单链抗体

摘要： 噬菌体展示技术作为目前应用广泛的展示抗体技术,逐渐成为生产基因工程抗体的重要工具。噬菌体展示技术是以噬菌体或噬菌粒为载体,通过将外源多肽基因整合到噬菌体基因中,以融合表达的形式将外源蛋白展示在噬菌体表面的分子生物学技术。近年来,噬菌体展示技术在抗体筛选领域的应用越来越广泛,与传统制备抗体的方法相比,噬菌体展示技术具有通量高、成本低、操作简单等特点,且通过该技术筛选得到的抗体不仅可在标签蛋白的辅助下进行选择和纯化,还可通过基因测序的方法得到单链抗体的完整基因序列。笔者首先对噬菌体抗体库进行分类,根据抗体的来源将噬菌体抗体库分为天然抗体库和免疫抗体库,通过免疫动物制备的抗体文库的特异性、抗体阳性率明显高于天然抗体文库;其次简述了噬菌体抗体库的构建流程,其中噬菌体表达载体的选择是展示技术的关键,整合了噬菌粒基因的辅助噬菌体侵染其特异性菌株,从而通过抗生素平板对该系统进行选择性筛选;最后讨论了噬菌体展示技术在疾病防控领域应用的研究进展,抗体的首次人源化使同源性抗体在临床上应用成为可能,后续用于预防和治疗病毒性疾病的动物同源性抗体的研发进一步证明了噬菌体展示技术用于生产诊断或潜在治疗试剂的能力。该综述主要聚焦于噬菌体展示系统的构建及其在疾病防控领域的应用,以期对后续通过噬菌体展示技术筛选单链抗体的应用提供指导。

摘要： 单链抗体融合蛋白是一种通过重组质粒将单链抗体与蛋白质融合构建的新型蛋白,具有保持抗原抗体结合的稳定性和外部蛋白质生物活性功能,主要通过大肠杆菌与酵母两个表达系统进行表达。单链抗体融合蛋白的抗肿瘤机制包括阻滞肿瘤细胞周期、靶向杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强机体免疫应答等,现已主要应用于靶向治疗、影像诊断、细胞内免疫和生物检测等方面。本文对近年来单链抗体融合蛋白抗肿瘤的研究进展作一综述。

摘要： 目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA。采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体。以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线。运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定线性范围,计算最低检测限。以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性。结果抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面。随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL。重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的。结论本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点。

摘要： ras基因突变或过表达可导致多种肿瘤的发生,约30%的肿瘤中存在ras基因突变。p21Ras蛋白是ras基因表达的产物。抗p21Ras蛋白抗体的研发,为ras驱动肿瘤的病理诊断和治疗提供了新的研究方向。该文对抗p21Ras蛋白单克隆抗体、单链抗体、细胞内抗体、重组抗体的研发和应用情况进行简要综述。

摘要： 为提高抗呋喃唑酮代谢物衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。采用液体培养基发酵培养能表达出目的蛋白的基因工程菌,对诱导表达得到的目标融合蛋白进行鉴定,探讨5种培养基、6种诱导时间和4种诱导剂-异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度对融合蛋白表达的影响,再通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧基琼脂糖凝胶柱和直接竞争酶联免疫分析法进行纯化并对其活性进行鉴定。结果表明,最适宜条件为SB培养基,诱导剂IPTG浓度为0.6 mmol/L,培养9 h,该条件下抗呋喃唑酮代谢物衍生物单链抗体-AP融合蛋白的表达效果较好,表达量从2.89%增加到5.75%,总体增加了约2.86百分点,通过NHS活化羧基琼脂糖凝胶柱纯化后融合蛋白的浓度为1.973 mg/mL,IC_(50)值为56.9231 ng/mL。本试验单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达量得到了很好的提高,并获得生物活性较好的融合蛋白,为后续呋喃唑酮代谢物免疫检测分析方法的建立奠定了一定基础。

