免疫印迹法

摘要： 为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑取白斑进行菌落PCR检测,检测无误后提取Bacmid DNA转染Sf9细胞,制备重组杆状病毒。采用杆状病毒表达系统表达目的蛋白,采用免疫印迹法(Western blot)和串联式飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术鉴定表达蛋白,采用SDS-PAGE半定量方法测定蛋白含量;以Balb/c小鼠为材料进行免疫试验,应用中和试验、ELISPOT试验测定小鼠抗体滴度及细胞因子水平。结果表明,S蛋白氨基端20个氨基酸为蛋白信号肽,重组质粒经双酶切鉴定构建成功,经菌体PCR检测验证表达骨架构建完成,转染Sf9细胞后获得重组病毒rB-PEDV-S;重组病毒表达蛋白经Western-blot和MALDI-TOFTOF鉴定为目的蛋白,蛋白质量浓度可达0.008 6μg/μL;替换原有信号肽可有效提高S蛋白产量,以0.86μg/只剂量免疫小鼠后,可刺激小鼠产生IL-4,但血清抗体水平与PBS组无明显差异。替换信号肽有助于S蛋白表达,利用表达蛋白免疫小鼠可有效刺激IL-4产生。

摘要： 目的探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体确证试验快速检测替代策略的适用性及可行性。方法收集2019年5月至12月昆明市第三人民医院检验科艾滋病确证实验室143例HIV感染待确定样本。采用快速检测替代策略(至少2种进口快速试剂和任意2种国产试剂)进行HIV抗体确证试验,满足4种快速检测试剂强阳性,报告“HIV-1抗体阳性”;若出现其中1种快速检测试剂弱阳性或者阴性,用免疫印迹法进行抗体补充试验,按试剂盒使用说明书提供的标准判别。同时检测143例样本血清HIV抗体S/CO值,抗凝血CD4^(+)T淋巴细胞绝对计数及血浆HIV病毒载量,统计分析快速检测替代策略阳性样本和不确定进行免疫印迹法抗体补充试验阳性样本间HIV抗体S/CO值、HIV病毒载量和CD4^(+)T淋巴细胞绝对计数差异。结果143例HIV感染待确定样本中107例样本快速检测替代策略结果阳性(替代阳性组);36例出现1种或以上快速检测试剂弱阳性及阴性,其中的30例试验结果为3种快速检测试剂阳性1种弱阳性,占比高达91%(30/33),用免疫印迹法进行抗体补充试验,33例结果阳性(免疫印迹法阳性组),3例结果为不确定,快速检测替代策略不确定而免疫印迹法阳性的33例选用的4种快速检测试剂阳性率加拿大麦美华生物科技有限公司(90.91%)和日本美艾利尔医疗有限公司(87.88%)远远高于韩国标准诊断股份有限公司(57.58%)和广州万孚生物技术股份有限公司(60.61%),差异有统计学意义(χ^(2)=9.587,P<0.01;χ^(2)=8.250,P<0.01)。替代阳性组与免疫印迹法阳性组的S/CO值、HIV病毒载量和CD4^(+)T淋巴细胞绝对计数,差异均有统计学意义(Z=0.238,P<0.01;Z=0.403,P<0.01;Z=0.518,P<0.01)。结论我们的研究显示最终确诊的阳性样本中约有1/5在快速检测替代策略中检测结果不确定而二次采用免疫印迹法试验才确诊,而这1/5的样本快速检测替代策略3种阳性1种弱阳性的不确定结果占比很高,主要由于不同的快速检测试剂敏感度之间差异大,造成这样二次试验,这种情况发生浪费了大量的人力、物力,也极大地拖延了检测时长,我们建议采用快速检测替代策略时,在快速检测试剂的选择上应根据自身实践及文献研究综合选择一些敏感度、特异度及性价比更佳的试剂。

摘要： 目的 了解延安市过敏性疾病患者过敏原特异性IgE抗体分布特点,为过敏性疾病防治提供参考。方法 以2015年8月至2019年6月在延安大学附属医院就诊的过敏性疾病患者为研究对象。采用欧蒙免疫印迹法检测血清过敏原特异性IgE抗体。结果 752例过敏性疾病患者中检测出特异性IgE 204例(204/752,27.12%);检出率占前5位的过敏原分别是艾蒿、淡水鱼、螨虫组合、大豆、海洋鱼;吸入性过敏原检出率前3位的是艾蒿、螨虫组合、屋尘/普通肠草;食物过敏原检出率前3位的是淡水鱼、大豆、海洋鱼。不同季节过敏原分布存在差异,秋季的检出率最高,且秋季以艾蒿为主,夏季以淡水鱼检出率为主。13~18岁年龄段人群sIgE检出率最高,60~81岁检出率最低。结论延安市常见的过敏原是艾蒿和淡水鱼,不同季节、不同年龄段过敏原存在差异,这些研究结果可为延安市过敏性疾病的防治工作提供参考。

