重组蛋白

摘要： 为了实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达,同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,本试验根据GenBank(序列号:NC_044943.1)公布的ASFV p54的基因序列,设计一对特异性引物,扩增构建pGEX-6P-1-p54原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行复制,经IPTG诱导表达,对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后,进行表达条件优化,并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原,通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法。结果显示,ASFV p54基因成功克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,得到pGEX-6P-1-p54原核表达质粒;转化E.coli菌株BL21(DE3)中,经诱导表达得到重组蛋白,大小为46 kDa;成功建立测定ASFV抗体的间接ELISA方法,优化后确定最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4000,经验证此方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。

摘要： 目的探讨不同亚型梅毒螺旋体(Tp)黏附素蛋白TP0136在神经梅毒(NS)患者血液中的诊断价值。方法比较60例NS患者与120例非神经梅毒的梅毒患者(NNS)一般情况。通过分子克隆技术构建表达和纯化Nichols Seattle TP0136(NST)和Nichols Houston TP0136(NHT)重组蛋白,采用ELISA方法检查NS和NNS患者血清中NST和NHT抗体水平。结果NS和NNS患者两组之间年龄、性别、来源地、职业无统计学差异(均P>0.05),而婚姻状况、神经系统症状、血清或血浆TRUST和TPPA滴度、血清或血浆TP-IgM阳性率、脑脊液TRUST和TPPA滴度均有统计学差异(均P<0.05)。NST在NS组和NNS组血清或血浆中抗体水平无差异(t=0.15,P=0.920);NHT在NNS组血清或血浆中抗体水平高于NS患者,差异有统计学意义(t=3.68,P=0.021)。结论Tp黏附素蛋白TP0136重组蛋白NHT或可作为NS诊断的潜在血液学标志物。

摘要： 为了研制2、3、9型猪链球菌(SS)通用的重组亚单位疫苗,本研究通过生物信息学软件对SS分泌型核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、锌转运蛋白(ZnuA)3种毒力因子的蛋白质一级结构、B细胞及辅助T(Th)细胞抗原表位、亲疏水性及抗原性、二级结构进行综合分析后,预测获得了SsnA、DLDH和ZnuA具有亲水性和较好抗原性的B/Th细胞表位,将它们与12聚体树突状细胞靶向肽(DC3pep)序列串联后获得了重组氨基酸序列DC3pep-SDZ。经蛋白质理化分析DC3pep-SDZ分子质量约为44 ku,理论等电点(pI)为4.65,平均亲水性为-0.462,为亲水性蛋白。由生物公司构建重组原核表达载体pET28a-DC3pepSDZ,转化感受态细胞后经IPTG诱导表达后经western blot鉴定重组蛋白以可溶形式表达。表达产物利用亲和层析镍柱纯化,SDS-PAGE结果显示得到44 ku的纯化目的蛋白,纯化浓缩后经BCA蛋白浓度测定试剂盒检测,浓度为5.60 mg/mL。利用不同浓度纯化重组蛋白对2%猪红细胞悬液进行体外溶血试验,并对PK15、IPEC-J2细胞进行毒性试验,检测重组蛋白的生物安全性。体外溶血试验结果显示在5μg/mL~500μg/mL浓度范围内,DC3pep-SDZ蛋白对2%猪红细胞悬液溶血率低于5%;细胞毒性试验结果显示经500μg/mL DC3pep-SDZ蛋白孵育后,PK15与IPEC-J2细胞的相对增殖率(RGR)分别为98.5%和99.6%,与对照组RGR相比均无显著差异。表明,重组蛋白无明显毒性作用。本实验首次构建并表达了重组蛋白DC3pep-SDZ,该蛋白生物安全性良好,为后续分析其免疫保护效果、研发2、3、9型SS重组亚单位疫苗奠定基础。

