融合表达

摘要： 为构建新型表面活性肽的表达载体,并探讨其在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化,将编码新型活性肽A_(6)K的重复DNA片段(A_(6)K)_(15)分别插入到4中不同的原核表达载体中,经酶切和测序验证后,转化到3种不同的表达宿主进行表达,通过改变异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度、诱导温度和时间来优化表达条件。表达产物通过镍-次氮基三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)螯合层析进行纯化,通过(A_(6)K)_(15)上的6×His与抗体特异性结合进行Western blot分析,用二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测定产物浓度,进行经济效益分析。构建了含有目的基因(A_(6)K)_(15)的重组表达质粒,筛选出最优载体pET-28a-SUMO-(A_(6)K)_(15)和最优宿主BL21(DE3)。当IPTG终浓度为1.0 mmol/mL,诱导温度为30°C,时间为12 h时,表面活性肽(A_(6)K)_(15)的表达量最高,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定含有此新型小分子多肽(A_(6)K)_(15)。该研究成功构建了新型表面活性肽(A_(6)K)_(15)表达载体,并得到其最优表达条件,使其大量表达及纯化,为生物方法制备新型表面活性肽提供了思路。

摘要： [目的]:提高重组猪表皮生长因子(pEGF)的表达量和纯化量,为后续研究pEGF对仔猪生长发育的影响奠定基础。[方法]:将人工合成的pEGF基因克隆至pEGF4T-1载体,转化至大肠杆菌Rossetta(DE3)中,得到重组菌株Rossetta(DE3)-pGEX-pEGF,IPTG诱导表达,进行表达条件的优化,用GST-tag亲和层析纯化方法进行纯化。[结果]:pEGF基因大小为159 bp,融合表达蛋白分子量为32k Da,最佳诱导表达条件为IPTG浓度0.01mmol/L、诱导温度15°C和诱导时间24h。流穿液和洗涤液中目的蛋白含量极少,洗脱液得到了高纯度的GST-pEGF融合蛋白,纯化较为成功。[结论]:成功构建了pEGF表达菌株,得到了最优的诱导表达条件和最优的纯化工艺,为pEGF相关产品的开发以及应用奠定了基础。

摘要： 为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌Rv3403c、CFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PCR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-Rv3403c-CFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示:通过SDSPAGE和Western blot鉴定分析,成功表达并纯化出包涵体蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性;以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示,本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明,成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法,为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。

摘要： 噬菌体展示技术作为目前应用广泛的展示抗体技术,逐渐成为生产基因工程抗体的重要工具。噬菌体展示技术是以噬菌体或噬菌粒为载体,通过将外源多肽基因整合到噬菌体基因中,以融合表达的形式将外源蛋白展示在噬菌体表面的分子生物学技术。近年来,噬菌体展示技术在抗体筛选领域的应用越来越广泛,与传统制备抗体的方法相比,噬菌体展示技术具有通量高、成本低、操作简单等特点,且通过该技术筛选得到的抗体不仅可在标签蛋白的辅助下进行选择和纯化,还可通过基因测序的方法得到单链抗体的完整基因序列。笔者首先对噬菌体抗体库进行分类,根据抗体的来源将噬菌体抗体库分为天然抗体库和免疫抗体库,通过免疫动物制备的抗体文库的特异性、抗体阳性率明显高于天然抗体文库;其次简述了噬菌体抗体库的构建流程,其中噬菌体表达载体的选择是展示技术的关键,整合了噬菌粒基因的辅助噬菌体侵染其特异性菌株,从而通过抗生素平板对该系统进行选择性筛选;最后讨论了噬菌体展示技术在疾病防控领域应用的研究进展,抗体的首次人源化使同源性抗体在临床上应用成为可能,后续用于预防和治疗病毒性疾病的动物同源性抗体的研发进一步证明了噬菌体展示技术用于生产诊断或潜在治疗试剂的能力。该综述主要聚焦于噬菌体展示系统的构建及其在疾病防控领域的应用,以期对后续通过噬菌体展示技术筛选单链抗体的应用提供指导。

