分离鉴定

摘要： 本研究旨在调查上海地区猪源多杀性巴氏杆菌对临床常用抗菌药的耐药情况,为该病的药物预防与治疗提供科学依据.2014～2015年在上海市11个规模化养猪场采集的疑似多杀性巴氏杆菌感染的病料共计116份,采用细菌分离培养及PCR方法,分离鉴定出20株多杀性巴氏杆菌.采用纸片法测定了分离菌株对20种临床常用抗菌药的敏感性,结果表明,所有菌株对阿莫西林克拉维酸、头孢曲松、恩诺沙星、氟苯尼考、阿奇霉素和多黏菌素B敏感,这6种药物可作为本地区控制本病的首选药物.然而,超过50％的菌株对青霉素(65.0％)、复方新诺明(65.0％)、氨苄西林(60.0％)、链霉素(60.0％)、四环素(60.0％)的耐药.耐药谱分析显示,85.0％的菌株对4～7种的抗菌药耐药.本研究结果表明上海地区猪源多杀性巴氏杆菌对临床常用抗菌药物耐药较严重,应加强养殖场猪多杀性巴氏杆菌的耐药性监测与防控.

摘要： 为了解目前国内猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行现状,本研究对上海和江苏地区猪场进行了PEDV流行株的分离鉴定.根据GenBank中PEDV的基因序列,对其M基因设计检测引物.检测临床采集的猪腹泻样品,2份临床样品能扩增出特异性目的条带,测序结果证实为PEDV M基因片段.将检测为PEDV阳性的样品接种Vero细胞,并添加不同浓度的胰酶进行病毒传代培养,在添加适量胰酶的Vero细胞上分离到两株病毒并能稳定传代、增殖.选择第22代病毒饲喂新生仔猪,进行回归试验,结果两株细胞毒均能使1日龄仔猪出现典型腹泻症状,进一步证实成功分离到PEDV,命名为JSLS/PEDV/1/2014和JS/PEDV/2/2014株.遗传进化分析,JS/PEDV/2/2014和JSLS/PEDV/1/2014分离株的M基因分别与中国毒株HLJ-2012、BJ-2012-1亲缘性最近;S基因与Ⅰ群PEDV流行毒株亲缘性最近;两个毒株的ORF3基因均存在51个碱基缺失,与DR13处于同一大分支,与CV777亲缘性较远.

摘要： 益生菌是指一种可以改善动物肠道菌群平衡,有利于动物生长发育的一种有活性的微生态制剂.该研究从健康新鲜牛粪便中分离菌种,利用形态学和16S rRNA基因扩增测序,并对其中益生菌进行抑菌性试验,从中筛选候选益生菌株.结果表明,所有分离的菌株包括球菌和杆菌,除柠檬酸杆菌、大肠杆菌、产气克雷白(氏)杆菌为革兰氏阴性菌,其余均为革兰氏阳性菌;这些菌株依次为1株假肠膜明串株菌,3株粪肠球菌,2株海氏肠球菌,3株屎肠球菌,1株绿浅气球菌,3株魏斯氏菌,1株类鸟肠球菌,2株产气克雷白(氏)杆菌,1株柠檬酸杆菌,2株枯草芽孢杆菌,3株大肠杆菌,2株甲基营养型芽孢杆菌,2株蜡样茅胞杆菌.其中屎肠球菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌、海氏肠球菌、假肠膜明串株菌都有一定的耐药性.本研究从健康牛的新鲜粪便中分离和筛选益生菌,为后续牛源益生菌的进一步研究提供了候选菌株.

