重组蛋白质类

摘要： 目的建立人降钙素原(procalcitonin,PCT)表达体系,高效表达可溶性PCT蛋白。方法合成PCT蛋白密码子优化序列,克隆至带麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)标签的pRSF-Duet载体以构建pMBP-PCT-pRSF原核表达质粒。在E.coli BL21(DE3)pLysS菌株中诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)鉴定蛋白分子量及纯度,生物梅里埃VIDAS全自动荧光免疫分析仪检测蛋白浓度、稳定性及均匀性。结果pMBP-PCT-pRSF质粒成功构建及表达,浓度达168(168.00±2.65)mg/L,纯度达95%。在4°C及-20°C储存,PCT蛋白具有良好的稳定性(F=2.016,2.620,均P>0.05)和均匀性(F=0.7273,0.9739,均P>0.05)。结论利用密码子优化,成功构建可溶性PCT蛋白的高效原核表达体系,可充分满足临床实验室参考物质的需求。

摘要： 目的利用巴斯德毕赤酵母获得具有可溶性、免疫原性的重组PD-L1蛋白。方法根据巴斯德毕赤酵母表达系统的密码子使用偏好,优化人PD-L1基因序列,将优化后的序列构建至质粒pPIC9K,合成重组质粒pPIC9K-PDL1。使用SacⅠ-HF将pPIC9K-PDL1线性化,然后通过电击法将pPIC9K-PDL1上的PD-L1基因序列整合至巴斯德毕赤酵母基因组中,依次使用MD平板(无组氨酸)和遗传霉素G418从电击处理过的菌液中筛选重组巴斯德毕赤酵母菌株,然后使用PCR和测序对筛选到的菌株进行鉴定。利用甲醇体积分数为0.005的BMMY培养基诱导重组巴斯德毕赤酵母菌株表达,使用免疫印迹法检测菌株培养基上清液中的表达产物。结果筛选得到了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,表达的PD-L1相对分子质量约为44700,可以与抗PD-L1抗体特异性结合。结论成功构建了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株,菌株表达的PD-L1蛋白可用于开发血清PD-L1检测试剂盒。

摘要： 为探讨卡介菌纯蛋白衍生物(BCG-PPD)和结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)在结核病筛查中的差异。笔者检索PubMed、Embase、Medline、Cochrane Library、中国知网和万方数据库从建库至2022年2月期间发表的相关文献,对符合纳入条件的文献采用Open Meta Analyst软件进行Meta分析,采用Rev Man 5.3软件Cochrane偏倚风险评估工具对文献进行质量评价。最终纳入7篇文献,共36131例参与者,BCG-PPD组参与者18314例,TB-PPD组参与者17817例。采用二分类随机效应模型进行分析,合并的OR(95%CI)值为2.072(1.683~2.550),I^(2)=78.73%,P<0.001,存在高度异质性,需要进一步分析异质性的来源。亚组分析结果显示,以学生及新生儿为研究对象的亚组OR(95%CI)值为2.393(2.132~2.686),I^(2)=50.15%,P=0.091,I^(2)值明显下降;以结核病患者为研究对象的亚组OR(95%CI)值为0.481(0.236~0.978),I^(2)=0,P=0.043,选用固定效应模型。可见,TB-PPD和BCG-PPD在不同人群结核病筛查中存在阳性检出率的差异,以学生及新生儿为研究对象,BCG-PPD的阳性检出率高于TB-PPD;以结核病患者为研究对象,TB-PPD的阳性检出率高于BCG-PPD。

