牛分枝杆菌

摘要： 目的采用基因分型方法对30株分离自西北三省的牛源分枝杆菌分离株进行鉴定。方法从西北三省的规模化奶牛场采集结核菌素(PPD)阳性奶牛的咽拭子和鼻拭子,经分离培养后,采用16S rRNA、MPT64以及多位点PCR进行菌株分型鉴定,利用数目可变串联重复序列分析(variable-number of tandem repeats,VNTR)和分枝杆菌散在分布重复单元(Mycobacterial interspersed repetitive unit,MIRU)连用的方法对其基因型进行了分析。结果菌株分型鉴定结果表明,30株牛源临床分离株全部为分枝杆菌属,其中,12株属于结核分枝杆菌复合群,18株属于非结核分枝杆菌;12株结核分枝杆菌中10株为牛分枝杆菌,2株为人型结核分枝杆菌。MIRU-VNTR分析结果表明,12株结核分枝杆菌呈现10种VNTR基因型,4株聚集为2个基因簇。结论30株分离株均属于分枝杆菌属,且结核分枝杆菌中以牛分枝杆菌为主。

摘要： 为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌Rv3403c、CFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PCR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-Rv3403c-CFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示:通过SDSPAGE和Western blot鉴定分析,成功表达并纯化出包涵体蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性;以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示,本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明,成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法,为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。

摘要： 为探究高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌(M. bovis)抗体的可行性,对该方法的特异性、灵敏性、稳定性及临床适用性进行了分析。特异性试验结果显示,该方法能够检出M. bovis抗体阳性血清参考品,而对布鲁氏菌阳性血清、O型口蹄疫阳性血清、A型口蹄疫阳性血清、样品稀释液、结核菌素皮内变态反应(TST)阴性牛血清样品等均为阴性;灵敏性试验结果显示,该方法最低可检测到3 200倍稀释的牛结核(bTB)强阳性血清参考品;稳定性试验结果显示,该方法检测bTB强阳性血清和阳性血清的变异系数分别为5.48%和5.83%;临床样本检测结果显示,该方法与IDEXX M bovis ELISA抗体检测试剂盒的符合率为86.36%,具有较高的一致性,且差异不显著。以上结果表明,高敏荧光免疫层析分析法特异性强、灵敏度高、结果可靠,可作为TST检疫的补充抗体检测方法,用于bTB的诊断、检疫和净化。

摘要： [目的]利用原核表达系统对牛分枝杆菌Mb0950c蛋白进行表达和纯化,通过小鼠模型评价其免疫原性,建立血清学间接ELISA方法用于牛结核病的临床检测.[方法]构建pET32a-Mb0950c原核表达质粒,并转化至BL21(DE3)中诱导蛋白的表达,对蛋白进行纯化.使用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、ELISA等对该蛋白在小鼠中的免疫原性进行分析.建立基于Mb0950c的间接ELISA方法,评价该方法的临床检测潜力.[结果]SDS-PAGE和Western blotting结果显示,成功获得了可溶性Mb0950c蛋白,且具有良好免疫反应性;FCM结果显示,Mb0950c蛋白上调了T细胞表面CD69分子的表达.细胞因子和抗体结果表明,该蛋白能够诱导特异性的IFN-y和IL-4的分泌,同时能诱导机体分泌特异性的抗体,且以IgG1型为主.建立了ELISA检测方法应用于牛结核临床检测,结果显示,该方法与牛结核外周血IFN-γ外释放试验和皮试试验结果的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为65.7％、97.9％和72.4％.[结论]在原核表达系统中可溶性表达Mb0950c蛋白,它在小鼠模型中诱导Th1和Th2型免疫应答,基于此蛋白建立了牛结核病血清学检测的间接ELISA方法.