摘要： 犬冠状病毒(CCoV)是引起犬急性胃肠炎的重要病原,临床方面表现为呕吐,血便和严重脱水等临床症状,对幼犬危害严重,导致幼犬高的死亡率和发病率.近年来研究表明CCoV在犬中的感染非常普遍,且宿主范围很广.本研究从一只6个月病死犬中通过细胞分离,噬斑纯化和间接免疫荧光等方法鉴定出2株犬冠状病毒,HIJ-071和HIJ-073.遗传进化分析显示皿J-071和皿J-073与1型和2型CCoV亲缘关系较远，而与2型FCoV亲缘关系相近。

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 对2株血凝活性较弱的H9N2禽流感病毒进行病毒特性的研究.首先采用HA/HI、电镜观察、HA和NA测序等方法对2株分离株进行了病毒的鉴定;其次采用形态学、化学和生物学方法对这2株分离株进行研究.2株病毒被确定为A型H9N2亚型禽流感病毒;病毒粒子在透射电镜下为圆形、椭圆形、杆状并呈多型性,大小为80～120nm;血凝素(HA)均为中等耐热型;病毒50℃均耐热;均能凝集公鸡和人O型红细胞,但凝集作用开始并未出现,而是随着病毒的传代逐渐恢复,均不凝集猪、牛、羊、兔和马红细胞;2株病毒均对乙醚、氯仿不敏感,只有1株病毒对酸敏感;病毒对鸡胚无致死性,EID50都为1×10-7/0.2mL;经鼻腔途径感染小白鼠,均未导致小鼠出现症状和死亡,接种后第14d在小鼠血清中可检出相应病毒的抗体.上海地区活禽交易市场存在对环境条件具有较强耐受性的H9N2亚型禽流感病毒.

摘要： 对2株血凝活性较弱的H9N2禽流感病毒进行病毒特性的研究.首先采用HA/HI、电镜观察、HA和NA测序等方法对2株分离株进行了病毒的鉴定;其次采用形态学、化学和生物学方法对这2株分离株进行研究.2株病毒被确定为A型H9N2亚型禽流感病毒;病毒粒子在透射电镜下为圆形、椭圆形、杆状并呈多型性,大小为80～120nm;血凝素(HA)均为中等耐热型;病毒50℃均耐热;均能凝集公鸡和人O型红细胞,但凝集作用开始并未出现,而是随着病毒的传代逐渐恢复,均不凝集猪、牛、羊、兔和马红细胞;2株病毒均对乙醚、氯仿不敏感,只有1株病毒对酸敏感;病毒对鸡胚无致死性,EID50都为1×10-7/0.2mL;经鼻腔途径感染小白鼠,均未导致小鼠出现症状和死亡,接种后第14d在小鼠血清中可检出相应病毒的抗体.上海地区活禽交易市场存在对环境条件具有较强耐受性的H9N2亚型禽流感病毒.

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 一种快速稳定分离鉴定菰黑粉菌性亲和单倍体菌株的方法，属于生物技术领域。其包括以下步骤：1）收集冬孢子；2）冬孢子悬液；3）冬孢子培养；4）单孢分离培养；5）显微观察；6）性亲和菌株筛选；7）PCR鉴定。通过以上方法可快速稳定地筛选得到菰黑粉菌单倍体菌株，同时通过融合实验初筛及PCR验证交配型基因可准确地获得配对的性亲和单倍体菌株。

摘要： 一种活性污泥系统中不同电子受体聚磷菌的分离鉴定方法，属于污水生物处理技术领域。本发明可以分离污水处理厂活性污泥系统中不同电子受体聚磷菌的DNA，并采用分子生物学方法在基因水平上分析菌群特点。采用¹³C‑乙酸钠作为实验组碳源，¹²C‑乙酸钠作为对照组碳源，厌氧释磷培养2小时，分别以氧气、硝酸盐和亚硝酸盐为电子受体，好氧或缺氧吸磷培养3小时，共培养8个周期，超高速离心分离纯化得到不同密度层级的DNA样品，用分子生物学方法测定分析不同电子受体时聚磷菌的菌群结构。本发明提供了一种分析不同聚磷菌所需电子受体的方法，为实际污水处理厂强化反硝化除磷过程提供理论支撑。