摘要： 为探究影响产肠毒素大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素2型(LT2)毒性的关键氨基酸及其突变重组蛋白的免疫原性,本研究扩增了LT2编码基因elt2,并采用重叠延伸PCR(SOE PCR)方法分别对其A亚基进行R5K、H42A、S59K、V95K、Y102K和E110K的单突变,将elt2及其6个突变基因分别双酶切后克隆于pET-30a中构建重组大肠杆菌pET-30a-elt2/BL21、pET-30a-R5K/BL21、pET-30a-H42A/BL21、pET-30a-S59K/BL21、pET-30a-V95K/BL21、pET-30a-Y102K/BL21、pET-30a-E110K/BL21,经IPTG诱导表达了重组LT2(rLT2)及其突变重组蛋白mrLT2-R5K、mrLT2-H42A、mrLT2-S59K、mrLT2-V95K、mrLT2-Y102K、mrLT2-E110K;利用细胞毒性试验和小鼠致病性试验比较了rLT2和突变重组蛋白对小鼠肾上腺皮质瘤(Y1)细胞的毒性作用及对小鼠的致病性,并将rLT2和mrLT2-V95K作为免疫原接种小鼠检测其对小鼠的免疫原性。结果显示,突变重组蛋白对Y1细胞的毒性作用均弱于rLT2,其中mrLT2-V95K对Y1细胞的毒性作用最弱为1.145×10^(1)TCID_(50)/0.1 mL;rLT2及该突变重组蛋白对小鼠均无致病性,表明小鼠也不适合用于LT2的致病性检测。mrLT2-V95K免疫BALB/c小鼠的血清特异性IgG抗体效价和对rLT2的中和抗体效价分别为1:102 400和1:32,与rLT2的免疫原性无显著差异。本研究首次证实LT2 A亚基的aa95对LT2细胞毒性作用的影响较明显,其突变重组蛋白具有良好的免疫原性,为大肠杆菌减毒疫苗研究提供了重要科学信息。

摘要： 通过将乙醛脱氢酶2(acetaldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)与NusA-tag融合表达,以获得能够在大肠杆菌中可溶性表达并且具有较好活性的重组蛋白。首先,根据Aldh2的基因序列设计引物,引入EcoRI和XhoI的酶切位点,聚合酶链式反应扩增出Aldh2基因片段,连接到pMD19-T-simple载体,并转化到大肠杆菌DH5α菌株。测序正确后,双酶切处理,将Aldh2基因片段克隆到表达载体pET44b(+)上NusA-tag下游的EcoRI和XhoI酶切位点之间,得到pET44b(+)-NusA-Aldh2重组载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达的融合蛋白具有良好的溶解性,主要存在于上清液中。融合蛋白的最优表达条件为IPTG浓度0.25 mmol/L、诱导温度37°C、诱导时间3 h。重组蛋白的最适反应温度为37°C,在pH 7.0时达到最好的催化效果。不同金属离子如Ca^(2+)、K^(+)、Na^(+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)都对酶有激活作用,且Mg^(2+)效果最好,最佳的酶活性为1.64 U/mL。而野生型ALDH2在大肠杆菌中表达时完全以无活性的包涵体形式存在,复性后得到的酶活性为1.43 U/mL。本研究通过引入NusA进行融合表达,实现了ALDH2在大肠杆菌中的可溶性表达,且重组蛋白的活性优于包涵体复性蛋白。这些结果表明利用NusA进行融合表达是制备重组ALDH2的一个良好方法。

摘要： 【目的】对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持。【方法】根据GenBank中公布的HO-1序列(登录号:NM_001004027.1),利用Primer Premier 6.0设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增HO-1基因片段,将其与pMD19-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定;将载体pNCMO2与重组载体pMD19-T-HO-1进行SalⅠ和KpnⅠ双酶切,使用T4 DNA连接酶连接,利用电击转化技术将重组表达载体pNCMO2-HO-1转入感受态短小芽孢杆菌,使用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting分析HO-1在短小芽孢杆菌中的融合表达情况。【结果】猪HO-1基因全长897 bp,编码298个氨基酸。双酶切后在约5200和897 bp处分别观察到pNCMO2载体片段和HO-1基因片段,证明成功构建基因表达载体pNCMO2-HO-1;电转后的双酶切结果表明,在相同的位置观察到pNCMO2和HO-1片段,证明重组表达载体pNCMO2-HO-1成功导入短小芽孢杆菌。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果发现,在36.5 ku处出现了明显的蛋白印迹,表明成功表达了HO-1的重组蛋白,且为胞外分泌。【结论】本研究成功构建了HO-1的重组原核表达载体,pNCMO2-HO-1重组载体可以在短小芽孢杆菌中诱导表达。

