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亲和层析

亲和层析的相关文献在1979年到2022年内共计875篇,主要集中在基础医学、生物化学、分子生物学 等领域,其中期刊论文698篇、会议论文26篇、专利文献11793篇;相关期刊354种,包括生物化学与生物物理进展、生物化学与生物物理学报:英文版、生物技术通讯等; 相关会议24种,包括2012第五届中国北京国际食品安全高峰论坛、第七届全国第SOD学术研讨会、生物制品研发与质量控制及生物反应器研讨会等;亲和层析的相关文献由2674位作者贡献,包括刘翠珍、林晓磊、刘乃山等。

亲和层析—发文量

期刊论文>

论文:698 占比:5.58%

会议论文>

论文:26 占比:0.21%

专利文献>

论文:11793 占比:94.22%

总计:12517篇

亲和层析—发文趋势图

亲和层析

-研究学者

  • 刘翠珍
  • 林晓磊
  • 刘乃山
  • 杨帆
  • 刘先菊
  • 张连峰
  • 林树柱
  • 秦川
  • 苏志国
  • 全雄志
  • 期刊论文
  • 会议论文
  • 专利文献

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排序:

年份

    • 刘凤华; 王淏; 贾乔雅; 毕允晨
    • 摘要: 亲和层析是一种广泛使用的蛋白质分离纯化技术,常用的亲和标签包括谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签、多组氨酸(polyhistidine)标签等。然而,外源亲和标签可能会影响蛋白质的结构与功能,通常需要酶切去除,造成实验流程加长、产率降低。某些蛋白质具有与亲和标签相似的氨基酸序列特征,利用这种序列特征尝试无标签纯化可有效避免上述问题。本研究选取C端天然富含组氨酸残基的长牡蛎电压门控钙离子通道(VGCC)β亚基进行无标签亲和层析纯化,结果显示,氨基三乙酸镍(Ni-NTA)能够特异性地结合无标签的β亚基,且结合能力与多组氨酸标签相当。对β亚基C端组氨酸残基分组突变后发现,随着组氨酸残基突变的增多,各突变型β亚基与Ni-NTA的结合能力逐步下降。免疫印迹实验结果表明,β亚基C端(HG)7序列在针对多组氨酸标签的抗体识别中发挥关键作用。VGCCβ亚基的这种天然序列特征也可应用于该膜蛋白复合体提取过程关键步骤的监测。综上,本研究对氨基酸序列中具有亲和标签特征的蛋白质进行了无标签亲和层析纯化,为具有相似特征蛋白质的分离纯化提供了参考。
    • 周帅辉; 王伟杰; 余正; 任和; 李帅鹏; 杨艳坤; 白仲虎
    • 摘要: 为获得纤溶酶-α2-纤溶酶抑制剂(plasmin-α2-plasmin inhibitor complex,PIC)与凝血酶-抗凝血酶(thrombinantithrombin,TAT)单克隆抗体及建立相应复合物的检测方法,需要制备高纯度的PIC与TAT复合物。以脂血血浆为研究材料,进行血浆前处理,通过尿激酶激活血浆,经Lysine-sepharose亲和层柱,最后获得高纯度的PIC;处理过的血浆经过氯化钡吸附、饱和硫酸铵沉淀后,获得抗凝血酶(antithrombin,AT)与凝血酶原(prothrombin,Pro-T);采用Ecarin蛇毒激活Pro-T获得T,将T与AT分别通过Heparin-sepharose亲和柱以提高其纯度,使其在体外混合反应得到TAT混合物,再经Heparin-sepharose亲和柱除去未反应的T与AT,最终获得高纯度TAT。通过SDS-PAGE、紫外分光光度法与HISCL自动分析仪对产物进行鉴定与定量。结果表明:PIC最佳激活条件为2 mg尿激酶/100 mL血浆,37°C激活30 min,最终获得2.5 mg PIC,经SDS-PAGE鉴定纯度在90%以上;Pro-T的激活条件为0.5 mL蛇毒/100 mL血浆,37°C激活20 min,从100 mL血浆中获得2.1 mg T与6.2 mg AT;T与AT体外最佳反应质量比例为0.7∶1,经SDS-PAGE鉴定TAT的纯度在80%以上。
    • 周桐同; 郭皓; 欧艳曦; 张清华; 袁帅; 杨文钦; 丁琳; 藏传刚; 关宏
    • 摘要: 对以脱盐乳清蛋白粉为原料的乳杆菌A-2代谢产物中铜离子螯合活性多肽进行分离纯化并进行其抗氧化活性的评价。采用铜离子固定化金属离子亲和层析柱分离,筛选具有铜离子螯合活性多肽,得组分F1、F2、F3,分别经Sephadex G-15凝胶过滤柱层析经进行脱盐分离,得到组分F1-1、F1-2、F2-1、F2-2、F3-1、F3-2,采用ABTS法与抗氧化指数(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)法进行抗氧化活性测定,组分F2-1的清除ABTS阳离子自由基能力IC_(50)值为(3.068±0.15)g/L,组分F3-1的清除ABTS阳离子自由基能力IC_(50)值为(5.510±1.56)g/L;组分F2-1的相对ORAC值为(1246.59±0.72)μmol TE/g,组分F3-1的相对ORAC值为(518.83±1.15)μmol TE/g。组分F2-1、F3-1与铜离子螯合率分别为(59±1.45)%和(6±0.32)%。结果表明,组分F2-1、F3-1具有铜螯合活性组分,具有良好的抗氧化活性。该实验为合理开发乳清蛋白,提供了有效依据。
