛应用于酶和有机酸生产。为提高黑曲霉遗传操作效率,对黑曲霉转化及重组菌株筛选策略进行优化。基于已报道的最佳转化条件对黑曲霉AG11进行电转化、农杆菌介导和聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导转化(Agrobacterium-mediated and PEG-mediated transformation,PMT),单个潮霉素转化板分别得到0、30和6个转化子。其中,PMT的转化子阳性率最高。基于优化后的原生质体制备条件:0.8~1 g松散的菌丝球于10 mL Yatalase溶液(0.8 mg/mL,pH 5.5)反应2.5 h,获得原生质体并进行PMT,转化效率较优化前提高14倍。为提高转化子筛选效率,将融合绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的天冬酰胺酶(asparaginase,ASN)基因整合至黑曲霉AG11糖化酶位点,并通过流式细胞仪分选表达ASN的孢子。分选结果显示,0.3%的孢子能表达GFP(共筛选30万个孢子)。酶活力分析表明,65%表达GFP的孢子能表达ASN。研究结果将为黑曲霉基因编辑提供重要方法学基础。
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徐志霞;
孙杰;
杨勇;
丁利
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摘要:
为提高生物化学实验的教学效果,培养学生的创新性、应用性思维,在生物化学实验中以绿色荧光蛋白为对象,设计蛋白质表达与纯化的综合性实验,并以该实验为基础创新了自主实验考核方式。通过实验材料的优化、实验教学内容的改进,提升了该课程的教学质量;以学生自主设计实验并实施的方式对其进行考核,通过考核方式和规则的完善,增强了学生的创新能力和综合运用知识的能力,提升了学生进行科学研究的热情和能力,取得了较好的教学效果。
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宋馨;
王慧;
袁世豪;
黄佳伟;
易文涛;
艾连中
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摘要:
乳酸乳球菌是治疗剂在体内运送的良好载体,研究其在体内的真实运送情况需对其进行标记。该实验利用CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000进行增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)标记,用于研究乳酸乳球菌在体内的运送,评价其作为益生菌的功能。基于该实验室已构建的乳酸乳球菌CRISPR/Cas9编辑质粒pLL25构建重组质粒pYSH,其上携带eGFP及同源臂,电转入乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞中,将基因组中的乳酸脱氢酶基因(ldh)替换为绿色荧光蛋白基因,从而使Lactococcus lactis NZ9000获得标记,表达绿色荧光蛋白。对绿色荧光标记的Lactococcus lactis NZ9000突变株,酶标仪定量分析eGFP的表达强度。荧光强度定量分析结果表明,在乳酸乳球菌不同生长阶段,eGFP基因均能稳定表达。
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汪舒颖;
马俊飞;
季倩玉;
刘箐
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摘要:
减毒单增李斯特氏菌是一种有潜力的肿瘤疫苗载体和靶向药物载体。然而由于缺乏在肿瘤缺氧环境中调控外源蛋白表达量的基因元件,限制了减毒单增李斯特氏菌活载体的进一步发展。本研究通过对单增李斯特氏菌EGD-e菌株进行转录组分析,在厌氧和有氧两种培养条件下,筛选出18个候选强启动子并以此构建了绿色荧光蛋白报告菌株,然后根据菌株的荧光强度从中选出了调控表达水平最高的P_(an)4启动子。此外,P_(an)4启动子还可成功调控天青蛋白和θ毒素表达,具有一定的广泛适用性。本研究为减毒单增李斯特氏菌在肿瘤药物或疫苗活载体应用中外源蛋白表达调控的优化提供了有效的分子工具。
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刘啸宇;
后梦情;
程安琪;
胡传俊;
姚坤;
吴萧
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摘要:
旨在构建一个适用于农杆菌的遗传转化载体,为研究农杆菌T-复合物招募蛋白VBP3的编码基因Atu4856的表达调控机制奠定基础。通过聚合酶链式反应(PCR)获得该编码基因5'端上游可能含有转录活性的DNA片段。用绿色荧光蛋白基因(gfp)和495 bp Atu 4856启动子构成嵌合基因,以绿色荧光蛋白基因(gfp)为报告基因,体外构建启动子探针prset-agfp1,转化大肠杆菌,通过抗生素筛选和对绿色荧光蛋白(GFP)的跟踪观察,最终确定有启动子转录活性的基因片段。结果表明,该载体适用于农杆菌T-复合物招募蛋白VBP3的编码基因Atu4856的表达调控机理的研究。
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王迪;
王润杨;
杨俊寒;
张乐;
胡翰;
汪洋;
刘滨磊
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摘要:
为构建稳定表达人源hPD-L1分子的小鼠乳腺癌细胞系(4T1),建立BALB/c小鼠乳腺癌肿瘤模型,采用Lipofactamine 3000转染试剂将携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)和hPD-L1的质粒转入4T1细胞中,经嘌呤霉素筛选获得4T1-hPD-L1单克隆细胞系,通过流式细胞术检测细胞纯度。将构建成功的细胞系皮下植入BALB/c小鼠背部,建立乳腺癌皮下肿瘤模型。流式细胞术检测4T1-hPD-L1细胞中GFP、PD-L1双阳性率为97.0%。将4T1-hPD-L1单克隆细胞系皮下接种于BALB/c小鼠背部可成瘤。成功构建稳定表达hPD-L1分子的4T1单克隆细胞系,并建立BALB/c小鼠乳腺癌肿瘤模型,为进一步研究PD-L1抗体药物提供参考。
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雷晶晶;
康业斌;
苗圃;
马君红;
石秋环
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摘要:
采用质粒消除与热激法构建枯草芽孢杆菌工程菌株B2-GFP,并测定其生长曲线、稳定性及对烟草疫霉的抑制率;同时,采用灌根和稀释平板法测定该菌株在烟株土壤中的活菌数.结果表明:工程菌株B2-GFP较野生型菌株B2提前1 h进入指数增长期,在培养11 h后同时进入稳定生长期;B2-GFP与烟草疫霉对峙培养后抑菌率达48.30%;在不含卡那霉素的LB固体培养基中继代培养10代后,在荧光显微镜下,菌落及菌体仍具有较强绿色荧光.烟株根际土壤活菌数大于根围土壤活菌数,且均呈现先升后降再趋于稳定的规律.在灭菌土壤中接种工程菌株B2-GFP第14天,烟株根际土壤活菌数达1.61×10^(7) CFU·g^(-1);在自然土壤中接种该菌第42天,烟株根际土壤活菌数达1.46×10^(7) CFU·g^(-1);接种第70天仍能保持绿色荧光表型.本研究证实工程菌株B2-GFP在烟田土壤中能够定殖并保持其特性.