摘要： 《中国药典》2020年版(三部)新增了人用聚乙二醇化重组蛋白及多肽制品总论。本文依照其总论体例,阐述了研究起草过程中所遵循的基本原则,重点详述了所关注的技术要点及相应研究结果,旨在为本领域内相关研发和质控人员更好地理解和应用总论提供参考。

摘要： 目的构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)原核表达载体,用以快速获取低成本、高浓度、高纯度的CysC纯化蛋白,为制备应用于临床实验室检测的CysC标准物质和质控品奠定基础。方法用Codon Adaptation Tool将人的CysC编码序列优化为大肠杆菌偏好的密码子序列,再将合成的DNA片段克隆至pET-28a(+)原核表达载体。将重组CysC表达质粒转化至E.coli BL21感受态中,优化诱导表达条件、确定最优表达条件组合及有效表达序列,并用融合标签对重组蛋白进行纯化。结果成功构建重组CysC原核表达质粒,明确CysC表达序列,确定异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达浓度、诱导温度等条件,纯化的CysC蛋白可通过临床检测,且稀释倍数与检测浓度间呈现线性关系。结论成功构建重组CysC的高效原核表达系统,重组CysC蛋白纯度大、浓度高、生产周期短,有望为CysC标准物质和质控品的制备提供物质基础。

摘要： 从我们前期实验获得的蛋白组学数据中筛选到1个新的诊断靶标Annexin(ANN),并从肝片吸虫cDNA中扩增Ann基因,将其在大肠杆菌中表达,通过亲和层析纯化后,以该重组蛋白为诊断抗原,建立间接ELISA方法,通过棋盘法优化反应条件,并计算其临界值,接着使用该ELISA方法检测来自河北省9个地区的312份绵羊血清样本。结果显示,成功获得了rANN蛋白,并成功建立临界值为1.145的间接ELISA方法,该方法的敏感性和特异性分别为95.00%和86.36%,河北这些地区片形吸虫病的平均感染率为43.27%。本实验成功筛选得到了一种新的片形吸虫病诊断靶标ANN,并建立了基于该重组蛋白的间接ELISA方法,该方法可初步用于绵羊片形吸虫病的诊断。

摘要： 为研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)在免疫应答过程中的作用,通过聚合酶链式反应(PCR)获得斜带石斑鱼TIM-4的蛋白编码区(GenBank登录号:MZ465580),利用生物信息学分析其结构特征,采用荧光定量PCR(qPCR)分析TIM-4在健康鱼体中的组织分布,以及经LPS和Poly I:C刺激后的表达变化,并构建原核表达载体质粒TIM-4-4T,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行TIM-4重组蛋白诱导表达。结果表明:斜带石斑鱼TIM-4基因的蛋白编码区片段长度为702 bp,可编码234个氨基酸,含有V-Type(IGV)、BTK和PRY 3个功能结构域;qPCR显示,TIM-4基因在斜带石斑鱼10种组织中均有表达,在胃中的表达量最高(P<0.05),在脾脏中表达量最低;经LPS刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著降低(P<0.05),而经Poly I:C刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著升高(P<0.05);SDS-PAGE电泳显示,TIM-4重组蛋白相对分子质量约为25100,以包涵体形式表达,在0.4 mmol/L IPTG、37°C下诱导6 h时,TIM-4重组蛋白的表达量最大。研究表明,TIM-4基因可能参与了斜带石斑鱼抗感染免疫反应,本研究结果为深入了解TIM-4的生物学功能提供了理论基础。

