蛋白纯化

摘要： 随着生物制药技术的迅速发展,生物制品的制备规模和质量要求的提高对下游分离纯化工艺提出了新的要求。如何通过分离纯化手段快速获得目标产物并进一步降低成本是现代生物分离技术研究的热点问题。混合模式色谱技术是一种高效的分离纯化方法,一般兼有多种作用模式,并且其蛋白结合量高、选择性好、洗脱条件温和、具有耐盐吸附等多种特性,可减少对料液的预处理操作,从而提高分离效率,降低生产成本。因此,该技术被广泛应用于蛋白质的分离纯化及相关领域中。本文对混合模式色谱技术的发展历程、分离机理、基质、配基类型及其在蛋白分离纯化中的应用等方面进行阐述,对当前混合模式介质的制备及其应用中存在的问题进行概括,希望能够为该项技术在生物制品制备生产中的应用提供一些参考。

摘要： 【目的】中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)是我国本土蜂种,也是重要的传粉昆虫和经济昆虫。气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)是蜜蜂嗅觉感知中的关键蛋白。在前人对中蜂AcerOBP7基因序列特征分析的基础上,本研究进一步对其表达特性及与气味物质的结合能力进行探究,为揭示气味结合蛋白在中蜂嗅觉系统中的作用提供基础数据。【方法】采用qRT-PCR检测AcerOBP7在工蜂不同组织和发育阶段的表达特性;通过原核表达系统获得AcerOBP7融合蛋白,使用Ni-NTA柱进行蛋白纯化;采用荧光竞争结合法,以1-NPN(N-phenyl-1-naphthylamine)为荧光探针,测定AcerOBP7与信息素及植物挥发物的结合能力;设计并合成dsAcerOBP7,采用饲喂法对该基因进行沉默,通过qRT-PCR测定沉默效率;结合RNAi,利用EAG检测并比较对照组与干扰组中蜜蜂触角对待测物质反应值的差异。【结果】qRT-PCR结果显示,AcerOBP7 mRNA在工蜂触角中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01),且在20日龄时表达量最高,在1日龄时表达量最低。成功构建了pET28a/AcerOBP7表达载体,通过大肠杆菌原核表达系统获得了高纯度的重组蛋白。与37种配体分子的荧光竞争结合试验表明,AcerOBP7与9-ODA、1-壬醇结合能力最强,Ki值均为1.85μmol·L^(-1),其次与(+)-柠檬烯、1-辛烯-3-醇、芳樟醇、反式肉桂酸乙酯、桉树脑、(+)-3-蒈烯及壬醛有较强的结合活性,Ki值分别为1.87、2.66、2.72、3.05、3.88、4.14和4.40μmol·L^(-1),与所选择的幼虫信息素均无结合能力。使用饲喂dsRNA的方法成功干扰了AcerOBP7的表达,干扰效率最高可达70.63%。干扰后的EAG试验表明,中蜂触角对所测气味物质的反应强度均有所下降,其中1-辛烯-3-醇、壬醛、桉树脑和9-ODA的EAG相对值显著降低(P<0.05)。【结论】AcerOBP7在中蜂采集蜂触角中高表达,重组蛋白能与多种气味分子结合,表明AcerOBP7是一种广谱型结合蛋白,推测其可能在工蜂采集和哺育蜂王的行为中发挥着重要作用。另外,1-辛烯-3-醇、壬醛、桉树脑和9-ODA可能是AcerOBP7结合特异性较高的配体物质。

摘要： 目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白(P2),并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组:C57BL/6小鼠24只,随机分3组(8只/组)。对照组、模型组(5 ng/mL TGF-β1处理)、SB431542组(2μmol/L)和鲜广地龙纯化蛋白P2组(13.125μg/mL)。动物实验分组:对照组(不处理)、模型组(博来霉素处理)、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2(5 mg/mL)。造模后给药21 d,在第22天进行取材。采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制;流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡;HE和Massson染色观察其对肺组织的病理学变化;RT-PCR、Western blot检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen Ⅰ的调节;机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用,进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用。结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2。体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用(P<0.01),降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen Ⅰ的表达(P<0.001或P<0.01),升高E-cadherin的表达(P<0.01),可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达(P<0.001或P<0.01)。体内实验显示,P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域。结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2,且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程。

