摘要:猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinee reproductive andrespiratory syndrome virus,PRRSV)感染宿主细胞是通过易感细胞上不同的病毒受体介导完成的。目前关于PRRSV细胞上受体的研究已经证明了四个不同受体,分别Heparan sulphate,Sialoadhesin,CD163和Vimentin。他们在不同PRRSV易感细胞上的分布和功能各不相同。非肌肉肌球蛋白ⅡA(NMHC-ⅡA)蛋白是由模拟PRRSVGP5蛋白的抗独特型抗体Mab2-5G2通过免疫共沉淀从PRRSV易感细胞PAM或MA-104上获得。为了进一步验证NMHC-ⅡA与PRRSV之间的关系,本研究利用RNA干扰技术,构建NMHC-ⅡA低表达Marc-145稳定细胞系,分别通过Real-time PCR与TCID50测定NMHC-ⅡA低表达对PRRSV感染Marc-145的影响。Real-time PCR检测结果显示,敲低47%NMHC-ⅡA的表达对病毒4℃条件下吸附Marc-145细胞1小时与对照组相比较没有差异。病毒在4℃条件下吸附Marc-145细胞1小时后转移至细胞培养箱中继续培养分别于24,48,72和96小时收集培养上清测定病毒滴度,TCID50测定结果显示,NMHC-ⅡA敲低Marc-145细胞的病毒滴度与对照Marc-145细胞的病毒滴度相比分别降低了42.1%,22.3%,13.2%和12.6%。为了分析NMHC-ⅡA表达量敲低后是否对Marc-145细胞的增殖与分裂产生影响,我们对稳定敲低NMHC-ⅡA的Marc-145细胞进行了细胞增殖、细胞周期、细胞有丝分裂以及活细胞观察分析,结果显示47%的NMHC-ⅡA表达降低对细胞增殖、细胞周期、细胞有丝分裂均没产生显著影响,但是活细胞实时观察发现NMHC-ⅡA低.表达细胞系与对照细胞相比较细胞膜运动速度变得缓慢,并且在低密度培养时细胞的贴壁性变弱。最终结果分析显示NMHC-ⅡA表达量的降低能够降低PRRSV感染Marc-145细胞,其影响过程的主要发生在PRRSV侵染细胞后内化或增值过程,而非吸附过程。其详细机理还有待于进一步研究。