摘要：目的：研究碳青酶烯类药物敏感性降低肠杆菌科菌的分子特征。方法:收集2004-2008年我国16家教学医院的49株碳青霉烯类药物敏感性降低(亚胺培南或美罗培南或厄他培南的MIC≥2μg/ml)的肠杆菌科菌，采用对倍琼脂稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度；采用改良的Hodge试验和EDTA协同试验检测菌株产的碳青霉烯酶；接合试验检测耐药基因的可移动性；质粒提取试验分析菌株携带的质粒；聚合酶链式反应(PCR)检测包括碳青霉烯酶基因在内的多种β内酰胺酶基因、qnr基因、aac(6’)-Ib基因和整合子基因；对PCR阳性产物进行序列测定以确定基因型别；十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析菌株的外膜孔通道蛋白。脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析部分菌株的同源性。结果：49株研究菌株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药率分别为48%、20.4%和82.4%，替加环素和多粘菌素B的敏感率较高，分别为91.8%和98%。49株临床分离菌中25株菌为改良Hodge试验阳性，其中10株为弱阳性，15株为强阳性。49株临床分离菌株中有16株检测出携带碳青霉烯酶基因：4株肺炎克雷伯菌和2株大肠埃希荫携带KPC-2型碳青霉烯酶基因(均为浙江省杭州市分离菌株)，3株肺炎克雷伯菌、3株阴沟肠杆菌和2株弗劳地枸橼酸杆菌携带IMP-4型金属酶基因，2株肺炎克雷伯菌携带IMP-8型金属酶基因。49株临床分离菌株获得23株接合予，16株产碳青霉烯酶菌株中13株获得接合子，另外3株阴沟肠杆菌未获得接合子。检测出的整合子中携带了介导了菌株对甲氧苄啶、氨基糖苷类、氯霉素、β内酰胺类药物等耐药的基因。blaKPC-2分别位于4种不同大小的质粒上(147，120,90,42Kb)，肺炎克雷伯菌47、49的blaIMP-8定位于190Kb的质粒上，肺炎克雷伯菌76、77的blaIMP-4定位于57Kb的质粒上，弗劳地枸橼酸杆菌62、63的blaIMP-4定位于57Kb的质粒上。在不产碳青霉烯酶的33株菌株中，15株肺炎克雷伯菌的ompK35和ompK36均不表达或表达降低，6株大肠埃希菌和8株肠杆菌属菌的ompF和ompC均小表达或表达降低。PFGE显示部分菌株为克隆传播。rn 结论：碳青酶烯酶的产生在碳氰酶烯类药物低至中等水平耐药肠杆菌科菌中较为常见，中至高水平耐药的菌株中以多个外膜通道同时缺失或表达降低合并AmpC或ESBLs较为常见。
