RNA干扰

摘要： 背景:肝癌干细胞是导致癌细胞形成、更新和增殖的原因,寻找针对肝癌干细胞治疗的关键靶点,并进一步拓展肝癌综合治疗手段是重要研究课题。目的:观察β-catenin基因沉默后CD133+HepG2细胞干性转录因子变化,探讨β-catenin调控肝癌干细胞干性的作用机制。方法:采用免疫磁珠筛选CD133+HepG2细胞,然后经干细胞培养基诱导、扩增方案获得CD133+HepG2肝癌干细胞,流式细胞术鉴定CD133+HepG2细胞阳性率,RNA干扰技术构建沉默β-catenin基因表达的β-catenin-shRNA慢病毒质粒,转染CD133+HepG2肝癌干细胞72 h,荧光标记并评估转染效率。确认β-catenin沉默后,平板克隆形成实验观察CD133+HepG2肝癌干细胞增殖情况,流式细胞术检测CD133+HepG2肝癌干细胞的细胞周期,qRT-PCR和Western blot检测干性转录因子SOX2,NANOG,OCT4的mRNA及蛋白表达水平。结果与结论:与空白对照组和病毒空载组相比,病毒干扰组的细胞克隆形成能力明显降低,G_(0)/G_(1)期细胞百分比明显增多,S期和G_(2)/M期细胞百分比降低,NANOG、SOX2、OCT4的蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.05),提示下调β-catenin表达可能对抑制肝癌干细胞的干性水平具有潜在作用。

摘要： 为了探讨Nrf2基因被干扰后对牛睾丸细胞的影响,试验采用了实时荧光定量PCR和Western boltting方法检测了牛睾丸细胞中HO-1和NQO1基因的表达。结果显示,设计的siRNA-1672在终浓度为50nmol/L时抑制效果较好,Nrf2基因表达显著下降,HO-1和NQO1基因在mRNA水平上表达显著下降。Nrf2被干扰72h后,HO-1和NQO1蛋白质水平表达水平明显下降。说明Nrf2对牛睾丸细胞中HO-1和NQO1基因的表达存在调控作用。

摘要： 为研究旋毛虫谷氨酸脱羧酶(GAD)基因在其谷氨酸依赖型抗酸系统2(AR2)中的作用,本研究根据GenBank中登录的旋毛虫GAD基因序列,设计3条靶向该基因的siRNA(GAD-siRNA1~GAD-siRNA3)及一条阴性对照NC siRNA。将这4条siRNA以2μmol/L的剂量通过浸染法分别转染旋毛虫肌幼虫(后均简写为肌幼虫),12 h后分别采用荧光定量PCR和western blot检测各siRNA的干扰效果;采用不同剂量的最佳siRNA按照上述方法转染确定最佳干扰剂量。结果显示,2μmol/L的GAD-siRNA1(后简写为siRNA1)对GAD基因的干扰效果最好。将2μmol/L siRNA1、NC siRNA分别在不同pH值的培养液中利用浸染法分别转染肌幼虫,培养不同时间后分别计算各组存活率;同时利用荧光定量PCR方法检测GAD基因的转录水平;采用比色法建立γ-氨基丁酸(GABA)的标准曲线,通过酶活性公式和标准曲线计算酸环境培养0.5 h后各组培养液中GAD的酶活性并测定其pH值。存活率结果显示,随培养时间的增加,同一pH值培养液中各组肌幼虫的存活率均降低,其中siRNA1组肌幼虫的存活率明显低于PBS和NC siRNA组(NC组)(P<0.05),其在pH2.5培养0.5 h时的存活率最低,各组肌幼虫在pH6.6培养0.5 h时的存活率均最高。荧光定量PCR结果显示,相同p H条件下,随培养时间的延长,siRNA1组肌幼虫GAD基因的转录水平均显著低于PBS和NC组。相同培养时间内,与两个对照组相比,随着培养液p H值的减小,siRNA1组肌幼虫GAD基因的转录水平均增加,且该组肌幼虫在pH2.5时GAD基因的转录水平显著高于pH6.6时的转录水平(P<0.05)。上述结果表明,酸性环境可以诱导旋毛虫肌幼虫GAD基因转录水平的升高。酶活性测定结果显示,相同pH条件下,siRNA1组肌幼虫培养液中GAD的酶活性均比PBS组和NC组低,且该组肌幼虫在pH2.5和pH4.0时GAD的酶活性显著高于pH6.6和pH8.0(P<0.05);p H值测定结果显示,siRNA1组肌幼虫培养液pH值相比其在不同pH条件下培养前均略升高,但差异不显著。上述结果表明,干扰GAD基因后会降低旋毛虫肌幼虫GAD的酶活性,且在酸性条件下该酶活性较高。将GAD基因干扰后的肌幼虫感染小鼠,感染后第7 d迫杀小鼠收集成虫,计算旋毛虫成虫减虫率,感染后42 d采用相同方法计算肌幼虫的减虫率、繁殖力指数(RCI)及每克肌幼虫数(LPG);采集各组小鼠的膈肌,制作病理切片并经显微镜观察肌幼虫的保姆细胞。结果显示,siRNA1组成虫减虫率为31.50%,肌幼虫的减虫率为49.15%,RCI为62.51±7.32,LPG为1250.22±146.48。PBS组和NC组肌幼虫的RCI、LPG则显著高于siRNA1组(P<0.05);小鼠膈肌病理切片观察可见,siRNA1组肌幼虫子代保姆细胞壁周围有大量炎性细胞,且保姆细胞裂解,而两个对照组肌幼虫子代保姆细胞壁周围无炎性细胞。表明干扰GAD基因后肌幼虫体内的抗酸能力降低,对宿主免疫系统的抵抗力减弱。本研究首次证实了旋毛虫谷氨酸依赖型抗酸机制在其抵抗酸环境过程中发挥的作用,为旋毛虫抗酸系统的全面研究奠定了基础,并为旋毛虫病的预防提供了新思路。