摘要： 为了解我国新疆地区牛分枝杆菌的毒力基因变异情况并初步评估其毒力变化,利用聚合酶链式反应(PCR)检测临床分离的66株牛分枝杆菌的29个毒力基因,经Sanger测序后与标准株AF2122/97和本实验室保存的两株牛分枝杆菌(M.bovis C68004和M.bovis N)进行序列比对,对基因突变情况进行统计,分析基因突变对其编码蛋白功能和结构的影响.结果 表明:1)临床分离株与本实验室保存的高毒力菌株M.bovis N毒力基因突变位点具有很高的相似性,在检测的29个毒力基因中,50％以上临床分离株与M.bovis N共有25个基因序列一致;2)临床分离株广泛存在的Mb2958、Mb2982C和Mb1553C基因突变PROVEAN评分均低于-2.5,可能改变其编码的酶催化活性,进而影响细胞壁脂类合成;3)Mb0607、Mb0609、Mb0606、Mb2979C和Mb1214基因突变分别造成哺乳动物细胞入侵蛋白、甲基转移酶和酰基转移酶蛋白二级结构改变,或许对细菌的胞内生存产生影响.综上,本研究筛选出8个关键毒力基因,这些基因的突变可能在新疆地区牛分枝杆菌流行菌株的毒力变化中发挥重要作用;同时,本研究揭示了关键毒力基因的突变特征,为进一步研究牛分枝杆菌遗传多样性及进化规律奠定了基础.

摘要： 为研究牛分枝杆菌N和C68004菌株间蛋白水平的差异表达对其致病性的影响,本试验采用串联质谱标记(TMT)定量蛋白组学技术,对2个菌株的毒力及其致病性进行鉴定与分析。结果分析得到2174个共有蛋白,其中有479个差异表达蛋白(P<0.05)。GO分析结果显示,表达差异显著蛋白的功能包括催化、结合、运输、转录调控以及分子结构相关作用,特别是对内部或外部刺激产生的反应。KEGG分析结果显示,表达差异显著蛋白主要参与代谢和生物过程的调节。导致N菌致病性增强的毒力基因可能是mmaA 4、ecce 1、IpqY、hspX、Mpb 63和mmpl 4。并且N菌的耐药基因rpoA、rpoB和rpoC表达量显著高于C68004,可以推断N菌对抗结核一线药物利福平的耐药性可能比C68004更强。随着临床用药频繁和免疫应答的改变,N菌在适应环境过程中,与代谢、DNA复制以及耐药相关的蛋白表达出现了差异。

摘要： 为研究牛分枝杆菌N和C68004菌株间蛋白水平的差异表达对其致病性的影响,本试验采用串联质谱标记(TMT)定量蛋白组学技术,对2个菌株的毒力及其致病性进行鉴定与分析.结果分析得到2 174个共有蛋白,其中有479个差异表达蛋白(P＜0.05).GO分析结果显示,表达差异显著蛋白的功能包括催化、结合、运输、转录调控以及分子结构相关作用,特别是对内部或外部刺激产生的反应.KEGG分析结果显示,表达差异显著蛋白主要参与代谢和生物过程的调节.导致N菌致病性增强的毒力基因可能是mmaA4、ecce1、IpqY、hspX、Mpb63和mmpl4.并且N菌的耐药基因rpoA、rpoB和rpoC表达量显著高于C68004,可以推断N菌对抗结核一线药物利福平的耐药性可能比C68004更强.随着临床用药频繁和免疫应答的改变,N菌在适应环境过程中,与代谢、DNA复制以及耐药相关的蛋白表达出现了差异.

摘要： 牛结核病属于养牛业发展过程中的重点防控传染性疫病,一旦养牛场发病,就会造成养牛业的巨大经济损失,同时还会影响到社会的稳定以及人们的生命财产安全.目前,我国针对牛结核病的防控还存在一定的不足之处,由于其属于人畜共患病,人类感染后临床症状和结核分枝杆菌类似,因此牛结核病的净化成为公共卫生安全问题.

摘要： 为了研究牛防御素5 (BNBD5)微球对卡介苗(BCG)免疫小鼠的影响,在表达纯化获得目的 蛋白BNBD5后,制备包封BNBD5重组蛋白的聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)纳米微球,并进行动物试验.用BCG对BALB/c小鼠免疫后,再用BNBD5纳米微粒对小鼠进行滴鼻,通过ELISA方法检测小鼠血清中细胞因子和抗体的变化,发现BNBD5-PLGA微球能够显著提高促炎因子IL-β (P ＜0.001)和TNF-α(P＜0.001)以及抗体IgA(P ＜0.001)产生;再用牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)滴鼻感染小鼠,发现BNBD5-PLGA组临床症状和病理变化有所减轻.表明重组蛋白牛防御素5微球能刺激小鼠产生较高的非特异性细胞因子以及黏膜免疫抗体IgA水平,对黏膜免疫具有促进作用.