摘要： 为快速筛选获得牛冠状病毒(BCoV)特异性抗体,本试验用重组的牛冠状病毒N蛋白免疫BALB/c小鼠,从免疫小鼠脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,分别扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,采用重叠延伸PCR法将VH、VL拼接为完整的单链抗体(scFv)基因,将scFv基因与酶切的噬菌粒连接,电转入感受态细胞中,过夜培养获得初级噬菌体抗体库,测定库容为8×10^(8)PFU。自库中随机挑取15个单克隆的噬菌体通过PCR鉴定,结果显示其中13个克隆扩增出约800 bp大小的目的片段,阳性率为86.7%,说明噬菌体抗体库构建成功。该抗体库经4轮富集淘选和酶联免疫吸附试验检测,最终获得32株与N蛋白特异性反应的噬菌体克隆。将32株阳性克隆进行PCR鉴定并测序,分析序列后发现有19株阳性单链抗体基因正确,选取阳性值较高的5株阳性单链抗体检测其噬菌体抗体结合活性,其中阳性单链抗体scFv-154与N蛋白的结合活性较高。本试验为进一步探讨单链抗体在牛冠状病毒病诊断和防控技术领域的应用提供了依据。

摘要： 验证Aif-T18融合蛋白对肿瘤内皮细胞标志分子1(TEM1)阳性肿瘤细胞的杀伤作用。采用基因工程技术方法构建重组质粒pIRES-TEM1-EGFP,转染TEM1阴性表达细胞MS1,经G418筛选得到TEM1阳性细胞株(MS1-TEM1);通过构建重组质粒pET302-Aif和pET302-Aif-T18,转化至表达宿主菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导菌体得到所需的目的蛋白,采用流式细胞仪和MTT技术检测融合蛋白对MS1和MS1-TEM1细胞的亲和力和特异性杀伤的效果。本研究中,主要利用单链抗体scFvT18选择性携带凋亡诱导因子AIF,靶向抑杀TEM1阳性细胞,从而为Aif-T18融合蛋白在肿瘤治疗中的开发应用提供实验依据。

摘要： 验证Aif-T18融合蛋白对肿瘤内皮细胞标志分子1(TEM1)阳性肿瘤细胞的杀伤作用.采用基因工程技术方法构建重组质粒pIRES-TEM1-EGFP,转染TEM1阴性表达细胞MS1,经G418筛选得到TEM1阳性细胞株(MS1-TEM1);通过构建重组质粒pET302-Aif和pET302-Aif-T18,转化至表达宿主菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导菌体得到所需的目的蛋白,采用流式细胞仪和MTT技术检测融合蛋白对MS1和MS1-TEM1细胞的亲和力和特异性杀伤的效果.本研究中,主要利用单链抗体scFvT18选择性携带凋亡诱导因子AIF,靶向抑杀TEM1阳性细胞,从而为Aif-T18融合蛋白在肿瘤治疗中的开发应用提供实验依据.

摘要： [目的]优化基因工程菌的诱导表达条件,以提高抗呋喃它酮代谢物衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量.[方法]采用液体发酵法培养抗AMOZ衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的基因工程菌,分别研究不同宿主菌、培养基、初始pH、诱导时期、诱导时间和蛋白诱导表达剂异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)对融合蛋白表达量的影响,并通过蛋白质印迹法和直接竞争酶联免疫分析法对其活性进行鉴定.[结果]以E.coli BL21(DE3)作为宿主菌,在以初始pH为7.0的SB液体培养基作为发酵培养基,将含有目的蛋白的基因工程菌培养至OD600为0.6时,用浓度为0.6 mmol/L的诱导表达剂IPTG诱导表达9 h的条件下,抗AMOZ衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达量由最初的7.94％增加到了11.45％,总体增加了约3.51％,且融合蛋白具有良好的生物活性.[结论]成功提高了抗AMOZ衍生物单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达量,为后期大规模生产抗AMOZ衍生物单链抗体奠定了一定的基础.

摘要： 制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)猪源单链抗体(ScFv),并对其生物学活性进行鉴定,筛选出具有ASFV反应活性的猪源单链抗体(ScFv),为ASFV的诊断提供新的材料.采集ASFV感染康复猪的外周血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,以此为模板通过PCR扩增得到猪源IgG重链可变区与轻链可变区基因,利用SOE-PCR技术扩增拼接得到猪源ScFv基因;构建pET-30a-ScFv表达载体,进行蛋白的表达与纯化,用ELISA和IFA鉴定ScFv抗体的反应活性.结果显示,成功扩增出猪源ScFv(VH-VLκ、VH-VLλ)基因,鉴定到1株与ASFV存在反应活性的ScFv(VH-VLλ11)抗体.结果表明,成功筛选到1株与ASFV存在反应活性的ScFv(VH-VLλ11)抗体,为ASFV诊断和防控提供了新型原材料.