摘要： 研究通过在异育银鲫脊髓细胞系(Spinal cord tissue cell lines of Carassius auratus gibelio,CSC)中对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)ORF57进行RNA干扰,以探究其对CyHV-2病毒复制的影响。首先,以FAM标记的异育银鲫β-actin的siRNA进行CSC细胞转染条件的优化,再将针对CyHV-2 ORF57基因设计的3条siRNA,转染CSC细胞,并进行病毒感染,评估siRNA对病毒复制和致细胞病变的影响。转染条件优化结果显示,在siRNA浓度为80 nmol/L,转染液维持24h后更换维持液,β-actin基因表达量最低且观察到的荧光点数量最多。而ORF57-siRNAs干扰结果显示,ORF57-siRNA-2组表现出了较强的抑制效果,在接毒48h时,ORF57-siRNA-2处理组的ORF57基因表达量降到相对于Mock组的33.55%(P<0.01),并且各ORF57-siRNA组都表现出了延缓CyHV-2致细胞病变的时间和强度,抑制时间可达120h。TCID_(50)结果显示,不同组的ORF57-siRNAs均能降低病毒滴度,其中ORF57-siRNA-2将病毒原液TCID_(50)108.487/mL下降至106.776/mL。研究结果表明,干扰ORF57的表达可大大降低CyHV-2的致细胞病变力和复制率,ORF57在CyHV-2复制与致细胞病变中起重要作用。本研究为CyHV-2基于siRNA技术的抗病毒治疗和弱毒株的改造提供了借鉴。

摘要： 目的:探讨ARHGAP29对小鼠腭突间充质细胞增殖能力的影响。方法:免疫组织化学染色确定ARHGAP29在腭突组织中的表达;体外培养GD13.5小鼠腭突间充质细胞,免疫荧光染色鉴定细胞来源;合成3条Arhgap29基因特异性小干扰RNA进行体外沉默实验,利用Real-time PCR和Western blot检测沉默效率;CCK-8法检测Arhgap29基因沉默后腭突间充质细胞增殖能力的改变;实验结果采用GraphPad Prism 8.0.2软件进行统计学分析。结果:免疫组织化学结果示ARHGAP29在GD13.5小鼠腭突组织中显著表达;免疫荧光染色结果显示Vimentin染色的腭突间充质细胞包浆着色,绿色荧光表达强,Cytokeratin染色的细胞未见有阳性表达;Real-time PCR和Western blot结果显示,相较于阴性对照组和空白对照组,实验组ARHGAP29 mRNA和蛋白表达水平明显降低,其中Arhgap29-siRNA3的沉默效果最好(P<0.001);CCK-8结果显示体外沉默Arhgap29基因48 h后腭突间充质细胞的增殖能力开始上升,转染72 h细胞的增殖能力显著增强(P<0.05)。结论:ARHGAP29可能通过促进腭突间充质细胞的增殖,在腭突发育阶段造成腭突与口腔上皮的黏连,从而影响腭部的正常发育。