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穆业腾;
郭冲;
胡楠楠;
杨馥旭;
薛晗;
范宇鑫;
郭峰霖;
关新刚
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摘要:
目的:构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白(TIGITGFP)慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法:将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别采用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,凝胶回收后连接构建重组质粒pLenti-TIGIT-GFP。将测序正确的重组质粒转染人胚胎肾HEK293T细胞作为实验组,转染TIGIT质粒的HEK293T细胞作为对照组,转染48 h后荧光显微镜下观察细胞膜上GFP表达情况。将实验组细胞继续培养,采用嘌呤霉素筛选2周后,挑取单克隆扩大培养,荧光显微镜观察细胞膜上GFP表达情况,Western blotting法检测在转染的人胚胎肾HEK293T细胞中TIGIT-GFP蛋白表达情况。结果:酶切鉴定,TIGIT基因成功插入pLenti-GFP表达载体,DNA测序未检测到突变发生。实验组细胞膜上检测到GFP表达。Western blotting法检测,实验组细胞裂解液中检测到TIGIT-GFP特异性条带。结论:成功构建pLenti-TIGIT-GFP慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP融合蛋白的细胞系,TIGIT-GFP融合蛋白主要在稳定细胞系的细胞膜上表达。
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高竞;
方伟;
顾佳悦;
严淑娴;
邵帅;
梁辰飞;
秦华;
陈俊辉;
徐秋芳
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摘要:
为探明解淀粉芽孢杆菌WK1在山核桃树和林地土壤的定殖动态及其最佳接种方式,采用电击转化方法导入绿色荧光蛋白(GFP)质粒,构建荧光标记菌株(GFP-WK1).通过叶面喷施(喷叶法)、根系浇灌(灌根法)和树干滴注(挂液法)3种方式接种GFP-WK1菌液,定期测定GFP-WK1在山核桃树体和土壤中的定殖数量,以及不同土壤pH条件下GFP-WK1在山核桃幼苗根、茎、叶中的定殖量,分析GFP-WK1的定殖能力和移动规律.结果表明:GFP-WK1能够通过喷叶法、灌根法和挂液法的方式在土壤和山核桃树体定殖,GFP-WK1在山核桃树体和土壤之间有良好的移动性,定殖量可保持在104~106 CFU·g-1.相较于灌根法和喷叶法,挂液法处理下GFP-WK1定殖稳定.不同土壤pH条件下,GFP-WK1在山核桃幼苗中的定殖量均表现为根>茎>叶,在pH值为6.8的土壤条件下定殖效果最好,植物体内的定殖量也相对较高.从短期定殖效果和施用方便的角度,田间实际应用推荐灌根法,并将土壤pH值调到6.8;长期使用的话,建议选择挂液法,以保证树体的菌株定殖量稳定.
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史志丹;
宋培玲;
郝丽芬;
皇甫海燕;
燕孟娇;
杨永青;
吴晶;
赵丽丽;
李子钦
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摘要:
为明确黑胫病菌(Leptosphaeria biglobosa)在甘蓝型油菜叶片和茎中的侵染及扩展过程,利用绿色荧光蛋白(GFP)标记的黑胫病菌株接菌油菜叶片,利用激光共聚焦显微镜观察菌株在油菜叶片和茎中的侵染过程.结果表明,接种油菜叶片7 h后,分生孢子萌发并长出芽管;17 h后,芽管侵入气孔;24 h后,分生孢子全部萌发;36 h后萌发的芽管形成菌丝;120 h后,菌丝在叶片表皮细胞间隙蔓延,并侵入叶肉细胞.13 d后,菌丝侵入茎部皮层组织;15 d后,菌丝在皮层细胞间隙蔓延,并侵染至茎表皮;21 d后,菌丝侵染至维管组织;23 d后,菌丝侵染至茎韧皮部;25 d后,茎导管被侵染,并向木质部扩展.本研究发现的L.biglobosa在油菜叶片和茎中的侵染过程,可为油菜与黑胫病菌互作的研究、黑胫病致病机理及防治提供参考.
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王晶宇;
WANG Jing-yu;
OUYANG Wei;
欧阳伟;
WANG Yong-shan;
王永山;
XIA Xing-xia;
夏兴霞;
ZHU Yu-mei;
诸玉梅;
WANG Xiao-li;
王晓丽;
PAN Qun-xing;
潘群兴;
MENG Kai;
孟凯;
BI Zhen-wei;
毕振威;
An Xin;
安欣;
楼晶瑶;
Lou Jing-yao;
YAO Huo-chun;
姚火春
- 《第18次全国犬业科技学术研讨会》
| 2018年
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摘要:
为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CαIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.