摘要： 牛结核病作为一种人畜共患传染病,表现为慢性消耗性症状,可对养牛业以及公共卫生安全造成极其严重的危害.牛结核病在世界范围内传播流行,主要由牛分枝杆菌引起,作为曾经的OIE B类传染性动物疫病,在世界范围内受到高度重视.MTB的耐药性检测方法在不断的发展，越来越多的先进方法代替了传统方法。传统的药敏试验所需时间长，生长依赖性较强，且各检测方法之间存在很差的可比性。这就使得其应用受到一定的限制。随着对分枝杆菌分子遗传学的不断研究，与耐药性相关的分子机制和主要基因更加清晰，在此基础上，耐药性检测的各种创新方法也相继得到完善。

摘要： 目的：研究AIM2对STING-TBK1-IFR3信号通路的影响以及对STING-TBK1介导的自噬体成熟过程中的调控作用的影响。rn 方法：本实验通过AIM2基因敲除的巨噬细胞，检测牛分枝杆菌感染巨噬细胞后，AIM2受体对STING的转位，STING对TBK1的招募，IRF3的核转位，干扰素诱导基因的表达，以及自噬标志物LC3的变化等。rn 结果：牛分枝杆菌诱导的AIM2炎症复合体下调鼠源巨噬细胞的自噬水平，而且这种对自噬的影响只与炎症复合体的受体AIM2相关，与炎症复合体的其他成分ASC和caspase-1的活化无关；AIM2干扰后影响牛分枝杆菌感染巨噬细胞后STING的转位以及TBK-1和IRF3的磷酸化；AIM2同时影响牛分枝杆菌和STING以及TBK-1的共定位，这些都表明AIM2对巨噬细胞感染牛分枝杆菌后STING-TBK-1信号通路具有下调作用。检测AIM2基因敲除后感染牛分枝杆菌巨噬细胞Ⅰ型干扰素的表达上调，也表明了AIM2对STING相关信号通路的抑制作用。另外，本研究还发现外源性的鼠源IFN-β可以增强巨噬细胞的自噬水平，其具体的作用机制尚不明确。rn 结论：通过上述的实验研究，阐明了宿主巨噬细胞在受到结核杆菌感染后，AIM2受体除了形成炎症复合体之外的调控机体天然免疫的新型机制。也为阐明结核杆菌进入巨噬细胞后诱导的STING相关信号转导的分子机制奠定了基础。

摘要： 牛分枝杆菌(mycobacterium bovis)是分枝杆菌复合物成员,感染牛、人、獾猪、长颈鹿等多种动物.牛分枝杆菌在人与动物之间的相互传播严重威胁了公共安全,也为防控增加了难度.炎症复合体作为天然免疫的重要组成部分,在机体防御牛分枝杆菌感染过程中发挥至关重要的作用.研究表明,牛分枝杆菌可激活AIM2炎症复合体,分泌的ESAT-6激活NLRP3炎症复合体,释放促炎因子,如IL-1β,抑制该菌的生长.炎症复合体的激活需要两步：信号1诱导IL-1β前体等蛋白的表达（称为致敏），信号2激活caspase-1加工IL-1β前体成为活性形式。钾离子外流、新蛋白质的合成和去泛素化显著抑制感染牛分枝杆菌的THP-1细胞分泌IL-1β，同时抑制IL-1β前体在胞浆内的蓄积，表明这三种因素可能通过抑制致敏参与炎症复合体激活的调控。IL-1β的分泌受到的抑制作用比IL-1β前体的蓄积更加敏感，在较低浓度即表现出明显抑制作用。

摘要： 牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis,Mb)成功侵入巨噬细胞并在其胞内存活是其致病机制中的重要环节.因此,解析与细胞入侵相关的蛋白的功能将有助于控制牛结核病.牛分枝杆菌Mb1514基因编码一种推定侵入蛋白(本研究将其命名MbINV 蛋白),但其确切功能尚不明确.本研究旨在对该基因进行原核表达,并初步解析其功能.对Mb1514基因进行了原核表达并通过RAW264.7细胞初步解析了该蛋白的功能。Western blotting结果显示，该蛋白具有反应原性，提示该蛋白在诊断抗原的制备和亚单位疫苗的研发上具有潜在应用价值。细胞毒性实验结果表明该蛋白可以抑制巨噬细胞活性并导致细胞坏死，提示该基因与毒力相关。重组蛋白能够上调巨噬细胞促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和NOS2的mRNA表达水平，且具有细胞侵入功能，提示该蛋白与牛分枝杆菌的致病力相关，在调节机体免疫过程中发挥着重要作用。至于其具体的作用机制还有待深入研究。