摘要： 目的在细胞和分子水平中探讨钙激活中性蛋白酶1(calcium activated neutral protease 1,CAPN1)与口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞侵袭、转移等行为是否存在相关性。方法选用永生化正常口腔黏膜上皮HOK细胞株作为对照组(正常组),2个不同来源的口腔鳞癌(OSCC)细胞株HSC3、CAL27作为实验组(肿瘤组),通过蛋白质印迹法(Western blot)探讨CAPN1在正常和肿瘤细胞中的表达情况。以OSCC细胞株中的两组HSC3、CAL27细胞为研究对象,将这两组细胞随机分为siRNA1-1组(将siRNA CAPN1-1转染到两组OSCC细胞中)、siRNA1-2组(将siRNA CAPN1-2转染到两组OSCC细胞中)及siRNA-neg组(将非特异性siRNA(siNC)转染到的两组OSCC细胞中)作为对照组。应用PCR法和Western blot检测转染后细胞内CAPN1mRNA和蛋白水平的变化。应用Transwell小室设计肿瘤细胞迁移、侵袭实验,检测转染后细胞迁移、侵袭能力的变化。结果Western blot表明CAPN1在肿瘤组中的表达高于正常组(P<0.05);通过PCR法和Western blot实验发现两组细胞HSC3、CAL27中,与siRNA-neg组相比,siRNA1-1组、siRNA1-2组中CAPN1mRNA的表达均明显受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05);通过Transwell小室实验发现siRNA1-1组与siRNA1-2组较siRNA-neg组迁移及侵袭能力均减弱,显微镜下穿膜数目均减少,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论CAPN1可升高口腔鳞癌细胞迁移、侵袭能力,可能在口腔鳞癌的发生发展中发挥了重要作用。

摘要： 目的探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞迁移和侵袭作用的影响。方法qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞(乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D)LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21(实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组),抑制miR-17-3p表达(实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组),过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达(实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组)。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织(0.48±0.03 vs.1.03±0.06,t=11.714,P<0.01),miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织(2.93±0.17 vs.1.02±0.04,t=15.593,P<0.01)。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A(P<0.01)。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达(P<0.05)。结论LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。

摘要： 昆虫气味受体(odorant receptors,ORs)在外周嗅觉系统识别气味信号过程中起着关键作用,参与昆虫取食、交配和产卵等重要生命活动过程。随着测序技术飞速发展以及生物信息学研究的深入,昆虫气味受体基因实现了大规模鉴定。本文详述了昆虫气味受体基因的研究方法及其原理和优缺点,归纳总结了自2015年以来已发表文章中采用不同分析方法进行ORs鉴定和功能研究的数量和比例,列举了重要害虫气味受体的研究进展。2015-2019年利用基因组和转录组测序技术分别鉴定了2543和5111个OR基因。基因表达和蛋白定位研究有助于分析OR基因在不同组织以及不同发育阶段的表达特异性,荧光原位杂交和免疫组织化学方法常用于分析细胞和组织定位;半定量反转录PCR(semi-quantitative reverse transcription PCR,RT-PCR)技术和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术常用于研究OR基因的时空表达模式。利用冷冻电镜技术解析昆虫OR蛋白的超微晶体结构,以明确OR关键氨基酸残基与配体化合物互作规律。ORs功能研究手段不断丰富,体外异源表达系统在2015-2019年间的占比为75.76%,以爪蟾卵母细胞Xenopus oocytes系统结合双电极电压钳技术(two-electrode voltage clamp,TEVC)为主(占比43.94%),辅以转基因果蝇异源表达系统结合单感器记录技术以及细胞系异源表达ORs结合钙离子成像技术;体内功能研究方法包括RNA干扰(RNAi)技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,后者在ORs功能研究中取得了突破性进展并具有广泛的应用前景。最后本文对今后的研究方向提出了以下建议:(1)开展更多重大害虫及天敌昆虫嗅觉识别机制研究;(2)阐明昆虫性信息素和寄主植物挥发物协同作用的内在机理;(3)解析气味受体蛋白超微晶体结构并揭示ORs与气味分子特异性识别机制;(4)基于RNAi技术开发新型昆虫行为调节剂。