    • 许梦园; 毕津豪; 王馨悦; 张颖; 韩秋雪; 莫若; 闫飞虎; 杨松涛; 冯娜; 王铁成; 赵永坤; 夏咸柱
    • 摘要: 收集经SARS-CoV-2病毒样颗粒(VLPs)为免疫原免疫的健康马血清,采用亲和层析法分离血清中总IgG,利用胃蛋白酶消化Fc片段获得免疫球蛋白F(ab’)_(2),将二者使用结合RBD蛋白的免疫层析柱进行纯化,获得具有高度特异性的马抗SARS-CoV-2 IgG与免疫球蛋白F(ab’)_(2)。结果显示,特异性IgG与F(ab’)_(2)浓度是2.36 mg/mL和1.05 mg/mL,收率为11%和4.89%,纯度在91%与96%以上,对假病毒的半抑制浓度(IC50)为1.406μg/mL和0.862μg/mL。结果表明,成功制备了纯度高、特异性强且具有中和活性的马抗SARS-CoV-2特异性IgG与特异性F(ab’)_(2),为制备安全高效的抗SARS-CoV-2治疗性抗体药物奠定了基础。
    • 杨敬; 吕燕霞; 翁秀芳; 梁智辉; 吴雄文
    • 摘要: 目的 建立真核表达的人CD1d(hCD1d)二聚体的纯化方法,并制备人工抗原提呈细胞,研究其对iNKT细胞的刺激效应.方法 提取pFastBacTM Dual+β2 m+ CD1d/IgG1-Fc]昆虫杆状病毒质粒并转染至sf9细胞中,收集病毒感染上清,通过ELISA法鉴定融合蛋白中人IgG-Fc、人CD1d和人β2m等组分并测定hCD1d二聚体浓度.探索保持hCD1d二聚体完整构象的亲和层析条件,对hCD1d二聚体进行纯化和浓缩.应用加载α-GalCer的hCD1d二聚体制备人工抗原提呈细胞刺激健康个体外周血单个核细胞(PBMC),检测Th1、Th2、Th17细胞因子分泌水平与iNKT细胞的扩增效率.结果 收集的第4代病毒感染上清中目的蛋白表达量较高.抗Ig-Fc抗体ELISA、抗CD1d抗体与抗β2m抗体双抗夹心ELISA检测显示sf9细胞表达的hCD1d二聚体构象正确,两种方法检测的蛋白浓度分别为(1.05±0.20)μg/mL和(0.85±0.01)μg/mL.亲和层析纯化结果显示用pH2.5的0.1 mol/L柠檬酸可较好地实现hCD1d二聚体有效纯化.健康个体iNKT细胞经人工抗原提呈细胞刺激3d后主要产生Th1型细胞因子,上清中IFN-γ、TNF-α含量分别为(1876.26±96.73) pg/mL和(1186.25±98.63) pg/mL,明显高于对照组(79.98±18.52) pg/mL和(29.96±4.43)pg/mL,差异具有统计学意义(均P<0.01),其余Th2型(IL-4)、Treg型(IL-10)和Th17型(IL-17)细胞因子未见明显升高,差异均无统计学意义(均P>0.05),与iNKT细胞接收刺激后分泌细胞因子谱基本一致.健康个体PBMC接受刺激后,iNKT细胞迅速扩增,刺激第7天iNKT细胞占PBMC(4.17士0.76)%,而未包被hCD1d二聚体的微球对照组iNKT细胞占PBMC的比例仅为(0.41±0.09)%.这些结果说明包被有hCD1d二聚体的人工抗原提呈细胞可特异性地刺激iNKT细胞分泌Th1型细胞因子并有效扩增.结论 成功制备hCD1d二聚体,并建立基于人工抗原提呈细胞的iNKT细胞有效的刺激与扩增体系,为后续对iNKT细胞深入研究打下了基础.
    • 唐王刚; 梅传忠; 高佳慧; 司雨; 连超群
    • 摘要: 为鉴定结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv0357c蛋白的生物学功能,进而寻找新的抗Mtb靶点,对Rv0357c进行生物信息学分析,构建了表达Rv0357c的原核表达载体pET-Rv0357c,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达Rv0357c融合蛋白,最后用Co2+亲和层析纯化并对其进行鉴定与活性分析.生物信息学分析表明:Rv0357c是稳定的酸性亲水蛋白,且含有腺苷酸琥珀酸合成酶(AdSS)的2个保守基序和保守的活性位点,同时和人AdSS同工酶(AdSS1和AdSS2)的同源性均低于40%.SDS-PAGE分析证实Rv0357c融合蛋白以包涵体形式表达,亚基分子质量约为48 ku,经包涵体溶解、亲和纯化和重折叠,可以得到可溶性目的蛋白(复性率约为63%).Western Blot检测进一步表明过表达的蛋白为目的蛋白.此外,酶活性测定证实重折叠的Rv0357c融合蛋白有AdSS活性,比活力为0.0161U/mg.综上,Rv0357c是功能性的AdSS蛋白,这将为Rv0357c的进一步功能鉴定和开发新型抗Mtb靶点奠定基础.
    • 石松; 薛殿婷; 张培; 石静; 孙达权
