大肠杆菌

摘要： 为了调查石河子地区绵羊肠道正常菌群大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药表型和耐药基因的携带情况,本研究采用常规细菌分离方法结合16S rRNA检测方法分离鉴定绵羊源羊肠道正常大肠杆菌,利用K-B纸片扩散法和PCR分析分离株对β-内酰胺类5种临床常用抗菌药的耐药表型及SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9、TEM 5种耐药基因的携带情况.结果显示,100株绵羊源大肠杆菌对青霉素耐药率为100％,对头孢拉丁和阿莫西林等药物的耐药率在80％ ～90％ 之间,对头孢唑林和头孢他啶耐药率为1％;CTX-M-1和TEM耐药基因的检出率分别为100％和98％,未检测到SHV、CTX-M-2、CTX-M-9基因.结果表明石河子地区绵羊源羊肠道正常大肠杆菌对β-内酰胺类药物具有一定水平的耐药性,耐药基因主要以TEM和CTX-M-1为主.

摘要： 为考察添加防冻剂(乙二醇)的浓戊二醛消毒剂防冻及消杀效果,对不同温度条件下添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂(防冻剂/浓戊二醛消毒剂体积分数分别为2％、3％、4％、8％、10％、12％、14％)进行了冻结试验,并对其抑菌及杀灭非洲猪瘟病毒效果进行了验证,利用硫酸滴定法检测防冻剂对浓戊二醛有效含量及稳定性的影响.结果显示:添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂在-10、-20°C条件下均有良好的防冻效果.添加防冻剂后的消毒液(体积分数10％、12％)进行100倍稀释后抑菌圈可达到标准要求,且抑菌圈平均大于不加防冻剂消毒液1 mm左右.5％ 稀释、12％ 体积分数的防冻消毒剂,在20°C条件下作用10 min,10°C作用30 min,0°C作用60 min,均能完全灭活非洲猪瘟病毒;10％ 稀释的防冻消毒剂-10°C条件下作用30 min,20％稀释的防冻消毒剂-20°C条件下作用30 min,均能完全灭活非洲猪瘟病毒.经硫酸滴定,该防冻剂理化性质稳定,首次检定与24、48 h后检定的结果并无太大差距,消毒剂有效含量分别为96.7％、96.2％ 和95.6％.结果表明,低温环境下添加体积分数12％的防冻消毒剂具有很好的防冻效果和贮存稳定性,并且能够有效杀灭细菌及非洲猪瘟病毒.本研究为东北地区冬季选择合适的防冻消毒剂提供了技术支撑.

摘要： 目的测试自研新型负压过滤系统的过滤效果和杀菌性能,为其实际应用提供数据支撑。方法使用测试平台检测自研新型负压过滤系统在不同气体流量下的过滤效率;采用载体定量杀菌试验的方法获取新型负压过滤系统放电作用后的细菌存活率;使用扫描电镜观察细菌的超微结构,了解其放电处理前、后的样貌变化。结果当流量在0~950 m;/h范围内变化时,新型负压过滤系统的气溶胶去除效率高于99.99%,高于WS/T 292-2008《救护车》对气溶胶过滤效率(达到99.7%)的要求;在放电处理时间相同的条件下,放电功率越高,灭菌效果越好;3种细菌灭活的难易程度为枯草芽孢杆菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌。随着放电处理时间的延长,大肠杆菌菌体胞内物质析出逐渐增多。放电作用后的菌体出现了细胞壁变粗糙或明显破损的现象。结论该新型负压过滤系统过滤性能良好,具有较高的原位杀菌效率,在传染病防治领域有很好的应用前景,亦可用于冷库、空调风道、人防设施、生物安全实验室等空间内微生物的过滤和消杀。