摘要： 【目的】获得茉莉花香气调控转录因子JsMYB305的重组蛋白,为深入研究JsMYB305调控茉莉萜类香气代谢的分子机理及筛选其他互作蛋白提供基础。【方法】通过酶切连接的方式,将JsMYB305的编码序列构建到原核表达载体pGEX-4T-1,转化BL21(DE3)表达菌株,通过IPTG诱导蛋白表达、GST亲和树脂分离纯化,最后Western Blot鉴定重组蛋白。【结果】重组蛋白的诱导条件为0.2 mmol·L^(−1) IPTG,最适宜纯化的温度和时间为28°C诱导4 h,经20 mmol·L^(−1) GSH洗脱的蛋白纯度较好,Western Blot结果表明重组蛋白的大小正确。【结论】成功获得了JsMYB305重组蛋白,为后期利用GST-pull down技术筛选互作蛋白及EMSA研究JsMYB305对特定启动子位点的结合提供基础。

摘要： [目的]探索重组布鲁菌Omp19蛋白的制备方法,评价其在实验动物中的免疫原性,为中试工艺放大奠定基础。[方法]利用摇瓶培养对重组Omp19蛋白进行原核诱导表达,对培养基类型、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间、诱导时的菌体密度等条件进行筛选;利用阳离子交换层析、疏水层析和阴离子交换层析对重组Omp19蛋白进行纯化制备;利用SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)对重组Omp19蛋白的纯度进行鉴定;利用动物实验评价制备的重组Omp19蛋白的免疫原性。[结果]摇瓶培养试验表明,重组布鲁菌Omp19蛋白较优的表达条件为:使用LB培养基,在菌密度OD600 nm值为0.6~1.0时加入0.5 mmol/L的IPTG,于28°C诱导5 h;经3步纯化后,获得了高纯度的重组Omp19蛋白;免疫原性研究表明,经方法优化后制备的重组Omp19蛋白联合佐剂可以较好地刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体。[结论]优化了重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法,评价了其在小鼠中的免疫原性,为重组布鲁菌疫苗的研发提供了实验基础。

摘要： [目的]:提高重组猪表皮生长因子(pEGF)的表达量和纯化量,为后续研究pEGF对仔猪生长发育的影响奠定基础。[方法]:将人工合成的pEGF基因克隆至pEGF4T-1载体,转化至大肠杆菌Rossetta(DE3)中,得到重组菌株Rossetta(DE3)-pGEX-pEGF,IPTG诱导表达,进行表达条件的优化,用GST-tag亲和层析纯化方法进行纯化。[结果]:pEGF基因大小为159 bp,融合表达蛋白分子量为32k Da,最佳诱导表达条件为IPTG浓度0.01mmol/L、诱导温度15°C和诱导时间24h。流穿液和洗涤液中目的蛋白含量极少,洗脱液得到了高纯度的GST-pEGF融合蛋白,纯化较为成功。[结论]:成功构建了pEGF表达菌株,得到了最优的诱导表达条件和最优的纯化工艺,为pEGF相关产品的开发以及应用奠定了基础。

摘要： 目的表达纯化热聚体Thermosome蛋白,探讨Thermosome蛋白组装体基本特性与细胞相容性.方法将Thermosome原核表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达Thermosome的α和β亚基蛋白,利用凝胶过滤层析法纯化目的蛋白;利用动态光散射和透射电子显微镜分析Thermosome蛋白组装体的粒径和形貌特征;通过MTT法检测Thermosome蛋白组装体的细胞相容性.结果SDS-PAGE结果显示,Thermosome的α和β亚基以可溶性蛋白在BL21大肠杆菌中表达,凝胶过滤层析得到了较高纯度的α和β亚基蛋白;动态光散射结果显示Thermosome蛋白组装体尺寸为20.2 nm,组装体在透射电镜下呈现中空球形结构;MTT结果显示Thermosome纳米粒处理后细胞存活率接近100%;绿色荧光标记的纳米粒能够被细胞摄取进入细胞内.结论本研究成功表达纯化Thermosome的α和β亚基蛋白,得到平均粒径在20.2 nm的中空笼状自组装纳米颗粒;Thermosome蛋白纳米颗粒具有良好生物相容性,能够被肿瘤细胞高效摄取.