摘要： 扩张蛋白(Expansin)具有削弱细胞壁多糖之间氢键,增强多糖降解酶降解多糖的效率。在食品领域、生物能源领域和生物制药领域,具有广泛的应用价值。自然状态下,Expansin蛋白在植物、真菌、细菌等生物中的表达量较少,目前,枯草芽孢杆菌Expansin重组表达研究受到广泛关注。以来源于构巢曲霉的果胶酸裂解酶(PelA)为融合标签,构建高效表达融合蛋白PelA-Expansin的工程菌newexpansin/pelA-pET-28a(+)/BL21(DE3),在OD_(600)为0.4、0.01 mmol/L IPTG、15°C和150 r/min下,表达24 h,融合蛋白产量约为3.0 mg/mL。建立融合蛋白一次性His-tag亲和纯化工艺,工艺中上样、清洗和洗脱缓冲液中咪唑浓度分别为30、60和500 mmol/L,目标蛋白纯度约为95%,得率约为75%;融合蛋白协同纤维素酶、木聚糖酶和果胶酸水解酶酶降解多糖的效率分别为300%、150%和125%;为扩张蛋白Expansin在食品、能源、医药及农业等领域的应用奠定了基础。

摘要： 通过将乙醛脱氢酶2(acetaldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)与NusA-tag融合表达,以获得能够在大肠杆菌中可溶性表达并且具有较好活性的重组蛋白。首先,根据Aldh2的基因序列设计引物,引入EcoRI和XhoI的酶切位点,聚合酶链式反应扩增出Aldh2基因片段,连接到pMD19-T-simple载体,并转化到大肠杆菌DH5α菌株。测序正确后,双酶切处理,将Aldh2基因片段克隆到表达载体pET44b(+)上NusA-tag下游的EcoRI和XhoI酶切位点之间,得到pET44b(+)-NusA-Aldh2重组载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达的融合蛋白具有良好的溶解性,主要存在于上清液中。融合蛋白的最优表达条件为IPTG浓度0.25 mmol/L、诱导温度37°C、诱导时间3 h。重组蛋白的最适反应温度为37°C,在pH 7.0时达到最好的催化效果。不同金属离子如Ca^(2+)、K^(+)、Na^(+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)都对酶有激活作用,且Mg^(2+)效果最好,最佳的酶活性为1.64 U/mL。而野生型ALDH2在大肠杆菌中表达时完全以无活性的包涵体形式存在,复性后得到的酶活性为1.43 U/mL。本研究通过引入NusA进行融合表达,实现了ALDH2在大肠杆菌中的可溶性表达,且重组蛋白的活性优于包涵体复性蛋白。这些结果表明利用NusA进行融合表达是制备重组ALDH2的一个良好方法。

摘要： 本文对江苏手工艺非遗品牌视觉形象设计发展现状进行综合分析,结合市场与案例实践设计,重视设计中的民族性与时代性,提升设计中的文化性与内涵性,使之成为兼具文化价值和商业价值的视觉符号。符合当代大众审美的优质品牌视觉形象设计,是手工艺非遗在当代得以展示传播和广泛使用的重要途径。

摘要： 目的:构建具有绿色荧光蛋白(copGFP)和嘌呤霉素抗性基因(PuroR)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体,检测其嘌呤霉素抗性和绿色荧光蛋白表达的特性。方法:从pCDH-CMV-MCS-copGFP载体中扩增copGFP编码区DNA序列,从pLKO.1载体中扩增Puro^(R)编码区DNA序列,运用重组PCR方法,扩增copGFP与Puro^(R)基因融合编码序列并克隆至经BamHⅠ+SalⅠ双酶切的pCDH-CMV-MCS-copGFP载体片段中,构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体;载体的融合标签序列进行测序确证;将该载体用辅助包装质粒PLP1、PLP2、VSVG在293T细胞中包装成慢病毒后感染肝癌细胞MHCC97H,检测感染细胞对嘌呤霉素的抵抗作用以及绿色荧光蛋白的表达情况;为验证该载体表达外源目的基因的有效性,将Sp1编码区DNA序列插入该载体中包装成慢病毒,用对照及表达Sp1的慢病毒感染肝癌细胞MHCC97H,感染细胞经1 mg/ml嘌呤霉素筛选7 d后获得稳定感染细胞株,提取稳定感染细胞的总RNA及总蛋白,分别运用RT-qPCR和Western blot方法检测Sp1在对照及表达Sp1的慢病毒感染的肝癌MHCC97H细胞中的mRNA和蛋白表达水平的差异。结果:成功构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体;该载体与辅助质粒包装出的慢病毒感染肝癌细胞后,感染细胞同时具有嘌呤霉素抗性和表达绿色荧光蛋白特性;将Sp1编码序列插入该载体,包装慢病毒并肝癌细胞,Sp1的mRNA水平对照细胞相比分别升高3.3倍,蛋白水平升高2.2倍(P<0.01)。结论:成功构建含copGFP和Puro^(R)融合表达双筛选标记的慢病毒过表达载体,该载体编码的融合双标记基因具有嘌呤霉素抗性和绿色荧光蛋白表达的特性,可高水平表达长片段的目的基因。

