肝癌干细胞

摘要： 背景:肝癌干细胞是导致癌细胞形成、更新和增殖的原因,寻找针对肝癌干细胞治疗的关键靶点,并进一步拓展肝癌综合治疗手段是重要研究课题。目的:观察β-catenin基因沉默后CD133+HepG2细胞干性转录因子变化,探讨β-catenin调控肝癌干细胞干性的作用机制。方法:采用免疫磁珠筛选CD133+HepG2细胞,然后经干细胞培养基诱导、扩增方案获得CD133+HepG2肝癌干细胞,流式细胞术鉴定CD133+HepG2细胞阳性率,RNA干扰技术构建沉默β-catenin基因表达的β-catenin-shRNA慢病毒质粒,转染CD133+HepG2肝癌干细胞72 h,荧光标记并评估转染效率。确认β-catenin沉默后,平板克隆形成实验观察CD133+HepG2肝癌干细胞增殖情况,流式细胞术检测CD133+HepG2肝癌干细胞的细胞周期,qRT-PCR和Western blot检测干性转录因子SOX2,NANOG,OCT4的mRNA及蛋白表达水平。结果与结论:与空白对照组和病毒空载组相比,病毒干扰组的细胞克隆形成能力明显降低,G_(0)/G_(1)期细胞百分比明显增多,S期和G_(2)/M期细胞百分比降低,NANOG、SOX2、OCT4的蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.05),提示下调β-catenin表达可能对抑制肝癌干细胞的干性水平具有潜在作用。

摘要： 目的探讨鳖甲煎丸对肝癌干细胞的抑制作用及潜在调控机制。方法免疫磁珠法分选CD133^(+)肝癌干细胞;流式细胞术检测细胞CD133表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;全细胞转录组学分析mRNA表达变化;Kaplan-Meier Plotter数据库评估mRNA表达与肝癌患者预后的相关性。结果与肝癌细胞比较,肝癌干细胞中CD133^(+)细胞所占比例增高;肝癌干细胞的增殖和侵袭能力提高;鳖甲煎丸含药血清干预后,肝癌干细胞的增殖能力受到抑制,WNT1、GBP1、CTNNB1、STBM、PRICKLE1和JNK表达降低;WNT1、GBP1、PRICKLE1高表达组的肝癌患者总生存期明显短于低表达组。结论鳖甲煎丸抑制肝癌干细胞增殖,可能与其下调Wnt信号通路分子的表达水平有关。

摘要： 目的通过肝癌干细胞(LCSCs)进行文献计量学分析,探索近10年LCSCs领域的研究热点和研究趋势。方法基于Web of Science核心数据库,通过CiteSpace和VOSviewer对2011—2020年发表文章的年度分布、国家、机构、作者、期刊、被引情况和关键词等进行可视化分析,并对关键词的词频、中心性和聚类情况进行探讨。结果2011—2020年LCSCs相关文献发表量为1000篇,LCSCs相关文献发文量总体呈增长趋势;发文量前5位的国家分别是中国、美国、日本、韩国和意大利;发文量前5位的研究机构分别是第二军医大学、中山大学、复旦大学、香港大学和上海交通大学;发文量前5位的作者分别是Stephanie Ma、Taro Yamashita、Jia Fan、Hongyang Wang和Shuichi Kaneko;发文量前5位的期刊分别是Oncotarget、Hepatology、Cancer letters、PLoS One和Scientific Reports;被引文献中,Taro等2009年发表的“EpCAM-positive hepatocellular carcinoma cells are tumor-initiating cells with stem/progenitor cell features”被引频次最高;LCSCs鉴定的干性标志物的研究,调控LCSCs的转录因子、长链非编码RNA、微小RNAs、癌基因和信号通路的研究等是LCSCs领域研究的热点;LCSCs干性研究-靶向LCSCs治疗研究-LCSCs生物学机制研究是LCSCs的研究趋势,靶向LCSCs的抑制剂研究是LCSCs的重点研究方向。结论调控LCSCs的基因和信号通路的研究是LCSCs领域的研究热点,靶向LCSCs的药物研究是LCSCs领域的重点研究方向。