摘要： 背景:目前,布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病,近年来其发病率不断上升.简单、快速、灵敏的布鲁氏菌病诊断方法对于其早期诊断和早期治疗具有非常重要的意义,可以减轻患者的医疗负担和经济损失.基于线性B细胞表位预测工具,构建了一种新型多表位重组蛋白.研究中,用重组蛋白作为抗原免疫小鼠以获得免疫应答,并使用感染布鲁氏菌病的山羊和人血清来检验其抗原性,判断其对布鲁氏菌病诊断的准确性. 结果:诱导接种疫苗的小鼠成功产生了抗体,通过分析血清抗体亚型,主要抗体是IgG.流式细胞术分析显示,小鼠脾细胞中CD4+、CD8+百分比以及CD4+/CD8+比率增加,表明重组蛋白在小鼠体内诱导产生了强烈的免疫应答,重组蛋白具有强免疫反应性.利用间接ELISA方法进行验证,结果表明重组蛋白可以正确区分阳性和阴性布鲁氏菌病血清样品,与全菌抗原相比,重组蛋白具有更强的灵敏度和特异性. 结论:在本研究中,动物实验表明构建的重组蛋白具有良好的抗原性,间接ELISA证明它可以作为抗原诊断布鲁氏菌病.因此,构建的重组蛋白是布鲁氏菌病疫苗和血清学诊断的潜在候选抗原.

摘要： 血吸虫的体被表膜覆盖着整个虫体,它的维持被公认为是通过膜融合实现的.膜融合是真核生物中普遍存在的基本生命过程.囊泡膜上的v-SNARE(N乙基马来酰胺敏感因子附着蛋白受体)和靶细胞膜上互补的t-SNARE形成SNARE复合物的过程拉动了囊泡膜与靶细胞膜的融合.v-SNARE亦叫囊泡膜蛋白.本研究描述了日本血吸虫囊泡膜蛋白2的基因特性,并对其重组蛋白的免疫保护力进行了评估.日本血吸虫囊泡膜蛋白2属于囊泡膜蛋白亚家族的一员,含有v-SNARE尾巴同源结构域.实时定量分析表明日本血吸虫囊泡膜蛋白2在28天和42天虫体中转录水平较高,其中在42天雌虫中的转录水平显著高于雄虫.此外,在吡喹酮处理的虫体中该蛋白的转录水平与膜修复有关.免疫组化分析表明日本血吸虫囊泡膜蛋白2主要分布在虫体体被下方.免疫原性分析显示该蛋白具有较好的免疫原性.在两次独立的动物保护实验中,重组日本血吸虫囊泡膜蛋白2经ISA206疫苗佐剂乳化后可分别诱导产生41.5％和27.3％的减虫率,及36.8％和23.3％的减卵率.并且,在该重组蛋白免疫的实验组中检测到了显著高水平的特异性lgG及IgG1和IgG2a.该研究表明日本血吸虫囊泡膜蛋白2有作为抗血吸虫病的候选疫苗分子的潜力,并为进一步探究该蛋白的生物学功能奠定了基础.

摘要： 为了制备鸡BLec蛋白的多克隆抗体,本实验采用RT-PCR技术从2月龄B15单倍型鸡的胸腺组织扩增了ChBLec基因,并以pET-30a(+)为原核表达载体成功构建重组质粒pET-30a-ChBLec,并在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG(0.02mmol/L)诱导表达,获得大小约为17kDa以包涵体形式存在的ChBLec重组蛋白.把含有重组蛋白的SDS-PAGE胶研磨后制备免疫原,免疫新西兰兔,获得兔抗血清.Western blot检测显示,兔抗血清能检测到pET-30a-ChBLec外源蛋白.结果表明：ChBLec基因在大肠杆菌成功表达,且成功制备了兔抗ChBLec血清,该血清可进一步用于检测ChBLec蛋白在鸡体内的表达情况.

摘要： 近年来,猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)给哺乳仔猪造成了严重的损失.M蛋白是PEDV重要的跨膜结构蛋白,是基因工程疫苗和诊断试剂的理想抗原.本实验设计M基因的特异性引物,扩增M基因,将鉴定正确的重组质粒转化致BL21感受态细胞,IPTG诱导表达及条件的优化.结果表明,重组表达的融合蛋白PET-32a-M大小约为43kD,与预期大小相符.SDS-PAGE电泳分析发现,在IPTG浓度为1.0mmoL/L,温度为37°C,诱导时间为6h时,蛋白表达效果最佳.Western-Blot结果进一步显示,重组蛋白PET-32a-M在体外可以被成功表达.

