蛋白表达

摘要： 目的 基于癌症蛋白质组图谱(TCPA)以及癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析宫颈癌蛋白表达情况,研究宫颈癌相关蛋白表达对宫颈癌预后及临床意义.方法 从TCPA数据库中下载CESC(cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma)患者肿瘤的的反相蛋白芯片(reverse-phase protein arrays,RPPA)数据(v4.2版本,level 4数据,Dataset ID为TCGA-CESC-L4),以及TCGA(https://portal.gdc.cancer.gov/,检索时间:2020.06.22)下载CESC患者的临床资料.采用R 3.6.3统计软件,应用KM检验及单因素Cox分析预后相关的蛋白,分析蛋白表达与宫颈癌预后作用,构建风险模型,并进行风险模型的独立预后分析.结果 与宫颈癌预后显著相关的纳入风险模型的蛋白有7个,其中CYCLIND1、MEK1_pS217S221、SMAD3、X4EBP1_pT70、YAP、CRAF_pS338为高风险蛋白,Bcl-2为低风险蛋白.基于蛋白表达及预后分析所构建的由7种蛋白组成的宫颈癌预后风险模型是宫颈癌的独立预后因子,AUC为0.804.结论 基于对TCPA及TCGA数据库的蛋白表达及预后分析在显示宫颈癌中,蛋白表达与宫颈癌癌的预后显著相关,我们所构建的7种蛋白组成的宫颈癌预后风险模型在评价宫颈癌预后中具有很好的价值,但由于缺乏中国大队列患者组成的数据库数据验证,因此后续仍需要开展大量工作进一步检验其在临床实际应用中的效能.

摘要： 为了在重组杆状病毒上获得高丰度表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白,利用细胞贴壁培养和悬浮培养法培养重组杆状病毒Vbacmin-PPRV-N 120 h,用显微镜观察不同时间点细胞形态变化,随后在培养24、48、72、96、120 h时分别收集培养液,以ELISA方法检测PPRV N蛋白表达量,并用SPSS软件对数据进行统计分析.显微镜下观察发现,在感染重组杆状病毒后,两种方式培养的细胞随着时间增加,均由形态大小均匀、圆形、透亮、折光性好,变为大小不均匀、折光性差,并且出现了很多细胞碎片.根据ELISA检测结果,摇瓶悬浮培养条件下PPRV N蛋白的表达量显著高于贴壁培养,摇瓶悬浮培养的昆虫细胞蛋白表达量在96 h达到最高峰,120 h蛋白表达量开始下降,贴壁培养的昆虫细胞蛋白表达量在120 h达到最高峰.研究表明,用昆虫杆状病毒系统大规模表达PPRV N蛋白时更适合用摇瓶悬浮培养方法.本研究为优化昆虫细胞表达PRRV N蛋白的培养条件提供了参考.

摘要： 为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑取白斑进行菌落PCR检测,检测无误后提取Bacmid DNA转染Sf9细胞,制备重组杆状病毒。采用杆状病毒表达系统表达目的蛋白,采用免疫印迹法(Western blot)和串联式飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术鉴定表达蛋白,采用SDS-PAGE半定量方法测定蛋白含量;以Balb/c小鼠为材料进行免疫试验,应用中和试验、ELISPOT试验测定小鼠抗体滴度及细胞因子水平。结果表明,S蛋白氨基端20个氨基酸为蛋白信号肽,重组质粒经双酶切鉴定构建成功,经菌体PCR检测验证表达骨架构建完成,转染Sf9细胞后获得重组病毒rB-PEDV-S;重组病毒表达蛋白经Western-blot和MALDI-TOFTOF鉴定为目的蛋白,蛋白质量浓度可达0.008 6μg/μL;替换原有信号肽可有效提高S蛋白产量,以0.86μg/只剂量免疫小鼠后,可刺激小鼠产生IL-4,但血清抗体水平与PBS组无明显差异。替换信号肽有助于S蛋白表达,利用表达蛋白免疫小鼠可有效刺激IL-4产生。