摘要： 【目的】获得具有体外切割活性的来自毛螺旋菌属(Lachnospiraceae)ND2006的LbCas12a蛋白,以期为LbCas12a的应用研究提供重要的生物学工具。【方法】根据pMBP-LbCas12a质粒(Addgene,113431)的基因序列合成LbCas12a基因,并将其与pET-28a(+)线性化载体进行同源重组,构建重组质粒pET28a-LbCas12a,经测序和NheⅠ、SalⅠ双酶切鉴定后将阳性重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达。通过12%SDS-PAGE凝胶电泳检测确定IPTG诱导的最佳浓度及温度,鉴定重组蛋白的表达形式,通过Ni-NTA树脂亲和层析的方法进行纯化、超滤法浓缩,BCA法检测蛋白浓度。将浓缩后的LbCas12a与猪细小病毒(PPV)靶标DNA、CRISPR RNA(crRNA)及偶联荧光基团的非特异性单链DNA(ssDNA)探针FQ共孵育,设置1个无LbCas12a蛋白的对照组、4个不同蛋白浓度(125、250、500、1000 nmol/L)的试验组,检测不同组别ssDNA探针的荧光强度,检测测试位点PPV活性。【结果】测序和NheⅠ、SalⅠ双酶切鉴定结果表明,重组质粒pET28a-LbCas12a构建成功且无移码突变。12%SDS-PAGE凝胶电泳检测结果表明,IPTG诱导表达的最佳浓度为0.5 mmol/L,最佳温度为37°C,表达形式主要为可溶性表达。蛋白浓度检测结果表明,浓缩后的蛋白浓度为485 ng/μL,质量为143 ku。活性检测结果表明,125、250、500、1000 nmol/L LbCas12a蛋白组的荧光强度均极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】本研究成功表达出高活性的LbCas12a蛋白,且LbCas12a蛋白具有体外切割ssDNA的反式活性,为后续基于CRISPR-LbCas12a系统的分子检测技术奠定了基础。

摘要： 采用杆状病毒表达系统表达并纯化裂谷热病毒(RVFV)Gn蛋白,并对其反应原性进行鉴定。根据GenBank公布的Gn蛋白的序列,选取其主要抗原区Gn1设计引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pFastBac HTB载体,构建重组转移载体,并将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,经SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白正确表达后,将重组杆状病毒感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,最终获得纯度较高的Gn1重组蛋白。本研究为RVF新型疫苗研发及诊断试剂的研发提供了重要材料。

摘要： 【目的】探究在柑橘大实蝇成虫触角高表达的化学感受蛋白BminCSP3与气味配体的结合特性,以期为揭示柑橘大实蝇嗅觉识别的分子机制提供一定理论依据。【方法】通过RT-PCR克隆BminCSP3基因,并对其进行生物信息学分析;以原核表达系统和镍柱体外表达纯化得到BminCSP3蛋白;利用荧光竞争结合实验检测BminCSP3与14种气味配体的结合特性。【结果】BminCSP3开放阅读框全长为474 bp,编码157个氨基酸,含有4个半胱氨酸残基,为典型的化学感受蛋白;预测其等电点为5.41,信号肽由22个氨基酸组成,无跨膜结构域,亲水性总平均值为-0.397,是亲水性蛋白。荧光竞争结合实验结果表明,BminCSP3与供试14种气味配体的亲和力均较弱,其Ki值均大于20μmol·L^(-1)。一般认为Ki值大于20μmol·L^(-1),说明蛋白与配体分子间的亲和力较弱。【结论】BminCSP3虽然在柑橘大实蝇成虫触角中显著上调表达,但可能不参与柑橘大实蝇成虫的嗅觉识别过程;或本试验所用配体并非BminCSP3最适配体,应扩大配体库进一步验证BminCSP3的嗅觉功能。

