诱导表达

摘要： 大豆紫色酸性磷酸酶基因GmPAP14受低磷诱导表达,其超表达显著提高植物有机磷利用效率,为进一步探究其调控机制,本研究以GmPAP14 cDNA序列检索大豆参考基因组,获取基因上游启动子序列,设计引物克隆了中黄15 GmPAP14启动子序列.利用PLACE与PlantCARE预测启动子调控元件发现,该序列中含有增强子调控元件、组织特异表达元件,根特异表达元件、转录因子PHR1结合的PIBS元件等.构建了GmPAP14启动子3个5'端缺失片段融合GUS的植物表达载体PGmPAP14-2568-GUS、PGmPAP14-2238-GUS、PGmPAP14-1635-GUS,并通过Floral dip法获得转基因拟南芥.利用GUS染色和活性测定分析GmPAP14启动子不同片段表达活性发现,正常磷条件下各片段转基因拟南芥均在根尖表达,低磷条件下GUS染色可扩展到成熟区和根毛,另外转PGmPAP14-2238-GUS植株的GUS活性最高.这些结果为后续的基因调控研究奠定重要基础.

摘要： 为提高L-天冬氨酸α-脱羧酶粗酶液催化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸的效率,研究了诱导剂添加时间、诱导剂浓度、诱导温度和培养时间对重组菌株产酶的影响,并优化了粗酶液的反应温度、pH和底物浓度等转化条件。得到最优诱导条件:在OD_(600)达到0.6左右时加入诱导剂IPTG 0.5 mmol/L、25°C下诱导表达18 h时,酶活力达到251.2 U/mL。粗酶液的最佳转化条件为反应体系10 mL中含1.5 mL粗酶液,底物质量浓度90 g/L,反应温度60°C,pH 7.5,反应3 h后β-丙氨酸产量最大,可达32.58 g/L。

摘要： [目的]:提高重组猪表皮生长因子(pEGF)的表达量和纯化量,为后续研究pEGF对仔猪生长发育的影响奠定基础。[方法]:将人工合成的pEGF基因克隆至pEGF4T-1载体,转化至大肠杆菌Rossetta(DE3)中,得到重组菌株Rossetta(DE3)-pGEX-pEGF,IPTG诱导表达,进行表达条件的优化,用GST-tag亲和层析纯化方法进行纯化。[结果]:pEGF基因大小为159 bp,融合表达蛋白分子量为32k Da,最佳诱导表达条件为IPTG浓度0.01mmol/L、诱导温度15°C和诱导时间24h。流穿液和洗涤液中目的蛋白含量极少,洗脱液得到了高纯度的GST-pEGF融合蛋白,纯化较为成功。[结论]:成功构建了pEGF表达菌株,得到了最优的诱导表达条件和最优的纯化工艺,为pEGF相关产品的开发以及应用奠定了基础。

摘要： 为探讨3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A合酶基因(HMGS)在马尾松萜类生物合成途径中的作用及调控机制,利用RT-PCR技术克隆马尾松PmHMGS基因的cDNA全长序列。序列分析表明,PmHMGS基因的完整开放阅读框(ORF)由1425 bp组成,编码474个氨基酸,蛋白相对分子质量为52972.04,理论等电点pI为5.61;保守结构域分析显示,PmHMGS蛋白具有植物HMGS酶的典型结构域和活性中心;系统进化树分析显示,PmHMGS蛋白与裸子植物HMGS聚为一支,与樟子松的HMGS蛋白亲缘关系最近;组织表达分析显示,PmHMGS基因在叶、茎、根有差异表达,茎中表达量最高;诱导表达分析显示,PmHMGS基因均上调表达,表明PmHMGS参与马尾松萜类合成。因此,PmHMGS的表达具有组织特异性,并能响应茉莉酸甲酯和机械损伤处理,推测其可能参与调控马尾松萜类生物合成。

