绵羊肺炎支原体

摘要： 为探究2020年冬季云南省昆明市某山羊场持续发生的羊呼吸道疾病病因,从该场采集病料,经样品DNA提取、临床症状及病理剖检观察、病原分离纯化和16S rRNA PCR扩增鉴定,确定病原为绵羊肺炎支原体,并将分离株命名为YN-2020.随后设计引物,扩增YN-2020株延伸因子(TU)和热休克蛋白基因(HSP70)全长序列,分别与GenBank中相关参考菌株构建遗传进化树开展生物信息学分析,并对TU及HSP70基因进行体外原核表达.生物信息学分析结果显示:YN-2020分离株TU基因与绵羊肺炎支原体菌株MoGH3-3亲缘关系较近,在不同支原体种间,其与牛殊异支原体亲缘关系较近,与禽滑液囊支原体亲缘关系较远;HSP70基因与绵羊肺炎支原体Movi 117株亲缘关系较近,在不同支原体种间,其与牛殊异支原体亲缘关系较近,与猪鼻支原体亲缘关系较远.TU及HSP70基因原核表达结果显示,两种蛋白均能在大肠杆菌表达系统中获得不同程度的分泌性表达,TU重组蛋白大小约48 kDa,HSP70重组蛋白大小约68 kDa,且能与康复期绵羊血清发生反应.本研究可为进一步认识绵羊肺炎支原体提供参考,并在此基础上完善相关诊断方法的研究.

摘要： 为研究绵羊肺炎支原体(Mo)P113基因和丝状支原体山羊亚种(Mmc)LppA基因的共表达质粒免疫小鼠后对其免疫系统的影响,本研究构建了真核重组质粒pVAX1-P113-LppA,并经PCR、双酶切及测序鉴定正确后转染MDBK细胞,利用PCR及间接免疫荧光试验(IFA)分别检测P113蛋白和LppA蛋白的表达,结果显示,正确构建了含Mo P113基因及Mmc LppA基因的重组质粒pVAX1-P113-LppA;且该重组质粒在MDBK细胞中能有效转录并表达目的蛋白。分别在0、7 d、14 d时以100μg/只pVAX1-P113-LppA腿部肌肉注射免疫BABL/c小鼠,并设Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组,通过MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况,并在初次免疫后28 d利用流式细胞术分析各组小鼠脾细胞中CD4^(+)T淋巴细胞和CD8^(+)T淋巴细胞所占总淋巴细胞数的变化,同时采用的ELISA方法检测小鼠免疫后血清特异性抗体和细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)的分泌情况。结果显示,重组质粒组小鼠脾淋巴细胞增殖能力极显著高于对照组和空载体组(P<0.01),且该组小鼠脾CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞在免疫28 d时较Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组均极显著上升(P<0.01);该组小鼠免疫后7 d的血清特异性抗体水平极显著升高(P<0.01),在初次免疫后第49 d特异性抗体仍为阳性;血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌水平较Elution Buffer对照组和空载体pVAX1(100μg)对照组均呈显著上升趋势(P<0.05),且在首次免疫后28 d时分泌量最高,而后缓慢下降。攻毒试验结果显示,重组质粒pVAX1-P113-LppA对小鼠具有一定的免疫保护能力,小鼠肺部病理损伤明显减轻,发病数量减少。本实验首次表明重组质粒pVAX1-P113-LppA能诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,Mo P113基因和Mmc LppA基因可以作为羊支原体肺炎(MPSG)DNA疫苗的候选基因,该结果为MPSG核酸疫苗的研究与应用提供实验基础。

摘要： 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)引起的支原体肺炎(Mycoplasma pneumonia)是严重危害养羊业的重要呼吸道疫病。绵羊肺炎支原体感染具有隐蔽性、持续性,造成患病羊生产性能下降,严重影响养羊经济效益。综合近期国内外关于绵羊肺炎支原体分子致病机制的文献报道,从绵羊肺炎支原体与呼吸道上皮细胞黏附、致下呼吸道损伤和引起机体免疫抑制三方面进行综述,以期为后续深入研究绵羊肺炎支原体致病机理、开发新型防控技术奠定基础。

摘要： 研究旨在了解新疆某规模化羊场羊支原体肺炎主要流行株的种型背景,摸清该规模化羊场支原体主要流行株的种型,为该场羊支原体性肺炎的免疫防治提供参考。试验采用绵羊肺炎支原体、丝状支原体丝状亚种、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、精氨酸支原体等特异性引物,运用PCR检测方法对支原体进行检测。结果显示,该场羊群整体处于亚健康的状态,常年有咳嗽等临床表现,发病月份多集中于12月至第二年3月。研究表明,该场羊群以感染绵羊肺炎支原体为主,少数羊群感染精氨酸支原体,其他支原体均未检出。