摘要： 目的 探讨冻干重组人脑利钠肽联合缬沙坦氢氯噻嗪在急诊急性心力衰竭(AHF)伴高血压病人中的应用.方法 选取2017年4月至2018年12月郑州大学附属洛阳中心医院收治的AHF伴高血压病人106例,以随机数字表法分为对照组和联合组各53例,对照组给予缬沙坦氢氯噻嗪+螺内酯治疗,联合组给予冻干重组人脑利钠肽+缬沙坦氢氯噻嗪+螺内酯治疗.对比两组治疗前及治疗2周后的血压、心率、心功能指标、心率变异性指标、血清肌钙蛋白T(TNT)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)及胱抑素C(Cys-C)水平变化,对比临床疗效及治疗期间的不良反应.结果 治疗2周后,收缩压(SBP)[对照组(165.16±34.83)mmHg比(133.78±23.41)mmHg、联合组(166.23±35.37)mmHg比(124.32±22.57)mmHg]和舒张压(DBP)[对照组(108.76±22.75)mmHg比(87.57±12.89)mmHg、联合组(109.23±23.14)mmHg比(82.16±13.17)mmHg]均降低(P50 ms个数所占百分比(PNN50)均明显高于治疗前(P0.05).结论 冻干重组人脑利钠肽联合缬沙坦氢氯噻嗪治疗可显著降低急诊AHF伴高血压病人血压、改善心功能及心率变异性,减慢心率,显著降低TNT、NT-proBNP及Cys-C水平,增强疗效且安全可靠.

摘要： 卡介苗是唯一应用于临床的结核病疫苗,但是其对成人结核病的保护效果仍存在不确定性.重组蛋白亚单位疫苗可提供长期的免疫保护效果,且成分明确、安全性好,因而具有较好的应用开发前景.作者对结核病重组蛋白亚单位疫苗的组分(结核分枝杆菌保护性抗原和免疫佐剂)、临床研究现况、应用策略及研究所面临的挑战等方面的进展进行了综述.

摘要： 目的 探讨氦?氖激光照射联合重组人白介素?2(IL?2)、常规抗病毒治疗治疗生殖器疱疹的疗效.方法 选取2018年6—12月深圳市龙岗区第三人民医院收治的生殖器疱疹病人共80例,以随机数字表法分组,基础组40例,口服盐酸伐昔洛伟+皮下注射重组人IL?2治疗.联合组40例,在上述治疗基础上,增加氦?氖激光照射病灶.对比两组病人止痛时间、止疱时间、结痂时间、脱痂时间,临床疗效,治疗前后血清白细胞介素2(IL?2)、干扰素?γ(IFN?γ)、白细胞介素4(IL?4)水平变化与不良反应.结果 联合组病人止痛时间(1.62±0.33)d、止疱时间(1.35±0.27)d、结痂时间(3.02±0.61)d、脱痂时间(4.59±0.92)d均短于基础组(P0.05).结论 在生殖器疱疹病人中实施氦?氖激光照射联合重组人IL?2、常规抗病毒治疗可促进病人康复,增强疗效,提高病人的IL?2、IFN?γ水平,降低IL?4水平且安全性良好.

