分离鉴定

摘要： 目的 分离鉴定临床标本中的马红球菌(R.equi),探讨其对抗生素的敏感性与临床疗效的关系.方法 对2019年4月至2020年4月临床科室送检的痰、尿、脑脊液、血培养等标本进行培养;从中选取17例经分离鉴定确定携带马红球菌的患者为治疗组(抗生素敏感性联合用药),另选取17例同期分离鉴定确定携带马红球菌的患者为对照组(经验用药治疗),比较两组治疗效果.结果 根据抗生素敏感性联合用药进行临床疗效的比较,治疗组疗效高于对照组(P<0.05).结论 合理选用抗生素联合用药,能明显提高临床疗效的治愈率.

摘要： 为探究2020年冬季云南省昆明市某山羊场持续发生的羊呼吸道疾病病因,从该场采集病料,经样品DNA提取、临床症状及病理剖检观察、病原分离纯化和16S rRNA PCR扩增鉴定,确定病原为绵羊肺炎支原体,并将分离株命名为YN-2020.随后设计引物,扩增YN-2020株延伸因子(TU)和热休克蛋白基因(HSP70)全长序列,分别与GenBank中相关参考菌株构建遗传进化树开展生物信息学分析,并对TU及HSP70基因进行体外原核表达.生物信息学分析结果显示:YN-2020分离株TU基因与绵羊肺炎支原体菌株MoGH3-3亲缘关系较近,在不同支原体种间,其与牛殊异支原体亲缘关系较近,与禽滑液囊支原体亲缘关系较远;HSP70基因与绵羊肺炎支原体Movi 117株亲缘关系较近,在不同支原体种间,其与牛殊异支原体亲缘关系较近,与猪鼻支原体亲缘关系较远.TU及HSP70基因原核表达结果显示,两种蛋白均能在大肠杆菌表达系统中获得不同程度的分泌性表达,TU重组蛋白大小约48 kDa,HSP70重组蛋白大小约68 kDa,且能与康复期绵羊血清发生反应.本研究可为进一步认识绵羊肺炎支原体提供参考,并在此基础上完善相关诊断方法的研究.

摘要： 目的研究西红花Crocus sativus L.柱头的化学成分及其抗炎活性。方法西红花95%乙醇提取物采用D101型大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20和HPLC等进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。用LPS诱导的小鼠RAW 246.7细胞炎症模型评价化合物抗炎活性。结果从中分离得到14个化合物,分别鉴定为(2E,4E)-2-甲基-6-羰基-2,4-庚二烯酸-1-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(1)、(2E,4E)-2-甲基-6-羰基-2,4-庚二烯酸甲酯(2)、山柰酚(3)、单侧西红花酸龙胆二糖酯(4)、(2E,4E)-2-甲基-6-羰基-2,4-庚二烯酸龙胆二糖酯(5)、(2E,4E)-2-甲基-6-羰基-2,4-庚二烯酸(6)、crocusatin M(7)、crocusatin K(8)、3,4-二羟基丁酸(9)、对羟基苯甲酸(10)、山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(11)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(12)、柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(13)、柚皮素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(14)。化合物3、11可降低LPS诱导RAW 264.7细胞NO的释放量。结论化合物1是新化合物,化合物2是新天然产物,化合物6、8、13~14为首次从该属植物中分离得到,化合物3、11具有一定抗炎活性。

摘要： 为了丰富生防微生物菌种资源库,从杨山牡丹的根、茎、叶中共分离出211株内生细菌,经初筛和复筛,有6株菌株(YMG34、YMJ74、YMJ78、YMJ141、YMJ143、YMY13)对牡丹黑斑病菌(Alternaria suffruticosae)、黄斑病菌(Phyllosticta commonsii)、腔孢叶斑病菌(Hainesia lythri)、灰霉病菌(Botrytis paeoniae)和北方根结线虫(Meloidogyne hapla)表现出稳定的拮抗活性。拮抗实验结果表明,6株内生菌处理能使牡丹病原真菌菌丝生长扭曲,出现泡囊结构以及局部膨大。经生理生化实验并结合16S rDNA及gyrB基因序列分析,YMG34菌株被鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);其余5个菌株被鉴定为耐盐芽孢杆菌(B.halodurans),结果表明6株内生细菌菌株均具有防治牡丹病害的潜力。