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Guo Qiang;
郭强;
Wang Xin;
王鑫;
Xu Shiqiang;
徐世强;
Wang Jihua;
王继华
- 《广西甘蔗学会2016年年会暨学术交流会》
| 2016年
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摘要:
甘蔗梢腐病是甘蔗生长中期的主要真菌病害.目前,研究甘蔗梢腐病病原菌和甘蔗品种的互作机制是防治梢腐病害的重点.本研究运用农杆菌介导的转化方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的双元载体PCA-MBgfp转化到甘蔗梢腐病野生菌株(YN41)中,获得41个转化子.随机挑取7个转化子进行PCR扩增,均可扩增出潮霉素基因目标条带;且转化菌株的菌落形态、生长速度和致病力与野生型菌株相比没有显著差异;单孢继代培养后仍能发出稳定的绿色荧光,并且能够稳定遗传.同时发现60μg/mL潮霉素B能够完全抑制甘蔗梢腐病菌株YN41的生长.以上结果表明GFP基因已成功转化到甘蔗梢腐病菌株YN41中,可为后续甘蔗梢腐病病原菌和甘蔗品种的互作机制研究提供技术支撑.
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王伟;
陈超;
张男;
韩发彬
- 《第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会》
| 2015年
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摘要:
目的:为探讨干细胞移植后的体内迁移和定向分化,寻找非损伤性的方法标记移植的细胞,用加强的绿色荧光蛋白(EGFP)作为报道基因标记间充质干细胞分析了EGFP标记细胞在体内移植后的荧光变化. 方法:本研究利用电穿孔方法进行加强的绿色荧光蛋白质粒(pCVM-EGFP)转染产生具有EGFP标记的牙髓干细胞,皮肤成纤维细胞,脐带间充质干细胞.然后将EGFP标记的脐带间充质干细胞注射到裸鼠皮下,在不同时间用小动物活体成像系统观察了EGFP标记细胞在体内的荧光变化. 结果:用电穿孔方法能够在体外产生高效表达的标记细胞,EGFP在牙髓干细胞,皮肤成纤维细胞,脐带间充质干细胞中的表达超过80-85%,EGFP标记的脐带间充质干细胞注射到裸鼠皮下后表达荧光持续1周以上,能够利用小动物活体成像系统检测到移植细胞在体内的荧光变化情况. 结论:电穿孔技术能够产生高效表达EGFP的细胞用于追踪细胞体内移植后的定位与迁移,为探讨干细胞移植治疗作用提供了实验技术手段.
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Huo Peng;
霍鹏;
Yan Pu;
言普;
Shen Wentao;
沈文涛;
Zhou Peng;
周鹏
- 《第七届生命科学联合学术大会》
| 2015年
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摘要:
本研究对聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)的分子量、浓度及处理时间等三个影响番木瓜叶肉原生质体转化效率的主要因素进行了优化,同时利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达体系进行了转化表达分析.结果表明:经40%PEG8000溶液处理10min,可使GFP在原生质体中的平均转化率达到45.26%;沉默抑制载体pGreen-Hcpro和GFP瞬时表达载体共转化番木瓜叶肉原生质体,可使GFP在原生质体中的平均转化率进一步提高到68.75%,相比单独转化瞬时表达载体pRNAi-GFP增长了51.90%.PEG介导番木瓜叶肉原生质体瞬时表达体系的建立为番木瓜功能基因组和基因功能研究奠定了基础,可为热带作物的研究提供又一模式作物,推动热带作物在分子及细胞生物学领域的发展.
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刘雷;
王宝珠;
劳荃蘅;
刘民;
薛整风;
季明春
- 《华东地区第13届实验动物科学学术交流会》
| 2014年
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摘要:
本研究采用显微注射法制备bcr启动子启动报告基因egfp表达的转基因小鼠,在活体水平验证bcr启动子的启动特异性.首先,以慢性髓性细胞白血病细胞株K562细胞基因组为模板,PCR扩增了1.1kb bcr启动子,在扩增产物的上、下游引物加入了EcoR Ⅰ酶切位点.Ase Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切pEGFP-N1真核表达质粒载体,去除载体自身的CMV启动子,将1.1 kb bcr启动子定向克隆到EGFP绿色荧光蛋白报告基因上游,构建了pbcr-EGFP真核表达载体;重组质粒瞬时转染K562细胞和NIH3T3细胞,进行真和表达验证后,酶切回收获得目标片段,显微注射583枚受精卵,移植到30只受体鼠输卵管中,受体鼠怀孕26只,共生产首建鼠90只,经过PCR检测,4#(♀)、36#(♂)和81#(♂)等3只F0代为转基因整合阳性鼠.