摘要： 通过体内外生长曲线和表型观察试验,分析不同浓度β-蒎烯对柑橘溃疡病菌(Xcc 29-1)的生长抑制作用和柑橘溃疡病症状形成的影响。利用β-葡萄糖苷酸酶基因的定性检测和实时荧光定量PCR分析不同浓度β-蒎烯对Xcc 29-1Ⅲ型分泌系统相关基因hrp G的诱导作用。结果表明:随着浓度的升高,β-蒎烯对Xcc 29-1的生长抑制增强,0.2μg·mL^(-1)的β-蒎烯能显著抑制溃疡病菌的生长繁殖,培养基中添加1μg·mL^(-1)β-蒎烯时,Xcc 29-1几乎不能生长。同时,0.1μg·mL^(-1)的β-蒎烯能有效在体内外诱导Ⅲ型分泌系统相关基因hrp G、hrp X、hrc V和hrp D6的转录表达。β-蒎烯作为柑橘的次级代谢产物可抑制Xcc 29-1的生长繁殖,抑菌作用的大小与其浓度正相关。与此同时,β-蒎烯能诱导Ⅲ型分泌系统相关基因的表达。说明β-蒎烯抑制的不是菌物的致病力,而是菌物的繁殖。

摘要： 【目的】克隆鉴定褐飞虱(Nilaparvata lugens)丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin2,探明其表达模式和生物学功能。【方法】基于褐飞虱转录组数据,利用PCR技术克隆Nlserpin2全长cDNA序列;利用生物信息学手段分析其核酸和蛋白序列特征;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测其在褐飞虱不同发育时期(卵、1—5龄若虫和雌雄成虫)和初羽化雌成虫不同组织(脂肪体、肠道和卵巢)中的表达,以及病原真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)侵染褐飞虱5龄若虫不同时间后的诱导表达模式;利用RNAi技术探明Nlserpin2基因沉默对褐飞虱5龄若虫存活率及抵御金龟子绿僵菌侵染能力的影响。【结果】Nlserpin2 cDNA序列(GenBank登录号:KC355239)全长1209 bp,编码402个氨基酸,含有serpin蛋白超家族所具有的典型serpin结构域和RCL区,且N端包含一段由27个氨基酸残基组成的信号肽。系统进化树分析表明,Nlserpin2与半翅目其他昆虫的serpin聚为一支,其中与白背飞虱(Sogatella furcifera)serpin亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,Nlserpin2表达具有明显的时空特异性,其在褐飞虱成虫中的表达量显著高于其他龄期,且在雄成虫中表达量最高;卵和低龄若虫(1—3龄)中Nlserpin2的表达量显著低于高龄若虫(4—5龄),其中3龄若虫期最低;Nlserpin2在褐飞虱雌成虫肠道、脂肪体和卵巢中均有表达,且肠道中表达量显著高于脂肪体和卵巢。金龟子绿僵菌诱导2 d和3 d后Nlserpin2的表达量显著上调,但随着诱导时间的增加,Nlserpin2表达量呈回稳趋势。RNAi分析结果显示,显微注射dsNlserpin2可显著抑制Nlserpin2的表达水平。干扰Nlserpin2后褐飞虱5龄若虫的存活率以及对金龟子绿僵菌侵染的抵御能力均显著降低。与对照组相比,Nlserpin2干扰的褐飞虱在金龟子绿僵菌侵染5 d和8 d后的校正存活率分别下降了28.4%和31.0%,且均达到显著水平。【结论】Nlserpin2在褐飞虱防御病原真菌侵染过程中发挥重要作用,可作为应用RNAi技术防控褐飞虱的潜在靶标和褐飞虱高毒力病原真菌遗传改良的资源基因。