摘要： 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是猪的条件性致病菌,常引起以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等为特征的格拉泽氏病,严重危害养殖业的发展.虽然抗生素对该病有一定的治疗效果,但长期使用也导致细菌耐药性越来越严重,因此疫苗仍然是控制该病的最佳手段.3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是HPS的一个外膜蛋白,可以促进B细胞和T细胞的增殖,具有重要的免疫调节作用,可以作为新型DNA疫苗的候选蛋白.本研究以副猪嗜血杆菌标准5型血清菌株的基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆得到GAPDH片段,将其和原核表达载体pET28a都进行双酶切处理后,在T4连接酶的作用下连接得到重组质粒pET28a-GAPDH,经验证无误后,将其导入大肠杆菌BL21中,在IPTG的诱导下进行原核表达.结果表明,重组菌株可以在含有卡那霉素的LB平板上长出单菌落,菌液PCR可以扩增出1020bp大小的外源基因片段,说明GAPDH原核表达载体构建成功.通过SDS-PAGE实验可以看到,重组菌株BL21(pET28a-GAPDH)在IPTG的诱导下表达出带有His标签的,大小约为37KDa的3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白,与理论值相符,应用镍离子亲和交换柱进行蛋白的纯化,纯化后得到的蛋白含量约为0.988mg/mL,证明GAPDH基因可以在原核表达系统中得到有效表达且蛋白纯化后蛋白含量较高.

摘要： 微管存在于所有的真核生物中,主要由α/β-微管蛋白异源二聚体组成,在细胞内呈网状和束状分布,参与细胞很多重要的过程,包括有丝分裂、细胞运动、维持细胞形态和细胞表面受体的活性等,对细胞的各种生命活动起着非常重要的作用.已经成为很多抗肿瘤药物,驱虫剂,除草剂和杀菌剂的作用靶标.但随着抗微管药物的广泛使用,随之而来的抗药性问题也日益严重.因此,在分子水平上研究微管蛋白药剂的抗性机理显得日益迫切,以助于更好地去开发多靶点,对寄主低毒,高亲和力的药剂.由于微管蛋白在许多细胞中丰度非常低,因此如何大量表达微管蛋白以及纯化出有生物活性的微管蛋白成为首要面临的难题.本文着重介绍了目前几种常用的微管蛋白的大量表达方法以及成功纯化出微管蛋白的案例.

摘要： 微管存在于所有的真核生物中,主要由α/β-微管蛋白异源二聚体组成,在细胞内呈网状和束状分布,参与细胞很多重要的过程,包括有丝分裂、细胞运动、维持细胞形态和细胞表面受体的活性等,对细胞的各种生命活动起着非常重要的作用.已经成为很多抗肿瘤药物,驱虫剂,除草剂和杀菌剂的作用靶标.但随着抗微管药物的广泛使用,随之而来的抗药性问题也日益严重.因此,在分子水平上研究微管蛋白药剂的抗性机理显得日益迫切,以助于更好地去开发多靶点,对寄主低毒,高亲和力的药剂.由于微管蛋白在许多细胞中丰度非常低,因此如何大量表达微管蛋白以及纯化出有生物活性的微管蛋白成为首要面临的难题.本文着重介绍了目前几种常用的微管蛋白的大量表达方法以及成功纯化出微管蛋白的案例.