摘要： 目的评价各种检测方法对HCV的诊断价值。方法运用微粒子免疫分析法(CMIA),免疫印迹法(RIBA),电化学发光免疫分析法(ECLIA),酶法(ELISA)和荧光定量PCR法检测84份HCV样本。结果31份CMIA法检测HCV抗体为0.40~10.0的样本,RIBA再测有14(45.16%)是不确定,8(25.81%)是有反应性,9(29.03%)是无反应性。不确定样本中的2份可能与RF,IgG和IgA有关。根据ROC曲线分析,抗-HCV(ECLIA)、HCV-Ab(CMIA)、HCV-Ag(CMIA)和HCV RNA曲线下面积分别为1.000、0.997、0.753和0.679,此时cut-offs分别为15.85 COI、3.31 S/CO、3.32 fmol/L和3.94E+03拷贝/mL。HCV RNA的对数值与HCV-Ag呈正相关(R=0.91,P<0.01)。RIBA实验有反应性的标本中,97.5%Core抗原和NS3抗原都有条带,其次37.5%NS4-1或NS5抗原有条带,仅有2.5%NS4-2抗原有条带。结论低水平HCV抗体需要有两种以上的方法来提高诊断准确性,电化学推荐的参考值分别为15.85 COI(ECLIA)和3.31 S/CO(CMIA)。一定程度上HCV Ag检测可以替代HCV RNA检测。

摘要： 目的了解上海市松江区的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染状况,探索HIV抗体确证假阳性结果的影响因素,为制定针对性的艾滋病(AIDS)防治措施提供科学依据。方法收集2017年—2019年上海市松江区各医疗机构送检的HIV抗体初筛阳性标本,对相关数据进行整理分析,采用Logistic回归模型分析确证假阳性的相关影响因素。结果2017年—2019年松江区HIV初筛检测标本共656955份,其中阳性934份,初筛阳性率为1.42‰。将其中526份初筛阳性标本进行确证试验,发现假阳性170份。多因素Logistic回归分析结果显示:女性(OR=7.804,95%CI:4.540~13.783)、≥60岁(OR=2.671,95%CI:1.267~5.740)、上海户籍(OR=3.532,95%CI:1.935~6.658)、已婚/离异(OR=2.263,95%CI:1.487~3.494)、医疗机构送检(OR=4.552,95%CI:1.321~17.081)和被动检测(OR=3.788,95%CI:1.408~11.437)是确证假阳性的主要影响因素。结论应加强AIDS的健康宣教,动员高危人群主动检测的同时,重点关注性别、年龄及是否为被动检测等检测前的流行病调查,降低HIV筛查的假阳性率。

摘要： 目的利用巴斯德毕赤酵母获得具有可溶性、免疫原性的重组PD-L1蛋白。方法根据巴斯德毕赤酵母表达系统的密码子使用偏好,优化人PD-L1基因序列,将优化后的序列构建至质粒pPIC9K,合成重组质粒pPIC9K-PDL1。使用SacⅠ-HF将pPIC9K-PDL1线性化,然后通过电击法将pPIC9K-PDL1上的PD-L1基因序列整合至巴斯德毕赤酵母基因组中,依次使用MD平板(无组氨酸)和遗传霉素G418从电击处理过的菌液中筛选重组巴斯德毕赤酵母菌株,然后使用PCR和测序对筛选到的菌株进行鉴定。利用甲醇体积分数为0.005的BMMY培养基诱导重组巴斯德毕赤酵母菌株表达,使用免疫印迹法检测菌株培养基上清液中的表达产物。结果筛选得到了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,表达的PD-L1相对分子质量约为44700,可以与抗PD-L1抗体特异性结合。结论成功构建了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,菌株表达的PD-L1蛋白可用于开发血清PD-L1检测试剂盒。