摘要： 牛分枝杆菌是引起牛结核病的主要病原.机体感染牛分枝杆菌时,巨噬细胞是吞噬分枝杆菌的主要宿主细胞,但是在此过程中中性粒细胞也发挥着重要的作用.中性粒细胞,又称多形核白细胞,是组成动物机体的第一道防御线的有效成分,在机体受到感染时,中性粒细胞是最先游走到感染部位的细胞成分.在感染部位,通过释放一系列的抗菌分子来达到杀菌的目的.最近的研究表明,中性粒细胞不仅仅在对抗细胞外细菌感染时发挥杀伤作用,而且在对抗胞内细胞感染时也能起到一定的控制作用.激活后的中性粒细胞可以杀伤细菌并且通过分泌一系列的抗炎的细胞因子、趋化因子和其他的颗粒物质来招募单核细胞、T细胞和树突状细胞等达到炎区从而启动机体的固有免疫反应和适应性免疫反应.还有证据表明在某些条件下,中性粒细胞也会表达MHCⅡ、 B7-Ⅰ类分子、CD80和CD86等分子,从而起到抗原递呈的作用.rn 对结核菌长期的研究中,都将巨噬细胞作为研究的主要对象,与巨噬细胞相比,对中性粒细胞的研究相对较少而且也并不深入.体内的中性粒细胞是否能够完全杀灭结核菌主要依赖于组织的微环境、感染的阶段、感染个体和感染菌株的性质.尽管在以人和鼠为感染对象的结核感染模型中有报道,但是现有的文献关于中性粒细胞是否能够杀死结核分枝杆菌的数据并不一致,且迄今为止的研究报道中和研究数据中,尚无牛中性粒细胞和牛分枝杆菌的相互作用的相关数据.本研究通过中性粒细胞体外感染牛分枝杆菌模型来模拟结核菌感染入侵机体的最初阶段,检测了牛分枝杆菌对牛中性粒细胞的功能改变如表型变化、凋亡率以及炎性因子等的调节效应,以期对中性粒细胞参与机体的抗结核防御机制的作用提供全面详细的报道.

摘要： 牛结核是由牛分枝杆菌感染引起的疾病,对养牛业乃至人类健康均产生很大的影响.为了研究整个转录组表达的差异,使用AgilentTM公司的牛基因表达谱芯片来研究整个过程中转录组的变化.分别探讨了结核阳性牛的巨噬细胞与结核阴性牛的巨噬细胞的表达谱差异,以及两种感染状态的巨噬细胞在体外牛分枝杆菌攻毒时发生的表达谱改变.在较高的感染复数(MOI等于10)下,观察了巨噬细胞在体外感染前后的基因表达变化,发现体外感染导致整个转录组数千个基因的表达发生改变,也有某些功能不同程度的异常.比如CSF3、CSF2和CCL20这三个基因的表达量变化很大,观察到巨噬细胞的经典激活但是IL12的表达又不高.结核阳性牛和结核阴性牛的巨噬细胞的表达谱之间有较小的差异,不如已报道的使用外周血单个核细胞获得的结果表现出的差异那么大.具体表现在KLK12、PRSS2 等基因的变化,以及一个以SPARC 基因为中心的细胞外基质的基因网络.而且也发现,结核阴性牛的巨噬细胞在感染牛分枝杆菌后,其基因变化的倍数普遍高于结核阳性牛的倍数,表明健康牛的巨噬细胞对攻毒的反应更大,而结核阳性牛巨噬细胞再次感染牛分枝杆菌,其反应弱,防御能力差.

摘要： 本研究主要揭示了AIM2炎症复合体在牛分枝杆菌诱导小鼠巨噬细胞释放IL-1β的过程中所发挥的作用，证明了牛分枝杆菌通过激活AIM2炎症复合体引起小鼠巨噬细胞分泌IL-1β，并且这是由牛分枝杆菌由吞噬小体进人到细胞质中所引起的，本研究为机体固有免疫系统抵抗结核杆菌感染的机制提供了一定的理论基础。