摘要： 胶原蛋白是一种生物高分子,具有良好的生物特性,被广泛应用于食品、化妆品、生物学以及医学等领域,但以传统方法在动物中提取的胶原存在水溶性差、具有传播病毒的风险及批间一致性差等问题。以基因工程技术得到的重组胶原蛋白组分单一、安全性高和生产过程可控。在大肠杆菌中表达重组Ⅲ型人源化胶原蛋白,通过正交实验对培养基的碳氮浓度进行优化,发现最佳添加量为蛋白胨15 g/L、酵母粉7.5 g/L和甘油12 g/L,经5 L发酵罐验证菌体量增加约120%,表达量达到10.31 g/L,提高了199%。胶原蛋白纯化后进行了氮端测序和等电点表征实验。

摘要： 为调查山西地区不同来源大肠杆菌对临床常用药物的耐药性,选择山西省部分地区不同来源大肠杆菌196株,采用KB纸片法进行敏感药物筛选试验。结果显示,山西地区鸡源大肠杆菌对卡那霉素、阿米卡星、氟苯尼考高度敏感,对庆大霉素高度耐药;猪源大肠杆菌对卡那霉素、阿米卡星、头孢氨苄敏感度较高,对庆大霉素、氧氟沙星高度耐药;牛源大肠杆菌对阿米卡星、氟苯尼考、头孢曲松、氧氟沙星、诺氟沙星的耐药率为0。研究表明,不同来源的大肠杆菌均有不同程度的耐药性产生,临床应注意科学合理用药。

摘要： 仔猪大肠杆菌病由致病性大肠杆菌感染所引起,病原在养殖环境中广泛分布,管理水平低、饲养环境差、消毒不严格的猪场多发。根据仔猪感染后临床表现的不同,该病分为仔猪黄痢型、白痢型和水肿型3种,黄痢和白痢主要特征为粪便分别显黄色和灰白色,前者发病急,发病日龄早,致死率高,后者发病稍缓,致死率低,水肿型则以全身组织器官发生水肿为特征。对此,从接种疫苗、加强环境卫生管理、减少应激对仔猪的影响、科学使用药物、加强对母猪的管理以及做好猪场全方位消毒的角度阐述了该病的预防方法,同时介绍了该病的治疗措施。

摘要： 噬菌体抗性菌株的产生是噬菌体治疗领域普遍关注的问题,为研究噬菌体的抗性菌株与其敏感菌株之间的的差别,本研究将大肠杆菌短尾噬菌体Bp4与宿主大肠杆菌共培养,经双层平板法筛选,结果显示获得了对噬菌体具有抗性的大肠杆菌,且该抗性菌株不能被Bp4裂解。将该抗性菌株与其敏感菌株进行了形态及培养特性的比较,发现二者基本一致;基因组测序分析结果显示,与敏感菌株相比,抗性菌株基因组出现3处突变,造成乙醛脱氢酶的天冬氨酸突变为酪氨酸,十一碳二烯磷酸α-N-乙酰氨基葡萄糖磷酸转移酶1的色氨酸发生无义突变,以及UpfB蛋白的亮氨酸发生同义突变;采用玻板凝集试验检测了二者的血清型,结果显示敏感菌株为O78型大肠杆菌,而抗性菌株与O78抗血清凝集现象不明显,表明抗性菌株血清型发生了变化。药敏试验结果显示,与敏感菌株相比,抗性菌株对替米考星、环丙沙星、氨曲南、妥布霉素的耐药性均降低;小鼠的致病性试验结果显示,抗性菌株接种的小鼠未出现死亡,感染后0~48 h前小鼠体况计分一直维持在45分以上,之后略有下降;而敏感菌株接种的小鼠在接种后72 h内共死亡4只,且体况计分比抗性菌株接种的小鼠低约30分,表明噬菌体抗性菌株对小鼠的致病性降低。上述结果表明,本研究获得的噬菌体抗性大肠杆菌的耐药性及致病性均下降,为噬菌体治疗中出现的抗性菌问题提供了参考依据。