摘要： 旨在克隆Marc-145细胞蛋白激酶R(PKR)基因,对其进行遗传特性及表达研究。利用RT-PCR克隆获得Marc-145细胞PKR基因,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性与遗传进化分析;将该基因分别插入pEGFP-C1与pEGFP-N1多克隆位点,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合真核重组质粒,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察、Western blot检测EGFP标签,开展PKR融合表达研究。结果显示,成功克隆获得Marc-145细胞PKR基因,编码区为1653 bp,推导编码550个氨基酸,与选取的灵长类及哺乳动物参考物种PKR基因核苷酸序列同源性在72.2%~99.8%之间,氨基酸序列同源性在55.4%~99.5%之间,与豚鼠及其供体物种非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)同源性分别为最低、最高;成功构建了EGFP-PKR融合质粒,但荧光蛋白观察及Western blot检测表明,仅C端融合质粒成功表达。结果表明,成功克隆了Marc-145细胞PKR基因并进行了融合表达,为进一步开展猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在感染细胞与细胞内复制增殖时PKR所发挥的作用、PRRSV与细胞固有免疫抗病毒互作机制等研究奠定了基础。

摘要： 目的 建立免疫学快速检测动物制品中的环丙沙星、恩诺沙星、磺胺二甲嘧啶残留,制备融合表达蛋白并进行评价.方法 利用传统单克隆抗体制备方法分别制备环丙沙星、恩诺沙星、磺胺二甲嘧啶的单克隆抗体,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得3种单抗的单链抗体(single-chain variable fragment,Sc-Fv),再通过套嵌PCR方法,使用柔性氨基酸Linker将已获得的单链抗体进行串联并通过分子生物学技术获得高效融合表达,以纯化的多联融合单链抗体为探针,结合前期技术建立的免疫学快速检测技术,对融合表达产物的抗原特性进行初步的分析.结果 制备的单克隆抗体抗原抗体反应性良好,效价较高,融合表达抗体蛋白能够很好的与3种相应药物反应.结论 本研究初步建立了特异性较高的3种药物的融合表达抗体的制备方法,且该抗体具有良好的反应原性.

摘要： 将不同纤维素酶基因融合并实现共表达,以提高纤维素的降解效率.本研究从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中扩增得到两个纤维素酶基因Cel042和Cel22,将其分别重组入大肠杆菌表达载体pET32a(+),构建出重组质粒pET32a-Cel042、pET32a-Cel22.利用柔性接头GSGGGS,通过T克隆将两纤维素酶基因融合后,插入pET32a(+)构建出重组表达载体pET32a-Cel042-Cel22.将三种重组子分别转化大肠杆菌Escherichia eoliBL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE结果表明表达的蛋白大小分别为74kDa、44kDa、101kDa,与理论值吻合.酶活测定结果显示三种重组体表达的纤维素酶活力分别为29.98U/mL、20.87U/mL和57.62U/mL.酶学性质研究表明融合后的双纤维素酶Eg8c反应的最适温度为50°C,最适pH为6.0;纯化后的酶在pH4～8之间保持75％以上活性.温度在40～70°C之间,可维持70％酶活效力.Mn2+对该酶有较强激活作用,而Hg2+和乙二胺四乙酸(EDTA)则抑制作用明显.不同纤维素酶的融合表达形式,为研究新的纤维素降解途径奠定了基础.

摘要： 对鸡堆型艾美耳球虫相关抗原基因ADF和3-1E进行重组克隆及共表达研究,为研制鸡球虫重组疫苗奠定基础.应用重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将鸡堆型艾美耳球虫ADF基因和3-1E基因重组构建ADF-3-1E融合基因,将融合基因插入到pET-32a(+)载体中,构建pET-32a(+)-ADF-3-1E共表达载体,转化Rosetta(DE3)宿主菌中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western Blotting鉴定.构建了pET-32a(+)-AD-F-3-1E共表达载体,实现了鸡堆型艾美耳球虫多抗原基因的融合表达.