摘要： 目的 评价重组结核分枝杆菌11 kDa(相对分子质量为11 000)蛋白(简称“重组11kDa蛋白”)在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种鉴别中的应用.方法 由首都医科大学附属北京胸科医院联合北京市昌平区结核病防治所、北京市怀柔区结核病防治所和北京市大兴区结核病防治所,于2014年7月至2016年3月在以上3个区的高校和工厂招募健康志愿者.共计招募3001名志愿者,所有志愿者体检合格,均签订知情同意书.对所有志愿者采用Mantoux法进行重组11kDa蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1ml重组11kDa蛋白(10 μg/ml)和0.1 ml TB-PPD(50 U/ml),观察注射后72 h后的皮肤反应.于皮肤试验前采集所有志愿者的静脉血,进行体外γ-干扰素释放试验(IGRA)检测.采用“一致率(％)”和“一阶一致性系数(the first-order agreement coefficient,AC1)比较重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD试验及IGRA结果的差异.3001名志愿者均接受3种方法检测,其中475名3种检测结果均为阴性的受试者,采用数字表法按随机双盲的原则,以2∶1的比例接种卡介苗(318名;失访8例)和安慰剂(147名;失访2例),接种3个月后再次进行重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD皮肤试验及IGRA,采用“一致率(％)”和“AC1”比较其结果差异.结果 健康志愿者潜伏性结核感染筛查中,IGRA阳性率(34.4％,1033/3001)明显高于重组11 kDa蛋白(32.2％,966/3001),差异有统计学意义(x2=22.787,P＜0.001);IGRA与重组11kDa蛋白的一致率为93.4％(2804/3001),AC1值为0.882(95％CI=0.866～0.898),两者有较好的一致性.TB-PPD阳性率(47.7％,1430/3001)明显高于重组11 kDa蛋白(32.2％,966/3001),差异有统计学意义(x2=182.146,P＜0.001);TB-PPD与重组11 kDa蛋白的一致率为60.6％(1819/3001),AC1值为0.243(95％CI=0.207～0.279),两者的一致性较差.卡介苗接种鉴别研究中,接种卡介苗的志愿者重组11 kDa蛋白的阳性率(1.3％,4/318)与IGRA(3.1％,10/318)比较,差异无统计学意义(x2=2.571,P=0.109);一致率为95.6％(304/318),AC1值为0.954(95％CI=0.929～0.979),两者有较好的一致性.重组11 kDa蛋白的阳性率(1.3％,4/318)低于TB-PPD(56.3％,179/318),差异有统计学意义(x2=167.350,P＜0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为42.5％(135/318),AC1值为0.025(95％CI=-0.106～0.155),两者的一致性较差.接种安慰剂的志愿者重组11 kDa蛋白的阳性率(4.1％,6/147)与IGRA(1.4％,2/147)比较,差异无统计学意义(x2=2.667,P=0.109);一致率为95.9％(141/147),AC1值为0.957(95％CI=0.921～0.993),两者有较好的一致性.TB-PPD的阳性率(17.7％,26/147)高于重组11kDa蛋白(4.1％,6/147),差异有统计学意义(x2=15.385,P＜0.001),一致率为82.3％(121/147),AC1值为0.781(95％CI=0.690～0.871),两者有较好的一致性.结论 重组11 kDa蛋白在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种方面与IGRA有很好的一致性,可作为潜伏性结核感染者筛查与卡介苗接种鉴别的候选诊断试剂.

摘要： 目的探讨结核分枝杆菌Rv2991、Rv3428c重组蛋白对菌阴肺结核的辅助诊断价值。方法选择2016年3月—2018年5月我院收治的初治菌阴肺结核患者100例(A组)及同期在我院接受治疗的其他肺部疾病患者100例(B组),在我院进行常规全身体检健康者100例(C组)作为对照,采集3组受试者的血液标本,分离出血清,采用酶联免疫吸附测定法检测并比较3组受试者血清结核分枝杆菌Rv2991、Rv3428c重组蛋白表达水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算各重组蛋白检测的曲线下面积。结果A组患者血清结核分枝杆菌Rv2991、Rv3428c重组蛋白表达水平高于B组和C组(F=649.451、2156.945,q=43.381~81.529,P0.05)。将B组作为对照,绘制ROC曲线,血清结核分枝杆菌Rv2991、Rv3482c重组蛋白辅助诊断菌阴肺结核的曲线下面积分别为0.834(95%CI=0.778~0.895)以及0.829(95%CI=0.771~0.884),cut-off值分别为58000.50和48500.50,在该cut-off值下,血清结核分枝杆菌Rv2991、Rv3482c重组蛋白辅助诊断菌阴肺结核的灵敏度分别为92.3%、81.5%,特异度分别为85.5%、82.0%。结论血清结核分枝杆菌Rv2991、Rv3428c重组蛋白用于菌阴肺结核的辅助诊断特异度与灵敏度较高,具有一定的临床应用价值。

摘要： 病例1:患者,女,54岁,左侧肺癌并双肺转移(cT4NXM1Ⅳ期)化疗后,血常规检查:白细胞计数1.63×10^9/L,其中中性粒百分比67.4%,嗜酸性粒细胞百分比0.4%,红细胞计数2.44×10^12/L,血小板计数104×10^9/L,结果提示三系细胞下降明显,临床诊断为Ⅳ度骨髓抑制,考虑因化疗药物引起,给予患者新瑞白(PEG-rhG-CSF,生产厂家:齐鲁制药,批号:201908080KDB)升白细胞治疗,升白细胞后第3天血常规检查仪器结果显示.