摘要： ras基因是最常被激活的原癌基因,主要生理功能是调节细胞的增殖.ras基因的主要成员有H-ras、K-ras、N-ras,编码188-189个氨基酸,有85％的同源性,蛋白质分子量为21KD.成功构建了抗p21Ras蛋白的单链抗体，该单链抗体是一种新型的特异性针对野生型Ras蛋白的抗p21Ras单链抗体，单链抗体在体内体外都具有抗肿瘤活性，成功构建了感染CIK细胞的条件复制性腺病毒。

摘要： 奶牛乳腺炎是影响奶牛业发展,给乳品生产带来巨大损失的一种常见多发病.金黄色葡萄球菌是最重要的致病菌,但针对金黄色葡萄球菌的疫苗并不能对奶牛乳腺炎提供足够的保护,抗体治疗可能有一定的作用.本研究构建了针对金黄色葡萄球菌感染过程中最重要的毒力因子纤连蛋白结合蛋白(FnbpA)和凝集因子(ClfA)的单链抗体(scFv).首先从患金黄色葡萄球菌乳腺炎的奶牛外周血淋巴细胞中提取RNA作为模板扩增scFv的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),利用重叠延伸PCR将VH和VL通过linker-(Gly4Ser)3连接构建scFv;然后将scFv基因克隆入原核表达载体pOPE 101-XP后转化E.coli XLl-Blue进行诱导表达并提取周质腔可溶性蛋白;最后通过间接ELISA的方法筛选针对FnbpA和ClfA的scFv.最终我们获得了两株亲和力较高的阳性克隆scFvZW.28和scFvZW.132,分析这两株scFv的氨基酸序列发现,FR区氨基酸序列比较保守,CDR区氨基酸变异较大,尤其是VH的CDR3区.Western blot分析表明两株scFv能够与FnbpA和ClfA特异性结合.该研究为治疗奶牛乳腺炎抗体制剂的研发提供了新的思路.

摘要： 黄绿青霉素(Citreoviridin,CIT)是一种具有毒性的小分子真菌毒素,由黄绿青霉菌(Penicillum Citreoviridin,PCV)在低温高湿度等的恶劣环境中分泌产生的,其广泛存在于谷类农作物和农副产品中.CIT毒素具有神经毒性作用,可抑制中枢神经系统,严重的甚至会引起死亡.很多研究表明CIT是引起心脏性脚气病主要病因。到目前为止，中国和其他国家的相关监管机构并未建立CIT在食品中的安全限制范围，同时基于液相色谱等常规检测方法通常是耗时的、昂贵的，并不适合检测大量的样品。因此，建立一个快速、简便和灵敏的基于免疫学方法检测CIT毒素是势在必行的。本研究主要利用基因工程手段，通过错易PCR构建了一个库容量为2.0X108cfu/ml抗CIT的突变体单链抗体库，并结合噬菌体淘选技术最终获得了一株高亲和力scFv抗体。将抗体基因克隆到含有可溶性标签麦芽糖结合蛋白的pBD-mbp-his-linker载体上，从而获得了可溶的高亲和力抗体。通过将纳米金标记在scFv抗体上，并建立基于单链抗体黄绿青霉素胶体金检测平台，为实现体外黄绿青霉素高灵敏度，高特异性胶体金检测奠定坚实的基础。

摘要： 目的：应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体(scFv)库,并从抗体库中进行筛选. 方法：利用重组人IL-4R(rhIL-4R)蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增VH和VL基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的scFv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切scFv和pCANTAB5E载体,利用T4DNA连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析. 结果：经过3轮筛选,构建了库容为2×108的rhIL-4R单链抗体库,测序结果显示anti-rhIL-4R蛋白scFv基因全长741bp,编码247个氨基酸.通过VBASE2数据库分析,anti-rhIL-4R蛋白的VH和VL基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区. 结论：成功构建了抗rhIL-4R蛋白噬菌体scFv库.

摘要： 本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与流感病毒中和效果较好的单克隆抗体。以单抗杂交瘤细胞RNA反转录产物为模板，PCR成功扩增了轻(321 bp)、重链(360 bp)基因。选用(Gly4Ser),15肽序列的Linker序列，以重叠延伸拼接法成功组建了3条单链抗体基因，构建真核表达载体pCDNA31-ScFvo Lipoinfectamine2000转染MDCK细胞，在细胞水平上对3条单链抗体抗流感病毒活性进行了检测，间接免疫荧光实验结果表明单链抗体Q1-B1-BB具有一定的抑制流感病毒复制的能力，为以后小鼠模型验证其抗流感病毒活性奠定了基础，为抗流感转基因动物研究提供候选基因。