摘要： 目的:利用原核表达系统融合表达人胰岛素样生长因子-1(Human insulin-like growth factor-1,hIGF-1),并进行纯化及鉴定。方法:根据大肠杆菌密码子偏好性设计并合成WGF-1基因,克隆至PET48b载体构建重组原核表达质粒,经PCR及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性菌落进行IPTG诱导,经SDS-PAGE分析表达量及表达形式;表达产物经Ni2+-亲和层析进行纯化,SDS-PAGE法检测纯度,非干扰型蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度;纯化产物经肠激酶酶切,并经Western blot鉴定。结果:重组表达质粒pET48b-Trx A-hIGF-1构建正确;融合蛋白主要以可溶形式表达,相对分子质量约为26000,相对表达量约为40％,经亲和层析纯度不低于90％,浓度为0.5 mg/ml;经肠激酶切割可见相对分子质量约为8000的hIGF-1目的条带,Western blot分析可见预期的特异性免疫印迹条带。结论:已成功构建并表达了hIGF-1融合蛋白,为其生物学活性研究及规模化生产奠定基础。

摘要： 为了获得ALV-J SU和兔IgG Fc的融合蛋白，研究病毒与宿主的相互作用，本研究用PCR方法扩增出SUJ-IgG Fc基因，并克隆至pFastBacl质粒，构建转移载体pFastBacl-SUJ-IgG Fc；再将其转化DH10BacTM感受态细胞，获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-SUJ-IgG Fc；最后转染sf9细胞，获得重组病毒rBacmid-SUJ-IgG Fc。免疫荧光试验结果显示，重组杆状病毒表达的融合蛋白可被ALV-J单抗JE9以及羊抗兔IgG所识别。Western-blot结果显示，表达的融合蛋白与ALV-J单抗JE9以及羊抗兔IgG都有很好的反应性，其分子量大小约为95 ku。该融合蛋白的表达为鸡细胞表面ALV-J受体的研究提供了有力工具。

摘要： 目的：构建pEGFP-NDPK B真核表达载体，预测NDPK B蛋白的三维结构和活性位点，研究NDPKB表达对细胞生长活性的影响。方法：将目的基因NDPKB连接到pEGFP-N1真核表达载体，转染Vero细胞，通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和Western blot分析，鉴定构建的pEGFP-NDPK B真核表达载体的正确性；利用生物信息学工具分析预测NDPK B蛋白的三维结构和可能存在的活性位点；MTT实验检测NDPKB对细胞生长活性的影响。结果：pEGFP-NDPK B真核表达载体构建成功，在Vero细胞中NDPK B和GFP蛋白能有效地融合表达。在线预测了：NDPK B蛋白的三维结构和可能存在的活性位点。MTT实验结果表明，NDPK B对Vero细胞生长活性的抑制率为25.8%，对A549细胞生长活性的抑制率为22.7%。结论：NDPKB能够抑制细胞的生长，对细胞的凋亡具有正调节作用。

摘要： 用天然毒素蛋白杀灭害虫是农林病虫害防治的一个重要发展方向。利用家蚕核型多角体病毒（BmNPV）多 角体蛋白基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因（BmK ITa1）融合表达，经SDS-PAGE分析表明，通过融合表达策略构 建的含有蝎毒素蛋白基因的重组病毒具有较高的蝎毒素蛋白表达水平。以家蚕和棉铃虫为供试昆虫，探讨蝎毒素蛋 白的杀虫效果，结果表明：经口添食含重组病毒表达的蝎毒素蛋白的BmN细胞液对不同龄期家蚕幼虫均具有毒性，尤其对低龄幼虫的毒性较强，蚁蚕添食后的死亡率达80%;给1 龄期的家蚕和棉铃虫幼虫经口添食含有不同剂量重 组蛋白的细胞破碎液，当添食剂量在2.8 μg/头时，家蚕的死亡率即达100%，棉铃虫的死亡率达74%。研究结果提示：BmNPV多角体蛋白编码基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因融合表达，可提高蝎毒素蛋白的表达水平，且重组病毒表 达的蝎毒素蛋白具有较好的杀虫活性，在较低剂量下即可对低龄昆虫产生良好的杀灭效果。