摘要： 根据Genbank中牛分枝杆菌的基因序列，设计合成一对扩增CFP．10基因完整ORF的特异性引物，以pET32a(+)为载体构建重组表达载体CFP-10／pET32a(+)。重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)。经0．9 mmol／LIPTG37°C诱导3h后表达，收集菌体并裂解，裂解后上清和沉淀经SDS．PAGE分析，结果表明融合蛋白分子量分别为30kda．表达产物以可溶性存在于上清中，后经Ni-NTA吸附柱方法对目的蛋白进行纯化，经薄层凝胶扫描分析，纯化后的His融合蛋白纯度达95％，该CFP-10表达蛋白可作为体外诊断抗原，为进一步建立检测牛分枝杆菌的方法奠定基础。

摘要： 根据Genbank中牛分枝杆菌的基因序列，设计合成一对扩增CFP—10基因完整ORF的特异性引物，以pET32a(+)为载体构建重组表达载体CFP-10／pET32a(+)。重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经0．9 mmol／L IPTG 37°C诱导3h后表达，收集菌体并裂解，裂解后上清和沉淀经SDS—PAGE分析，结果表明融合蛋白分子量分别为30kda，表达产物以可溶性存在于上清中，后经Ni-NTA吸附柱方法对目的蛋白进行纯化，经薄层凝胶扫描分析，纯化后的His融合蛋白纯度达95％，该CFP-10表达蛋白可作为体外诊断抗原，为进一步建立检测牛分枝杆菌的方法奠定基础。

摘要： 牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis,M.bovis)进入机体肺脏后主要感染巨噬细胞,最终造成大量合成的炎性因子错误折叠或未折叠,堆积在内质网内引起内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS).ERS可以引起内质网外膜上的多功能衔接子STING的转位,招募TBK1活化IRF3,从而与下游的Capase8和Bax共同作用损伤线粒体,最终导致细胞凋亡.为结核杆菌感染宿主巨噬细胞后，ERS对STING-TBK1-IFR3信号通路在诱导细胞凋亡中的调控作用，以及STING在ERS作用下调节细胞的死亡和天然免疫以应对结核杆菌的免疫逃逸新机制提供实验依据，也为阐明结核杆菌进入巨噬细胞后诱导的STING信号转导的精确分子机制奠定基础。通过对ERS相关蛋白和细菌CFU的检测以及电镜观察，结果表明M.bovis能够通过ERS引起细胞凋亡，并且通过ERS对STING-TBK1-IFR3信号通路引起的细胞凋亡进行调控，最终导致细菌的数量减少，从而有效控制细菌的传播。

摘要： 本发明公开了一种检测结核性分枝杆菌(M.tuberculosis)和分枝杆菌属的组合物，其包含：(i)靶向结核性分枝杆菌特异性基因(IS6110)的引物和/或探针；和(ii)靶向分枝杆菌属特异性基因(内部转录间隔区(ITS))的引物和/或探针；和非必需地，(iii)靶向作为内对照的源自植物的基因的引物和/或探针。当使用所述组合物进行实时多重聚合酶链式反应时，可以通过单个反应检测非结核性分枝杆菌和分枝杆菌属，因此可以以高可靠性快速且容易地实现临床诊断。

摘要： 本发明公开了一种检测结核性分枝杆菌(M.tuberculosis)和分枝杆菌属的组合物，其包含：(i)靶向结核性分枝杆菌特异性基因(IS6110)的引物和/或探针；和(ii)靶向分枝杆菌属特异性基因(内部转录间隔区(ITS))的引物和/或探针；和非必需地，(iii)靶向作为内对照的源自植物的基因的引物和/或探针。当使用所述组合物进行实时多重聚合酶链式反应时，可以通过单个反应检测非结核性分枝杆菌和分枝杆菌属，因此可以以高可靠性快速且容易地实现临床诊断。

摘要： 本发明提供一种用于检测结核分枝杆菌复合群或分枝杆菌属的组合物，其包含：(i)靶向IS6110的引物和/或探针，所述IS6110为结核分枝杆菌复合群-特异性基因；(ii)靶向rpoB的引物和/或探针，所述rpoB为分枝杆菌属-特异性基因；和视需要的(iii)作为内对照的靶向植物源基因的引物和/或探针。当使用本发明的组合物进行多重实时PCR时，可以通过单轮PCR测定检测结核分枝杆菌复合群和分枝杆菌属。因此，本发明实现了具有高可靠性的快速且容易的临床诊断。