摘要： 本实验室以构建好的全人源白血病噬菌体抗体库为基础，成功筛选出与白细胞分化抗原CD33胞外区蛋白特异性结合的单链抗体(scFv)。表达与CD33胞外区蛋白结合性高的scFv并检测其相关活性;构建scFv与人颗粒酶B(Gz B)融合的免疫毒素scFv-Gz B,并对其进行表达及活性检测;将活性高的单链抗体及免疫毒素成功转入酵母表达体系并大量表达。

摘要： 构建抗骨硬化素单链抗体表达载体并进行活性分析.提取抗SOST单克隆抗体5H3D1杂交瘤细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增抗体轻链可变区基因(VL)和重链可变区基因(VH)通过重叠延伸拼接(SOE) PCR方法,在VL和VH基因之间引入Linker (Gly4Ser)3,连接成单链抗体SOST-scFv(VL-Linker-VH).将测序正确的scFv基因克隆至表达载体PET-22b(+)后转入HEK293细胞进行分泌表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA和West-blot检测表达蛋白的反应活性,茜素红染色观察单链抗体对体外培养骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.成功构建了抗S0ST单链抗体表达载体，表达产物具有确定的免疫结合活性和有效的体外诱导分化成骨作用，为抗体治疗骨质疏松疾病奠定了实验基础。

摘要： 目的:最新研究表明某些具有抑癌作用的微小RNA可以通过靶向多个下游靶分子对肝癌细胞发挥促分化作用,但由于小核酸分子体内靶向输送这一瓶颈问题而无法证明其药用的可行性.方法:考虑肝癌的发生与乙型肝炎病毒(HBV)感染密切相关,制备了一株靶向HBV-S抗原的单克隆抗体,并在此基础上利用基因工程方法制备了相应的单链抗体ScFv-15.在证明该单链抗体的抗原特异性和内化活性的基础上,将携带正电荷、具有强力结合核酸组份的九聚精氨酸肽段融合在抗体的C末端,构建了一个理论上可以高效携带小核酸分子的抗原靶向输送系统.结论：研究发现证明HBs靶向的单链抗体融合分子可以高效、特异地将抑癌miRNA分子输送到HBV阳性的肿瘤组织中,通过诱导分化和生长抑制机制发挥抑癌功效.

摘要： 目的:构建前列腺干细胞抗原(PSCA)单链抗体与碱性磷酸酶(AP)的融合表达载体,并进行原核表达和鉴定.rn 方法:根据大肠杆菌的密码子偏爱性进行碱基优化,合成抗PSCA的单链抗体基因PaFv基因,用Sfi Ⅰ和Not Ⅰ限制性核酸内切酶分别酶切、连接至含有AP编码序列的pDAP2/S载体上,转化大肠杆菌XL1-Blue中诱导表达,Western blot检测融合蛋白的表达情况,并测定融合蛋白活性.rn 结果:PCR鉴定和序列测定显示抗PSCA单链抗体基因成功构建到pDAP2/S载体中,分析结果表明单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在重组大肠杆菌中表达形式为包涵体,具有融合蛋白的活性.rn 结论:成功构建并表达了抗PSCA单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白,为进一步发展以PSCA为靶点的前列腺癌快速免疫诊断方法奠定了基础.

摘要： 近年来,抗体药物在临床肿瘤靶向治疗领域取得突破性进展.至今,美国FDA已经批准十多种抗体及其偶联药物上市.筛选和构建人源性抗体是抗体药物开发的源头.本论文首先从本实验室己构建好的全人源白血病噬菌体单链抗体库中筛选出与白细胞分化抗原CD33胞外区蛋白特异性结合的单链抗体(scFv),表达并鉴定scFv蛋白;构建scFv与瓜蛋白MAP30偶联的用于治疗白血病的免疫毒素,并对其进行鉴定分析.经筛选获得具有较强特异性的噬菌体单克隆抗体，并表达获得可溶性scFv蛋白。成功构建单链免疫毒素，并获得表达，为免疫毒素进一步的功能分析与检测打下了基础，为CD33阳性白血病的治疗提供了可能。

摘要： 本发明公开了一种抗表皮生长因子受体单链抗体、抗PD1单链抗体及融合蛋白及其应用，所述双特异单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有良好的临床应用前景。