摘要： 目的：1.以人骨髓MSC和口腔鳞癌细胞株为研究对象，研究MSC对口腔鳞癌细胞的生物学特性是否产生影响;2.体外观察MSC与口腔鳞癌细胞株是否会发生自发融合现象，并在PEG作用下获得二者融合后的融合细胞;3.初步研究融合细胞在口腔鳞癌发生发展中的作用及可能的调控通路。rn 方法：采用MTT法、胶原Ⅰ法和Transwell小室实验等技术研究MSC对口腔鳞癌细胞株增殖、粘附和迁移等生物学特性的影响，并研究MSCCM作用下口腔鳞癌细胞株PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化;2.采用Cell Tracker Green CMFDA对MSC细胞进行绿色荧光标记，采用电转染法将mCherry质粒DNA转染至SCC-25细胞株，观察两组细胞的自发融合现象以及在PHA, PEG作用下的相互融合现象;3采用免疫荧光法检测融合细胞中Phalloidin和p-catenin蛋白的表达，采用Western Blot法检测E-cadeherin, Vimentin蛋白的表达量，采用流式细胞术检测EpCAM, CD90的表达量，并观测融合细胞的细胞周期、粘附、迁移等生物学特性变化及PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化情况。rn 结果：1.成功建立MSC与SCC-25的作用模型，研究发现MSCCM可促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移活性，其影响或许是通过PI3KJAKT，Stat3信号通路发挥作用的，2.成功获得荧光标记的MSC与mCherry SCC-25，两者混合时可以观察到其自发融合现象，PEG可促进MSC与mCherry SCC-25的融合;3.融合细胞可共表达MSC与SCC-25的标记物，融合细胞处于增殖活跃状态的细胞比例更高，可见异倍体、多倍体细胞存在，融合细胞的增殖、粘附能力明显大于SCC-25，迁移能力强于SCC-25，PI3K/AKT, Stat3信号通路尚未见明显变化。rn 结论：综上所述，MSC可以促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移特性，MSC与SCC-25可以发生细胞融合，融合细胞具有促进癌细胞增殖、粘附及迁移特性的能力。

摘要： 目的：1.以人骨髓MSC和口腔鳞癌细胞株为研究对象，研究MSC对口腔鳞癌细胞的生物学特性是否产生影响;2.体外观察MSC与口腔鳞癌细胞株是否会发生自发融合现象，并在PEG作用下获得二者融合后的融合细胞;3.初步研究融合细胞在口腔鳞癌发生发展中的作用及可能的调控通路。rn 方法：采用MTT法、胶原Ⅰ法和Transwell小室实验等技术研究MSC对口腔鳞癌细胞株增殖、粘附和迁移等生物学特性的影响，并研究MSCCM作用下口腔鳞癌细胞株PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化;2.采用Cell Tracker Green CMFDA对MSC细胞进行绿色荧光标记，采用电转染法将mCherry质粒DNA转染至SCC-25细胞株，观察两组细胞的自发融合现象以及在PHA, PEG作用下的相互融合现象;3采用免疫荧光法检测融合细胞中Phalloidin和p-catenin蛋白的表达，采用Western Blot法检测E-cadeherin, Vimentin蛋白的表达量，采用流式细胞术检测EpCAM, CD90的表达量，并观测融合细胞的细胞周期、粘附、迁移等生物学特性变化及PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化情况。rn 结果：1.成功建立MSC与SCC-25的作用模型，研究发现MSCCM可促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移活性，其影响或许是通过PI3KJAKT，Stat3信号通路发挥作用的，2.成功获得荧光标记的MSC与mCherry SCC-25，两者混合时可以观察到其自发融合现象，PEG可促进MSC与mCherry SCC-25的融合;3.融合细胞可共表达MSC与SCC-25的标记物，融合细胞处于增殖活跃状态的细胞比例更高，可见异倍体、多倍体细胞存在，融合细胞的增殖、粘附能力明显大于SCC-25，迁移能力强于SCC-25，PI3K/AKT, Stat3信号通路尚未见明显变化。rn 结论：综上所述，MSC可以促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移特性，MSC与SCC-25可以发生细胞融合，融合细胞具有促进癌细胞增殖、粘附及迁移特性的能力。

