汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用

摘要

目的：应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗汉坦病毒特异性抗体IgG. 方法：PCR扩增HV-Z10株NP编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统rBAC-Z10S-TN.间接荧光法了解rNP表达及与特异性免疫反应情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rNP.SDS-PAGE观察纯化情况,建立免疫印迹法检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清样品,并与常规间接免疫荧光法进行比较. 结果：rBAC-Z10S-TN高效表达rNP,提纯rNP SDS-PAGE显示单一蛋白条带,此抗原仅与肾综合征出血热(HFRS)患者血清起反应,而与正常人及其它发热病人血清不起反应.经双盲试验,两法检测疑似肾综合征出血热患者血清43份,符合率为97.8％. 结论：成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统.所建立的免疫印迹法检可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法.