摘要： 目的:探究Ras蛋白特异性的鸟苷酸释放因子1(Ras protein specific guanylate releasing factor 1,Ras-GRF1)在肝癌干细胞(cancer stem cells,CSC)生物学特性及自我更新中的作用,并初步探究其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人正常肝细胞系(HL-7702)和不同肝癌细胞系(Huh7、HepG2、Hep3B、CLC4、CLCl3、SMMC-7721)中Ras-GRF1表达水平;流式细胞术分选出肝癌干细胞,利用Ras-GRF1-pCMV6-GFP重组慢病毒感染肝癌干细胞,MTT法、EdU染色和平板克隆形成实验检测过表达Ras-GRF1对肝癌干细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞迁移与侵袭变化;成球实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞的自我更新能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测肿瘤干细胞中Hippo信号通路关键蛋白大肿瘤抑制因子(large tumor suppressor,LATS)、Yes协同蛋白(Yes cooperative protein,YAP)和哺乳动物STE20样蛋白激酶(mammalian STE20-like protein kinase,MST)的蛋白及磷酸化表达水平。结果:不同肝癌细胞中Ras-GRF1 mRNA表达量较人正常肝细胞中显著降低(P<0.05);分离到的肝癌干细胞在感染Ras-GRF1-pC MV6-GFP重组慢病毒后,细胞中RasGRF1 mRNA表达量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);在两种肝癌干细胞HepG 2-CSC和SMMC-7721-CSC中,相较于空白对照组,Ras-GRF1-pC MV6组细胞增殖活性显著降低,EdU阳性染色数目和细胞克隆形成数目均显著减少,细胞迁移与侵袭数目也均显著减少,细胞成球能力明显降低,p-LATS/LATS、pYAP/YAP及p-MST/MST蛋白表达显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过慢病毒介导Ras-GRF1在肝癌干细胞中过表达后,能够抑制肝癌干细胞的增殖、迁移与侵袭,降低自我更新能力,其机制可能与调控Hippo信号通路相关。

摘要： 目的观察肝癌干细胞外泌体对肝癌细胞增殖和耐药性的影响。方法流荧光细胞技术筛选人肝癌细胞株MHCC97干细胞,超速离心提取干细胞外泌体。MTT和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感程度,实时荧光定量RT-PCR和Western Blot检测细胞增殖和耐药相关基因和蛋白表达水平。结果实验肝癌细胞各时间点OD值要明显高于对照组和普通组(P<0.05)。实验组肝癌细胞对5-氟尿嘧啶和阿霉素的半数抑制浓度明显高于对照组和普通组(P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果显示:实验组肝癌干细胞外泌体中survivin、c-myc、ras、ABCG2、MDR-1、MRP-1基因mRNA和蛋白的表达均较对照组的普通肝癌细胞明显增强,而P53和PTEN的表达则较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌干细胞外泌体能促进肝癌细胞的增殖,诱导肝癌细胞对化疗药物的耐药,其机制可能通过调控细胞增殖和耐药相关基因蛋白表达来实现。

摘要： 背景:癌症起源于干细胞的恶性转化越来越得到普遍认同。肝癌干细胞具有不断自我更新与多向分化潜能,可促进肝癌的发生发展、术后复发和耐药性的产生。目的:探讨中药复方制剂敷和备化方对CD133^+肝癌干细胞增殖及干性转录因子表达的影响。方法:采用免疫磁珠法分选出CD133^+HepG2肝癌干细胞,分别用2%,4%,8%,10%,12%,16%6个不同体积分数中药复方制剂敷和备化方含药血清干预CD133^+HepG2肝癌干细胞,通过CCK-8法检测细胞增殖抑制作用,筛选出最佳体积分数含药血清。然后将CD133^+HepG2肝癌干细胞分为二甲基亚砜组、敷和备化方组、血清对照组、空白对照组,其中二甲基亚砜组用0.05%二甲基亚砜干预,敷和备化方组用体积分数为16%敷和备化方含药血清干预,血清对照组用体积分数为16%正常大鼠血清干预,干预6 d后采用流式细胞术检测CD133^+HepG2肝癌干细胞百分比,RT-PCR以及Western blot检测干细胞转录因子SOX2、NANOG和OCT4的mRNA以及蛋白表达。结果与结论:①中药复方制剂敷和备化方含药血清对CD133^+HepG2细胞增殖有抑制作用,且与时间、体积分数相关,其中体积分数为16%敷和备化方含药血清干预72 h抑制作用最明显(P<0.05);②与血清对照组和空白对照组相比,敷和备化方组和二甲基亚砜组都可降低CD133^+HepG2细胞百分比(P<0.05),且敷和备化方组作用更明显;③与空白对照组和血清对照组相比,敷和备化方组和二甲基亚砜组都可下调干细胞转录因子SOX2、NANOG、OCT4 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且敷和备化方组作用更明显;④结果表明,中药复方制剂敷和备化方含药血清能有效降低肝癌干细胞表面标记物CD133和干细胞转录因子SOX2、NANOG、OCT4的表达水平,降低肝癌干细胞恶性程度。