摘要： 本发明公开了一种鉴别牛结核分枝杆菌和人结核分枝杆菌的方法及应用。本发明的方法包括如下步骤：用检测ETR-A、ETR-D、QUB-26、MIRU-20、MIRU-26和MIRU-27这6个VNTR位点的引物对分别对待测菌株进行扩增，根据PCR扩增产物大小，得到待测菌株在每一个VNTR位点的拷贝数，进而判断待测菌株是牛结核分枝杆菌还是人结核分枝杆菌。通过试验证明：利用本发明的方法既可以快速、灵敏、特异将牛结核分枝杆菌和人结核分枝杆菌鉴别开来，又可以利用我国牛结核分枝杆菌和人结核分枝杆菌在特定VNTR位点拷贝数的差异，进行基因分型，有利于更好的了解牛结核和人结核流行病学的相关内容。

摘要： 本发明公开了一种检测气溶胶中牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的方法：(1)采集气溶胶样本；(2)提取气溶胶样本的基因组总DNA；(3)检测：进行PCR扩增；(4)建立标准曲线和溶解曲线：建立pEASY-T3-MPB70阳性标准质粒的标准曲线，以及扩增体系的溶解曲线；(5)判断气溶胶样本中是否含有牛分枝杆菌或/和结核分枝杆菌。本发明还公开了特异性引物(如SEQIDNO.1、2所示)以及试剂盒(由特异性引物、pEASY-T3-MPB70阳性标准质粒、SYBRGreen？Ⅰ实时荧光定量PCR试剂和ddH

摘要： 本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种牛分枝杆菌和结核分枝杆菌的同时鉴定方法及其试剂盒。本发明利用结核分枝杆菌和牛分枝杆菌之间的基因组差异，设计1条上游引物和2条不同的下游引物(下游引物分别针对牛分枝杆菌和结核分枝杆菌)，根据扩增的靶片段分别设计Taqman探针，并对两条探针进行不同的荧光标记，实现了在同一反应管中同时检测牛分枝杆菌和结核分枝杆菌，并通过不同的荧光通道加以鉴别，扩增的同时可以直接在软件上判读结果，而不用跑电泳，避免了气溶胶污染，在临床上有更大的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种鉴定人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗的技术方法，选择16S rRNA、IS6110、Rv2659c、ESAT6和Rv1510五个目的基因进行多个PCR扩增，能快速准确地鉴别结核分枝杆菌，有效排除牛分枝杆菌和BCG弱毒株(卡介苗)的干扰。

摘要： 本发明公开了一种检测气溶胶中牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的方法：(1)采集气溶胶样本；(2)提取气溶胶样本的基因组总DNA；(3)检测：进行PCR扩增；(4)建立标准曲线和溶解曲线：建立pEASY-T3-MPB70阳性标准质粒的标准曲线，以及扩增体系的溶解曲线；(5)判断气溶胶样本中是否含有牛分枝杆菌或/和结核分枝杆菌。本发明还公开了特异性引物(如SEQIDNO.1、2所示)以及试剂盒(由特异性引物、pEASY-T3-MPB70阳性标准质粒、SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR试剂和ddH

摘要： 本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌的同时鉴定方法及其试剂盒。本发明利用人结核分枝杆菌和牛分枝杆菌之间的基因组差异，设计1条上游引物和2条不同的下游引物(下游引物分别针对牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌)，根据扩增的靶片段分别设计Taqman探针，并对两条探针进行不同的荧光标记，实现了在同一反应管中同时检测牛分枝杆菌和人结核分枝杆菌，并通过不同的荧光通道加以鉴别，扩增的同时可以直接在软件上判读结果，而不用跑电泳，避免了气溶胶污染，在临床上有更大的应用前景。

摘要： 新型的牛分枝杆菌与结核分枝杆菌的快速鉴别方法及应用。目前临床标本涂片镜检虽然简单、经济、快速，但并非每个临床标本(特别是痰液)都能成功地检出结核菌，无法鉴别它是结核杆菌或是其它分枝杆菌。本发明的方法：加入有牛分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA扩增出294bp的片段，用牛分枝杆菌的引物只能从牛分枝杆菌的DNA中出目的基因，加入有结核分枝杆菌H37vR菌株基因组DNA扩增出294bp的片段，用结核分枝杆菌的引物只能从结核分枝杆菌的DNA中扩增出目的基因，相同的上游引物和两个有差异的下游引物，两个扩增基因片段为294bp，67°C的退火温度。本方法用于在细菌纯培养物和临床样品的直接检测。