摘要： 目的探讨在艾滋病病毒(HIV)抗体初次筛查中应用胶体层析法与酶联免疫吸附实验法的临床价值,为艾滋病(AIDS)的诊疗提供可靠的临床依据。方法回顾性分析汉川市疾病预防控制中心利用全国艾滋病实验室检测管理系统于2017年3月至2021年10月收集的汉川市620例疑似AIDS患者的临床资料,所有疑似患者均采用胶体层析法、酶联免疫吸附实验法、免疫印迹法进行了HIV抗体初次筛查。将免疫印迹法作为金标准,比较胶体层析法、酶联免疫吸附实验法检测HIV抗体的诊断效能;采用免疫印迹法测定阳性样本带型分布状况;对比3种方法的检测时间。结果620例疑似AIDS患者采用免疫印迹法检测后,194例为阳性,426例为阴性。酶联免疫吸附实验法检查结果显示192例为阳性,428例为阴性,其中有187例为真实AIDS患者,阳性检出率为30.97%(192/620);胶体层析法检查结果显示190例阳性,430例阴性,其中182例为真实AIDS患者,阳性检出率30.65%(190/620)。酶联免疫吸附实验法的阳性检出率高于采用胶体层析法,但经比较,差异无统计学意义(P>0.05);酶联免疫吸附实验法检测的特异度、灵敏度、准确度均高于胶体层析法检测,但差异均无统计学意义(P>0.05);采用免疫印迹法检测阳性样本带型分布情况显示,194例AIDS患者中,gP160、gP120出现率为100%,其次为P24(98.97%)和gP41(97.94%),而P39、P55的出现率较低,分别为44.33%、31.44%;酶联免疫吸附实验法、胶体层析法的检测时间均显著短于免疫印迹法,且胶体层析法的检测时间显著短于酶联免疫吸附实验法(均P<0.05)。结论胶体层析法、酶联免疫吸附实验法各有优点,这两种检测方法在HIV抗体初次筛查中准确度、灵敏度、特异度均相对较高;酶联免疫吸附实验法的检测时间显著长于胶体层析法,因此,在进行HIV初抗体筛查时,应根据检测的具体情况,灵活运用两种检测方式。

摘要： 目的:探究采用免疫印迹法(IBT)检测抗可溶性抗原(ENA)抗体在诊断自身免疫性疾病中的应用价值。方法:选择2020年1月至2021年1月东南大学医学院附属南京同仁医院收治的自身免疫性疾病患者72例作为研究对象。随机将其分为观察组和对照组,每组各有患者36例。采用IBT对观察组患者进行ENA抗体检测,采用酶联免疫斑点法对对照组患者进行ENA抗体检测。比较两组患者ENA抗体的检出率,统计观察组患者室内质控抗体的检出率。结果:在观察组36例患者中,有29例(占80.56%)患者检出至少2种ENA抗体。本研究中两组患者所患的自身免疫性疾病主要为混合性结缔组织病(MCTD)、多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、类风湿关节炎(RA)。与对照组患者相比,观察组患者中的PM/DM、RA、SLE、MCTD、SS患者其ENA抗体的阳性检出率均显著高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。采用IBT对观察组患者进行ENA抗体检测时,其抗Jo-1、Scl-70室内质控抗体的检出率均为100.00%,抗SS-A室内质控抗体的检出率为97.22%,抗U1-nRNP室内质控抗体的检出率为97.22%,抗SS-B、Sm室内质控抗体的检出率均为94.44%。提示采用IBT进行ENA抗体检测可靠、准确。结论:采用IBT检测ENA抗体对诊断自身免疫性疾病具有较高的应用价值。