摘要： 微管存在于所有的真核生物中,主要由α/β-微管蛋白异源二聚体组成,在细胞内呈网状和束状分布,参与细胞很多重要的过程,包括有丝分裂、细胞运动、维持细胞形态和细胞表面受体的活性等,对细胞的各种生命活动起着非常重要的作用.已经成为很多抗肿瘤药物,驱虫剂,除草剂和杀菌剂的作用靶标.但随着抗微管药物的广泛使用,随之而来的抗药性问题也日益严重.因此,在分子水平上研究微管蛋白药剂的抗性机理显得日益迫切,以助于更好地去开发多靶点,对寄主低毒,高亲和力的药剂.由于微管蛋白在许多细胞中丰度非常低,因此如何大量表达微管蛋白以及纯化出有生物活性的微管蛋白成为首要面临的难题.本文着重介绍了目前几种常用的微管蛋白的大量表达方法以及成功纯化出微管蛋白的案例.

摘要： 微管存在于所有的真核生物中,主要由α/β-微管蛋白异源二聚体组成,在细胞内呈网状和束状分布,参与细胞很多重要的过程,包括有丝分裂、细胞运动、维持细胞形态和细胞表面受体的活性等,对细胞的各种生命活动起着非常重要的作用.已经成为很多抗肿瘤药物,驱虫剂,除草剂和杀菌剂的作用靶标.但随着抗微管药物的广泛使用,随之而来的抗药性问题也日益严重.因此,在分子水平上研究微管蛋白药剂的抗性机理显得日益迫切,以助于更好地去开发多靶点,对寄主低毒,高亲和力的药剂.由于微管蛋白在许多细胞中丰度非常低,因此如何大量表达微管蛋白以及纯化出有生物活性的微管蛋白成为首要面临的难题.本文着重介绍了目前几种常用的微管蛋白的大量表达方法以及成功纯化出微管蛋白的案例.

摘要： 本研究根据己报道的Bacillus subtilis 168菌株的基因组信息，从NCBI数据库中查询草酸脱羧酶(oxdc)基因并进行了生物信息学分析，然后设计引物克隆了该基因片段，将克隆的基因与表达质粒pGEX-6p-1连接形成重组质粒，并转入E. coli Transta细胞，进行蛋白表达和纯化。利用GST亲和层析方法纯化，从1L细菌培养物中可纯化出20mg的纯蛋白。对纯化的草酸脱羧酶进行了酶动力学研究。

摘要： 本研究根据己报道的Bacillus subtilis 168菌株的基因组信息，从NCBI数据库中查询草酸脱羧酶(oxdc)基因并进行了生物信息学分析，然后设计引物克隆了该基因片段，将克隆的基因与表达质粒pGEX-6p-1连接形成重组质粒，并转入E. coli Transta细胞，进行蛋白表达和纯化。利用GST亲和层析方法纯化，从1L细菌培养物中可纯化出20mg的纯蛋白。对纯化的草酸脱羧酶进行了酶动力学研究。

摘要： 本研究根据己报道的Bacillus subtilis 168菌株的基因组信息，从NCBI数据库中查询草酸脱羧酶(oxdc)基因并进行了生物信息学分析，然后设计引物克隆了该基因片段，将克隆的基因与表达质粒pGEX-6p-1连接形成重组质粒，并转入E. coli Transta细胞，进行蛋白表达和纯化。利用GST亲和层析方法纯化，从1L细菌培养物中可纯化出20mg的纯蛋白。对纯化的草酸脱羧酶进行了酶动力学研究。

摘要： 本研究根据己报道的Bacillus subtilis 168菌株的基因组信息，从NCBI数据库中查询草酸脱羧酶(oxdc)基因并进行了生物信息学分析，然后设计引物克隆了该基因片段，将克隆的基因与表达质粒pGEX-6p-1连接形成重组质粒，并转入E. coli Transta细胞，进行蛋白表达和纯化。利用GST亲和层析方法纯化，从1L细菌培养物中可纯化出20mg的纯蛋白。对纯化的草酸脱羧酶进行了酶动力学研究。