摘要： 探究R-脊椎蛋白1(RSPO1)、β-连环蛋白(β-catenin)与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系。2017年5月—2020年5月,256例乳腺浸润性导管癌患者,采用免疫组化染色法检测RSPO1、β-catenin在癌组织及癌旁正常组织中表达水平,分析RSPO1、β-catenin表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征及预后的关系。结果显示,乳腺浸润性导管癌患者癌组织中RSPO1、β-catenin阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P0.05);组织学分级、淋巴结转移、TNM分期不同的乳腺浸润性导管癌患者癌组织中RSPO1、β-catenin表达水平差异有统计学意义(P<0.05);RSPO1、β-catenin阳性表达的乳腺浸润性导管癌患者5年无进展生存率显著低于RSPO1、β-catenin阴性表达的乳腺浸润性导管癌患者(P<0.05)。结果表明,RSPO1、β-catenin在乳腺浸润性导管癌中呈高表达,其表达水平与乳腺浸润性导管癌患者组织学分级、淋巴结转移、TNM分期及5年无进展生存率显著相关。

摘要： 为研究儋州鸡鸡冠形态差异和发育与BMP2、CHADL基因的蛋白水平表达关系及变化规律,探索其对儋州鸡鸡冠生长发育的调控作用机制。通过免疫印迹(Western Blot)试验方法,对儋州鸡不同冠型(单冠和玫瑰冠)、不同发育阶段(2、4、5、6月龄)、不同性别(公鸡、母鸡)的鸡冠组织进行BMP2、CHADL基因蛋白水平的表达分析(每组各取5只儋州鸡鸡冠组织重复样本)。结果表明:儋州鸡公鸡的单冠和玫瑰冠组织中BMP2蛋白表达在2、4、6月龄的表达趋势均为由高到低再到高,玫瑰冠组织中差异显著;而CHADL蛋白表达呈上升趋势,但差异不显著;2月龄公鸡单冠组中BMP2蛋白表达水平低于玫瑰冠,4、6月龄则高于玫瑰冠,差异均不显著;2、6月龄公鸡单冠组织中CHADL蛋白表达水平低于玫瑰冠,而4月龄高于玫瑰冠,差异均不显著。性成熟中期(5月龄)儋州鸡公鸡和母鸡单冠组织中BMP2、CHADL蛋白表达水平均高于其在玫瑰冠组中的表达,且BMP2蛋白在公鸡2冠型组织间的表达差异显著,2种蛋白在母鸡2冠型组织间差异均不显著;性成熟中期相同冠型鸡冠组织中公鸡的BMP2蛋白表达水平均低于母鸡,且玫瑰冠中差异显著;CHADL蛋白表达水平在性成熟中期不同性别和不同冠型间表达差异不显著。儋州鸡鸡冠形态的差异和发育阶段的不同与BMP2、CHADL基因的蛋白水平表达有一定的关联性,其中BMP2较为显著。BMP2基因的表达量与儋州鸡鸡冠冠型大小和生长月龄呈负相关,可能在调控鸡冠发育上存在抑制作用,其调控作用在性成熟期间较为显著,并且主要体现在公鸡群体中。

摘要： 目的构建并表达补体因子H(complement factor H,CFH)关键结构域蛋白,即野生型短同源重复序列(short consensus repeats,SCR)7和SCR19-20,突变型SCR7 Y402H、SCR19-20 R1210C、SCR19-20 R1215Q,探讨CFH基因突变导致补体过度激活疾病的可能机制。方法采用In-Fusion反应,将编码SCR7(386~446位氨基酸)和SCR19-20(1107~1231位氨基酸)的cDNA序列分别克隆入pET-47b(+)载体,定点突变引入3个预期突变位点Y402H、R1210C和R1215Q,再将携带pET-47b(+)载体6-His纯化标签的CFH-SCR7和CFH-SCR19-20野生型和突变型重组质粒导入穿梭载体pNCMO2,在短芽孢杆菌中进行上述蛋白结构域的表达、Ni-NTA树脂纯化、SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法鉴定。通过检测其与肝素的亲和能力初步鉴定野生型与突变型的功能差异。结果成功构建了CFH关键结构域SCR7和SCR19-20的野生型和突变型重组表达载体pNCMO2-SCR7、pNCMO2-SCR19-20、pNCMO2-SCR7 Y402H、pNCMO2-SCR19-20 R1210C、pNCMO2-SCR19-20 R1215Q。5种重组体均高效表达且经抗6-His抗体和特异性抗CFH单克隆抗体进行蛋白质印迹法实验验证均为相应正确蛋白。SCR7 Y402H比野生型的肝素亲和力强,R1210C和R1215Q均比SCR19-20野生型亲和力弱。结论成功构建并表达了CFH SCR7和SCR19-20突变体,初步鉴定了突变蛋白结构域的功能,为体外进一步研究CFH基因突变致补体过度激活类疾病发生的可能机制奠定了实验基础。