摘要： 试验旨在研究饲料级柠檬酸铜对断奶仔猪细菌性腹泻主要病原菌(产肠毒素大肠杆菌和猪霍乱沙门氏菌)的体外抑菌作用。试验分别配制浓度为0.15 g/mL(铜含量26.5 mg/mL)、0.20 g/mL(铜含量35.3 mg/mL)和0.25 g/mL(铜含量44.1 mg/mL)的柠檬酸铜溶液作为试验组,同时配制不含柠檬酸铜的溶液作为对照组。试验采用药敏纸片法测定柠檬酸铜对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌圈直径;通过倍比稀释法测定柠檬酸铜对大肠杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度。结果表明:与对照组相比,0.15、0.20、0.25 g/mL柠檬酸铜组大肠杆菌的抑菌圈直径分别提高36.05%(P0.05)、56.40%(P<0.05)和92.91%(P<0.05);大肠杆菌和沙门氏菌对0.25 g/mL柠檬酸铜表现出高度敏感;柠檬酸铜对大肠杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度均为6.25 mg/mL。本试验条件下,饲料级柠檬酸铜对大肠杆菌和沙门氏菌具有较好的抑菌效果。

摘要： 为消除中药颜色和不溶颗粒对最小抑菌浓度测定结果判定的影响,建立了微量肉汤稀释联合平板计数法。结果发现,抗菌剂(磺胺甲噁唑、多西环素、氟苯尼考、硫酸新霉素、恩诺沙星)MIC测定前后的MIC孔细菌浓度比值(BCR_(MIC))为10^(-3)~10^(3)。以BCR_(MIC)为标准替代肉眼观察来判定中药MIC,采用微量肉汤稀释联合平板计数法定量评价了68种中药的抗菌活性。五倍子、黄连、山楂、地锦草、厚朴、黄芩、石榴皮、翻白草、乌梅对克氏原螯虾源病原菌(嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌)的抗菌活性较强,其MIC为4~16 mg/mL。

摘要： 生猪大肠杆菌病的病原微生物为致病性大肠杆菌,可感染不同年龄、品种的生猪,日龄越小的仔猪越易感,可出现不同程度的腹泻和脱水症状,还伴有发热、精神不振、消瘦等不良症状,不仅影响生猪自身的生长发育,也会通过多种途径感染整个猪群。笔者结合自身工作经验,对仔猪黄痢、白痢和水肿3类大肠杆菌致病菌引发的疾病的流行特点、症状、病变和防治进行概述,以供同行参考。

摘要： 萜类化合物(terpenoids)是自然界中分布最广泛的天然产物,因其多样的生理活性和经济价值而被人们认识和开发.近年来,代谢工程及合成生物学的发展使得生物合成萜类化合物备受关注.本文中,笔者总结了萜类化合物合成的路线及其在大肠杆菌研究中取得的进展,探讨和展望了可能的发展方向,为大肠杆菌微细胞工厂合成萜类产物的研究提供参考和启示.

摘要： 大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)是人和动物肠道中最主要且数量最多的细菌,但其中有些菌株具有很强的致病性,可以通过食物、水等传播媒介侵入人体引起各种并发症,因此在致病型大肠杆菌感染爆发阶段,实现大肠杆菌在环境水体和食品中的快速、简便、灵敏和特异性检测至关重要.

摘要： 为确定引起昌黎县某养殖厂狐狸患肺炎死亡的致病菌,对病死狐狸进行剖检,在肺脏分离出一株优势菌.对其进行革兰氏染色,采用16SrDNA序列分析,以及生化鉴定.结果显示,革兰氏染色呈阴性,16SrDNA序列比对分析和生化鉴定为大肠杆菌.使用15种药敏纸片进行药敏试验,此大肠杆菌对氟苯尼考、恩诺沙星、头孢曲松、诺氟沙星敏感,对丁胺卡那霉素、庆大霉素中度敏感,而对青霉素、氨苄西林、头孢拉定、复方新诺明、林可霉素、链霉素、阿莫西林耐药.此菌表现出严重的耐药性,提示,临床上狐狸大肠杆菌肺炎传统抗生素治疗难度增大.