摘要： 为明确江苏某羊场外购育肥羊突发呼吸道疾病的病因,本研究结合临床症状、剖检病变观察、病原学检测与分离鉴定等方法对病因进行分析。结果表明:该病是由肠道外致病性大肠杆菌、山羊副流感病毒3型及绵羊肺炎支原体混合感染所致。分离所得的2株大肠杆菌对多黏菌素B、强力霉素敏感,对其他12种常见抗生素均不敏感,检测到其携带有iss、fyuA、iroN、cvaC、fimH、iutA、kpsMTⅡ这7种毒力基因,分别属于系统进化群B1群与B2群。通过MDBK细胞成功分离获得1株山羊副流感病毒3型毒株,其M基因片段与流行毒株同源性最高达99.7%。该结果将有助于科学认识和防控山羊呼吸道疾病。

摘要： [目的]克隆表达绵羊肺炎支原体DnaJ基因,研究其表达产物的免疫原性。[方法]以绵羊肺炎支原体内蒙古分离株NM03-MO株基因组DNA为模板,克隆其DnaJ基因序列,对蛋白质序列进行分析比对及三维结构预测;将该基因片段连接至pColdⅠ表达载体,构建pColdⅠ-DnaJ原核表达载体表达重组DnaJ蛋白并纯化,通过Western blot技术检测其与支原体抗体阳性血清的结合活性。[结果]NM03-MO株DnaJ蛋白序列与绵羊肺炎支原体序列同源性最高,但三维结构存在一定差异,重组DnaJ蛋白与绵羊肺炎支原体阳性血清有较好的结合活性,初步证明该蛋白具有免疫原性。[结论]绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白被首次成功克隆表达,且具有较好的免疫原性,为后续分子致病机制研究及新型疫苗研制奠定基础。

摘要： 【目的】建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导抗原性最佳蛋白表达并进行诱导时间优化;利用SDS-PAGE分析该蛋白分子质量大小及其表达形式。以重组蛋白作为抗原,绵羊肺炎支原体阳性血清作为抗体,通过Western blotting方法分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立抗原性最佳蛋白的间接ELISA抗体检测方法,用该方法对20份阴性血清进行检测,计算阴阳临界值;检测该方法的特异性、敏感性和重复性,并用建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份绵羊临床血清样本进行检测。【结果】经DNAStar分析,P60蛋白第58-928位氨基酸区域的平均抗原指数在0.8~1.7之间,亲水指数为0~2.0,证明该区域(P60_(58aa-928aa))抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到P60_(58aa-928aa)基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导浓度为1 mmol/L,诱导10 h时蛋白表达量较高,蛋白分子质量为42 ku,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达;Western blotting结果表明,构建的重组蛋白具有良好的反应原性。对ELISA各条件进行优化结果显示:抗原包被浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶100,最佳孵育时间为1.5 h,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4000,判定阴阳性血清的临界值为0.36。对口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、牛支原体(Mb)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)的标准阳性血清的检测均为阴性,证明该方法特异性较强;敏感性试验结果表明,血清稀释度为1∶2048时仍为阳性;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均<10%,证明该方法具有较好的重复性。利用所建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份羊血清检测结果表明,二者的阳性符合率为81.6%,阴性符合率为92.6%,总符合率为88.0%。【结论】本研究建立的间接ELISA方法可用于临床样本的检测,为绵羊肺炎支原体的疫苗免疫效果评价和疾病诊断提供了较为可靠的方法。

摘要： 对来自祁连县默勒镇养殖合作社的病死羔羊进行临床剖检、实验室检验和分子生物学鉴定,诊断为D型产气荚膜梭菌合并感染绵羊肺炎支原体。

摘要： 羊传染性胸膜肺炎是一种急性、高度接触性传染性疾病,又称烂肺病,典型临床表现为浆液性、纤维素性胸膜肺炎,发病率、致死率高。羊传染性胸膜肺炎是一种典型的免疫抑制疾病,可攻击羊群的免疫系统,造成羊群出现严重的免疫抑制,对多种病原的抵抗能力显著下降。为防范羊传染性胸膜肺炎的传播流行,应掌握该病的流行特点,采取有效措施防控,确保可在短时间内控制病情。文章综述了羊传染性胸膜肺炎的临床症状及病理变化,总结了诊断及治疗方法,以期为该病的预防与治疗提供参考。