摘要： 目的：1.以人骨髓MSC和口腔鳞癌细胞株为研究对象，研究MSC对口腔鳞癌细胞的生物学特性是否产生影响;2.体外观察MSC与口腔鳞癌细胞株是否会发生自发融合现象，并在PEG作用下获得二者融合后的融合细胞;3.初步研究融合细胞在口腔鳞癌发生发展中的作用及可能的调控通路。rn 方法：采用MTT法、胶原Ⅰ法和Transwell小室实验等技术研究MSC对口腔鳞癌细胞株增殖、粘附和迁移等生物学特性的影响，并研究MSCCM作用下口腔鳞癌细胞株PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化;2.采用Cell Tracker Green CMFDA对MSC细胞进行绿色荧光标记，采用电转染法将mCherry质粒DNA转染至SCC-25细胞株，观察两组细胞的自发融合现象以及在PHA, PEG作用下的相互融合现象;3采用免疫荧光法检测融合细胞中Phalloidin和p-catenin蛋白的表达，采用Western Blot法检测E-cadeherin, Vimentin蛋白的表达量，采用流式细胞术检测EpCAM, CD90的表达量，并观测融合细胞的细胞周期、粘附、迁移等生物学特性变化及PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化情况。rn 结果：1.成功建立MSC与SCC-25的作用模型，研究发现MSCCM可促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移活性，其影响或许是通过PI3KJAKT，Stat3信号通路发挥作用的，2.成功获得荧光标记的MSC与mCherry SCC-25，两者混合时可以观察到其自发融合现象，PEG可促进MSC与mCherry SCC-25的融合;3.融合细胞可共表达MSC与SCC-25的标记物，融合细胞处于增殖活跃状态的细胞比例更高，可见异倍体、多倍体细胞存在，融合细胞的增殖、粘附能力明显大于SCC-25，迁移能力强于SCC-25，PI3K/AKT, Stat3信号通路尚未见明显变化。rn 结论：综上所述，MSC可以促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移特性，MSC与SCC-25可以发生细胞融合，融合细胞具有促进癌细胞增殖、粘附及迁移特性的能力。

摘要： 目的：1.以人骨髓MSC和口腔鳞癌细胞株为研究对象，研究MSC对口腔鳞癌细胞的生物学特性是否产生影响;2.体外观察MSC与口腔鳞癌细胞株是否会发生自发融合现象，并在PEG作用下获得二者融合后的融合细胞;3.初步研究融合细胞在口腔鳞癌发生发展中的作用及可能的调控通路。rn 方法：采用MTT法、胶原Ⅰ法和Transwell小室实验等技术研究MSC对口腔鳞癌细胞株增殖、粘附和迁移等生物学特性的影响，并研究MSCCM作用下口腔鳞癌细胞株PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化;2.采用Cell Tracker Green CMFDA对MSC细胞进行绿色荧光标记，采用电转染法将mCherry质粒DNA转染至SCC-25细胞株，观察两组细胞的自发融合现象以及在PHA, PEG作用下的相互融合现象;3采用免疫荧光法检测融合细胞中Phalloidin和p-catenin蛋白的表达，采用Western Blot法检测E-cadeherin, Vimentin蛋白的表达量，采用流式细胞术检测EpCAM, CD90的表达量，并观测融合细胞的细胞周期、粘附、迁移等生物学特性变化及PI3K/AKT和STAT3信号通路的表达变化情况。rn 结果：1.成功建立MSC与SCC-25的作用模型，研究发现MSCCM可促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移活性，其影响或许是通过PI3KJAKT，Stat3信号通路发挥作用的，2.成功获得荧光标记的MSC与mCherry SCC-25，两者混合时可以观察到其自发融合现象，PEG可促进MSC与mCherry SCC-25的融合;3.融合细胞可共表达MSC与SCC-25的标记物，融合细胞处于增殖活跃状态的细胞比例更高，可见异倍体、多倍体细胞存在，融合细胞的增殖、粘附能力明显大于SCC-25，迁移能力强于SCC-25，PI3K/AKT, Stat3信号通路尚未见明显变化。rn 结论：综上所述，MSC可以促进SCC-25细胞株的增殖、粘附及迁移特性，MSC与SCC-25可以发生细胞融合，融合细胞具有促进癌细胞增殖、粘附及迁移特性的能力。

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明公开了一种RXFP1融合蛋白、表达该RXFP1融合蛋白的细胞及其在测定Relaxin‑2活性中的应用，通过柔性连接肽将EGFP荧光标签和RXFP1受体蛋白连接，所述柔性连接肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示。本发明还涉及表达上述RXFP1融合蛋白的细胞，通过上述细胞可以检测Relaxin‑2的生物活性，其灵敏度高，特异性好，可操作性强，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。