摘要： 蒎烯(pinene)是一种重要的天然单萜类平台化合物,被广泛应用于合成高密度可再生燃料、药理活性、香料和芳香醇等产品,在军事、医药、农业、工业和家用等领域均有重要的应用前景.利用合成生物学概念,将来源于酵母和粪肠球菌异源杂合MVA代谢途径和来源于北美巨冷杉(Abies grandis)的牻牛儿焦磷酸合酶(GPPS)和蒎烯合成酶(PS)基因序列共同导入大肠杆菌中并催化表达,构建含完整的蒎烯代谢途径的大肠杆菌工程菌。首先获取蒎烯合成代谢途径中最后两个酶GPPS、PS的基因序列，优化后进行人工全基因合成，再以pET24-a为基础构建GPPS、PS融合表达载体，并将其转化到大肠杆菌中获得工程菌E.hzh02；然后再获取MVA代谢途径相关酶（mvaE、mvaS、ERG12、ERG8、ERG19、IDI）的基因序列，设计引物分别克隆，利用多顺反子模型构建MVA代谢途径，将MVA代谢途径和GPPS、PS融合表达基因共同转化到大肠杆菌中构建完整蒎烯合成代谢工程菌株E.hzh05，摇瓶发酵得到E.hzh02和E.hzh05的蒎烯产量分别为1.86mg/L和19.26 mg/L。综上得出，导入MVA代谢途径到大肠杆菌中可以显著提高蒎烯的产率，为工业生物合成蒎烯奠定了一定的基础。

摘要： 合成生物学作为近年来发展迅速的一门交叉学科,为微生物的生物合成提供了强有力的平台工具.微生物细胞工厂可以合成一系列不同种类的聚羟基脂肪酸酯(PHA),而大肠杆菌作为最常用的底盘,正不断运用合成生物学的策略发掘PHA的多样性并降低成本、提高产量.本文中,笔者综述了大肠杆菌利用合成生物学策略生产生物基材料PHA的研究进展,并对其开发与应用前景进行了展望.

摘要： 大肠杆菌是一种条件致病菌,既是家禽体内正常的肠道菌群又是致病菌,不同类型的大肠杆菌其致病力不同.大肠杆菌能引起家禽局部或全身感染,给养殖户带来巨大的经济损失.分子分型方法对于确定感染来源和途径,检测交叉污染和流行菌株方面非常有效.本文对大肠杆菌分子分型方法的研究进行综述.分子分型方法能够弥补表型分型的不足，理想的分型方法需要具备以下的特征:100%的分型能力;高分辨能力;良好的重复性;操作简便、节约时间，并且费用低。然而，所有的分子分型方法都存在一个很大的局限性。总之，低成本化、自动化、标准化的分子分型方法是细菌分型研究的发展方向。

摘要： 牛乳房内的细菌感染会导致很多临床特征,有严重威胁到生命的,也有慢性的亚临床现象.参与此细菌能通过不同的途径激活宿主的免疫系统,从而决定了个体最终所表现的病情严重性.为了更好地发展预防和治疗技术,清晰完整地了解激活和调控免疫应答的机理是十分必要的.本文重点对奶牛乳房对不同的导致乳房炎的病原体所做出的不同的免疫应答反应进行了介绍,比较了大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的感染应答及二者之间存在普遍的关联性.

摘要： 本文中,笔者综述了近年来体内大分子DNA组装的研究进展.DNA组装技术是合成生物学的关键共性技术.目前,小分子DNA组装大多采用体外组装策略,而大分子DNA的组装则更多地借助宿主自身的重组机制在体内完成,常用的宿主包括酿酒酵母、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌等.

摘要： 在临床中,兽医经常遇到的和抗生素选择有关的问题包括:(1)不同系统感染的首选抗生素是什么?(2)长期感染的病例,不如何选择抗生素;(3)对于更换了所有能更换的抗生素,依然控制不了感染的临床病例,该如何进行进一步治疗?虽然抗生素耐药已经成为全世界范围内重要的公共安全卫生问题,但国内有关宠物源性大肠杆菌和葡萄球菌耐药性的研究较少,缺乏临床分离菌株耐药性的连续监测.国内仅有的几项有关宠物源性大肠杆菌耐药性调查显示,宠物源性定植大肠杆菌呈现广泛性耐药,多重耐药现象严重,β-内酰胺类抗菌药物的耐药率为43.1％～85.6％,氟喹诺酮类的耐药率达45.9％～80.8％;有关临床分离大肠杆菌耐药性监测的数据非常欠缺.有关宠物临床葡萄球菌耐药性调查的数据也非常缺乏,散在的报道显示,犬源性葡萄球菌对青霉素的耐药率为33.3％～75.0％,对氟喹诺酮类的耐药率达46.8％～56.3％.在这一背景下,本研究旨在北京地区调查宠物源性临床分离大肠杆菌和葡萄球菌的耐药情况,为科学合理使用抗生素提供依据,为改善用药大环境提供预警依据.

