摘要:目的:本实验旨在建立适合LM肠杆菌基因间重复序列-聚合酶链式反应(ERIC-PCR)扩增体系和程序。方法:在单因素实验的基础上,采用正交设计L16(54)对影响单核细胞增生李斯特菌ERIC-PCR反应体系的5个因素(Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA)在4个浓度水平上进行试验,通过直观分析建立ERIC-PCR扩增的最佳反应体系。结果:最优的ERIC-PCR反应体系为:总体积为25μL的反应体系中,Mg2+浓度2.5mmol/L, dNTP浓度0.2mmol/L,Hotstart·Taq DNA聚合酶1.0U,引物浓度0.6mmol/L, DNA模板用量40ng。反应程序:94预变性3min;94℃变性45 s, 46℃退火30 s, 49℃退火30s, 72℃延伸3min, 35次循环;最后72℃延伸7min, 10℃保存。对不同血清型的LM进行扩增,其扩增图谱DNA条带清晰、多态性丰富。结论:优化了ERIC-PCR反应体系,为LM的遗传多样性分析打下基础。