摘要： 在化学酶法合成肝素过程中,肝素修饰酶6-O-磺基转移酶(6-OST)在肝素分子中N-乙酰基葡糖胺的C6羟基上进行硫酸化,以达到与肝素相似的硫酸化水平。构建的重组蛋白MBP-6-OST-3的纯化结果表明有较多杂蛋白条带,且蛋白浓度较低。利用定点突变原理设计引物,通过PCR扩增得到突变质粒pMAL-c2X-6-OST-3-linker-His。将突变质粒转化至大肠杆菌Rosetta-gamiB(DE3),实现了MBP-6-OST-3-His蛋白的表达。利用镍柱亲和层析系统将MBP-6-OST-3-His蛋白纯化,并通过SDS-PAGE电泳分析蛋白表达情况。该研究获得了具有高表达、高纯度的MBP-6-OST-3-His蛋白,这为获得高纯度的6-OST-3提供了可靠的方法以及为其应用于化学酶法合成肝素的研究提供了理论基础。

摘要： 目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注(MCAO/R)损伤模型大鼠脑组织miR-211-5p表达情况。方法取SPF级成年大鼠40只,分为假手术组(Sham组)、MCAO/R+溶剂组(Vehicle组)、MCAO/R+miR-211-5p组(Mimic组)、MCAO/R+anti-miR-211-5p组(Antagomir组),每组10只。评价各组大鼠神经功能缺损评分,检测各组大鼠脑梗死体积及miR-211-5p、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平。结果Vehicle组存活率低于Sham组,Longa评分升高,miR-211-5p处理后存活率升高,Longa评分降低(P<0.05)。Mimic组脑梗死体积百分比较Vehicle组降低,Antagomir组脑梗死体积百分比高于Mimic组(P<0.05)。与Sham组和Vehicle组比较,Mimic组miR-211-5p表达量升高,Antagomir组表达量降低,Antagomir组miR-211-5p表达量低于Mimic组(P<0.05)。Mimic组BDNF表达量显著高于其他3组,Antagomir组BDNF表达量最低(P<0.05)。结论miR-211-5p表达与大鼠MCAO/R损伤相关。

摘要： SBP-box基因在植物响应逆境胁迫中起着非常重要的作用,通过制备华东葡萄(V.pseudoreticulata)转录因子VpSBP16基因抗血清,为深入探究葡萄抗逆相关基因VpSBP16的功能试验提供基础。将已构建的pGEX-VpSBP16原核表达载体转入大肠杆菌中,利用IPTG诱导表达的蛋白作为抗原注射新西兰兔,从而获得VpSBP16基因抗血清,利用Western blot检测手段,以所获得的VpSBP16基因抗血清作为一抗检测毛葡萄‘商-24’叶、茎、花序、卷须和果实不同发育时期的VpSBP16蛋白表达情况。结果表明,原核表达载体pGEX-VpSBP16在大肠杆菌菌株DE3中高效表达,Western blot检测出与预期结果一致的分子量约为87kD的GST-VpSBP16融合蛋白。在新西兰兔的背部及腹股沟注射纯化后的目的融合蛋白获得了免疫-抗原反应良的多克隆抗血清。提取葡萄总蛋白后检测到VpSBP16蛋白表达量在花序中含量最低,而在果实发育的绿果期表达量较高。大肠杆菌表达系统中,pGEX-VpSBP16融合蛋白可以在27°C、0.6 mmol/L IPTG诱导条件下获得高表达。因此,笔者研究制备的多克隆抗血清具备效价高、特异性强的特点。VpSBP16基因不仅增强植物非生物胁迫的抗性,也可能会影响葡萄花发育和葡萄果实成熟,参与调节葡萄从营养生长到生殖生长的转变。