摘要： 目的:探讨CD44基因沉默对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响。方法:设计及合成CD44 siRNA,转染人鼻咽癌SUNE-15-8F细胞,Real-time qPCR及Western blot评价转染效果,流式细胞仪分析各组细胞周期和凋亡情况。结果:CD44 siRNA显著下调了人鼻咽癌SUNE-15-8F细胞中CD44 mRNA与蛋白表达(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示siRNA组细胞中G0/G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例显著下降,细胞凋亡率明显增加(均P<0.05)。结论:CD44 siRNA干扰载体可高效抑制鼻咽癌SUNE-15-8F细胞CD44的表达,诱导细胞阻滞在G0/G1期,促进细胞凋亡。

摘要： 目的探讨沉默信号素蛋白6D(Sema6D)对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及促进血管形成能力的影响。方法检测人骨肉瘤组织及细胞系中Sema6D的表达情况,脂质体法转染靶向siRNA后通过CCK-8、细胞划痕、Transwell、人脐静脉内皮细胞与肿瘤条件培养基共培养实验探究骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和体外促血管形成能力的改变。Western blot检测下游相关信号通路蛋白表达情况。结果Sema6D在人骨肉瘤组织及细胞系中相对高表达(P<0.05),沉默Sema6D后143B和MG63细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降(P<0.05);人脐静脉内皮细胞体外血管形成能力减弱(P<0.01);PI3K/AKT/mTOR和ERK信号通路蛋白表达降低(P<0.05)。结论Sema6D在人骨肉瘤组织和细胞系中表达水平高,敲低骨肉瘤细胞Sema6D表达水平后可通过减弱PI3K/AKT/mTOR和ERK信号通路转导抑制细胞增殖、迁移、侵袭及促血管形成能力。

摘要： 磷化氢是全世界范围内广泛应用的储粮熏蒸剂.近30年来,储粮害虫磷化氢抗药性问题日益严重.深入理解磷化氢在昆虫体内的代谢过程,对于储粮害虫的综合治理非常有益.本文在全国范围内采集了10个赤拟谷盗品系,生测结果表明,XD、CD、ZB和GD品系的抗性水平高于160倍,属于高抗性品系;QH和HK品系抗性水平次之;FX、CD、NX和TL抗性倍数小于5,属于敏感品系.测定细胞色素P450酶活性,结果表明,抗性品系酶活性显著高于敏感品系,且可被磷化氢诱导上调.在赤拟谷盗CYP345基因家族的6个基因中,CYP345A基因亚家族(CYP345A1、CYP345A2)在抗性品系中显著的过量表达,而其他4个基因没有过量表达.磷化氢处理后,CYP345A1和CYP345A2的表达水平被显著上调.利用RNA干扰技术成功调低了CYP345A1和CYP345A2的基因表达水平,结果分别造成了赤拟谷盗对磷化氢的敏感性提高.因此,细胞色素P450酶活性提高和CYP345A基因亚家族过量表达可导致赤拟谷盗对磷化氢产生抗性.研究结果对储粮害虫综合治理奠定基础.

摘要： 磷化氢是全世界范围内广泛应用的储粮熏蒸剂.近30年来,储粮害虫磷化氢抗药性问题日益严重.深入理解磷化氢在昆虫体内的代谢过程,对于储粮害虫的综合治理非常有益.本文在全国范围内采集了10个赤拟谷盗品系,生测结果表明,XD、CD、ZB和GD品系的抗性水平高于160倍,属于高抗性品系;QH和HK品系抗性水平次之;FX、CD、NX和TL抗性倍数小于5,属于敏感品系.测定细胞色素P450酶活性,结果表明,抗性品系酶活性显著高于敏感品系,且可被磷化氢诱导上调.在赤拟谷盗CYP345基因家族的6个基因中,CYP345A基因亚家族(CYP345A1、CYP345A2)在抗性品系中显著的过量表达,而其他4个基因没有过量表达.磷化氢处理后,CYP345A1和CYP345A2的表达水平被显著上调.利用RNA干扰技术成功调低了CYP345A1和CYP345A2的基因表达水平,结果分别造成了赤拟谷盗对磷化氢的敏感性提高.因此,细胞色素P450酶活性提高和CYP345A基因亚家族过量表达可导致赤拟谷盗对磷化氢产生抗性.研究结果对储粮害虫综合治理奠定基础.