摘要： 目的 观察肝癌干细胞外泌体对肝癌细胞增殖和耐药性的影响.方法 流荧光细胞技术筛选人肝癌细胞株MHCC97干细胞,超速离心提取干细胞外泌体.MTT和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感程度,实时荧光定量RT-PCR和Western Blot检测细胞增殖和耐药相关基因和蛋白表达水平.结果 实验肝癌细胞各时间点OD值要明显高于对照组和普通组(P<0.05).实验组肝癌细胞对5-氟尿嘧啶和阿霉素的半数抑制浓度明显高于对照组和普通组(P<0.05).RT-PCR和Western blot结果显示:实验组肝癌干细胞外泌体中survivin、c-myc、ras、ABCG2、MDR-1、MRP-1基因mRNA和蛋白的表达均较对照组的普通肝癌细胞明显增强,而P53和PTEN的表达则较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 肝癌干细胞外泌体能促进肝癌细胞的增殖,诱导肝癌细胞对化疗药物的耐药,其机制可能通过调控细胞增殖和耐药相关基因蛋白表达来实现.

摘要： 背景:癌症起源于干细胞的恶性转化越来越得到普遍认同.肝癌干细胞具有不断自我更新与多向分化潜能,可促进肝癌的发生发展、术后复发和耐药性的产生.目的:探讨中药复方制剂敷和备化方对CD133+肝癌干细胞增殖及干性转录因子表达的影响.方法:采用免疫磁珠法分选出CD133+HepG2肝癌干细胞,分别用2％,4％,8％,10％,12％,16％6个不同体积分数中药复方制剂敷和备化方含药血清干预CD133+ HepG2肝癌干细胞,通过CCK-8法检测细胞增殖抑制作用,筛选出最佳体积分数含药血清.然后将CD133+HepG2肝癌干细胞分为二甲基亚砜组、敷和备化方组、血清对照组、空白对照组,其中二甲基亚砜组用0.05％二甲基亚砜干预,敷和备化方组用体积分数为16％敷和备化方含药血清干预,血清对照组用体积分数为16％正常大鼠血清干预,干预6d后采用流式细胞术检测CD133+HepG2肝癌干细胞百分比,RT-PCR以及Western blot检测干细胞转录因子SOX2、NANOG和OCT4的mRNA以及蛋白表达.结果 与结论:①中药复方制剂敷和备化方含药血清对CD133+HepG2细胞增殖有抑制作用,且与时间、体积分数相关,其中体积分数为16％敷和备化方含药血清干预72 h抑制作用最明显(P＜0.05);②与血清对照组和空白对照组相比,敷和备化方组和二甲基亚砜组都可降低CD133+HepG2细胞百分比(P＜0.05),且敷和备化方组作用更明显;⑨与空白对照组和血清对照组相比,敷和备化方组和二甲基亚砜组都可下调干细胞转录因子SOX2、NANOG、OCT4 mRNA和蛋白表达(P＜0.05),且敷和备化方组作用更明显;④结果表明,中药复方制剂敷和备化方含药血清能有效降低肝癌干细胞表面标记物CD133和干细胞转录因子SOX2、NANOG、OCT4的表达水平,降低肝癌干细胞恶性程度.

摘要： 原发性肝癌是一种发生在肝脏的侵袭性肿瘤,具有极易发生转移和复发的特点.原发性肝癌主要包括肝细胞癌、肝内胆管癌、混合肝细胞胆管癌和纤维板层型肝细胞癌等.目前,手术切除、放射性和化学治疗仍是肝癌治疗的主要手段,但其特异性差、临床效果有限,肝癌患者5年总生存率仅为18％.肝癌干细胞是存在于肝癌组织中特定的细胞亚群,具有自我更新能力和强致瘤性,驱动肝癌起始、转移、耐药和复发.因此,肝癌干细胞分子标志物的鉴定及其干性维持机制的阐明,不仅能够揭示肝癌发病的分子机理,也为肝癌的分子分型、预后评估和靶向治疗奠定了理论基础.最新研究表明,5-氟尿嘧啶与CD13抑制剂联合使用,能够抑制CD13+肝癌干细胞的增殖,从而减少肿瘤体积.因此,肝癌干细胞是非常有前景的治疗靶标.文中将从分子标志物、干性维持机制及靶向治疗方面总结肝癌干细胞的最新进展.