摘要： 对紫陀螺菌的资源分布和化学成分进行研究,采用走访调查、实地考察及定点测定的方法,确定紫陀螺菌子实体为单生或群生,多呈带状分布,主要分布在西陵峡南岸、海拔为400 m~800 m的山脊及山腰中。采用葡聚糖凝胶柱层析、正相硅胶柱层析、高效液相色谱等分离手段,结合核磁共振波谱分析方法,对紫陀螺菌子实体和发酵液的化学成分进行研究,最终从紫陀螺菌子实体的甲醇提取物中分离得到4个化合物,紫陀螺菌发酵液中得到1个化合物。经核磁共振波谱鉴定,这5个化合物分别为邻苯二甲酸-双(2’-乙基庚基)酯,邻苯二甲酸-二(2-乙基己基)酯,D-半乳糖醇,腺苷,吲哚-3-羧酸甲酯。

摘要： 随机选择南昌某兔场养殖的的獭兔,从十二指肠中分离出多株乳酸菌,对其中7株优势菌用常规生化法结合分子鉴定法进行分离鉴定。结果显示:7株优势菌均为G+杆菌,生化特性与乳杆菌相符,分子特性与唾液乳杆菌相符。结论:7株优势菌均为唾液乳杆菌,唾液乳杆菌为獭兔肠道的优势常在菌。本试验可为开发獭兔源益生菌制剂提供优质的后备菌株分离方案。

摘要： 目的 研究枸骨Ilex cornuta Lindl.ex Paxt叶的化学成分及其抗骨髓炎活性。方法 枸骨叶90%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用Griess法测试化合物抗骨髓炎活性。结果 从中分离得到14个化合物,分别鉴定为二十四烷酸(1)、邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯(2)、selaginellin(3)、对香豆酸甲酯(4)、isobonein(5)、bonducellin(6)、对羟基苯甲酸乙酯(7)、没食子酸-3-甲基醚(8)、邻苯二甲酸二异丁酯(9)、isoagatholal(10)、对羟基肉桂酸乙酯(11)、neocaesalpin L(12)、cassipourol(13)、leeaoside(14)。化合物5、6、13可不同程度地减少骨髓NO释放量。结论 所有化合物均为首次从该植物中分离得到,枸骨叶可能具有潜在的抗骨髓炎活性。

摘要： 为了找到对云斑白条天牛(Batocera lineolata)具有杀虫活性的生防菌,开发云斑白条天牛生物防治的高效菌剂,采用传统的微生物分离培养与16S rDNA基因测序相结合的方法对自然罹病死亡的云斑白条天牛幼虫体内微生物进行分离鉴定。结果表明,获得的21株细菌分别属于克雷伯氏菌属(Klebsiella)、沙雷氏菌属(Serratia)和产碱杆菌属(Alcaligenes)等12属;获得的8株真菌分别属于虫草属(Cordyceps)、螺旋聚孢霉属(Clonostachys)、镰刀菌属(Fusariums)等6个属。讨论了沙雷氏菌属、虫草属、螺旋聚孢霉属等菌属的杀虫活性及其开发利用潜力。

摘要： 乳房炎是奶牛最常见的疾病之一,金黄色葡萄球菌是导致奶牛乳房炎的重要细菌之一。为了调查宁夏地区规模牧场金黄色葡萄球菌在奶牛中的流行情况和耐药特点。本研究通过流行病学调查、常规微生物学及PCR鉴定方法,对宁夏地区6个规模牧场中的856份奶样中的病原微生物进行分离鉴定和耐药性分析。结果表明,856份奶样中,共获得467株金黄色葡萄球菌,阳性率为55%;分离株对头孢噻肟、丁胺卡那霉素、阿莫西林、庆大霉素、万古霉素、环丙沙星、链霉素高度敏感。