摘要： 目的:探讨在低氧高二氧化碳(hypoxia and hypercapnia,HH)条件下,基于AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的细胞自噬的变化及其对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖和凋亡的影响。方法:以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 h后随机分为5组:正常对照(normal control,N)组、模型组(HH组)、溶剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(D组)、AMPK激动剂阿卡地新(acadesine;5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside,AICAR)组(AI组)和AMPK抑制剂dorsomorphin(compound C,CC)组(CC组)。N组置于常氧环境(21%O_(2)、5%CO_(2)和74%N2)下培养24 h,其余4组预先加入相对应的干预药物置于HH条件(5%O_(2)、6%CO_(2)和89%N2)下培养24 h进行造模。造模结束后用CCK-8法测各组细胞活力;5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)法检测细胞增殖;TUNEL检测细胞凋亡;qPCR法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62及caspase-3的mRNA表达;免疫印迹法检测AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、LC3、p62、caspase-3和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白水平;透射电镜观察自噬小体。结果:与N组相比,HH组PASMCs活力增强,EdU阳性率增加,凋亡率降低;LC3的mRNA表达上调,p62和caspase-3的mRNA表达下调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达上调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达下调;电镜下观察到细胞内有少量自噬小体。与HH组相比,AI组PASMCs活力进一步增强,EdU阳性率增加,凋亡率降低;LC3的mRNA表达上调,p62和caspase-3的mRNA表达下调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达上调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达下调;电镜形态表现为细胞自噬小体数量增加。而CC组较HH组PASMCs活力和EdU阳性率显著降低,凋亡率显著升高;LC3的mRNA表达下调,p62和caspase-3的mRNA表达上调;p-AMPK/AMPK比值、LC3-II/LC3-I比值和PCNA蛋白表达下调,p-mTOR/mTOR比值及p62和caspase-3蛋白表达上调;电镜下观察到细胞自噬小体数量减少。结论:在HH环境下,基于AMPK/mTOR信号通路的细胞自噬启动可能是大鼠PASMCs增殖增加、凋亡减少的机制之一。

摘要： 目的IIFA、LIA和ELISA检测抗ds DNA抗体的性能。方法选取在本院就诊的93例SLE患者、84例其他自身免疫性疾病患者和50例健康人作为对照组,采用上述3种方法检测血清中的抗ds DNA抗体。结果在SLE患者组中,抗ds DNA抗体检测阳性率最高的是ELISA法(60.2%),其次为LIA法(46.2%),最低的为IIFA法(38.7%),均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。特异度与阳性预测值最高的是IIFA法(99.3%、97.3%),灵敏度与阴性预测值最高的是ELISA法(60.2%、77.7%),ROC曲线下面积最大是ELISA(0.782),其次是LIA法(0.724),IIFA法(0.690)。IIFA法和LIA法(Kappa=0.881,P<0.001)、LIA方法和ELISA(Kappa=0.804,P<0.001)诊断结果一致性较好;IIFA方法和ELISA方法诊断结果一致性一般(Kappa=0.693,P<0.001)。结论推荐ELISA法联合IIFA法检测抗dsDNA抗体,对SLE诊断和病情活动监测有重要意义。

摘要： 目的：应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗汉坦病毒特异性抗体IgG. 方法：PCR扩增HV-Z10株NP编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统rBAC-Z10S-TN.间接荧光法了解rNP表达及与特异性免疫反应情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rNP.SDS-PAGE观察纯化情况,建立免疫印迹法检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清样品,并与常规间接免疫荧光法进行比较. 结果：rBAC-Z10S-TN高效表达rNP,提纯rNP SDS-PAGE显示单一蛋白条带,此抗原仅与肾综合征出血热(HFRS)患者血清起反应,而与正常人及其它发热病人血清不起反应.经双盲试验,两法检测疑似肾综合征出血热患者血清43份,符合率为97.8％. 结论：成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统.所建立的免疫印迹法检可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法.

摘要： 目的：比较间接免疫荧光法(IIF)筛查抗核抗体(ANA)与免疫印迹法(LIA)检测抗核抗体谱(ANA谱)特异性抗体结果的一致性,分析二者的相互关系及临床意义.rn 方法：2012年6月～2012年12月期间在中国中医科学院西苑医院风湿病科住院的503例患者,分析其ANA与ANA谱检测的一致性.将ANA与ANA谱的联合检测结果分为ANA+/ANA谱+、ANA+/ANA谱-、ANA-/ANA谱+、ANA-/ANA谱-四组,比较各组间的差异,并分析各类型自身免疫性疾病(AID)患者的分布情况.最后探讨AID患者ANA与ANA谱非一致时所检测出的核型及特异性抗体的特点。rn 结果：ANA与ANA谱检测结果无显著统计学差异,两者符合率为77.27％,不符合率为22.73％.ANA+/ANA谱+,ANA+/ANA谱-,ANA-/ANA谱+三组统计显示AID与非AID患者的概率不相同;ANA-/ANA谱-组AID与非AID患者的概率相同.rn 结论：ANA与ANA谱联合检测比单一检测时阳性预测值(PPV)提高,假阴性率(FNR)减低.ANA+/ANA谱+,ANA+/ANA谱-,ANA-/NA谱+三组对AID疾病有鉴别意义,而ANA-/ANA谱-组对AID无鉴别意义。