摘要： 本研究根据己报道的Bacillus subtilis 168菌株的基因组信息，从NCBI数据库中查询草酸脱羧酶(oxdc)基因并进行了生物信息学分析，然后设计引物克隆了该基因片段，将克隆的基因与表达质粒pGEX-6p-1连接形成重组质粒，并转入E. coli Transta细胞，进行蛋白表达和纯化。利用GST亲和层析方法纯化，从1L细菌培养物中可纯化出20mg的纯蛋白。对纯化的草酸脱羧酶进行了酶动力学研究。

摘要： 本发明公开了一种葛仙米藻红蛋白的纯化方法，包括：(1)选用阴离子交换柱过柱；(2)配置PB缓冲液Buffer A和PB‑NaCl缓冲液Buffer B；(3)葛仙米藻胆蛋白粗提粉末用PB缓冲液Buffer A溶解，离心，过滤；(4)洗泵，用PB缓冲液Buffer A平衡离子交换柱；(5)将步骤(3)制备的溶解于PB缓冲液Buffer A中的葛仙米藻胆蛋白直接上样，PB‑NaCl缓冲液Buffer B梯度洗脱，收集洗脱液；(6)用盐溶液清洗离子交换柱，然后用碱溶液反向冲洗；(7)对淋洗液进行超滤浓缩，透析，得到纯化的葛仙米藻红蛋白水溶液。本发明的方法操作简单，得到的葛仙米藻红蛋白浓度和纯度都得到显著提高，适于工业化大规模生产。

摘要： 本发明公开了一种葛仙米藻蓝蛋白的纯化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)选用阴离子交换柱过柱；(2)配置Tris‑HCl缓冲液Buffer A、Tris‑HCl‑NaCl缓冲液Buffer B；(3)葛仙米藻胆蛋白粗提粉末用Buffer A溶解，离心，过滤；(4)洗泵，用Buffer A缓冲液平衡离子交换柱；(5)将步骤(3)制备的溶解于Buffer A中的葛仙米藻胆蛋白直接上样，Buffer B梯度洗脱，收集洗脱液；(6)用盐溶液清洗离子交换柱，然后用碱溶液反向冲洗；(7)对淋洗液进行超滤浓缩，透析，得到纯化的葛仙米藻蓝蛋白水溶液。本发明的方法操作简单，得到的葛仙米藻蓝蛋白浓度和纯度都得到显著提高，适于工业化大规模生产。

摘要： 本发明涉及一种用于超滤纯化胶原蛋白的超滤膜及纯化胶原蛋白的方法，所述的超滤膜为中空纤维膜，其膜丝长度/膜丝内径的比值为25～1000。优选所述中空纤维膜由亲水性有机材料制成，丝膜内径为0.6～3mm，截留孔径为0.001μm～0.12μm。将胶原蛋白预处理后分散于分散介质中，采用所述的超滤膜对其进行超滤即可获得纯度＞99％的胶原蛋白。该方法不仅不会堵塞超滤膜，显著提高胶原蛋白的纯化效率，且不会对胶原蛋白的分子结构、生物活性等造成影响。

摘要： 本发明公开了一种利用抗冻蛋白‑内含肽序列作为纯化标签实现外源重组蛋白分离纯化的方法和应用，属于生物技术领域。该方法包括：(1)构建带有抗冻蛋白‑内含肽纯化标签和重组蛋白基因的重组质粒，将其转入表达宿主细胞，获得重组工程菌；(2)培养重组工程菌，诱导外源蛋白表达；(3)细胞破碎后用冰作为吸附介质从细胞破碎上清液中一步分离纯化带有抗冻蛋白‑内含肽纯化标签的融合蛋白，之后诱导内含肽的N端发生断裂反应，释放目的蛋白，经过透析后再次用冰吸附去除纯化标签从而得到去除纯化标签的目的蛋白。本发明提供了一种低成本、无需色谱柱和色谱填料、操作简单、去除纯化标签的实现外源重组蛋白分离纯化的方法及应用。