摘要： 本发明为检测融合基因MLL/CBP的表达情况及融合型别的寡核苷酸及应用。先采用含有三种型别引物的多重引物荧光PCR进行初检。若出现阳性，再用特异性引物荧光PCR进行具体型别鉴定，这样即降低了初检成本，又提高了检测通量。本发明所述试剂盒特异性好，灵敏度高，通量大，适用于大批量样本检测。对于白血病诊断、调整治疗方案、评价治疗效果、预测预后、预防临床复发都具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种连接肽，所述的连接肽具有如下的氨基酸序列：X－Arg－Y－Asp－Asp－Asp－Asp－Lys。本发明还公开了一种含有所述连接肽以及目的多肽的融合多肽。本发明还提供了一种制备目的多肽的方法。本发明所述的连接肽在与目的多肽串联形成融合多肽后，可被肠激酶、Kex2酶和羧肽酶B三种酶酶切，从而形成不带有任何连接肽序列的目的多肽。

摘要： 本发明公开了一种融合基因及其制备方法、融合基因表达载体及其构建方法、融合基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。该融合基因，将蛋白转导域TAT连接入利尿多肽HKI序列，借助TAT的高效跨膜转运作用，使HKI快速地穿过食道系统内膜进入体内位点，确保HKI在体内运送过程中稳定发挥作用，使棉铃虫过度排泄死亡。本发明融合基因表达载体，将融合基因构建于植物表达载体pB Ⅰ 121中，由35S启动子驱动表达，在植株内高效表达，棉铃虫取食本发明融合基因表达载体遗传转化的转基因植株后3龄棉铃虫幼虫体重增幅明显减少，死亡率高。本发明融合基因工程菌，浸染待发芽植株，实现融合基因遗传转化植株，培育出转基因抗虫植株。

摘要： 本发明公开了一种RXFP1融合蛋白、表达该RXFP1融合蛋白的细胞及其在测定Relaxin‑2活性中的应用，通过柔性连接肽将EGFP荧光标签和RXFP1受体蛋白连接，所述柔性连接肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示。本发明还涉及表达上述RXFP1融合蛋白的细胞，通过上述细胞可以检测Relaxin‑2的生物活性，其灵敏度高，特异性好，可操作性强，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种表达重组神经营养因子融合蛋白的方法、重组神经营养因子融合蛋白及其应用，属于功能蛋白技术领域。本发明通过构建高表达载体，使用细胞表达系统，筛选高表达细胞株，获得了高生物学活性、二聚体GDNF/BDNF重组蛋白，解决了市面上重组GDNF/BDNF表达量低、价格昂贵、生物学活性低等缺点。获得的GDNF/BDNF对于后续神经生长和发育等方面的基础研究与临床级细胞培养具有非常重要的意义。

摘要： 本发明提供一种含干扰素α的融合蛋白，该融合蛋白由以下模块依次串联得到：猪血清白蛋白rpoALB、冠状病毒nsp5切割位点nsp5 site、干扰素α融合蛋白IFNα依次串联构成；本发明还提供表达所述融合蛋白的重组菌株以及上述融合蛋白的制备方法。本发明的rpoALB‑nsp5 site‑IFNα融合蛋白，抗病毒活性高，半衰期长，可以降低感染病毒后仔猪的发病率和死亡率。

摘要： 本发明公开了利用SUMO融合表达系统制备重组肝素酶II的方法及其所制备的肝素酶II，该制备方法包括下列步骤：选择来自肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)的肝素酶II序列，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，共772aa；去除信号肽序列，获得肝素酶II的DNA序列，如SEQIDNo.2；将所述肝素酶II的DNA序列插入带有N端SUMO蛋白标签的pSMART载体质粒；将正确的质粒转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆，获得融合蛋白；用SUMO蛋白酶将SUMO标签蛋白从融合蛋白上切割下来，即获得肝素酶II。本发明的优点是：提高目标蛋白质的可溶性、促进目标蛋白质的正确折叠，避免形成包涵体；降低纯化成本、提高纯化效率；SUMO蛋白标签分子量较小，对肝素酶II的酶活性影响较小，获得纯化的肝素酶II。