摘要： 目的:观察不同转膜时间对免疫印迹法检测自噬蛋白LC3条带的影响.方法:利用他莫昔芬诱导人乳腺癌MCF7细胞自噬,高内涵成像系统观察LC3表达.提取总蛋白,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,0.22μm孔径PVDF膜,72伏分别电转15、30、45、60、75、90分钟,封闭,漂洗后加LC3一抗、二抗孵育.结果:LC3条带在30、45、60分钟时逐渐加深;75、90分钟时条带逐渐减弱,45分钟时LC3BⅠ及Ⅱ条带更为明显.结论:LC3Ⅰ、Ⅱ转膜时间最短可为15分钟,最佳显示时间为45分钟.

摘要： 目的：研究赣南地区过敏性皮肤病变应原谱,明确赣南地区过敏性皮肤病常见变应原,为赣南地区过敏性皮肤病的防治提供依据. 方法：临床纳入赣南地区2015年10月至2017年10月期间1126例过敏性皮肤病患者作为研究对象.采用免疫印迹法对所有患者血清进行特异性IgE检测,测定变应原,分析不同年龄段患者变应原阳性率情况. 结果：吸入组变应原中以户尘螨/粉尘螨和矮豚草/蒿最为常见,阳性率明显高于其他种类,P＜0.05;食入组变应原中以鱼/虾/蟹和腰果/花生/黄豆最为常见,阳性率明显高于其他种类,P＜0.05.儿童组、青少年组及老年组单种阳性率高于2种及以上阳性率,P＜0.05.变应原方式上不同年龄组内吸入性和食入性阳性率均无差异,P＞0.05.中老年组变应原种类上,单种阳性率和2种及以上阳性率明显低于儿童组和青少年组,P＜0.05;变应原方式上,吸入性、食入性阳性率均低于儿童组和青少年组,P＜0.05. 结论：导致赣南地区过敏性皮肤病的吸入性变应原以户尘螨/粉尘螨和矮豚草/蒿为主,食入性变应原以鱼/虾/蟹和腰果/花生/黄豆为主.年龄越小越容易发生过敏性皮肤病.因此应扩大赣南地区海鲜、坚果类变应原种类的检测,对年龄较小的儿童进行积极预防,可进一步降低赣南地区过敏性皮肤病的发生率.

摘要： 目的：探讨不同检测放大在诊断自身免疫性疾病中的价值.方法：选取本院2014年1月至2015年1月送检的血样2230例,采用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测抗核抗体和抗核抗体谱.对检测结果为阳性病例的临床资料进行统计分析.结果：经检查,抗核抗体阳性率为5.69％,抗核抗体谱阳性率为5.19％.确诊为自身免疫疾病的患者中,抗核抗体阳性率为82.6％.抗核抗体谱阳性率为73.48％.间接性免疫荧光法检测法的敏感性较高,免疫印迹法的特异性较强.结论：间接免疫荧光发检测抗核抗体的敏感性较高,免疫印迹法检测抗核抗体谱的特异性较强,两者联合进行检测可提高自身免疫性疾病的检出率,降低潜在患者的漏检率.

摘要： 目的：总结11名抗GABABR脑炎患者的临床特征,分析上述患者体内合并恶性肿瘤及神经系统副肿瘤综合征相关抗体情况.rn 方法：回顾首都医科大学附属北京同仁医院及其前身北京友谊医院自身免疫性脑炎研究组自2011年11月至2014年9月诊断的全部11名抗GABABR脑炎患者的临床资料,应用免疫印迹法筛查其血清中神经系统副肿瘤综合征相关抗体。rn 结果：全部送检815例临床拟诊“脑炎”患者中共检出11例抗GABABR脑炎病例，男女人数比为7:4，中位年龄62岁，年龄区间(54-72岁)。本组患者以癫痈发作、近记忆力减退以及精神错乱等边缘系统受累症状为核心表现，另有两名患者合并小脑性共济失调。5名患者行支气管镜并经病理确诊合并小细胞肺癌。经包括激素在内的免疫治疗以及必要化疗后半年，6人mRS为1-2分，3人mRS为3-4分，1人死于肿瘤恶液质，另有1人于第一轮免疫治疗期间死于急性呼吸衰竭。全部11名患者血清抗GABABR-IgG均阳性，其中10人脑脊液抗GABABR-IgG阳性。5名罹患小细胞肺癌的抗GABABR脑炎患者血清中均合并神经系统副肿瘤综合征相关抗体((4人SOX 1阳性，2人Hu阳性，1人Zic4阳性，1人amphiphysin阳性，1人recoverin阳性)。另有3例合并肺部占位但未行活检者，血清中存在神经系统副肿瘤综合征相关抗体(3人SOX1阳性，2人recoverin阳性，1人Zic4阳性，1人amphiphysin阳性，1人PNMA2阳性)。本组中胸部CT未发现占位者，血清神经系统副肿瘤综合征相关抗体阴性。rn 结论：作为全世界迄今为止报道不足百例、由抗神经元表面抗原抗体介导的新型自身免疫性脑炎，抗GABABR脑炎好发于40岁以上人群，约半数合并小细胞肺癌，其神经系统症状对包括激素在内的免疫治疗反应较好。由于患者总体预后取决于是否合并肿瘤尤其是小细胞肺癌，联合胸部CT、全身PET以及神经系统副肿瘤综合征相关抗体筛查，有助于对肿瘤做到早发现、早治疗。