摘要： 磷化氢是全世界范围内广泛应用的储粮熏蒸剂.近30年来,储粮害虫磷化氢抗药性问题日益严重.深入理解磷化氢在昆虫体内的代谢过程,对于储粮害虫的综合治理非常有益.本文在全国范围内采集了10个赤拟谷盗品系,生测结果表明,XD、CD、ZB和GD品系的抗性水平高于160倍,属于高抗性品系;QH和HK品系抗性水平次之;FX、CD、NX和TL抗性倍数小于5,属于敏感品系.测定细胞色素P450酶活性,结果表明,抗性品系酶活性显著高于敏感品系,且可被磷化氢诱导上调.在赤拟谷盗CYP345基因家族的6个基因中,CYP345A基因亚家族(CYP345A1、CYP345A2)在抗性品系中显著的过量表达,而其他4个基因没有过量表达.磷化氢处理后,CYP345A1和CYP345A2的表达水平被显著上调.利用RNA干扰技术成功调低了CYP345A1和CYP345A2的基因表达水平,结果分别造成了赤拟谷盗对磷化氢的敏感性提高.因此,细胞色素P450酶活性提高和CYP345A基因亚家族过量表达可导致赤拟谷盗对磷化氢产生抗性.研究结果对储粮害虫综合治理奠定基础.

摘要： 磷化氢是全世界范围内广泛应用的储粮熏蒸剂.近30年来,储粮害虫磷化氢抗药性问题日益严重.深入理解磷化氢在昆虫体内的代谢过程,对于储粮害虫的综合治理非常有益.本文在全国范围内采集了10个赤拟谷盗品系,生测结果表明,XD、CD、ZB和GD品系的抗性水平高于160倍,属于高抗性品系;QH和HK品系抗性水平次之;FX、CD、NX和TL抗性倍数小于5,属于敏感品系.测定细胞色素P450酶活性,结果表明,抗性品系酶活性显著高于敏感品系,且可被磷化氢诱导上调.在赤拟谷盗CYP345基因家族的6个基因中,CYP345A基因亚家族(CYP345A1、CYP345A2)在抗性品系中显著的过量表达,而其他4个基因没有过量表达.磷化氢处理后,CYP345A1和CYP345A2的表达水平被显著上调.利用RNA干扰技术成功调低了CYP345A1和CYP345A2的基因表达水平,结果分别造成了赤拟谷盗对磷化氢的敏感性提高.因此,细胞色素P450酶活性提高和CYP345A基因亚家族过量表达可导致赤拟谷盗对磷化氢产生抗性.研究结果对储粮害虫综合治理奠定基础.

摘要： 磷化氢是全世界范围内广泛应用的储粮熏蒸剂.近30年来,储粮害虫磷化氢抗药性问题日益严重.深入理解磷化氢在昆虫体内的代谢过程,对于储粮害虫的综合治理非常有益.本文在全国范围内采集了10个赤拟谷盗品系,生测结果表明,XD、CD、ZB和GD品系的抗性水平高于160倍,属于高抗性品系;QH和HK品系抗性水平次之;FX、CD、NX和TL抗性倍数小于5,属于敏感品系.测定细胞色素P450酶活性,结果表明,抗性品系酶活性显著高于敏感品系,且可被磷化氢诱导上调.在赤拟谷盗CYP345基因家族的6个基因中,CYP345A基因亚家族(CYP345A1、CYP345A2)在抗性品系中显著的过量表达,而其他4个基因没有过量表达.磷化氢处理后,CYP345A1和CYP345A2的表达水平被显著上调.利用RNA干扰技术成功调低了CYP345A1和CYP345A2的基因表达水平,结果分别造成了赤拟谷盗对磷化氢的敏感性提高.因此,细胞色素P450酶活性提高和CYP345A基因亚家族过量表达可导致赤拟谷盗对磷化氢产生抗性.研究结果对储粮害虫综合治理奠定基础.