摘要： 为调查西安市奶山羊传染性胸膜肺炎流行情况,分别从临潼区、高陵区和阎良区随机采集均未经过山羊传染性胸膜肺炎疫苗免疫的奶山羊血清1013份。利用山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测试剂盒和山羊感染绵羊肺炎支原体抗体检测试剂盒进行血清抗体检测。结果表明,临潼区、高陵区和阎良区山羊支原体山羊肺炎亚种抗体阳性率分别为7.07%、16.56%和6.6%,总体阳性率为8.29%;山羊感染绵羊肺炎支原体抗体阳性率分别为19.19%、30.06%和21.17%,总体阳性率为22.21%;两种支原体混合感染阳性率分别为2.53%、4.91%和0.61%,总体阳性率为1.68%。检测结果说明西安市奶山羊养殖场存在山羊支原体山羊肺炎亚种和山羊的绵羊肺炎支原体感染率,并以山羊的绵羊肺炎支原体感染为主,应该制定相应的防控措施控制疫情。

摘要： 为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例,利用支原体培养基对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,结果显示菌落呈"桑葚状,无中心脐";分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,美兰还原反应阳性,氯化四氮唑还原反应阳性,血细胞吸附试验阳性,胆固醇需要试验阳性;PCR结果扩增出绵羊肺炎支原体特异大小为361bp的目的片段,将该序列同GenBank中8株绵羊肺炎支原体序列进行比较,结果证明该序列同绵羊肺炎支原体标准株Y-98同源性为98.1％,与地方株MoGH3-3的同源性最高(98.7％).鉴定结果表明本次分离到的支原体为绵羊肺炎支原体,并命名为FJ01-CL株.本研究首次证明了福建省存在由绵羊肺炎支原体(Mycopalsam ovipneumonia,Mo)引起的羊支原体性肺炎.

摘要： 本文旨在对绵羊肺炎支原体p113基因进行生物信息学分析，并对其功能进行预测。采用多种软件和在线工具，对p113基因的同源性、跨膜结构、重复序列、信号肽、抗原表位等进行预测，并与同源序列进行比较分析。结果表明，p113基因是猪肺炎支原体粘附素基因p97的直系同源基因，并具有与P97蛋白R2区类似的特征性重复序列。通过综合比较分析，推测P113蛋白极可能是绵羊肺炎支原体的重要粘附素和膜表面免疫原。

摘要： 目的：通过绵羊肺炎支原体(Mo)贵州分离株的遗传进化特征分析,为贵州省采取针对性措施防控CCPP爆发流行提供科学依据.rn 材料方法：采用分子克隆技术对所分离支原体进行分子鉴定,从Mo贵州分离TZ株与WN株的DNA中扩增16S rRNA基因部分序列,连接pMD18-T克隆载体转化DH5α感受态细胞中,并进行重组质粒的PCR与酶切鉴定,通过序列比对分析比较了Mo贵州分离株与国内外其他毒株及多种支原体的遗传进化关系.rn 结果：Mo贵州分离TZ、WN株与标准株Y98仅各有5个碱基的差异，与国内分离MoGH3-3株同源性高达99.9%；与丝状支原体簇16S rRNA基因亲缘关系较远，而与Mcanis PG14等支原体亲缘关系较近。进一步证实了TZ、WN株为Mo。结果Mo贵州分离TZ、WN株16S rRNA基因与Mo标准Y98株间仅存在5个碱基的变异或缺失，从分子指征上再次鉴定TZ、WN株为Mo，表明了贵州省CCPP病原不仅存在Mmc，而且Mo也是致山羊发病主要病原之一。rn 结论：绵羊肺炎支原体(Mo)是山羊传染性胸膜肺炎主要病原之一，主要感染山羊及绵羊，表现为呼吸障碍、消瘦、高热、卧地不起等症状，病死率较高，给山羊养殖业造成严重的经济损失。自1972年首次分离鉴定Mo后，Mo已呈全球性分布，我国山东、新疆、广西等地皆有M03感染山羊的报道。16S rRNA分子是原核生物核糖体30S亚基中稳定的组分，编码的基因序列内部由保守区和可变区组成，并共存的独特分子进化格局使编码16S rRNA基因序列为微生物鉴定分类的重要科学指标。目前关于Mo基因组学的研究暂属空白，通过绵羊肺炎支原体(Mo)贵州分离株的遗传进化特征分析，佐证Mo与Mmc在免疫原性上存在差异，这将对当地采用何种疫苗，以何种免疫方式针对病原防控有重要意义。

摘要： 应用微量法检测18种常用抗菌药对绵羊肺炎支原体HD1-goat和丝状支原体XT1-goat分离株的抗菌活性。供试药物中，以盐酸环丙沙星对两支原体分离株的抗菌活性最高，其次是恩诺沙星、盐酸左旋氧氟沙星、盐酸多西环素和酒石酸泰乐菌素。乳酸环丙沙星对HD1-goat株显示很高的抗菌活性，但对XT1-goat株的抗菌活性较低。硫氰酸红霉素对HD1-goat没有抑制活性，但对分离株XT1-goat有较高的抑制和杀灭作用.单硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素、硫酸阿米卡星以及磺胺甲嗯唑等对两者均无抑制活性。上述结果表明，盐酸环丙沙星、恩诺沙星、乳酸环丙沙星、盐酸左旋氧氟沙星等多种氟喹诺酮类药物，以及盐酸多西环素和酒石酸泰乐菌素为治疗羊传染性胸膜肺炎的高敏感药物，但不同支原体分离株对药物的敏感性不同;氨基糖苷类药物不适合用于羊传染性胸膜肺炎的治疗。