摘要： 【目的】建立快速、准确检测猪链球菌自溶素(atl)抗体的间接ELISA方法。【方法】根据GenBank登录的猪链球菌atl基因序列设计1对引物,采用PCR方法从猪源链球菌中获得atl基因序列;构建pET-32a-atl和pGEX-4T-1-atl重组质粒,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达;以表达纯化后的atl-His融合蛋白为免疫原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;以兔多克隆抗体为一抗,用Western blotting方法检测atl-GST融合蛋白的反应原性;以纯化后的atl-GST融合蛋白为包被抗原,猪链球菌感染阳性血清作为标准血清,建立猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA检测方法。利用本试验建立的ELISA方法与商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒同时对184份血清样品进行检测并用本试验建立的方法进行临床样品检测。【结果】从猪链球菌中成功扩增出atl基因;构建的重组质粒,经诱导表达和纯化,获得大小为40 ku的atl-His和48 ku的atl-GST融合蛋白;经Western blotting验证,兔抗atl-His抗血清与atl-GST融合蛋白具有良好的反应原性;间接ELISA结果显示,该检测方法的阴阳临界值为0.318,阳性血清稀释至1∶1 280检测仍为阳性;批内批间变异系数均<10%,表明该方法具有良好的重复性及敏感性。本试验所建立的ELISA方法检测出96份阳性样品,商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒检测出66份阳性样品,符合率为71.7%。应用建立的方法检测458份不同饲养阶段的猪血清样品,其中检出277份阳性样品,阳性率为60.4%。【结论】本试验成功建立了检测猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA方法并进行了初步应用,为猪链球菌病血清流行病学调查奠定了基础。

摘要： 【目的】对参与暴马桑黄赤霉素合成途径关键酶-牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPS)基因进行克隆及诱导表达研究,以期深入了解暴马桑黄的生长发育机制,为获得优质高产的暴马桑黄菌株提供理论依据。【方法】采用PCR扩增技术获得暴马桑黄GGPS基因cDNA全长及启动子序列,利用生物信息学软件对序列进行分析;qRT-PCR技术分析不同浓度茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对暴马桑黄GGPS基因转录水平的影响,并用分光光度计测定不同浓度MeJA诱导下赤霉素含量的变化;电子天平称量暴马桑黄菌丝体生物量;SDS-PAGE检测暴马桑黄GGPS基因原核表达情况。【结果】将克隆得到的暴马桑黄GGPS启动子和基因分别命名为SbGGPS启动子和SbGGPS基因。SbGGPS启动子分析结果显示,除了含有CAAT-box、TATA-box典型的启动子作用元件之外,还含有MeJA响应元件。基因分析发现,SbGGPS基因cDNA序列全长945 bp,共编码314个氨基酸,蛋白相对分子量35.89 kDa,不存在信号肽和跨膜结构。荧光定量分析、赤霉素含量测定及生物量检测结果表明,SbGGPS基因转录水平、赤霉素含量及生物量均随着MeJA浓度增加呈现显著下降的趋势,三者变化趋势基本一致,并且两两之间均呈显著正相关。SDS-PAGE结果显示,SbGGPS基因能够在原核系统中成功表达出蛋白。【结论】通过对SbGGPS基因的克隆及诱导表达分析发现,该基因在暴马桑黄赤霉素生物合成及生长发育过程中具有重要作用。

摘要： 本研究旨在对免疫原性目的蛋白基因A11R优化表达的基础上建立羊痘血清学检测方法,为羊痘防控提供技术支撑。绵羊痘病毒A11R基因经密码子优化后合成目的基因,连入pET-28a(+)载体,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌,pET28a-A11R经鉴定后进行诱导表达。结果显示,经密码子优化后的A11R蛋白的表达量显著增加,更易从转化的大肠杆菌裂解上清液和经过复性的包涵体中大量纯化获得。将该蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测羊痘抗体的间接ELISA方法,并进行特异性和敏感性试验,用该方法与商业化试剂盒对临床样品进行检测。结果显示,A11R蛋白的最佳包被剂量为0.5μg/孔,待检血清最适稀释度为1∶100,家兔抗羊Ig G最适稀释度为1∶20 000。用建立的间接ELISA方法检测小反刍兽疫、羊口疮、口蹄疫的阳性血清,结果均为阴性,无交叉反应,具有良好的特异性。当羊痘阳性血清稀释到1∶1 600时抗体检测仍为阳性,具有较高的敏感性。用该ELISA方法与商业化试剂盒检测临床样品,符合率为98.71%,具有良好的一致性。上述结果表明,本研究建立了基于A11R蛋白的羊痘血清学免疫诊断方法,同时表明了密码子偏好性的优化可显著提高蛋白表达量。