    • 摘要: 目的 探讨人丝裂原激活蛋白激酶3(MAPK3)基因原核表达载体的构建及鉴定.方法 取对数生长期正常人肝细胞系HL-7702细胞,采用TRIzol法抽提细胞总RNA,以此为模板用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)反转录扩增MAPK3基因的蛋白编码区,脱氧核糖核苷酸(DNA)测序鉴定后插入原核表达载体pGEX-4t-1中构建重组原核表达质粒(命名为pGEX-MAPK3GST);将pGEX-MAPK3GST导入细菌Rosetta(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达MAPK3融合蛋白(GST-MAPK3),采用Sepharose 4B亲和层析法纯化MAPK3融合蛋白(GST-MAPK3),采用考马斯亮蓝染色和蛋白免疫印迹分析GST-MAPK3的蛋白纯度和验证目的蛋白.结果 RT-PCR法成功克隆了人MAPK3基因的蛋白编码区,DNA测序结果显示该片段无任何突变;用克隆获得的基因片段成功构建了pGEX-MAPK3GST,通过原核表达的方式获得了GST-MAPK3,并通过亲和层析纯化了GST-MAPK3.结论 成功克隆人MAPK3基因并获得MAPK3蛋白,可用于体外研究MAPK3对细胞角蛋白18(CK18)的磷酸化作用.
    • 牛香香; 李雪洋; 许倩茹; 李青梅; 王雅楠; 张申立; 马强; 张二芹; 张改平
    • 摘要: 血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)表面的一种糖蛋白,能诱导机体产生中和抗体,也是AIV主要的保护性抗原.已在水稻(Oryza sativa)胚乳中成功表达禽流感病毒H9N2 HA蛋白.为了建立水稻源禽流感病毒H9N2亚型HA蛋白的纯化方法,本研究分别采用两种方法进行HA蛋白的纯化.方法一:将HA蛋白水稻粉末按照质量与体积1:5比例加入到提取液中,室温下搅拌,离心、取上清液,过滤后,首先经Q阴离子层析捕获到HA粗提蛋白,其次利用HA蛋白抗体亲和层析精细纯化HA蛋白,收集洗脱液,检测目的蛋白;方法二:用与方法一同样的方法获得HA粗提蛋白,根据Butyl疏水填料特性,HA粗提蛋白液中加入硫酸铵,搅拌、离心和过滤,进行第2步纯化,将收集到的洗脱液浓缩、换液,再经过SP阳离子层析纯化,收集洗脱液,获得HA蛋白.将两种方法纯化的HA蛋白经过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的纯度,并将HA蛋白送公司测序.结果表明,方法一:Q阴离子层析与HA免疫抗体亲和层析两种组合纯化HA蛋白的纯度约为90%左右.该组合纯化蛋白的方法相对简单,但需要培养和纯化单克隆抗体,此方法适合实验室快速小规模的蛋白纯化;方法二:Q阴离子层析、Butyl疏水层析和SP阳离子层析3种组合纯化的HA蛋白纯度达到90%左右.该方法适合建立HA蛋白的纯化工艺,用于大规模纯化HA蛋白.这两种方法获得的HA蛋白经测序与已知的氨基酸序列一致.本研究首次建立2种从水稻中获得高纯度重组H9N2亚型HA蛋白的方法,为今后制备禽流感H9N2亚型亚单位疫苗提供基础资料.
    • 何成霞; 邹强; 刘达玉; 苟兴华; 陶雪菊; 詹茂; 黄海韬
    • 摘要: 通过单因素实验确定了天蚕素抗菌肽融合蛋白表达的最佳条件,即温度为31°C,种子菌接种量为2.0%,培养基pH值为6.5,诱导时间为10 h,此时融合蛋白的表达量占细胞总蛋白的30.6%;开发融合蛋白纯化工艺,将工程菌细胞超声破碎后,所得包涵体使用8 mol/L尿素溶液溶解,泵入2 mol/L尿素溶液中搅拌使蛋白质复性,复性完成后将2 mol/L尿素溶液通过超滤置换成含0.5 mol/L NaCl、20 mmol/L的PB缓冲液,pH 7.2,并浓缩溶液体积至总体积的30%~40%,采用镍离子亲和层析法纯化Cecropin A融合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示目标融合蛋白纯度达到87%以上.
    • 张煜彬; 叶路芬; 吴忠秀; 薛维娜; 何彬; 杨畅; 李勇军; 王永林; 刘亭
    • 摘要: 为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了 PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法.首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响.利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定.菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6 μmol/L,最佳温度为15°C,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6.经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白.SDS-PAGE 电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致.作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法.
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