摘要： 本研究利用PCR扩增伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株gB基因核心抗原区和闵A株gE基因核心抗原区,构建了重组质粒pET-32a-gB和pET-32a-gE,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE分析表明,pET32a-gB蛋白分子量约为44 kDa,pET32a-gE蛋白分子量约为41 kDa。分别以gB和gE重组蛋白作为包被抗原,建立了PRV抗体间接ELISA检测方法。该方法中重组蛋白仅与PRV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1∶1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%。本研究建立的间接ELISA方法可用于PRV抗体的监测,鉴别疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪伪狂犬病净化工作。

摘要： 目的：观察右归饮对腺嘌呤所致肾虚生殖功能损害大鼠的改善作用及与EPO的相关性. 方法：将SD大鼠随机分为正常组15只与造模组85只,造模组用腺嘌呤150mg·kg-1·d-1连续灌胃14d.以检测血液肾功能、生殖激素作为判定模型成功的标准.将造模成功大鼠随机分为5组：模型组,龟鹿二仙胶10g/kg,右归饮10、20、40g/kg组,各15只,并进行组间均衡性检验.第15天开始,除正常组外,各组隔日给予150mg/kg腺嘌呤灌胃维持模型,同时右归饮各组与龟鹿二仙胶组灌胃给药每日1次.第46天麻醉取血,处死.检测各组大鼠血清中肌酐(CREA)、尿素(UREA)、腺体激素、生殖相关激素的含量;HE染色检测组织病理变化;免疫组化法检测及免疫印迹法检测肾脏与睾丸中EPO介导的HIF1α-STAT5通路中关键蛋白的含量. 结果：与正常组比较,模型组大鼠血清中UREA、CREA含量显著上升,ACTH、T3、EPO含量显著下降,同时血清中E2、T、LH、DHT含量显著下降(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,右归饮各剂量均能不同程度地降低大鼠血清中UREA、CREA含量,增加血清中ACTH、T3、EPO含量(P＜0.05,P＜0.01);缓解大鼠肾脏及睾丸组织病理变化;均能显著调节肾脏与睾丸中EPO介导的HIF1α-STAT5通路中关键蛋白的表达. 结论：EPO是腺嘌呤致大鼠肾虚生殖功能低下的重要相关因子,右归饮对腺嘌呤所致肾虚生殖功能低下大鼠异常指标均有显著的逆转作用,其作用机制与上调血清中EPO含量,继而调节肾脏和睾丸中EPO介导的HIF1α-STAT5通路中关键蛋白表达有关.

摘要： 目的：观察益气清热膏对嘌呤霉素氨基核苷大鼠模型(PAN)的作用机制. 方法：40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组和环孢素组.通过单次静脉注射PAN(40mg/kg体质量)建立PAN损伤模型.测定血清生化指标和24h尿蛋白定量.观察肾脏病理改变和超微结构变化,RT-PCR及Western Blot检测细胞骨架调控蛋白(α-actinin-4、Synaptopodin、Desmin和uPAR)mRNA和蛋白的定量表达. 结果：与模型组比较,益气清热膏可降低PAN大鼠24h尿蛋白定量、改善肾功能(P＜0.05);还可减轻肾小球病理损伤,减少足突宽度,改善足突融合,恢复部分足突正常结构;下调肾组织中α-actinin-4、Synaptopodin、Desmin和uPAR的mRNA表达和蛋白表达水平(P＜0.05). 结论：益气清热膏能显著改善足细胞损伤,减轻PAN导致的肌动蛋白细胞骨架重组,其作用机制可能与下调肌动蛋白细胞骨架相关调控蛋白表达有关.