摘要： 【目的】对参与暴马桑黄Sanghuangporus baumii倍半萜合成途径的关键基因SbTps2及其启动子进行克隆和生物信息学分析,并解析不同浓度MeJA对该基因表达的影响。【方法】利用PCR扩增技术克隆暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps2 cDNA全长和启动子序列;用SWISS-MODEL、SignalP-3.0和SOPMA等软件对SbTps2基因和SbTps2启动子序列进行生物信息学分析;以暴马桑黄为试验材料,利用实时荧光定量技术,对不同浓度MeJA诱导下SbTps2基因相对表达量进行了比较分析。【结果】经测序,SbTps2基因全长1227 bp,编码407个氨基酸,蛋白分子量为45.73 kDa。根据暴马桑黄基因组已知的序列,并结合SbTps2基因cDNA测序结果分析基因的外显子和内含子表明,SbTps2基因包含3个外显子(核苷酸0~527 bp、592~898 bp和953~1348 bp)和两个内含子(528~591 bp和899~952 bp);SbTps2蛋白无跨膜结构与信号肽,该蛋白为亲水性不稳定蛋白。系统发育进化树分析结果表明,SbTps2蛋白与已报道的倍半萜合酶基因聚为一支;SbTps2启动子(1220 bp)生物信息学分析结果表明,它含有典型的启动子元件,如CAAT-box、TATA-box和MeJA等其他反应元件。荧光定量分析结果表明,SbTps2基因转录水平在不同浓度MeJA诱导时有差异性,并且在MeJA诱导浓度为200μM时SbTps2基因转录水平达到最高状态。【结论】通过对SbTps2基因的克隆与表达分析,为后续暴马桑黄倍半萜合酶基因功能的研究奠定了基础。

摘要： 随着科学的进步,人们对细菌素的了解越来越深入.细菌素是由细菌产生的、具有杀菌作用的一类多肽或蛋白,分为广谱与窄谱,成为人们研究的热点.但野生菌种细菌素产量低,细菌素分离纯化困难.为了提高细菌素产量,许多研究者已经进行了细菌素异源表达研究.本文就细菌素在大肠杆菌中诱导表达进行了综述，指出广泛寻找细菌素资源，并通过分子生物学技术进行基因改造或重组，增加细菌素在大肠杆菌中的诱导表达的研究，有望获得适用于生产的高产高效广谱细菌素工程菌。但是，目前外源基因的表达仍是经验性很强的工作，可预测性较差，只有彻底地了解蛋白质的体内合成和折叠过程，才可能使人们按照自己的意愿生产重组蛋白，更好地为人类服务。

摘要： 本研究旨在克隆牡丹DREB转录因子,对其进行生物信息学分析,并研究其对水分胁迫和外源激素处理的响应.利用已构建的牡丹花瓣转录组数据库,筛选出1个与植物DREB蛋白同源性较高的Unigene序列,命名为PsDREB1.利用RACE及RT-PCR技术,设计特异性引物对PsDREB1最大阅读框(ORF)序列进行扩增并测序.生物信息学分析表明PsDREB1序列包含一个831bp的ORF,编码一个276aa的肽链,含有一个典型的AP2结构域.氨基酸多序列比对及进化分析表明PsDREB1属于DREB-A4组.实时定量PCR分析表明,PsDREB1表达受到水分胁迫的诱导,但对乙烯和脱落酸没有响应.结果表明牡丹切花中PsDREB1可能参与了水分胁迫诱导的信号转导途径.

摘要： 肾联合造血干细胞移植诱导移植耐受主要有两种机制，肾移植和造血干细胞移植的实施顺序进行分析，介绍了造血干细胞移植的清髓性、非清髓性以及免疫调节细胞治疗辅助诱导嵌合体形成的预处理方案，肾联合造血干细胞移植诱导免疫耐受的研究现状.

摘要： 肾联合造血干细胞移植诱导移植耐受主要有两种机制，肾移植和造血干细胞移植的实施顺序进行分析，介绍了造血干细胞移植的清髓性、非清髓性以及免疫调节细胞治疗辅助诱导嵌合体形成的预处理方案，肾联合造血干细胞移植诱导免疫耐受的研究现状.