摘要： 磷化氢是全世界范围内广泛应用的储粮熏蒸剂.近30年来,储粮害虫磷化氢抗药性问题日益严重.深入理解磷化氢在昆虫体内的代谢过程,对于储粮害虫的综合治理非常有益.本文在全国范围内采集了10个赤拟谷盗品系,生测结果表明,XD、CD、ZB和GD品系的抗性水平高于160倍,属于高抗性品系;QH和HK品系抗性水平次之;FX、CD、NX和TL抗性倍数小于5,属于敏感品系.测定细胞色素P450酶活性,结果表明,抗性品系酶活性显著高于敏感品系,且可被磷化氢诱导上调.在赤拟谷盗CYP345基因家族的6个基因中,CYP345A基因亚家族(CYP345A1、CYP345A2)在抗性品系中显著的过量表达,而其他4个基因没有过量表达.磷化氢处理后,CYP345A1和CYP345A2的表达水平被显著上调.利用RNA干扰技术成功调低了CYP345A1和CYP345A2的基因表达水平,结果分别造成了赤拟谷盗对磷化氢的敏感性提高.因此,细胞色素P450酶活性提高和CYP345A基因亚家族过量表达可导致赤拟谷盗对磷化氢产生抗性.研究结果对储粮害虫综合治理奠定基础.

摘要： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL)可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,并避免对正常细胞造成损伤,但由于TRAIL的多药耐药性,使得单独使用TRAIL用于肿瘤治疗难以取得满意的效果.有研究发现,采用RNA干扰技术调控特定的蛋白,可以增加TRAIL对肿瘤的敏感性.因此,将靶向特定蛋白的核酸药物siRNA和蛋白药物TRAIL联用,可能产生较好的协同抗肿瘤作用.但是siRNA和TRAIL的成药性均很差,必须采用合适的递送载体才能提高siRNA和TRAIL的有效利用率.而且需要注意的是,由于siRNA荷负电,作用靶点位于胞质,而TRAIL荷正电,作用靶点位于细胞膜,使得现有的siRNA或TRAIL载体都无法同时满足两药的共同包载和分靶递释的要求.

摘要： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL)可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,并避免对正常细胞造成损伤,但由于TRAIL的多药耐药性,使得单独使用TRAIL用于肿瘤治疗难以取得满意的效果.有研究发现,采用RNA干扰技术调控特定的蛋白,可以增加TRAIL对肿瘤的敏感性.因此,将靶向特定蛋白的核酸药物siRNA和蛋白药物TRAIL联用,可能产生较好的协同抗肿瘤作用.但是siRNA和TRAIL的成药性均很差,必须采用合适的递送载体才能提高siRNA和TRAIL的有效利用率.而且需要注意的是,由于siRNA荷负电,作用靶点位于胞质,而TRAIL荷正电,作用靶点位于细胞膜,使得现有的siRNA或TRAIL载体都无法同时满足两药的共同包载和分靶递释的要求.

摘要： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL)可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,并避免对正常细胞造成损伤,但由于TRAIL的多药耐药性,使得单独使用TRAIL用于肿瘤治疗难以取得满意的效果.有研究发现,采用RNA干扰技术调控特定的蛋白,可以增加TRAIL对肿瘤的敏感性.因此,将靶向特定蛋白的核酸药物siRNA和蛋白药物TRAIL联用,可能产生较好的协同抗肿瘤作用.但是siRNA和TRAIL的成药性均很差,必须采用合适的递送载体才能提高siRNA和TRAIL的有效利用率.而且需要注意的是,由于siRNA荷负电,作用靶点位于胞质,而TRAIL荷正电,作用靶点位于细胞膜,使得现有的siRNA或TRAIL载体都无法同时满足两药的共同包载和分靶递释的要求.

摘要： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL)可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,并避免对正常细胞造成损伤,但由于TRAIL的多药耐药性,使得单独使用TRAIL用于肿瘤治疗难以取得满意的效果.有研究发现,采用RNA干扰技术调控特定的蛋白,可以增加TRAIL对肿瘤的敏感性.因此,将靶向特定蛋白的核酸药物siRNA和蛋白药物TRAIL联用,可能产生较好的协同抗肿瘤作用.但是siRNA和TRAIL的成药性均很差,必须采用合适的递送载体才能提高siRNA和TRAIL的有效利用率.而且需要注意的是,由于siRNA荷负电,作用靶点位于胞质,而TRAIL荷正电,作用靶点位于细胞膜,使得现有的siRNA或TRAIL载体都无法同时满足两药的共同包载和分靶递释的要求.