摘要： 目的：比较酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹法(IB)检测抗SSA/Ro抗体,评价两种方法的符合度,希望为临床该抗体检测方法的选择提供一定的帮助.rn 方法：购买不同品牌的检测试剂盒,然后利用ELISA法和IB法同时检测本院收集的153例待检血清中抗SSA/Ro抗体,最后比较两种方法的检测灵敏度.rn 结果：欧蒙医学诊断技术有限公司(欧蒙)的ELISA试剂盒共检测153例血清,其中阳性标本80例,阴性标本73例,同时进行的抗核抗体谱检测,欧蒙的产品检测出98例阳性,55例阴性,而北京和杰创新生物医学科技有限公司(和杰创新)的产品检测出69例阳性,84例阴性.与欧蒙ELISA法检测结果相比,和杰创新公司的抗核抗体谱检测试剂盒检测的阳性检出率为45.1％(69/153),阳性符合率和阴性符合率分别为85.00％和98.60％.而欧蒙公司的抗核抗体谱检测试剂盒检测的阳性检出率为64.05％(98/153),阳性符合率和阴性符合率分别为98.75％和73.97％.rn 结论：ELISA法检测灵敏度比IB法高.与ELISA法相比,基于IB法的抗核抗体谱检测试剂盒在阳性检出率和假阳性方面都可以满足国内临床检测要求.虽然本文中所用的两个品牌抗核抗体谱检测试剂盒在阳性检出率和假阳性方面稍有差异,但都可以满足临床检测需求,各有其特点.

摘要： 目的：探讨谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)、胰岛细胞抗体64KD(ICA-64KD)、胰岛细胞抗体40KD(ICA-40KD)、胰岛素抗体(IAA)在糖尿病患者中检测的诊断评价.rn 方法：采用免疫印迹法检测61例1型糖尿病(T1DM)、313例2型糖尿病(T2DM)及33例正常人群血清中的GADA、IA-2A、ICA-64KD、ICA-40KD和IAA抗体,并计算五种胰岛自身抗体的灵敏度和特异度,并对其进行诊断性评价.rn 结果：血清GADA、IA-2A、ICA-64KD、ICA-40KD和IAA在T1DM组的灵敏度分别为18.0％、8.2％、8.2％、3.3％和1.6％,特异度分别为97.0％、100.0％、100.0％、100.0％和100.0％,假阴性率分别为82.0％、91.8％、91.8％、96.7％和98.4％,假阳性率分别为3.0％、0.0％、0.0％、0.0％和0.0％;在T2DM组的灵敏度分别为11.5％、9.3％、2.2％、1.9％和1.3％,特异度分别为97.0％、100.0％、100.0％、100.0％和100.0％,假阴性率分别为88.5％、90.7％、97.8％、98.1％和98.7％,假阳性率分别为3.0％、0.0％、0.0％、0.0％和0.0％.五种抗体并联试验：T1DM组灵敏度为21.3％、特异度为97.0％、假阴性率为78.7％、假阳性率为3.0％;T2DM组灵敏度为21.4％、特异度为97.0％、假阴性率为78.6％、假阳性率为3.0％.rn 结论：五种胰岛自身抗体检测对糖尿病的诊断价值有限,但对排除或确诊病例有一定价值.五种胰岛自身抗体相对而言,GADA对糖尿病的诊断价值稍大一些.