摘要： 肾联合造血干细胞移植诱导移植耐受主要有两种机制，肾移植和造血干细胞移植的实施顺序进行分析，介绍了造血干细胞移植的清髓性、非清髓性以及免疫调节细胞治疗辅助诱导嵌合体形成的预处理方案，肾联合造血干细胞移植诱导免疫耐受的研究现状.

摘要： 肾联合造血干细胞移植诱导移植耐受主要有两种机制，肾移植和造血干细胞移植的实施顺序进行分析，介绍了造血干细胞移植的清髓性、非清髓性以及免疫调节细胞治疗辅助诱导嵌合体形成的预处理方案，肾联合造血干细胞移植诱导免疫耐受的研究现状.

摘要： 目的：探索小鼠骨髓耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cell,tDCs)缓解小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的机制.rn 方法：取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞,加入rmGM-CSF,rmlL-4,rmIL-10,rhTGFβ1等细胞因子培养6d,得到小鼠tDC,加入GPIIb培养后,得到GPIIb特异性tDCs,用于下面实验.将ITP小鼠脾脏分离来的CD4+CD25-T细胞与tDC共培养,流式细胞仪检测T细胞的表型变化并同时Elisa检测共培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的分泌;将与tDC共培养6d后的T细胞与来自自体的脾淋巴细胞共培养,检测混合淋巴细胞反应及上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的含量;分别检测接受PBS治疗的ITP小鼠和接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数目及Foxp3和CD69的表型;应用抗鼠GPIIb抗体进行小鼠ITP造模,将小鼠模型分成两组,一组于抗体注射1h后注射接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中的CD4+CD25+T细胞,另一组于抗体注射1h后注射PBS,分别在第0、1、3、24、48、72、96、120h检测两组小鼠的血小板计数、血清中IFN-γ的表达水平.rn 结果：ITP小鼠体内的CD4+CD25-T细胞在体外被tDC诱导为CD4+CD25+T细胞，其上清中含有较低含量的IFN-γ和较高含量的IL-10、TGF-β。rn 结论：GPIIb特异性tDC能够治疗ITP可能是通过诱导CD4+CD25+T细胞来实现的。

摘要： 目的：探索小鼠骨髓耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cell,tDCs)缓解小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的机制.rn 方法：取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞,加入rmGM-CSF,rmlL-4,rmIL-10,rhTGFβ1等细胞因子培养6d,得到小鼠tDC,加入GPIIb培养后,得到GPIIb特异性tDCs,用于下面实验.将ITP小鼠脾脏分离来的CD4+CD25-T细胞与tDC共培养,流式细胞仪检测T细胞的表型变化并同时Elisa检测共培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的分泌;将与tDC共培养6d后的T细胞与来自自体的脾淋巴细胞共培养,检测混合淋巴细胞反应及上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的含量;分别检测接受PBS治疗的ITP小鼠和接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数目及Foxp3和CD69的表型;应用抗鼠GPIIb抗体进行小鼠ITP造模,将小鼠模型分成两组,一组于抗体注射1h后注射接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中的CD4+CD25+T细胞,另一组于抗体注射1h后注射PBS,分别在第0、1、3、24、48、72、96、120h检测两组小鼠的血小板计数、血清中IFN-γ的表达水平.rn 结果：ITP小鼠体内的CD4+CD25-T细胞在体外被tDC诱导为CD4+CD25+T细胞，其上清中含有较低含量的IFN-γ和较高含量的IL-10、TGF-β。rn 结论：GPIIb特异性tDC能够治疗ITP可能是通过诱导CD4+CD25+T细胞来实现的。