摘要： 本发明公开了一种烟粉虱致死基因及其应用、RNA干扰剂及RNA干扰剂的制备方法和应用。烟粉虱致死基因为Alpha‑glucosidase。RNA干扰剂为包含根据Alpha‑glucosidase基因片段合成的dsRNA。其制备方法包括引物设计、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳分离、dsRNA合成等步骤。本发明的烟粉虱致死基因与α‑葡萄糖苷酶的活性相关，根据烟粉虱致死基因设计的RNA干扰剂可抑制α‑葡萄糖苷酶的活性，从而降低烟粉虱水解葡萄糖的能力，最终导致烟粉虱死亡，且同时能对其传播的病毒病进行有效控制。应用于农业中对烟粉虱的去除，及降低病毒病的发生，具有特异性，对哺乳动物以及天敌昆虫无害，见效快、致死率高、对环境无污染等优势。

摘要： 本发明公开了一种用调控植物结瘤固氮能力的RNA干扰载体，包括骨架载体和发夹结构，所述发夹结构利用SEQ ID NO：2所示的基因片段构建，将基因片段插入到pTCK303载体的限制性内切酶KpnI/Spe I和BamH I/Sac I酶切识别位点之间，得到重组RNA干扰载体。使所得RNA干扰载体转化受体植物，沉默受体植物中的对应基因，使受体植物的根组织具有增强的结瘤固氮能力。利用本发明构建的RNA干扰载体转化受体大豆植株获得转基因植物，能够显著提高大豆的结瘤固氮能力，对提高大豆产量具有重大的意义。

摘要： 本发明涉及靶向CCP22(complement control protein 22，CCP22)的干扰性RNA(interfering RNA)、含有该干扰性RNA的药物组合物及其医药用途。

摘要： 本发明提供了靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用。

摘要： 本发明公开了一种人黑色素瘤细胞相关的长非编码RNA的RNA干扰靶点RNA及用途，具体提供了人黑色素瘤细胞相关的长非编码RNA的RNA干扰靶点RNA(RNA interference，RNAi)，干扰靶点的短发夹RNA(short-hairpin RNA，shRNA)、shRNA编码的小分子干扰RNA(small interference RNA，siRNA)、编码shRNA的正义链DNA及反义链DNA、编码shRNA的重组质粒，以及它们在制备治疗黑色素瘤疾病药物中的用途。

摘要： 本发明公开了一种烟粉虱致死基因及其应用、RNA干扰剂及RNA干扰剂的制备方法和应用。烟粉虱致死基因为Alpha‑glucosidase。RNA干扰剂为包含根据Alpha‑glucosidase基因片段合成的dsRNA。其制备方法包括引物设计、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳分离、dsRNA合成等步骤。本发明的烟粉虱致死基因与α‑葡萄糖苷酶的活性相关，根据烟粉虱致死基因设计的RNA干扰剂可抑制α‑葡萄糖苷酶的活性，从而降低烟粉虱水解葡萄糖的能力，最终导致烟粉虱死亡，且同时能对其传播的病毒病进行有效控制。应用于农业中对烟粉虱的去除，及降低病毒病的发生，具有特异性，对哺乳动物以及天敌昆虫无害，见效快、致死率高、对环境无污染等优势。

摘要： 制备小干扰RNA(siRNA)表达系统文库，以生产通过诱导靶基因RNA表达产物降解来沉默靶基因的siRNA的方法，包括：(i)从细胞群中分离一种或多种靶基因的RNA；(ii)从分离的RNA产生RNA片段；(iii)将RNA片段转化为dsDNA片段；和(iv)将dsDNA片段克隆到载体中以形成克隆的载体，每个载体包含一个或多个启动子和能够接受至少一个dsDNA片段插入的至少一个限制性酶位点，使得可以产生siRNA。也提供了从siRNA表达系统产生siRNA的方法以及通过使用从siRNA表达系统产生的siRNA识别用于治疗的功能性靶基因和识别RNAi治疗剂的方法。

摘要： 本发明公开了一种用调控植物结瘤固氮能力的RNA干扰载体，包括骨架载体和发夹结构，所述发夹结构利用SEQ ID NO：2所示的基因片段构建，将基因片段插入到pTCK303载体的限制性内切酶KpnI/Spe I和BamH I/Sac I酶切识别位点之间，得到重组RNA干扰载体。使所得RNA干扰载体转化受体植物，沉默受体植物中的对应基因，使受体植物的根组织具有增强的结瘤固氮能力。利用本发明构建的RNA干扰载体转化受体大豆植株获得转基因植物，能够显著提高大豆的结瘤固氮能力，对提高大豆产量具有重大的意义。

摘要： 本发明涉及靶向CCP22(complement control protein 22，CCP22)的干扰性RNA(interfering RNA)、含有该干扰性RNA的药物组合物及其医药用途。

摘要： 本发明提供了靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用。