华东葡萄抗逆相关基因VpSBP16原核表达及功能初步分析

摘要

SBP-box基因在植物响应逆境胁迫中起着非常重要的作用,通过制备华东葡萄(V.pseudoreticulata)转录因子VpSBP16基因抗血清,为深入探究葡萄抗逆相关基因VpSBP16的功能试验提供基础。将已构建的pGEX-VpSBP16原核表达载体转入大肠杆菌中,利用IPTG诱导表达的蛋白作为抗原注射新西兰兔,从而获得VpSBP16基因抗血清,利用Western blot检测手段,以所获得的VpSBP16基因抗血清作为一抗检测毛葡萄‘商-24’叶、茎、花序、卷须和果实不同发育时期的VpSBP16蛋白表达情况。结果表明,原核表达载体pGEX-VpSBP16在大肠杆菌菌株DE3中高效表达,Western blot检测出与预期结果一致的分子量约为87kD的GST-VpSBP16融合蛋白。在新西兰兔的背部及腹股沟注射纯化后的目的融合蛋白获得了免疫-抗原反应良的多克隆抗血清。提取葡萄总蛋白后检测到VpSBP16蛋白表达量在花序中含量最低,而在果实发育的绿果期表达量较高。大肠杆菌表达系统中,pGEX-VpSBP16融合蛋白可以在27℃、0.6 mmol/L IPTG诱导条件下获得高表达。因此,笔者研究制备的多克隆抗血清具备效价高、特异性强的特点。VpSBP16基因不仅增强植物非生物胁迫的抗性,也可能会影响葡萄花发育和葡萄果实成熟,参与调节葡萄从营养生长到生殖生长的转变。