摘要： 目的：探索小鼠骨髓耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cell,tDCs)缓解小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的机制.rn 方法：取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞,加入rmGM-CSF,rmlL-4,rmIL-10,rhTGFβ1等细胞因子培养6d,得到小鼠tDC,加入GPIIb培养后,得到GPIIb特异性tDCs,用于下面实验.将ITP小鼠脾脏分离来的CD4+CD25-T细胞与tDC共培养,流式细胞仪检测T细胞的表型变化并同时Elisa检测共培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的分泌;将与tDC共培养6d后的T细胞与来自自体的脾淋巴细胞共培养,检测混合淋巴细胞反应及上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的含量;分别检测接受PBS治疗的ITP小鼠和接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数目及Foxp3和CD69的表型;应用抗鼠GPIIb抗体进行小鼠ITP造模,将小鼠模型分成两组,一组于抗体注射1h后注射接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中的CD4+CD25+T细胞,另一组于抗体注射1h后注射PBS,分别在第0、1、3、24、48、72、96、120h检测两组小鼠的血小板计数、血清中IFN-γ的表达水平.rn 结果：ITP小鼠体内的CD4+CD25-T细胞在体外被tDC诱导为CD4+CD25+T细胞，其上清中含有较低含量的IFN-γ和较高含量的IL-10、TGF-β。rn 结论：GPIIb特异性tDC能够治疗ITP可能是通过诱导CD4+CD25+T细胞来实现的。

摘要： 目的：探索小鼠骨髓耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cell,tDCs)缓解小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的机制.rn 方法：取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞,加入rmGM-CSF,rmlL-4,rmIL-10,rhTGFβ1等细胞因子培养6d,得到小鼠tDC,加入GPIIb培养后,得到GPIIb特异性tDCs,用于下面实验.将ITP小鼠脾脏分离来的CD4+CD25-T细胞与tDC共培养,流式细胞仪检测T细胞的表型变化并同时Elisa检测共培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的分泌;将与tDC共培养6d后的T细胞与来自自体的脾淋巴细胞共培养,检测混合淋巴细胞反应及上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的含量;分别检测接受PBS治疗的ITP小鼠和接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞的数目及Foxp3和CD69的表型;应用抗鼠GPIIb抗体进行小鼠ITP造模,将小鼠模型分成两组,一组于抗体注射1h后注射接受GPIIb特异性tDC治疗的ITP小鼠外周血中的CD4+CD25+T细胞,另一组于抗体注射1h后注射PBS,分别在第0、1、3、24、48、72、96、120h检测两组小鼠的血小板计数、血清中IFN-γ的表达水平.rn 结果：ITP小鼠体内的CD4+CD25-T细胞在体外被tDC诱导为CD4+CD25+T细胞，其上清中含有较低含量的IFN-γ和较高含量的IL-10、TGF-β。rn 结论：GPIIb特异性tDC能够治疗ITP可能是通过诱导CD4+CD25+T细胞来实现的。

摘要： 本发明涉及一种逆境诱导型启动子序列，包含SEQ ID NO:1的1388bp的DNA核苷酸序列，属于植物基因工程技术领域。本发明还提供了一种逆境诱导型启动子植物表达载体及使植物在低温、干旱和盐诱导下表达目标基因的方法，可将目标基因替换GUS基因插入到含有本发明启动子的植物表达载体中，将该重组载体导入目标植物；SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3为PCR引物，分别包含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点，所述引物适用于扩增含SEQ ID NO:1的DNA序列；本发明可用于启动冷、干旱和盐胁迫下外源基因的高效表达，适用于植物遗传育种改良研究。

摘要： 本发明涉及一种逆境诱导型启动子序列，包含SEQ ID NO:1的1388bp的 DNA核苷酸序列，属于植物基因工程技术领域。本发明还提供了一种逆境诱导型启动子植物表达载体及使植物在低温、干旱和盐诱导下表达目标基因的方法，可将目标基因替换

摘要： 本发明公开了一种孤雄诱导基因表达盒，其包括诱导基因、与诱导基因紧密连锁的荧光筛选标记基因、以及增强诱导基因表达水平的增强子。该孤雄诱导基因表达盒可用于转化玉米得到具有较高单倍体诱导率的孤雄诱导系，为玉米单倍体育种提供了方便、降低了筛选劳动强度。本发明还公开了此孤雄诱导基因表达盒在诱导玉米单倍体中的应用。