摘要： 本发明提供了靶向DNAM‑1的鼠单链抗体、表达所述鼠单链抗体的重组质粒、重组细胞及应用，属于抗体制备技术领域，所述靶向DNAM‑1的鼠单链抗体包括鼠单链抗体DN9或鼠单链抗体DN12；所述鼠单链抗体DN9的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述鼠单链抗体DN9的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述鼠单链抗体DN12的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，所述鼠单链抗体DN12的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。所述靶向DNAM‑1的鼠单链抗体能够与DNAM‑1抗原特异性结合，能够快速高效的检测DNAM‑1抗原。

摘要： 本发明公开了一种抗肿瘤坏死因子和抗白介素6的单链抗体及其融合蛋白，所述融合蛋白既具有抗体的特异性识别作用，同时这种识别性又可以被特异性受体阻断，利用人角质形成细胞系HaCaT评价该双特异抗体的抗银屑病可能，结果显示本发明公开的抗肿瘤坏死因子抗体和抗白介素6抗体以及它们组成的双特异抗体均能使该细胞系的CXCL1和IL8的表达量降低。所述融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有广泛的临床应用前景。

摘要： 抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用。本发明公开了一种抗跨膜酪氨酸激酶受体的单链抗体、一种抗CD3E的单链抗体及其融合蛋白及其应用，所述融合蛋白具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，其对三种不同类型的肿瘤细胞系，均有明显的生长抑制作用，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有良好的临床应用前景。

摘要： 一种特异性识别并结合Aβ42寡聚体及原纤维的单链抗体及单链抗体基因，属于基因工程抗体技术领域。具体是提供了一种包括重链可变区、轻链可变区的人源性抗Aβ42寡聚体的单链抗体HT7，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。同时提供了一种核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码单链抗体HT7的基因，以及该基因与pET‑28a、pET‑41b、pMA5、pPZW103等载体构建的单链抗体HT7的基因工程表达载体。该单链抗体HT7能特异性识别并结合Aβ42寡聚体及原纤维，并降低Aβ42寡聚体及原纤维的水平，有效抑制Aβ42寡聚体及原纤维的神经胞毒性，可在制备抗神经毒性Aβ42或阿尔茨海默氏病的药物中具有广泛应用。

摘要： 本发明公开了拉沙洛菌素和盐霉素单链抗体和双特异性单链抗体及其应用。该双特异性单链抗体含有名称为LAS‑VH的LAS重链可变区、名称为SAL‑VH的SAL重链可变区、名称为LAS‑VL的LAS轻链可变区和名称为SAL‑VL的SAL轻链可变区，所述LAS‑VH、SAL‑VH、LAS‑VL和SAL‑VL均由决定簇互补区和框架区组成；所述决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成。该双特异性单链抗体可用于检测盐霉素和拉沙洛菌素残留。

摘要： 本发明提供了一种用于曲妥珠单链抗体及与其序列同源的单链抗体的变复性方法，采用本发明方法制得的复性单链抗体重组蛋白溶液，该单链抗体重组蛋白所处的溶剂即为使用者后续实验所需的缓冲液，无需再进行缓冲液的置换，同时最终产物中单链抗体蛋白的浓度能达到30mg/mL以上，单链抗体复性率达到20％以上，最终置换蛋白与复性单链抗体蛋白的比例达到30％以上。本发明变复性方法适用于大肠杆菌表达得到的曲妥珠单链抗体蛋白，同时也适用于与曲妥珠单链抗体蛋白序列同源性达到60％以上的单链抗体蛋白。

摘要： 本发明提供了靶向DNAM‑1的鼠单链抗体、表达所述鼠单链抗体的重组质粒、重组细胞及应用，属于抗体制备技术领域，所述靶向DNAM‑1的鼠单链抗体包括鼠单链抗体DN9或鼠单链抗体DN12；所述鼠单链抗体DN9的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述鼠单链抗体DN9的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述鼠单链抗体DN12的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，所述鼠单链抗体DN12的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。所述靶向DNAM‑1的鼠单链抗体能够与DNAM‑1抗原特异性结合，能够快速高效的检测DNAM‑1抗原。

摘要： 抗EPHA2单链抗体、抗CD3E单链抗体及融合蛋白及其应用。本发明公开了一种抗跨膜酪氨酸激酶受体的单链抗体、一种抗CD3E的单链抗体及其融合蛋白及其应用，所述融合蛋白具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，其对三种不同类型的肿瘤细胞系，均有明显的生长抑制作用，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有良好的临床应用前景。

摘要： 本发明公开了一种抗表皮生长因子受体单链抗体、抗PD1单链抗体及融合蛋白及其应用，所述双特异单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，既具有抗体的特异性识别作用，同时又具有优异的抗肿瘤效果，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本，具有良好的临床应用前景。