摘要： 目的：运用网络药理学及实验验证方法,分析胃痞灵调控凋亡治疗胃癌前病变(GPL)的作用机制. 方法：利用网络药理学技术筛选胃痞灵治疗GPL的关键成分及作用靶标,构建成分-靶点网络,并进行蛋白相互作用分析、GO及KEGG通路富集,分析其调控细胞凋亡可能的作用机制.建立GPL小鼠模型,予以胃痞灵干预,观察用药后小鼠黏膜改变及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达变化. 结果：胃痞灵中含有113个活性成分,对应GPL103个靶点.其中有36个核心蛋白,主要涉及47条GO条目与18条信号通路;体内实验证实,与模型组比较,胃痞灵可通过下调Bcl-2、Bcl-xl(P＜0.01).上调Bax(P＜0.05)以促进细胞凋亡,从而发挥治疗作用. 结论：胃痞灵可通过调控凋亡相关蛋白表达,以发挥促凋亡作用.

摘要： 以厚壳贻贝为研究对象,开展不同暴露浓度(4μg/L、20μg/L、100μg/L)的菲(phenanthrene,PHE)的富集(10d)和释放(5d)试验,分别利用高效液相色谱法和荧光定量qPCR法分析了厚壳贻贝内脏团、外套膜、闭壳肌对PHE的富集和释放情况及HSP70mRNA表达量变化情况.结果表明:在10d的富集阶段,厚壳贻贝3个组织对PHE的富集能力大小表现为内脏团＞外套膜＞闭壳肌;3个组织对PHE的富集含量随时间的增加而增加,同时也随暴露浓度的增加而增加;在释放试验阶段,厚壳贻贝3个组织中PHE含量在释放前期迅速下降,但在15d时3个组织中PHE残留量仍均高于对照组;PHE对厚壳贻贝体内HSP70mRNA诱导表达具有组织特异性,其中外套膜中HSP70mRNA表达量最高.研究结果为PHE在贝类体内的富集动力学及致毒机制研究提供参考依据.

摘要： 以厚壳贻贝为研究对象,开展不同暴露浓度(4μg/L、20μg/L、100μg/L)的菲(phenanthrene,PHE)的富集(10d)和释放(5d)试验,分别利用高效液相色谱法和荧光定量qPCR法分析了厚壳贻贝内脏团、外套膜、闭壳肌对PHE的富集和释放情况及HSP70mRNA表达量变化情况.结果表明:在10d的富集阶段,厚壳贻贝3个组织对PHE的富集能力大小表现为内脏团＞外套膜＞闭壳肌;3个组织对PHE的富集含量随时间的增加而增加,同时也随暴露浓度的增加而增加;在释放试验阶段,厚壳贻贝3个组织中PHE含量在释放前期迅速下降,但在15d时3个组织中PHE残留量仍均高于对照组;PHE对厚壳贻贝体内HSP70mRNA诱导表达具有组织特异性,其中外套膜中HSP70mRNA表达量最高.研究结果为PHE在贝类体内的富集动力学及致毒机制研究提供参考依据.

摘要： 以厚壳贻贝为研究对象,开展不同暴露浓度(4μg/L、20μg/L、100μg/L)的菲(phenanthrene,PHE)的富集(10d)和释放(5d)试验,分别利用高效液相色谱法和荧光定量qPCR法分析了厚壳贻贝内脏团、外套膜、闭壳肌对PHE的富集和释放情况及HSP70mRNA表达量变化情况.结果表明:在10d的富集阶段,厚壳贻贝3个组织对PHE的富集能力大小表现为内脏团＞外套膜＞闭壳肌;3个组织对PHE的富集含量随时间的增加而增加,同时也随暴露浓度的增加而增加;在释放试验阶段,厚壳贻贝3个组织中PHE含量在释放前期迅速下降,但在15d时3个组织中PHE残留量仍均高于对照组;PHE对厚壳贻贝体内HSP70mRNA诱导表达具有组织特异性,其中外套膜中HSP70mRNA表达量最高.研究结果为PHE在贝类体内的富集动力学及致毒机制研究提供参考依据.