摘要： 对布鲁菌Omp28基因进行大肠埃希菌表达,用表达的布鲁菌重组蛋白Omp28作为抗原包被酶标板,建立检测布鲁菌抗体间接ELISA方法,进一步研发试剂盒,用该试剂盒和IDEXX抗体检测试剂盒同时对540份临床牛血清样品进行检测,评价二者的符合率.反应条件优化后,该试剂盒的抗原包被浓度为1μg/mL,作用条件为37°C1h;封闭液为50g/L脱脂乳,作用时间为30min;血清稀释度为1∶200,作用时间为30min;酶标二抗稀释度为1∶3×104,作用时间为30min;与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率达96.67％,证明该试剂盒可用于临床牛布鲁菌抗体的检测.

摘要： 目的：构建pPICZαA-EPF载体,电转入毕赤酵母GS115细胞中诱导表达rEPF蛋白,筛选能稳定分泌表达rEPF蛋白的毕赤酵母GS115细胞株,获取大量具有较高免疫原性的早孕因子(EPF)重组蛋白.rn 方法：优化EPF基因编码碱基序列,并在其末端融合6×His碱基序列,合成EPF-His基因,构建pPICZαA-EPF载体.将重组表达质粒pPICZαA-EPF转化大肠杆菌DH5αE.coli,提取pPICZαA-EPF质粒,经xhoI/NotI双酶切、测序鉴定.重组质粒经sacI限制性内切酶酶切线性化,并电转化入毕赤酵母GS115细胞,zeocin抗性培养基筛选重组酵母.接种重组酵母于BMGY/BMMY培养基,甲醇诱导分泌表达,筛选能稳定分泌表达的毕赤酵母GS115细胞株,表达产物经SDS-PAGE、Western-blot及Ea-RIT鉴定.rn 结果：成功合成EPF-His基因片段并构建pPICZαA-EPF载体.转化后的毕赤酵母GS115,经诱导后表达EPF重组蛋白;筛选出一株能稳定分泌表达EPF的毕赤酵母GS115细胞株3760-6.SDS-PAGE结果显示表明重组蛋白分子量为18kDa;Western blotting实验显示EPF重组蛋白与抗His标签单克隆抗体有特异性结合,经Ea-RIT结果表明其具有EPF样活性.rn 结论：成功构建了EPF的pPICZαA-EPF表达载体,筛选出能胞外稳定表达rEPF的GS115细胞株,并获得了具有生物学特性的EPF重组蛋白.

摘要： 杆状病毒表达系统是一个利用杆状病毒作为载体，在昆虫培养细胞或虫体中表达外源蛋白的真核表达系统。自1983年Smith GE等人利用A cNPV成功表达外源蛋白以来，经过不到30年的发展，杆状病毒表达系统己经成为当今基因工程四大表达系统(杆状病毒、大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统)之一。其在生物医药、农业、疫苗研发等方面均获得广泛应用。通过对杆状病毒及其表达载体系统的描述，展开了系统流感疫苗，单纯疱疹病毒疫苗，肠道病毒疫苗，肝炎病毒疫苗以及人类免疫缺陷病毒疫苗研发。尽管昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS)有着自己的特点和优势，但也不可避免的存在一定的不足，一是普遍存在于BEVS中重组蛋白易降解的问题;二是重组蛋白的表达量远远达不到理想的水平，为此，对杆状病毒表达载体系统进行了改进，随着对这一表达系统的基础理论研究的不断深入，新的调控因子及强的增强子也陆续被发现，杆状病毒表达载体系统必会发挥着不可估量的作用。