摘要： 目的 研究蝙蝠葛Menispermum dauricum DC.根茎的化学成分。方法 蝙蝠葛根茎95%乙醇提取物采用硅胶、ODS、Prep-HPLC、Sephadex LH-20、Prep-TLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果 从中分离得到16个化合物,分别鉴定为杏黄罂粟碱(1)、O-methylcorypalline(2)、青藤碱(3)、蝙蝠葛苏林碱(4)、(R)-6-methoxy-1-(4-methoxybenzyl)-2-methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-7-ol(5)、pecrassipine B(6)、蝙蝠葛碱(7)、黄堇碱(8)、蝙蝠葛米定(9)、O-甲基蝙蝠葛碱(10)、尖防己碱(11)、menidaurine A(12)、thalifoline(13)、N-methylcorydaldine(14)、pycnarrhine(15)、amurolin(16)。结论 化合物6、16在之前从蝙蝠葛属所分离的化合物中未见报道,化合物1、5、15为首次从该植物中分离得到。

摘要： 本研究旨在调查上海地区猪源多杀性巴氏杆菌对临床常用抗菌药的耐药情况,为该病的药物预防与治疗提供科学依据.2014～2015年在上海市11个规模化养猪场采集的疑似多杀性巴氏杆菌感染的病料共计116份,采用细菌分离培养及PCR方法,分离鉴定出20株多杀性巴氏杆菌.采用纸片法测定了分离菌株对20种临床常用抗菌药的敏感性,结果表明,所有菌株对阿莫西林克拉维酸、头孢曲松、恩诺沙星、氟苯尼考、阿奇霉素和多黏菌素B敏感,这6种药物可作为本地区控制本病的首选药物.然而,超过50％的菌株对青霉素(65.0％)、复方新诺明(65.0％)、氨苄西林(60.0％)、链霉素(60.0％)、四环素(60.0％)的耐药.耐药谱分析显示,85.0％的菌株对4～7种的抗菌药耐药.本研究结果表明上海地区猪源多杀性巴氏杆菌对临床常用抗菌药物耐药较严重,应加强养殖场猪多杀性巴氏杆菌的耐药性监测与防控.

摘要： 为了解目前国内猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行现状,本研究对上海和江苏地区猪场进行了PEDV流行株的分离鉴定.根据GenBank中PEDV的基因序列,对其M基因设计检测引物.检测临床采集的猪腹泻样品,2份临床样品能扩增出特异性目的条带,测序结果证实为PEDV M基因片段.将检测为PEDV阳性的样品接种Vero细胞,并添加不同浓度的胰酶进行病毒传代培养,在添加适量胰酶的Vero细胞上分离到两株病毒并能稳定传代、增殖.选择第22代病毒饲喂新生仔猪,进行回归试验,结果两株细胞毒均能使1日龄仔猪出现典型腹泻症状,进一步证实成功分离到PEDV,命名为JSLS/PEDV/1/2014和JS/PEDV/2/2014株.遗传进化分析,JS/PEDV/2/2014和JSLS/PEDV/1/2014分离株的M基因分别与中国毒株HLJ-2012、BJ-2012-1亲缘性最近;S基因与Ⅰ群PEDV流行毒株亲缘性最近;两个毒株的ORF3基因均存在51个碱基缺失,与DR13处于同一大分支,与CV777亲缘性较远.