摘要： 目的：探讨导致Ⅰ型变态反应的各类过敏源在临床上的分布规律.方法：收集重庆市新桥医院皮肤科2011年7到2012年5月间所检测的临床病例,其中正常对照组100例,过敏反应组200例,用过敏源免疫印迹法试剂盒进行检测.结果：在过敏反应组中,食人性过敏源所引起的过敏反应以虾、蟹为主,与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01);吸入性过敏源所引起的过敏反应以屋尘螨、粉尘螨和屋尘为主,与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论：通过对变态反应过敏源的检测,发现引起Ⅰ型变态反应的常见因素,对患者的诊断、治疗和正确规避Ⅰ型变态反应的发生有重要的临床指导意义.

摘要： 自身抗体的产生：正常的免疫反应具有保护性、防御性作用，对正常自身组织和成分不发生反应；正常生理情况下存在自身抗体，净化体内衰老及死亡的细胞；各种原因导致将自身成分视为“异物“发生自身免疫反应，产生自身抗体；自身抗体超过一定水平，就可能对身体产生损伤——自身免疫病。

摘要： 本发明涉及医疗检测技术领域，且公开了一种用于免疫印迹法的洗膜装置，包括壳体，所述壳体的内部由上而下依次设有冲洗腔、蓄压腔和集流腔，所述蓄压腔通过集流腔与驱动泵连通。该用于免疫印迹法的洗膜装置，转膜直接放置在托板中，各个转膜相互隔开，有效规避了转膜移动并堆积，保证冲洗和封闭效果，其次，通过摇摆和流动共同作用在转膜上，同时，流动透过托板从底部对转膜进行冲洗，保证液流充分的与转膜接触，另一方面，通过冲洗腔、蓄压腔、容器腔、集流腔和回流腔组成的循环冲洗结构，减少了驱动泵和连接管路的使用，同时通过射流实现摇摆，精简设备结构，降低整体设备的成本，保证了冲洗效率。

摘要： 本发明涉及文物检测领域，公开了一种基于免疫印迹法检测古代毛织品残片的方法，本发明先制备了碳量子点标记的羊毛二抗，之后用金属盐法和还原法提取现代羊毛和古代毛织品残片，进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用碳量子点溶液进行染色，观察电泳图像。将得到的蛋白条带转移到聚偏氟乙烯膜上，经羊毛一抗和碳量子点标记的二抗孵育后，可在凝胶成像系统中观察到免疫条带，鉴定古代毛织品。本发明中化学试剂用量少，反应温和、环保无害；在对古代毛织品进行检测时，具有样品用量少、灵敏、准确、直观等优点。

摘要： 本发明涉及文物检测领域，公开了一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，本发明先用反向微乳液法制备了碳量子点，用碳量子点标记山羊毛和绵羊毛的二抗，之后用金属盐法和还原法提取现代羊毛和古代毛织品残片，透析、纯化，进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用碳量子点溶液进行染色，观察电泳图像。将得到的蛋白条带转移到聚偏氟乙烯膜上，经羊毛一抗和碳量子点标记的二抗孵育后，可在凝胶成像系统中观察到免疫条带，鉴别古代毛织品的羊毛种类。本发明中化学试剂用量少，反应温和、环保无害；在对古代毛织品进行检测时，具有样品用量少、灵敏、准确、直观等优点。

摘要： 本发明公开一种提高检测灵敏度的蛋白质免疫印迹法，有将蛋白质转移至硝酸纤维素薄膜及封闭步骤，其特征在于：将被转移上蛋白质的硝酸纤维素薄膜放入0~25°C的50%甲醇中轻柔震荡30 min，取出后室温放置10 min，然后50~100°C加热30 min，待恢复至室温后再进行封闭。操作简单，可有效避免蛋白质在洗净液反复洗涤及孵育过程中发生从膜上脱离现象，使Western blot能准确反应抗原含量且实验结果再现性强，提高了蛋白质免疫印迹法检测的灵敏度，特别适用于来源珍贵的痕量样品检测和分析。

摘要： 本发明提供一种免疫化学和生物化学分析方法，特别适用于婴儿、采血困难和不愿采血者快速检测尿液中人类免疫缺陷病毒-I型(HIV-1)抗体的垂直流免疫印迹法。本发明是通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电转，将HIV-1抗原包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上，然后将膜粘合于自制反应槽的底部，并与真空抽滤系统结合构成垂直流免疫印迹法检测方法。该方法使尿液样本在可控时间内垂直通过硝酸纤维素膜，加速抗原抗体反应，增加抗原抗体的结合度，从而提高检测灵敏度。通过本发明可快速检测尿液中的HIV-1抗体，确认HIV-1感染状况。可用于实验室诊断确认、药物治疗效果评价等，适宜基层普及使用，具有较大的推广应用价值。

