合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途

摘要

本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。