摘要： 益生菌是指一种可以改善动物肠道菌群平衡,有利于动物生长发育的一种有活性的微生态制剂.该研究从健康新鲜牛粪便中分离菌种,利用形态学和16S rRNA基因扩增测序,并对其中益生菌进行抑菌性试验,从中筛选候选益生菌株.结果表明,所有分离的菌株包括球菌和杆菌,除柠檬酸杆菌、大肠杆菌、产气克雷白(氏)杆菌为革兰氏阴性菌,其余均为革兰氏阳性菌;这些菌株依次为1株假肠膜明串株菌,3株粪肠球菌,2株海氏肠球菌,3株屎肠球菌,1株绿浅气球菌,3株魏斯氏菌,1株类鸟肠球菌,2株产气克雷白(氏)杆菌,1株柠檬酸杆菌,2株枯草芽孢杆菌,3株大肠杆菌,2株甲基营养型芽孢杆菌,2株蜡样茅胞杆菌.其中屎肠球菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌、海氏肠球菌、假肠膜明串株菌都有一定的耐药性.本研究从健康牛的新鲜粪便中分离和筛选益生菌,为后续牛源益生菌的进一步研究提供了候选菌株.

摘要： 试验从某鹅场送检的一例以软脚、瘫痪为特征的病鹅中分离获得一株病毒.通过对分离毒株进行血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)和PCR鉴定,初步鉴定该分离株为禽Ⅰ型副黏病毒.用该毒株鸡胚尿囊液对雏鹅进行致病性试验并采取组织制作病理切片.结果为试验雏鹅出现神经症状,剖检可见脑部水肿,充血和胰脏变性坏死.组织病理学观察可见肝脏的肝板结构模糊,肝细胞肿大,变性;脾脏的淋巴细胞变性、坏死,充血;肺泡壁增厚,充血、出血;胰岛细胞变性、坏死;脑水肿、神经元变性坏死,出现卫星现象和噬神经元现象.本试验结果丰富了鹅感染禽Ⅰ型副黏病毒病的诊断技术资料.

摘要： 本试验采用鸭胚尿囊腔接种、盲传的方法从一例疑似禽Ⅰ型副黏病毒病的病死番鸭病例中分离到一株病毒,并对病毒的理化特性和致病性进行了研究.结果显示,该病毒与GenBank上发表的鸡源新城疫病毒的F基因同源性最高,达97.2％;毒株的ELD50为10-7.83/0.2mL;病毒对热(56°C处理30min)、乙醚和氯仿敏感,对酸(pH=3)和胰蛋白酶不敏感.肌肉接种雏番鸭,在人工感染48小时后,番鸭出现头颈震颤、走路不稳等神经症状,剖检可见番鸭脑部充血出血、腺胃乳头出血、胰脏灰白色点状变性坏死和脾脏斑驳状坏死等病变,发病症状和病变与自然病例特征相似.结果表明,该病毒分离株为禽Ⅰ型副粘病毒.

摘要： 吸烟过量有害健康,可引起人体呼吸道等部位的损伤,但流行病学研究报告也显示,吸烟可降低老年痴呆症(Alzheimer's disease,AD)和帕金森氏综合症(Parkinson's disease,PD)的发病率,这可能与发现的烟草尼古丁清除活性氧自由基活性有关.此外,烟草中还含有黄酮类、香豆类和单宁类等多种化学成分,而这些化合物已经被证明具有较好的抗氧化性和降低自由基活性的功能.糖苷是烟草中重要的潜香物质,由单糖或低聚糖的半缩醛羟基和另一分子中的羟基、氨基、硫羟基等失水而产生的化合物.烟草糖苷不具有明显的挥发性和香味特征,但在经过高温加热或燃烧释放香气香味,是影响烟叶香气的重要因素.因分离难度大,难以获得单体化合物,烟草中糖苷类物质一直是研究的重点和难点.

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 目的：研究胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora.Pennell根茎的化学成分.方法：利用硅胶、MCI和反相硅胶柱色谱以及半制备HPLC等手段进行分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术进行化合物结构鉴定.结果：从胡黄连根茎甲醇提取物中分离得到了7个化合物,分别鉴定为胡黄连苷Ⅵ(1),胡黄连苷Ⅰ(2),胡黄连苷Ⅱ(3),胡黄连苷Ⅲ(4),6-O-E-阿魏酰基梓醇(5),米内苷(6),草夹竹桃苷(7).结论：化合物Ⅰ为首次报道的新化合物.