摘要： 本发明涉及医疗检测技术领域，且公开了一种用于免疫印迹法的洗膜装置，包括壳体，所述壳体的内部由上而下依次设有冲洗腔、蓄压腔和集流腔，所述蓄压腔通过集流腔与驱动泵连通。该用于免疫印迹法的洗膜装置，转膜直接放置在托板中，各个转膜相互隔开，有效规避了转膜移动并堆积，保证冲洗和封闭效果，其次，通过摇摆和流动共同作用在转膜上，同时，流动透过托板从底部对转膜进行冲洗，保证液流充分的与转膜接触，另一方面，通过冲洗腔、蓄压腔、容器腔、集流腔和回流腔组成的循环冲洗结构，减少了驱动泵和连接管路的使用，同时通过射流实现摇摆，精简设备结构，降低整体设备的成本，保证了冲洗效率。

摘要： 本发明涉及文物检测领域，公开了一种基于免疫印迹法鉴定古代毛织品残片羊毛种类的方法，本发明先用反向微乳液法制备了碳量子点，用碳量子点标记山羊毛和绵羊毛的二抗，之后用金属盐法和还原法提取现代羊毛和古代毛织品残片，透析、纯化，进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用碳量子点溶液进行染色，观察电泳图像。将得到的蛋白条带转移到聚偏氟乙烯膜上，经羊毛一抗和碳量子点标记的二抗孵育后，可在凝胶成像系统中观察到免疫条带，鉴别古代毛织品的羊毛种类。本发明中化学试剂用量少，反应温和、环保无害；在对古代毛织品进行检测时，具有样品用量少、灵敏、准确、直观等优点。

摘要： 本实用新型涉及一种用于蛋白免疫印迹法的自动洗膜装置，包括储液单元、分流单元、洗膜单元、放液单元、集液单元和控制单元。其中，储液单元用于储存洗膜液；分流单元设置于储液单元的下游，用于将洗膜液均匀分流；洗膜单元设置于分流单元的下游，用于存放洗膜液进行洗膜；放液单元设置于洗膜单元的内部前侧，且与洗膜单元的内部进行滑动连接，用于打开或封闭洗膜单元；集液单元水平设置于水平摇床上，且其顶部外壁与洗膜单元的底部外壁相连接，用于收集洗膜后的废液；控制单元与储液单元、分流单元和放液单元连接，用于控制装置洗膜和排液；装置操作简单快捷，节约时间，避免物料浪费。

摘要： 本实用新型公开了一种免疫印迹法用洗膜盒，包括盒体，所述盒体的内部开设有若干个隔板，所述隔板的表面开设有若干个过水孔，所述盒体的一侧开设有通孔，所述通孔的内部安装有过滤网，所述盒体的顶部设置有盖板；本实用新型通过设计了隔板，使盒体形成独立单元格的结构，避免了条带间的粘连；盒体倒液处通孔的内部设计有过滤网，避免条带滑出，隔板上有过水孔，能够减少条带与盒体的附着，同时通过设计了遮光布，可以在其需要进行遮光洗膜时，使用遮光布将整个装置进行遮盖，形成不透光的洗膜盒，这样便可以适用于透光和不透光两种洗膜工作，减小另外购买设备的成本，并且转换方便，容易操作，使该装置的实用性得到了提高。

摘要： 本实用新型公开了一种免疫印迹法过敏原检测试剂盒，包括盒体、支撑机构和防水机构，所述支撑机构包括导轨，所述导轨安装在盒体的拐角位置处，所述导轨的一侧上端和下端均设置有滑块，所述滑块的内侧设置有丝杆，且丝杆与导轨转动连接，所述丝杆的外表面中间位置处设置有滑片，且滑片与滑块固定连接，所述丝杆的一端固定连接有锥齿轮B，所述锥齿轮B的外侧设置有锥齿轮A，且锥齿轮A与导轨转动连接，所述锥齿轮A的外表面固定连接有旋钮；通过设计了安装在盒体拐角位置处的导轨以及导轨上的滑块、丝杆、导轨和旋钮不仅便于支撑该装置，避免该装置接触水渍，同时还可保证该装置在堆积放置时的稳定性。