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尤金炜;
董敏;
刘彪;
梁磊;
田迎;
胡文娟;
田小芸;
方天;
周森妹;
赵志刚;
恽时锋
- 《华东地区第13届实验动物科学学术交流会》
| 2014年
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摘要:
目的:研究外源绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,简称GFP)基因在BALB/c绿色荧光裸鼠主要器官组织中的表达及其差异.方法:小动物成像系统以及RT-PCR方法检测GFP的组织分布以及荧光表达水平情况.结果:经活体荧光影像系统观察及PCR方法检测发现GFP可以在裸鼠多个器官组织中表达,其中在胰腺、心脏、全脑、皮肤、睾丸中表达量较高.结论:外源绿色荧光蛋白可以在模型动物体内成功表达且稳定遗传,其中在胰腺组织中高表达.
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葛辉;
GE Hui;
LIN Kebing;
林克冰;
HUANG Zhongchi;
黄种持;
CHEN Zhengqi;
陈震琪;
ZHU Zhihuang;
朱志煌;
WU Jiashao;
吴建绍;
ZHENG Leyun;
郑乐云;
ZHOU Chen;
周宸;
林琪;
LIN Qi;
YANG Qiuhua;
杨求华
- 《第七届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛》
| 2016年
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摘要:
抗生素可以治疗疾病,但同时也能破坏或降低动物的免疫功能,导致致病菌产生耐药性,使动物再次感染后,需要使用更多的抗生素,从而陷入了一种恶性循环.益生菌在动物的胃肠内是具有强大的益生功能,能够抑制住有害菌的生长,提供营养成分,促进免疫系统的发育,强化肠道粘膜屏障等,使其成为水产养殖业的研究和应用焦点.利用能产生荧光蛋白的大肠杆菌分别强化轮虫、桡足类、丰年虫,探究其在生物饵料体内的消化情况.试验结果表明:15min轮虫摄入的大肠杆菌达到峰值,桡足类和丰年虫摄入的大肠杆菌达到峰值10min.所以使用轮虫等仔稚鱼生物饵料包裹益生菌或者能够发酵产生疫苗的基因工程菌,制成生物胶囊,投喂仔鱼,强化时间在10~15min之间较好.
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葛辉;
GE Hui;
LIN Kebing;
林克冰;
HUANG Zhongchi;
黄种持;
CHEN Zhengqi;
陈震琪;
ZHU Zhihuang;
朱志煌;
WU Jiashao;
吴建绍;
ZHENG Leyun;
郑乐云;
ZHOU Chen;
周宸;
林琪;
LIN Qi;
YANG Qiuhua;
杨求华
- 《第七届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛》
| 2016年
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摘要:
抗生素可以治疗疾病,但同时也能破坏或降低动物的免疫功能,导致致病菌产生耐药性,使动物再次感染后,需要使用更多的抗生素,从而陷入了一种恶性循环.益生菌在动物的胃肠内是具有强大的益生功能,能够抑制住有害菌的生长,提供营养成分,促进免疫系统的发育,强化肠道粘膜屏障等,使其成为水产养殖业的研究和应用焦点.利用能产生荧光蛋白的大肠杆菌分别强化轮虫、桡足类、丰年虫,探究其在生物饵料体内的消化情况.试验结果表明:15min轮虫摄入的大肠杆菌达到峰值,桡足类和丰年虫摄入的大肠杆菌达到峰值10min.所以使用轮虫等仔稚鱼生物饵料包裹益生菌或者能够发酵产生疫苗的基因工程菌,制成生物胶囊,投喂仔鱼,强化时间在10~15min之间较好.