摘要： 以厚壳贻贝为研究对象,开展不同暴露浓度(4μg/L、20μg/L、100μg/L)的菲(phenanthrene,PHE)的富集(10d)和释放(5d)试验,分别利用高效液相色谱法和荧光定量qPCR法分析了厚壳贻贝内脏团、外套膜、闭壳肌对PHE的富集和释放情况及HSP70mRNA表达量变化情况.结果表明:在10d的富集阶段,厚壳贻贝3个组织对PHE的富集能力大小表现为内脏团＞外套膜＞闭壳肌;3个组织对PHE的富集含量随时间的增加而增加,同时也随暴露浓度的增加而增加;在释放试验阶段,厚壳贻贝3个组织中PHE含量在释放前期迅速下降,但在15d时3个组织中PHE残留量仍均高于对照组;PHE对厚壳贻贝体内HSP70mRNA诱导表达具有组织特异性,其中外套膜中HSP70mRNA表达量最高.研究结果为PHE在贝类体内的富集动力学及致毒机制研究提供参考依据.

摘要： 以厚壳贻贝为研究对象,开展不同暴露浓度(4μg/L、20μg/L、100μg/L)的菲(phenanthrene,PHE)的富集(10d)和释放(5d)试验,分别利用高效液相色谱法和荧光定量qPCR法分析了厚壳贻贝内脏团、外套膜、闭壳肌对PHE的富集和释放情况及HSP70mRNA表达量变化情况.结果表明:在10d的富集阶段,厚壳贻贝3个组织对PHE的富集能力大小表现为内脏团＞外套膜＞闭壳肌;3个组织对PHE的富集含量随时间的增加而增加,同时也随暴露浓度的增加而增加;在释放试验阶段,厚壳贻贝3个组织中PHE含量在释放前期迅速下降,但在15d时3个组织中PHE残留量仍均高于对照组;PHE对厚壳贻贝体内HSP70mRNA诱导表达具有组织特异性,其中外套膜中HSP70mRNA表达量最高.研究结果为PHE在贝类体内的富集动力学及致毒机制研究提供参考依据.

摘要： 目的：探讨黄金胶囊对2型糖尿病大鼠肝脏组织中eIF2a、GRP78表达的影响. 方法：48只雄性Wistar大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、罗格列酮组、中药低、中、高剂量组,每组8只.除正常对照组外,其余各组采用高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型.检测血糖以判断模型是否建立成功,后罗格列酮组及中药各组给予相应药物灌胃,模型组与正常对照组灌胃生理盐水.连续灌胃10周后处死各组大鼠,Western blot和RT-PCR检测大鼠肝脏组织eIF2α、GRP78蛋白及mRNA的表达变化,HE染色观察肝组织病理形态学变化. 结果：与正常对照组比较,模型组eIF2α、GRP78蛋白及mRNA表达均明显升高(P＜0.05);与模型组比较,罗格列酮组及黄金胶囊组eIF2αmRNA表达均降低(P＜0.05);与罗格列酮组比较,中药中、低剂量组效果不及罗格列酮组(P＜0.05),而高剂量组与罗格列酮组作用相当(P＞0.05).HE染色显示黄金胶囊组大鼠肝脏病理损害减轻,高剂量组减轻最为明显. 结论：黄金胶囊可以抑制肝组织中eIF2α、GRP78表达的上调,减轻病理损害,从而改善肝脏内质网应激,降低血糖.

摘要： 目的：探讨黄金胶囊对2型糖尿病大鼠肝脏组织中eIF2a、GRP78表达的影响. 方法：48只雄性Wistar大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、罗格列酮组、中药低、中、高剂量组,每组8只.除正常对照组外,其余各组采用高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型.检测血糖以判断模型是否建立成功,后罗格列酮组及中药各组给予相应药物灌胃,模型组与正常对照组灌胃生理盐水.连续灌胃10周后处死各组大鼠,Western blot和RT-PCR检测大鼠肝脏组织eIF2α、GRP78蛋白及mRNA的表达变化,HE染色观察肝组织病理形态学变化. 结果：与正常对照组比较,模型组eIF2α、GRP78蛋白及mRNA表达均明显升高(P＜0.05);与模型组比较,罗格列酮组及黄金胶囊组eIF2αmRNA表达均降低(P＜0.05);与罗格列酮组比较,中药中、低剂量组效果不及罗格列酮组(P＜0.05),而高剂量组与罗格列酮组作用相当(P＞0.05).HE染色显示黄金胶囊组大鼠肝脏病理损害减轻,高剂量组减轻最为明显. 结论：黄金胶囊可以抑制肝组织中eIF2α、GRP78表达的上调,减轻病理损害,从而改善肝脏内质网应激,降低血糖.