摘要： 目的 观察重组肿瘤抑素T42肽对人肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)体外血管生成及小鼠体内荷瘤能力的影响.方法 培养人肝癌细胞系SMMC-7721,免疫磁珠法提取富集CD133+(Cluster of Differentiation 133)肝癌干细胞LCSCs;构建稳定表达的LCSCs-Luc细胞系;人工合成T42肽.将LCSCs分为对照组、T42肽处理组和5-氟尿嘧啶组.体外血管形成实验检测3组LCSCs处理24 h后的成血管能力;建立免疫缺陷小鼠(中国科学院动物研究所)移植瘤模型(n=9),小动物活体成像检测成瘤能力;将9只成瘤小鼠分为3组(n=3),隔日注射生理盐水、T42肽(40 mmol/L)和5-氟尿嘧啶(40 mmol/L),共注射7次,14 d后小动物活体成像检测3组小鼠的治疗作用.并记录瘤体体积变化.两组间比较予以t检验,不符合正态分布的予以单因素方差分析.结果 与对照组比较,T42肽、5-氟尿嘧啶处理组LCSCs的体外血管生成数[(3.51±1.64)、(4.53±2.17)个]显著低于对照组[(11.50±2.07)个],差异有统计学意义(t=11.112、8.978,P＜0.05).T42肽、5-氟尿嘧啶处理4周后,小鼠LCSCs异位荷瘤的瘤体的光子通量[(1.53±0.35)×106光子/s/cm2、(1.87±0.31)×106光子/s/cm2]显著低于对照组[(4.23±0.15)×106光子/s/cm2],差异有统计学意义(t=12.213、12.004,P＜0.05).结论 T42肽对LCSCs的体外血管生成能力及动物体内成瘤能力均有较强的抑制作用.

摘要： 大量研究表明,肝癌干细胞(Liver cancer stem cells,LCSCs)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的发生、发展、复发及转移过程中发挥重要作用.因此,深入研究LCSCs被认为是探索HCC侵袭转移原因,制定防治策略的一条新思路.现有的临床治疗措施包括化疗、放疗虽然对普通HCC细胞具有杀伤作用,但对LCSCs却不能发挥作用,手术切除HCC肿块后LCSCs仍然可以分化、增殖甚至迁移到别处产生转移瘤.因此,针对LCSCs的各种靶向治疗的探索是突破HCC治疗瓶颈的必由之路.针对LCSCs的生物学特性,靶向LCSCs的HCC治疗策略包括:抑制LCSCs增殖、诱导凋亡;诱导LCSCs分化,提高放化疗的敏感性;破坏LCSCs赖以生存的微环境等.

摘要： @@自从90年代起，肝细胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)己成为中国第二位致死性肿瘤。HCC的外科治疗和围手术期管理已有了很大的进步和提高。

摘要： @@肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内最常见、恶性程度最高的肿瘤之一。近20年来,虽然HCC的诊断及治疗已经取得了很大进展,但由于其病程进展快,很多病人发现时手术已难以切除,且HCC对放疗、化疗不敏感,因此其预后未能得到根本改变,肝癌治疗仍是世界性难题,临床迫切需要寻找新的治疗方案。

摘要： 本发明提供了一种诱导成体肝干细胞转化为高转移肝癌细胞的方法及以此方法筛选出的稳定肝癌细胞，方法包括如下步骤：S1：对大鼠成体肝干细胞进行扩增、培养并保存；S2：采用基因转染技术将含有Notch1基因的慢病毒载体转入大鼠成体肝干细胞，获得稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞；S3：利用稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞，采用选择性条件培养法进行培养，使其在体外进一步分化，筛选出致瘤能力强及稳定的肝癌细胞；S4：采用筛选出的肝癌细胞，通过同种属的原位肝脏移植瘤模型，可在肝脏形成肝癌，并伴自发形成双肺转移瘤，从而获得高转移肝癌细胞。采用本发明的方法筛选出的稳定肝癌细胞成瘤时间短、致瘤性好、具有肺转移能力。

摘要： 本发明提出了试剂在制备药物中的用途，所述药物用于治疗肝癌，所述试剂用于抑制MCM7蛋白的表达。MCM7蛋白参与肝癌肿瘤干细胞自我更新的调控，通过抑制MCM7蛋白的表达，可以抑制肝癌肿瘤干细胞的自我更新，起到治疗肝癌的目的。

摘要： 本发明提供了一种诱导成体肝干细胞转化为高转移肝癌细胞的方法及以此方法筛选出的稳定肝癌细胞，方法包括如下步骤：S1：对大鼠成体肝干细胞进行扩增、培养并保存；S2：采用基因转染技术将含有Notch1基因的慢病毒载体转入大鼠成体肝干细胞，获得稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞；S3：利用稳定过表达Notch1的大鼠成体肝干细胞，采用选择性条件培养法进行培养，使其在体外进一步分化，筛选出致瘤能力强及稳定的肝癌细胞；S4：采用筛选出的肝癌细胞，通过同种属的原位肝脏移植瘤模型，可在肝脏形成肝癌，并伴自发形成双肺转移瘤，从而获得高转移肝癌细胞。采用本发明的方法筛选出的稳定肝癌细胞成瘤时间短、致瘤性好、具有肺转移能力。