摘要： 本发明公开了一种蛋白质纯化包，该蛋白质纯化包包括网布和亲和层析填料，所述网布包裹在所述亲和层析填料外面。本发明还公开了用该蛋白质纯化包纯化蛋白的方法。本发明利用网布包裹亲和层析填料，制成蛋白质纯化包，放入样品中捕获目标蛋白，然后用洗脱缓冲液洗脱目标蛋白，在不经过样品预处理的条件下，实现了重组蛋白的简单、快速、高通量纯化。

摘要： 本发明公开了一种葛仙米藻蓝蛋白的纯化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)选用阴离子交换柱过柱；(2)配置Tris‑HCl缓冲液Buffer A、Tris‑HCl‑NaCl缓冲液Buffer B；(3)葛仙米藻胆蛋白粗提粉末用Buffer A溶解，离心，过滤；(4)洗泵，用Buffer A缓冲液平衡离子交换柱；(5)将步骤(3)制备的溶解于Buffer A中的葛仙米藻胆蛋白直接上样，Buffer B梯度洗脱，收集洗脱液；(6)用盐溶液清洗离子交换柱，然后用碱溶液反向冲洗；(7)对淋洗液进行超滤浓缩，透析，得到纯化的葛仙米藻蓝蛋白水溶液。本发明的方法操作简单，得到的葛仙米藻蓝蛋白浓度和纯度都得到显著提高，适于工业化大规模生产。

摘要： 本发明公开了一种葛仙米藻红蛋白的纯化方法，包括：(1)选用阴离子交换柱过柱；(2)配置PB缓冲液Buffer A和PB‑NaCl缓冲液Buffer B；(3)葛仙米藻胆蛋白粗提粉末用PB缓冲液Buffer A溶解，离心，过滤；(4)洗泵，用PB缓冲液Buffer A平衡离子交换柱；(5)将步骤(3)制备的溶解于PB缓冲液Buffer A中的葛仙米藻胆蛋白直接上样，PB‑NaCl缓冲液Buffer B梯度洗脱，收集洗脱液；(6)用盐溶液清洗离子交换柱，然后用碱溶液反向冲洗；(7)对淋洗液进行超滤浓缩，透析，得到纯化的葛仙米藻红蛋白水溶液。本发明的方法操作简单，得到的葛仙米藻红蛋白浓度和纯度都得到显著提高，适于工业化大规模生产。

摘要： 本发明提供不使抗体特性失活且免疫球蛋白的回收率高的免疫球蛋白纯化方法。免疫球蛋白纯化方法具备吸附工序和解吸工序。吸附工序是在中性缓冲液中使免疫球蛋白吸附于多孔氧化锆粒子的工序。解吸工序是利用中性解吸液使吸附于多孔氧化锆粒子的免疫球蛋白从多孔氧化锆粒子解吸的工序。

摘要： 本发明涉及蛋白纯化技术领域，具体而言，涉及一种蛋白纯化方法和蛋白纯化系统。所述的蛋白纯化方法包括如下步骤：精纯层析后的处理物经第一超滤和/或第一渗滤后，进行除病毒过滤。本发明通过在除病毒过滤之前对精纯层析后的处理物进行第一超滤和/或第一渗滤，可以优化除病毒过滤的工艺表现，从而缩短除病毒过滤的工艺时间，增加载量，减少所需膜面积，降低成本。

摘要： 本发明提供一种利用磁感应蛋白作为纯化标签实现外源蛋白一步纯化与固定化的方法，应用及通用载体。该方法包括：1)以pET‑28a(+)为载体质粒，向其中插入磁感应蛋白基因，构建一通用载体；2)将外源蛋白基因插入通用载体中，构建重组表达质粒，再将其导入宿主细胞，获得重组菌株；以及3)培养重组菌株，诱导外源蛋白表达，收集产物，向其中投入纳米铁珠，实现外源蛋白的一步分离纯化与固定化。该通用载体从5’至3’依次包括：T7启动子、磁感应蛋白基因、凝血酶切割位点、linker、多克隆位点以及T7终止子。本发明提供了一种操作简单的、效率提高的以及成本降低的一步实现外源蛋白纯化与固定化的方法及应用。