摘要： 本发明涉及一种使用源自乳杆菌的两种启动子能够在微生物表面上共表达两种不同的靶蛋白的载体和使用该载体在微生物表面上表达靶蛋白的方法。将包含插入其中的外源基因的载体转化到微生物中，并使不同的外源蛋白在该微生物的表面上稳定地表达。此外，本发明涉及一种包含编码聚‑γ‑谷氨酸合成酶复合物的基因pgsA的表面表达载体以及使用该载体在微生物表面上表达靶蛋白的方法。将包含插入其中的外源基因的载体转化到微生物中，并使外源蛋白在该微生物的表面上稳定地表达。

摘要： 本发明涉及在微生物中异源产生表面活性剂蛋白Lv‑ranaspumin‑1(Lv‑Rsn‑1)预测同种型的经修饰形式，所述表面活性剂蛋白Lv‑Rsn‑1预测同种型的序列是从对来自东北胡椒蛙(Leptodactylus vastus)巢的泡沫蛋白质提取物进行的分析中推理而来。更具体地，本发明涉及以下：两种表面活性剂蛋白，其由Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式组成；两种合成基因，其各自编码Lv‑Rsn‑1预测同种型的所述经修饰形式之一；两种表达盒，其各自包含编码Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式之一的合成基因之一；两种表达载体，其各自包含编码Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式的合成基因之一；以及两种转基因微生物(细菌和酵母)，其各自被所述合成基因之一转化并异源产生Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式之一。Lv‑Rsn‑1尤其具有表面活性剂特性、乳化和分散特性，并且其异源产生使得其能够用于多种应用和工业产品，而无需从来自蛙巢的泡沫中提取。

摘要： 本发明属于生物医药领域，具体涉及一种Pgk1蛋白、表达Pgk1蛋白的重组质粒、表达Pgk1蛋白的重组益生菌及应用。本发明首先将Pgk1基因插入到表达载体pET‑28a中获得了表达Pgk1的重组质粒；其次将所述重组质粒导入大肠埃希菌(Escherichia coli)Nissle 1917耐受菌中获得了一种功能性重组益生菌。本发明所述的重组益生菌在高效表达Pgk1蛋白同时，能够有效抑制细胞死亡、改善脑梗死体积、降低血糖，对脑血管疾病及糖尿病的疗效显著，且效果高于临床药物，具有良好的临床应用前景。

摘要： 一种能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株及其构建方法、蛋白表达纯化方法和蛋白应用，它涉及一种重组菌株的构建、表达纯化及其应用。本发明要解决现有金针菇免疫调节蛋白工程菌株表达率低，表达产物多为不溶性的包涵体，结构不确定以及菌体破碎、纯化工艺复杂不适合大规模生产应用的问题。本发明将金针菇免疫调节蛋白基因，以Transetta(DE3)作为宿主菌，构建重组菌株；再用IPTG诱导表达，通过溶菌酶法结合超声法处理后采用Ni-His·Band柱层析，Sephadex G25凝胶层析柱方法脱盐，即完成重组菌株的构建及表达纯化。其用于制备预防或治疗过敏症的药物。其纯化过程简单而快速，适于规模化发酵生产。