摘要： 本发明提供了一种研究GNL3与肝癌发展的相关性的方法，通过所述方法能够获取GNL3与肝脏肿瘤干细胞、肝癌发展的相关性，为进一步研究GNL3的作用机制提供基础，以便后续基于GNL3制备治疗肝癌的药物，促进肿瘤诊断、治疗领域的发展。还能验证GNL3作为肝脏肿瘤干细胞的特异性标志物，方便从肿瘤干细胞层面应用GNL3以制定靶向肝脏肿瘤干细胞的治疗方法或药物，突破现有治疗方案所受的复发、转移、耐药性制约，提高治疗效果。同时，基于GNL3作为一种标志物，本发明还提供了一种检测GNL3的产品在制备诊断肝癌、预测肝癌治疗预后情况、检测肝脏肿瘤干细胞的工具中的应用和GNL3基因在制备治疗肝癌的药物中的应用。

摘要： 本发明属于肝干细胞恶性转化技术领域，公开了一种正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法，所述诱导方法包括在正常肝干细胞中同时失调四种转录因子联合诱导出肝癌干细胞的步骤；所述四种转录因子分别为TG737、miR10b、miR200a和CD44。本发明通过沉默TG737、过表达MiR‑10b、沉默miR‑200a和过表达CD44，实现了将正常肝干细胞向肝癌干细胞的恶性转化，从而利用本发明的诱导方法可以为肝癌的研究提供实验模型，利于肝癌疾病的研究。

摘要： 本发明涉及特异性结合肝癌干细胞的抗体及其在制备肝癌检测试剂盒中的用途，该抗体不仅与人正常细胞等无交叉反应，还具有较好的特异性，可广泛应用于人肝癌的定性、定量诊断，以及在检测以及流行病调查均具有较大的应用前景。

摘要： 本发明属于肝干细胞恶性转化技术领域，公开了一种正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法，所述诱导方法包括在正常肝干细胞中同时失调四种转录因子联合诱导出肝癌干细胞的步骤；所述四种转录因子分别为TG737、miR10b、miR200a和CD44。本发明通过沉默TG737、过表达MiR‑10b、沉默miR‑200a和过表达CD44，实现了将正常肝干细胞向肝癌干细胞的恶性转化，从而利用本发明的诱导方法可以为肝癌的研究提供实验模型，利于肝癌疾病的研究。

摘要： 本发明提供一种包含安卓幸醇(Antrocinol；(3aS,4R,6aS,10aR)‑4‑(羟甲基)‑7,7‑二甲基十氢‑1H‑萘酚[1,8a‑c]呋喃‑1‑酮)的组合物用于制备抑制肝癌细胞或肝癌干细胞生长的药物的用途，其中该组合物包含有效剂量的安卓幸醇。

摘要： 本发明提供了H基因或其表达产物在制备抑制肝癌细胞和肝癌干细胞耐药能力的药物中的应用。本发明的研究证明H基因或其表达产物是肝癌干细胞的标志物，H表达阳性的肝癌细胞具有侵袭能力强、自我更新能力强、耐药性强的干细胞特性。H基因敲降、使用抑制H基因表达的小分子抑制剂以及抑制H基因功能的功能性抗体可抑制H表达阳性的肝癌细胞的侵袭能力、自我更新能力以及耐药能力。根据以上研究成果，本发明提供了H表达阳性的肝癌干细胞的广泛应用。

摘要： 本发明公开了一种诱导肝癌细胞向肝癌干细胞转化的方法，包括以下步骤：将获得单细胞状态的人肝癌细胞，加入培养基中，制成细胞悬液；将细胞悬液滴加到多孔纤维素支架上，待细胞悬液渗入到多孔纤维素支架内部，置于细胞培养箱中培养贴附，然后再加入培养基置于细胞培养箱中培养数日，得到三维培养细胞；通过使用Western Blot、定量PCR、流式细胞术和IHC检测三维培养细胞中的肝癌干细胞标志分子EpCAM、OCT4、CD44和CD133表达情况的变化和（或）显微镜观察，检测转化的肝癌干细胞。本发明还公开了肝癌干细胞及其应用。本发明获得的肝癌干细胞具有耐药性。