摘要： 本研究旨在克隆鸡 β-防御素 Gal-9基因,对其预测的成熟肽基因进行原核表达和对产物进行抑菌活性的检测.根据 GenBank 发表的鸡β-防御素基因Gal-9(NM_001001611.2)设计引物,采用RT-PCR方法从鸡食道中扩增得到鸡β-防御素Gal-9基因,将该成熟肽基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)载体的EcoRI/XhoI双酶切位点上,构建重组原核表达质粒pET-32a-Gal-9.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37°C 进行诱导表达.扩增出Gal-9其cDNA大小为204bp,成熟肽编码42个氨基酸.SDS-PAGE电泳表明,重组鸡Gal-9蛋白大小约为25ku,与预期大小一致,重组蛋白主要以包涵体形式存在.重组鸡Gal-9蛋白对金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(ATCC 25922)、酵母菌(GS115)都能产生抑菌作用,最小抑菌浓度分别为62.50mg/L、31.75mg/L、125.00mg/L、31.75mg/L.成功获得了鸡β-防御素Gal-9成熟肽基因的表达产物,证实了重组鸡Gal-9蛋白具有广谱的抗菌活性,体外抑菌试验为其在家禽生产中应用提供了理论基础.

摘要： 为了探索制备囊素活性肽的有效方法,本实验以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽片段,按照大肠杆菌偏爱密码子设计引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种的囊素肽编码基因,分别构建重组质粒pET-32a-BS1、pET-32a-BS2和pET-32a-BS3,并转化于大肠杆菌OrigamiTMB中诱导表达.SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明,3种重组囊素肽BS1、BS2和BS3均以可溶形式存在上清液中,与天然囊素肽有相似的免疫原性.免疫效果监测表明,3种重组囊素肽在大肠杆菌中成功表达,免疫效果检测结果表明,与单独免疫灭活抗原组相比,3种重组囊素肽均能明显促进鸡血清中抗体产生,提高外周血淋巴细胞增殖能力;有2种能提高血清中细胞因子的含量.本研究获得了3种高效表达的重组囊素肽,动物实验结果为其作为免疫增强剂提供了实验依据.表达产物与禽流感灭活抗原联合免疫鸡只,进行免疫效果监测.

摘要： 为了探索制备囊素活性肽的有效方法,本实验以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽片段,按照大肠杆菌偏爱密码子设计引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种的囊素肽编码基因,分别构建重组质粒pET-32a-BS1、pET-32a-BS2和pET-32a-BS3,并转化于大肠杆菌OrigamiTMB中诱导表达.SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明,3种重组囊素肽BS1、BS2和BS3均以可溶形式存在上清液中,与天然囊素肽有相似的免疫原性.免疫效果监测表明,3种重组囊素肽在大肠杆菌中成功表达,免疫效果检测结果表明,与单独免疫灭活抗原组相比,3种重组囊素肽均能明显促进鸡血清中抗体产生,提高外周血淋巴细胞增殖能力;有2种能提高血清中细胞因子的含量.本研究获得了3种高效表达的重组囊素肽,动物实验结果为其作为免疫增强剂提供了实验依据.表达产物与禽流感灭活抗原联合免疫鸡只,进行免疫效果监测.

摘要： 本发明提供一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法，其将连续多套的生物活性胜肽置换于一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白。

摘要： 本发明提供了一种重组蛋白疫苗，该重组蛋白疫苗含EB病毒核抗原1（EBNA1）的抗原表位，以及人类疱疹病毒糖蛋白的抗原表位，该融合蛋白不仅能够有效激活特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应，直接抑制表达EBNA1，发挥EB病毒相关肿瘤的治疗效果；还能通过疱疹病毒糖蛋白直接阻断免疫抑制途径，提高调节性T细胞的活性；因此，本发明提供的重组蛋白疫苗能更全面、多途径预防或治疗EB病毒感染及其相关的疾病和肿瘤；本发明还提供了含编码该重组蛋白疫苗的基因的重组表达载体和该重组蛋白疫苗的应用。

摘要： 本发明涉及一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用，具体为通过优化牛III型干扰素λ3和I型干扰素α基因的核苷酸序列，再将两者构建表达载体后转化至原核宿主细胞中进行表达。在对核苷酸序列优化后，牛III型干扰素λ3和I型干扰素α基因的表达水平显著上升，牛III型干扰素λ3表达水平提高了50.2％，I型干扰素α表达水平提高了61％，并且两者的抗病毒活性也得到一定的提升。本发明使牛III型干扰素λ3和I型干扰素α原核表达后以可溶性蛋白的形式存在，节约了制备成本，使其可以大量应用于预防和治疗牛病毒性疾病。