摘要： 单萜类化合物因其独特的的甲基支链和环状化学结构,使其具有理想的能量密度、低冰点和高辛烷值/十六烷值等特性,从而近年来被认为是有发展前景的航空煤油,而受到广泛关注.

摘要： 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑COP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12662BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明公开了一种用于对溶液中大肠杆菌浓度检测的传感器的制作方法，制备了一种基于石墨烯的1‑氨基芘和麦芽糖的复合膜，通过嫁接刀豆凝聚素A制成对糖类具有敏感性的改性石墨烯复合膜，并将其涂敷在光纤上制成基于改性石墨烯复合敏感膜涂敷粗锥型的生物传感器。其不仅制作简单容易，另外通过此方法制得的传感器在对溶液中大肠杆菌浓度的检测中，具有灵敏度高、检测效果好，响应时间快，精度和可靠性高的优点。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠致病性大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑2，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12661BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的肌病毒科噬菌体Esc‑COP‑7(受托编号：KCTC 13130BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的长尾病毒科噬菌体Esc‑COP‑9(受托编号：KCTC 13131BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明提供了一种使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具在大肠杆菌基因编辑中的应用，所述使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具包括：pDual‑Cas9‑Parental质粒载体：含有DNA解旋酶基因、复制子、抗生素抗性基因、核酸酶基因、araC基因、阿拉伯糖启动子和Ⅱs型限制酶识别位点；和pDual‑sgRNA‑lacZ质粒载体：含有靶向lacZ基因的sgRNA序列、组成型表达的强启动子、复制子和抗生素抗性基因。本发明筛选得到的NHEJ系统在大肠杆菌中具有良好的连接效率，并可以进行高效的基因编辑，应用前景广阔。

摘要： 本发明提供了一种大肠杆菌重组核酸、重组大肠杆菌及培养方法和生物合成L‑苏氨酸的方法，涉及生物工程技术领域。本发明所述大肠杆菌重组核酸，利用磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因对大肠杆菌进行改造，获得一株以葡萄糖为底物的重组大肠杆菌LMT4，利用所述LMT4进行发酵生产，L‑苏氨酸产量以及转化率明显提高，为L‑苏氨酸的工业化生产奠定基础。

摘要： 本发明提供了大肠杆菌重组菌及利用大肠杆菌重组菌生产3,4‑二羟基苯乙醇的方法，大肠杆菌重组菌共表达四种酶，分别为酪氨酸酶、L‑氨基酸氧化酶、酮酸脱羧酶和醇脱氢酶；利用大肠杆菌重组菌，以酪氨酸为底物生产3,4‑二羟基苯乙醇。本发明以酪氨酸为底物，酪氨酸廉价易得，且大多数为生物基来源，不依赖于石化产品，属于可再生资源，此外，由于它的天然属性，在食品、保健品、化妆品领域更易于被消费者认可接受。

摘要： 本发明公开了一种在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒及其构建方法。所述的穿梭质粒是基于细菌‑酵母人工染色体，从pGEN‑MCS质粒上通过PCR扩增得到hok‑sok和par元件，然后通过连接将稳定遗传元件hok‑sok和parA构建入细菌‑酵母人工染色体中，进而获得方便克隆长片段DNA、无抗性且在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒。优选的，所述的穿梭质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的穿梭质粒载体，不但可实现酵母、细菌内穿梭，可在酵母中通过同源重组进行多片段DNA组装，还可以稳定的在大肠杆菌中复制、遗传，便于进行DNA提取。