摘要： 本发明提供无需利用细胞表面标记物，可以高效率、高纯度地由哺乳类或鸟类分离浆细胞和浆母细胞的方法。荧光探针，与对内质网以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞的内质网的染色选择性高。涉及鉴定浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞进行染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。荧光探针，与对细胞核以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞核的染色选择性高。鉴定淋巴结组织等中的浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。

摘要： 本发明公开了一种微生物实时分离检测方法，包括以下步骤：(1)在真空作用下，将微生物颗粒引入分离装置；(2)利用所述分离装置具有将不同颗粒粒径的微粒差异分离的特性，将不同粒径的微生物进行分散，并沉积在收集装置中的不同位置处；(3)将所述收集装置取出，加入基质进行干燥处理；(4)将干燥后收集装置放入微生物鉴定装置中进行鉴定，得到微生物的鉴定结果。本发明还提供一种分离检测装置在微生物分离检测鉴定中的应用。本发明克服了微生物分离检测鉴定技术中难以实现快速检测的技术问题，实现了直接对不同颗粒的微生物进行检测，实现了各种检测场合下的微生物快速分离检测。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明提供无需利用细胞表面标记物，可以高效率、高纯度地由哺乳类或鸟类分离浆细胞和浆母细胞的方法。荧光探针，与对内质网以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞的内质网的染色选择性高。涉及鉴定浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞进行染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。荧光探针，与对细胞核以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞核的染色选择性高。鉴定淋巴结组织等中的浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。

摘要： 本发明公开了一种微生物实时分离检测方法，包括以下步骤：(1)在真空作用下，将微生物颗粒引入分离装置；(2)利用所述分离装置具有将不同颗粒粒径的微粒差异分离的特性，将不同粒径的微生物进行分散，并沉积在收集装置中的不同位置处；(3)将所述收集装置取出，加入基质进行干燥处理；(4)将干燥后收集装置放入微生物鉴定装置中进行鉴定，得到微生物的鉴定结果。本发明还提供一种分离检测装置在微生物分离检测鉴定中的应用。本发明克服了微生物分离检测鉴定技术中难以实现快速检测的技术问题，实现了直接对不同颗粒的微生物进行检测，实现了各种检测场合下的微生物快速分离检测。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明涉及一种细胞分离用微流控芯片及其在肿瘤细胞分离中的应用、细胞分离鉴定方法。该微流控芯片包括进液流道、捕获区和出液流道，进液流道具有进液口，进液流道与捕获区的进液侧对应连通，出液流道具有出液口，出液流道与捕获区的出液侧对应连通；捕获区具有多个捕获单元，各捕获单元具有多个分流柱。该微流控芯片采用柱子分选方法，分流柱在捕获区的流道中可以起到分流阻挡的作用，通过分流柱阻挡分别形成捕获流道和通过流道，待捕获的目的细胞可被截留在捕获流道中，而其他非目的细胞可经由通过流道流出，整个微流控芯片结构设计精巧，可用于具有多种不同细胞直径的细胞混合液中目的细胞的分离，分离效果高且操作简单，可广泛推广应用。

摘要： 本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种快速鉴定果园高效解磷细菌的特异性引物及其试剂盒、分离鉴定方法。本发明所提供的特异性引物为pqqB1‑F和pqqB1‑R引物对：所述pqqB1‑F的序列如SEQ ID NO:1所示；所述pqqB1‑R的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明采用改良后的PVK培养基，同时，使用百里溴酚蓝作为指试剂，阳性解磷菌菌株易于观察和计数，快速且易于操作和观察。本发明设计的引物pqqE1‑F和pqqE1‑R能够快速检测溶磷细菌，具有特异性好，能够准确的检测溶磷细菌，解决了常规方法耗时且成本高，基因特异性研究针对目标功能组进行研究，可以解决细菌中众多的未知机制。