摘要： 本发明属于生物化学、分子生物学、遗传学、药学和药物化学领域，与生物化学和代谢过程有关。更具体地，本发明提供了在蜱的唾液腺的转录组学分析中鉴定出的抑制凝血酶的一类新型蛋白，具体地是来自sculptin的修饰的直接的凝血酶抑制剂，以及其片段和重组蛋白，其可以用作抗凝剂和用于预防和/或治疗血栓栓塞性疾病。

摘要： 本发明提供一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法，其将连续多套的生物活性胜肽置换于一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白。

摘要： 本发明提供了一种重组蛋白疫苗，该重组蛋白疫苗含EB病毒核抗原1（EBNA1）的抗原表位，以及人类疱疹病毒糖蛋白的抗原表位，该融合蛋白不仅能够有效激活特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应，直接抑制表达EBNA1，发挥EB病毒相关肿瘤的治疗效果；还能通过疱疹病毒糖蛋白直接阻断免疫抑制途径，提高调节性T细胞的活性；因此，本发明提供的重组蛋白疫苗能更全面、多途径预防或治疗EB病毒感染及其相关的疾病和肿瘤；本发明还提供了含编码该重组蛋白疫苗的基因的重组表达载体和该重组蛋白疫苗的应用。

摘要： 本发明涉及医疗器械领域，尤其涉及一种重组蛋白、含该重组蛋白的蛋白海绵的制备方法及应用。本发明的重组蛋白含有鱿鱼环齿蛋白序列，以及具有VPGXG重复单元的蛋白组成，在不同底片(如动物内脏，玻璃，钢)及测试条件下具有优异的黏合性能，可用于各种软组织粘合、止血等，如动脉紧急粘合止血及肺、膀胱的密封。本产品制备及止血粘合操作简单，是较为理想的医用止血和密封产品，具有极好的发展前景。

摘要： 本申请提供一种嗜吞噬细胞无形体重组蛋白抗原的制备方法，包括：含有p44基因的基因片段的反转录及PCR扩增、扩增产物的回收和克隆、目标基因的提取及再确认、重组蛋白抗原rP44‑47E合成的步骤。本申请的嗜吞噬细胞无形体重组蛋白抗原的制备方法，能单一、高效且大量制备重组蛋白抗原rP44‑47E；所制备的重组蛋白抗原rP44‑47E表达量和稳定性高，克服了p44全基因组抗原表达量低且不易制备的缺点，所制得的重组蛋白抗原rP44‑47E作为抗原蛋白具有特异性高、能有效降低检测成本、易于标准化的特点。

摘要： 本发明提供一种与美洲鲎的凝固机制有关的全部的全长重组蛋白、编码这些重组蛋白的cDNA、这些重组蛋白的用途。含有序列号2或4所示的氨基酸序列的重组蛋白；含有序列号6、8、10、或12所示的氨基酸序列的重组蛋白；含有序列号14、16、18、20、或22所示的氨基酸序列的重组蛋白；这些重组蛋白的变体、编码这些重组蛋白的cDNA、这些重组蛋白的应用。

摘要： 本发明涉及一种用于动物绝育或阉割的疫苗组合物，其包含其中融合有霍乱毒素B亚基(CTB)和促性腺激素释放激素(GnRH)的重组蛋白。更具体地，提供了：用于动物绝育或阉割并用于诱导针对GnRH的抗体的重组蛋白；用于生产重组蛋白的重组载体；用于动物绝育或阉割的疫苗组合物，该疫苗组合物包含该重组蛋白；以及通过使用该疫苗组合物进行动物绝育或阉割的方法。根据本发明的疫苗组合物在个体中诱导针对GnRH的抗体，从而使其卵巢或睾丸萎缩。因此，本发明能够以低成本、高安全性和最小的副作用来替代用于绝育和阉割的外科手术，并有益地用于动物绝育或阉割。