摘要： 目的：采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法 采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHO DHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果 获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×10左右的糖蛋白。结论 本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增植能力。

摘要： 目的：采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法 采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHO DHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果 获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×10左右的糖蛋白。结论 本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增植能力。

摘要： 目的：采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法 采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHO DHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果 获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×10左右的糖蛋白。结论 本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增植能力。

摘要： 本发明提供一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法，其将连续多套的生物活性胜肽置换于一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白。

摘要： 本发明揭示了包含二氢叶酸还原酶(DHFR)启动子的可诱导的高表达盒，所述启动子中富含GC重复序列被部分或完全去除，所述表达盒能够更有效地改善基因扩增系统。本发明还揭示了包含所述可诱导的表达盒和任选编码重组目的蛋白质的基因的表达载体，用所述表达载体转化的动物细胞系和通过培养所述转化体大量生产和纯化重组蛋白质的方法。本发明能够缩短建立使用低浓度DHFR抑制剂以高水平生产重组目的蛋白质的细胞系所需的时间，因此更高效地生产所述重组蛋白质。

摘要： 本发明揭示用以增进重组多肽/蛋白质(recombinantpolypeptide/protein)的生产的核酸构建体与表达载体，以及用以大量生产重组多肽/蛋白质的方法，其中一编码硫氧还蛋白(thioredoxin)的第一核酸序列以及一编码血红蛋白的第二核酸序列被克隆至一重组宿主细胞内，由此而增强该重组宿主细胞生产一选定的基因产物的生产力以及帮助该重组宿主细胞缓解由于该基因产物的过量生产所致的细胞内应激(intracellular stress)。

摘要： 本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒E1A蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构。

摘要： 本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0—2个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒ElA蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0—2个Lewis x结构。

摘要： 本发明提供一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法，其将连续多套的生物活性胜肽置换于一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白。

摘要： 本发明揭示了包含二氢叶酸还原酶(DHFR)启动子的可诱导的高表达盒，所述启动子中富含GC重复序列被部分或完全去除，所述表达盒能够更有效地改善基因扩增系统。本发明还揭示了包含所述可诱导的表达盒和任选编码重组目的蛋白质的基因的表达载体，用所述表达载体转化的动物细胞系和通过培养所述转化体大量生产和纯化重组蛋白质的方法。本发明能够缩短建立使用低浓度DHFR抑制剂以高水平生产重组目的蛋白质的细胞系所需的时间，因此更高效地生产所述重组蛋白质。

摘要： 本发明揭示用以增进重组多肽/蛋白质(recombinant polypeptide/protein)的生产的核酸构建体与表达载体，以及用以大量生产重组多肽/蛋白质的方法，其中一编码硫氧还蛋白(thioredoxin)的第一核酸序列以及一编码血红蛋白的第二核酸序列被克隆至一重组宿主细胞内，由此而增强该重组宿主细胞生产一选定的基因产物的生产力以及帮助该重组宿主细胞缓解由于该基因产物的过量生产所致的细胞内应激(intracellular stress)。

摘要： 本发明涉及蛋白质和/或其片段和衍生物及它们在疫苗和生物技术方法中的应用。该疫苗特别包括从牛蹄炎分离出的密螺旋体的免疫原性蛋白质。本发明进一步涉及针对所述蛋白质或其片段的抗体，和所述蛋白质在诊断方法中的应用，其中检测所述抗体作为牛蹄炎的标志。

摘要： 本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒E1A蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0-2个Lewis x结构。