摘要： 一种预测食管鳞癌同步放化疗疗效的数学模型的构建方法，包括如下步骤：（1）、分别对食管鳞癌患者组织的NOTCH3蛋白表达量和CYPA蛋白表达量进行评分；（2）、根据步骤（1）的结果，利用X‑tile软件分析NOTCH3蛋白表达量高低分界值和CYPA蛋白表达量高低分界值;接着，定义两种蛋白的疗效预测关系值；（3）、将步骤（2）得到的疗效预测关系值带入数学模型：患者同步放化疗总疗效预测值=NOTCH3蛋白的疗效预测关系值+CYPA蛋白的疗效预测关系值；（4）、进行预测疗效：若患者同步放化疗总疗效预测值等于2，则预测该患者同步放化疗疗效预测为敏感；若患者总疗效预测值小于2，则预测该患者同步放化疗疗效预测为抵抗。本发明能够预测食管鳞癌患者同步放化疗疗效。

摘要： 一种能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株及其构建方法、蛋白表达纯化方法和蛋白应用，它涉及一种重组菌株的构建、表达纯化及其应用。本发明要解决现有金针菇免疫调节蛋白工程菌株表达率低，表达产物多为不溶性的包涵体，结构不确定以及菌体破碎、纯化工艺复杂不适合大规模生产应用的问题。本发明将金针菇免疫调节蛋白基因，以Transetta(DE3)作为宿主菌，构建重组菌株；再用IPTG诱导表达，通过溶菌酶法结合超声法处理后采用Ni-His·Band柱层析，Sephadex G25凝胶层析柱方法脱盐，即完成重组菌株的构建及表达纯化。其用于制备预防或治疗过敏症的药物。其纯化过程简单而快速，适于规模化发酵生产。

摘要： 本发明提出一种SUMO促溶表达标签及其应用、SUMO促溶表达蛋白、重组菌株及蛋白的制备方法，涉及基因工程技术领域，所述SUMO促溶表达标签的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，本发明提出的SUMO促溶表达标签，来源于经密码子优化后的猪SUMO基因序列，来源于宿主猪，将其融合原核表达载体进行蛋白表达，可以更好的促进目的蛋白的正确折叠，提高外源蛋白可溶性表达量。本发明提出的SUMO促溶表达标签来源于宿主猪，在应用到猪用亚单位疫苗的制备时，不会带来免疫后的副反应，无需酶切SUMO促溶表达标签，既有利于提高保护性抗原的可溶性及表达量，又能简化猪用亚单位疫苗的制备流程，降低生产成本，提高生产效率。

摘要： 本发明公开了一种利用E.coli无细胞蛋白表达系统重组表达BCMA蛋白的方法，该方法包括以下步骤：(1)扩增BCMA蛋白的编码DNA；(2)将扩增产物加入到E.coli无细胞蛋白表达系统中进行BCMA蛋白的合成。本发明采用E.coli无细胞蛋白表达系统在细胞外重组表达BCMA蛋白，获得的BCMA溶解度高，且蛋白表达过程可控性强。

摘要： 本发明公开了一种蛋白质表达体系的密码子优化方法及蛋白质表达体系，该密码子优化方法基于所述蛋白质表达体系中细胞提取物的来源物种的核糖体蛋白，对编码所述核糖体蛋白的DNA序列的密码子进行统计，获得核糖体蛋白氨基酸序列中每种氨基酸残基对应的同义密码子中各密码子的相对频率，选择相对频率最高的密码子，并将该密码子用作目标蛋白的氨基酸序列中同种氨基酸残基的密码子。本发明的密码子优化方法能在使用较少计算资源的情况下，快速获得一个不含特定位点，且相较于优化前具有较高蛋白表达效率的DNA序列。

摘要： 本发明公开了一种利用含有硒代半胱氨酸的GPI锚定蛋白表达系统及高表达重组蛋白的细胞。其通过准备载体、连接特定蛋白、定点诱变、插入SECIS、更换至pME‑Hyg步骤制备获得，该系统可以利用硒元素诱导可溶性重组蛋白以GPI锚定蛋白的形式表达到细胞膜表面或以可溶性蛋白形式分泌到培养基中。在不添加硒元素的情况下，使重组蛋白分泌到培养基中，从而获得高表达重组蛋白的细胞株，该系统大大简化了检测和筛选高表达细胞的难度。与其它筛选系统相比，该系统将重组可溶蛋白表达在细胞膜表面，利用流式分选，筛选方便，高效。