摘要： 涉及一种基因工程,构建了包含蓝藻热休克基因groESL强启动区、目的基因UBTα1、rbcS终止区和Km标记基因的完整的可高效表达的蓝藻基因表达系统,并运用基因整合平台系统和穿梭质粒系统进行转基因表达胸腺素α1,由于利用热休克基因groESL的强启动子,易调控,经热诱导后能几十上百倍地加快转录,同时利用泛素融合技术,使目的基因Tα1得到高效表达,本发明工艺简单,可举一反三,具有很大的开发前景,为产业化开发转基因蓝藻开辟一条新途径。

摘要： 本发明公开了一种低温诱导型增强子及其在植物低温诱导时增强基因表达中的应用；所述的增强子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的有益效果是：本发明的所提供的增强子，可以在低温诱导的情况下特异启动增强目标基因的表达，同时在不寒冷的时候不会启动这个基因，不消耗植物多余的能量。采用增强子调控基因表达的模式能够避免组成型启动子非特异性启动基因表达，产生大量蛋白质或代谢产物对植物生长状况的影响。

摘要： 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种构建Doxycycline/Mifepristone诱导过表达的带有荧光蛋白标记基因的双诱导表达载体及构建方法及应用，所述表达载体系统核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中表达载体系统可以在几乎所有生物和细胞中正常表达且无渗漏表达，避免了基因沉默以及转导病毒可能带来的细胞毒性和免疫反应，系统特异性高，安全性高，诱导效率高，诱导具有可逆性，可以用多种转染方法进行转基因操作。

摘要： 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种构建Doxycycline/Mifepristone诱导过表达的带有荧光蛋白标记基因的双诱导表达载体及构建方法及应用，所述表达载体系统核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中表达载体系统可以在几乎所有生物和细胞中正常表达且无渗漏表达，避免了基因沉默以及转导病毒可能带来的细胞毒性和免疫反应，系统特异性高，安全性高，诱导效率高，诱导具有可逆性，可以用多种转染方法进行转基因操作。

摘要： 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种构建Doxycycline/Mifepristone诱导过表达的带有荧光蛋白标记基因的双诱导表达载体及构建方法及应用，所述表达载体系统核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中表达载体系统可以在几乎所有生物和细胞中正常表达且无渗漏表达，避免了基因沉默以及转导病毒可能带来的细胞毒性和免疫反应，系统特异性高，安全性高，诱导效率高，诱导具有可逆性，可以用多种转染方法进行转基因操作。

摘要： 本申请涉及蛋白表达的技术领域，具体公开了一种诱导培养基及利用该诱导培养基对MPT64蛋白进行诱导表达的方法。本申请提供的诱导培养基包括以下浓度的组分：胰蛋白胨35‑45mg/mL；酵母提取物18‑24mg/mL；氯化钠32‑47mg/mL；甘油25‑35mg/mL；诱导剂0.4‑0.8mg/mL；琥珀酸二辛酯磺酸酯钠2‑8mg/mL；所述诱导剂选自鼠李糖、阿拉伯糖、乳糖中的一种或多种。同时，本申请还提供了利用上述诱导培养基对MPT64蛋白在宿主细胞中进行诱导表达的方法，该方法能够有效提高MPT64重组蛋白的产量。

摘要： 本发明公开了一种脱水四环素诱导的大肠杆菌‑枯草芽孢杆菌通用型诱导表达系统，属于基因工程领域。本发明构建了在大肠杆菌与枯草芽孢杆菌中均可使用脱水四环素诱导表达的操纵子Ptet表达系统，该系统以商业化质粒pHT01为表达载体，包括阻遏蛋白tetR表达框和超级折叠绿色荧光蛋白(sfGFP)表达框。其中对阻遏蛋白tetR表达框中的阻遏蛋白tetR的基因序列和RBS序列进行突变以改变阻遏蛋白亲和力和表达强度。操纵子Ptet表达系统在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中均表现出低泄漏和高的诱导放大倍数。因此本通用表达系统结构简单、活性高、调控严谨，在异源蛋白高效表达和合成生物学研究中有广阔的应用前景。