摘要:目的:以1992年德国临床化学协会(DGKC)推荐的CHE催化活性测量候选参考方法为依据,研究不同试剂原料对CHE催化活性测量的影响,筛选出符合其方法要求的试剂.rn 方法:通过CHE测量时试剂空白起始吸光度及405nm处吸光度变化率、丁酰硫代胆碱试剂的稳定性、关键试剂原料对CHE催化活性测量的影响三个实验评价不同来源试剂原料对CHE催化活性测量的影响,筛选符合DGKC推荐方法要求的试剂原料.实验1-CHE测量时各厂家产品的试剂空白起始吸光度及405nm处吸光度变化率:使用pH为7.66(20℃℃)、浓度为91.5mmol/L的焦磷酸盐缓冲液配制浓度为2.44mmol/L的Sigma和Alfa六氰高铁酸钾(Ⅲ)溶液作分别为试剂1,与浓度为91.5mmol/L的Sigma,Merk,Roche,Alfa和Tci五个厂家生产的丁酰硫代胆碱试剂原料配制的五种底物浓度组成试剂组,按DGKC推荐方法在cary100紫外/可见分光光度计,37℃、405nm波长处以水为空白分别测量每组试剂的试剂空白起始吸光度及每分钟变化率.每组试剂测量l批,2个测试.每批实验以0.027mmol/L重铬酸钾检测405nm波长处噪音,若每批实验噪音检测的差值小于0.001,表明仪器性能稳定,测量数据有效.检查每批实验数据是否存在离群值,剔除离群值后计算各组试剂的试剂空白吸光度和每分钟吸光度变化率.以起始吸光度高于1.8Abs,每分钟吸光度变化率小于0.006为合格标准筛选符合DGKC推荐方法要求的试剂原料.实验2-丁酰硫代胆碱试剂的稳定性:以Sigma,Merk,Alfa,Tci四个厂家生产的丁酰硫代胆碱试剂原料按DGKC推荐方法配制四种底物溶液,每种溶液分3部分,分别置于4℃,室温,56℃条件下储存.各部分试剂分别于配制后0h,6h,24h,48h,1w和4w时使用cary100紫外/可见分光光度计,在405nm波长处以水为空白测量各溶液的吸光度,观察其变化以评价各厂家丁酰硫代胆碱产品是否存在自发水解.实验3-关键试剂原料对CHE催化活性测量的影响:以CHE催化活性浓度约为2200U/L、8700U/L、11700U/L的三个浓度水平的混合血清为研究样本,在日立7170A生化分析仪上按DGKC推荐方法建立相应的测量参数,评价(1)Sigma,Merk,Roche,Alfa和Tci等不同厂家生产的CHE底物-丁酰硫代胆碱试剂原料对CHE催化活性测量的影响.(2)Sigma,Alfa厂家生产的六氰高铁酸钾试剂原料对CHE催化活性测量的影响.rn 结果:1.以Sigma,Merk,Roche,Alfa和Tci五个厂家生产的CHE底物-丁酰硫代胆碱试剂原料制备的试剂与Sigma公司生产的六氰高铁酸钾试剂原料制备的试剂组合时各套测量试剂的试剂空白起始吸光度分别为1.8145、1.8149、1.7258、1.8147和1.809Abs,405nm波长处吸光度变化率分别为-0.00445、-0.00295、-0.00345、-0.00350和-0.00225.当六氰高铁酸钾试剂原料为Alfa公司产品时各套测量试剂的试剂空白起始吸光度分别为1.8157、1.8160、1.7365、1.8152和1.8215Abs,405nm处吸光度变化率分别为-0.00575、-0.00265、-0.00250、-0.00270和-0.00195.Roche公司生产的丁酰硫代胆碱试剂原料不能满足CHE候选参考方法要求.2.Sigma,Merk,Alfa和Tci四个厂家生产的丁酰硫代胆碱试剂在4℃,室温和56℃条件下于6h,24h,48h,1w和4w测得吸光度与0h测得吸光度差值分别为:(1)4℃:在4℃条件下各时间段与0h测得吸光度差值均为0.0000Abs.(2)室温:室温/6h,吸光度差值为0.0169,0.0134,0.0179,0.0171Abs;其余时间段吸光度差值均为0.0000Abs.(3)56℃:56℃/6h,吸光度差值为0.0082,0.0041,0.0082,0.0082Abs;56℃/24h,吸光度差值为0.0099,0.0073,0.0098,0.0100Abs;56℃/48h,吸光度差值为0.0049,0.0025,0.0068,0.0055Abs;56℃/1w,吸光度差值为0.0112,0.0060,0.0077,0.0087Abs;56℃/4w吸光度插值均为0.0000Abs.3.以Sigma,Merk,Roche,Alfa和Tci五个厂家生产的丁酰硫代胆碱试剂原料制备的试剂与Sigma公司生产的六氰高铁酸钾试剂原料制备的试剂组合时2200U/L、8700U/L、11700U/L三个浓度水平的混合血清在日立7170A生化分析仪上测得的CHE催化活性分别为2378、2466、2395、2457和2451U/L;8446、8756、8399、8721和8747U/L;11520、11920、11490、11946和11944U/L.与Alfa公司生产的六氰高铁酸钾试剂原料制备的试剂组合时测得的CHE催化活性分别为2417、2472、2381、2458和2481U/L;8472、8787、8409、8753和8744U/L;11605、11968、11491、11875和11894U/L.以Merk公司生产的丁酰硫代胆碱试剂测量CHE时催化活性浓度值高于其他厂家产品.rn 结论:不同来源的丁酰硫代胆碱试剂原料质量不一,Roche公司生产的丁酰硫代胆碱试剂空白吸光度不满足CHE候选参考方法要求,不适用于建立CHE候选参考方法.丁酰硫代胆碱试剂4℃条件下保存至少可稳定30天.不同来源的丁酰硫代胆碱试剂原料对CHE催化活性测量的影响大于六氰高铁酸钾(Ⅲ).Sigma,Merk,Roche,Alfa和Tci等各厂家生产的丁酰硫代胆碱试剂原料中Merk公司产品测量CHE催化活性值高于其他厂家产品。