摘要： 本发明涉及一种诺丽内生真菌的分离鉴定方法，属于微生物分离鉴定技术领域。本发明提供的诺丽内生真菌的分离鉴定方法包括以下步骤：1)对诺丽果和叶进行表面消毒；2)将诺丽果和叶的内部组织置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上25±1℃黑暗条件下培养8～10天；3)将步骤2)培养得到的菌株进行传代培养，通过4～5次连续的菌丝尖端转移进行纯化，得到诺丽内生真菌；4)对步骤3)得到的诺丽内生真菌进行ITS测序鉴定。本发明提供的方法能够实现诺丽内生真菌的有效分离和鉴定，利用分离得到的内生真菌通过发酵技术生产相应的活性物质，为发掘内生真菌在诺丽中的药效作用奠定基础，亦为抗癌、抗炎药物的研发提供新思路。

摘要： 本发明公开了一种烟曲霉的抗氧化产物的分离鉴定及其在提高水稻抗干旱能力上的应用。该烟曲霉保藏名称为

摘要： 本发明公开了一种猪源大肠杆菌的分离鉴定方法，属于微生物技术领域。该方法主要包括细菌分离培养、革兰氏染色及镜检和生化鉴定试验三步操作，方法简单、耗时短，成本低，鉴定结果准确、可靠。其中细菌分离培养依次采用营养肉汤培养基、麦康凯琼脂培养基和伊红美蓝琼脂培养基进行选择性培养，生长出的菌落形态清晰，便于挑取分离。

摘要： 本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株产细菌纤维素菌株的分离鉴定及应用。该菌株从腐败水果中分离得到，具有快速产膜且产膜量高的特性，本发明综合采用了16S rDNA，和dnaK、groEL、rpoB 3个管家基因对所分离得到的HEC‑004菌株进行分子水平鉴定，确定所分离菌株为纳塔葡糖酸醋杆菌Gluconacetobacter nataicola，现已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为：CGMCC No.11588。

摘要： 本发明提供一种硫酸盐还原菌（Sulfate‑Reducing Bacteria），即梭菌LYS08，Clostridium sp.LYS08，于2017年9月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为，CCTCC NO：M 2017562，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。同时提供了硫酸盐还原菌的分离鉴定方法，具体对沼液进行的第三代富集培养液稀释的菌悬液加到冷却至40‑50℃的琼脂培养基，凝固后放入厌氧罐中置于45℃下培养，至菌落长出；将长出的黑色单菌落接种至SRB选择培养基中进行增殖培养，再进行分离，增殖培养，如此重复3次固液交替的分离过程后，即可分离分离得到硫酸盐还原菌LYS08。本发明将所述的硫酸盐还原菌在降解SO₄^2‑上的应用。

摘要： 本发明公开了一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法，属于多肽提取技术领域。本发明通过对浓香型白酒酒糟采用半制备RP‑HPLC分离酒糟中的水溶性肽、并利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽，分离并鉴定出白酒酒糟中包含31种水溶性多肽，其中包括6种血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽AAPK、KAGP、TVPK、YE、VPGK、TPF，2种抗氧化肽VPSGK、LH和1种抑制紫外线引起的红斑的功能短肽HP；表明白酒酒糟能富集更多的生物活性肽，为白酒酒糟深加工或高附加值利用提供理论基础。

摘要： 本发明公开了一种分离鉴定黄酒中苦味多肽的方法，属于食品技术领域。通过电子舌测定结合乙醇沉淀、正丁醇萃取、C₁₈SPE固相萃取、半制备HPLC分离后，结合氨基酸组分分析、UPLC‑ESI‑Q‑TOF‑MS/MS、焦谷氨酸肽酶酶切多肽以及质谱软件解析鉴定分离出黄酒中的苦味多肽，最终从黄酒中鉴定得到一种具有苦味的多肽Pyr‑LFNPSTNPWHSP。本发明采用多种方法联用分离和鉴定黄酒中的苦味多肽，并通过焦谷氨酸肽酶酶切验证了该多肽为含有焦谷氨酸的苦味多肽，为机械化黄酒降苦技术的研究提供理论基础，同时，通过焦谷氨酸肽酶酶切验证等鉴定方法能够有效降低仅由质谱MS/MS法测定多肽序列的假阳性可能。