摘要： 采用TritonX-100裂解和0.6％ KI提取的方法制备绵羊肺炎支原体Y-98株外膜蛋白,经12％SDS-PAGE分析,表明其分子量范围在14.4～125.9KD之间;分别制备抗Y-98株全细胞抗原和外膜蛋白高免血清,经Western-blotting分析,表明外膜蛋白为绵羊肺炎支原体的主要保护性抗原,而在外膜蛋白,67.6KD、39.3KD和28.8KD多肽为其主要保护性抗原.利用ELISA方法和MTT法对外膜蛋白引起的体液免疫和细胞免疫功能进行了测定,结果表明膜蛋白能够诱导机体产生高效价的抗体,免疫后第7、14和28d效价分别达到了1∶24.25、1∶27.75和1∶28.75;膜蛋白具有非特异性和特异性致有丝分裂作用,在免疫前0d及免疫后28d对T淋巴细胞刺激的转化率分别为8.46％和18.3％.

摘要： 为遏制疫情蔓延，本实验对临床发病山羊以分子生物学及细菌学方法对疫情作出确定性诊断。对临床疑似CCPP羊进行了确定性诊断，结果从4只病死山羊的肺组织与胸腔积液中均检测出Mo核酸存在，表明山羊己感染CCPP主要病原Mo。且患病山羊继发感染大肠埃希氏杆菌，对多种常见抗生素表现明显的耐药性。本实验首次在贵州省检测到Mo存在，为以后合理制定防控措施预防CCPP暴发流行提供了科学依据。相关研究资料表明，Mo侵入机体后，可致病羊免疫力低下，因而易继发感染细菌性疾病。饲养管理者应加强山羊CCPP防治意识，对羊群进行科学合理的免疫，并注重合理规范用药，避免继发耐药细菌感染。

摘要： 为遏制疫情蔓延，本实验对临床发病山羊以分子生物学及细菌学方法对疫情作出确定性诊断。对临床疑似CCPP羊进行了确定性诊断，结果从4只病死山羊的肺组织与胸腔积液中均检测出Mo核酸存在，表明山羊己感染CCPP主要病原Mo。且患病山羊继发感染大肠埃希氏杆菌，对多种常见抗生素表现明显的耐药性。本实验首次在贵州省检测到Mo存在，为以后合理制定防控措施预防CCPP暴发流行提供了科学依据。相关研究资料表明，Mo侵入机体后，可致病羊免疫力低下，因而易继发感染细菌性疾病。饲养管理者应加强山羊CCPP防治意识，对羊群进行科学合理的免疫，并注重合理规范用药，避免继发耐药细菌感染。

摘要： 为遏制疫情蔓延，本实验对临床发病山羊以分子生物学及细菌学方法对疫情作出确定性诊断。对临床疑似CCPP羊进行了确定性诊断，结果从4只病死山羊的肺组织与胸腔积液中均检测出Mo核酸存在，表明山羊己感染CCPP主要病原Mo。且患病山羊继发感染大肠埃希氏杆菌，对多种常见抗生素表现明显的耐药性。本实验首次在贵州省检测到Mo存在，为以后合理制定防控措施预防CCPP暴发流行提供了科学依据。相关研究资料表明，Mo侵入机体后，可致病羊免疫力低下，因而易继发感染细菌性疾病。饲养管理者应加强山羊CCPP防治意识，对羊群进行科学合理的免疫，并注重合理规范用药，避免继发耐药细菌感染。

摘要： 为遏制疫情蔓延，本实验对临床发病山羊以分子生物学及细菌学方法对疫情作出确定性诊断。对临床疑似CCPP羊进行了确定性诊断，结果从4只病死山羊的肺组织与胸腔积液中均检测出Mo核酸存在，表明山羊己感染CCPP主要病原Mo。且患病山羊继发感染大肠埃希氏杆菌，对多种常见抗生素表现明显的耐药性。本实验首次在贵州省检测到Mo存在，为以后合理制定防控措施预防CCPP暴发流行提供了科学依据。相关研究资料表明，Mo侵入机体后，可致病羊免疫力低下，因而易继发感染细菌性疾病。饲养管理者应加强山羊CCPP防治意识，对羊群进行科学合理的免疫，并注重合理规范用药，避免继发耐药细菌感染。

摘要： 为遏制疫情蔓延，本实验对临床发病山羊以分子生物学及细菌学方法对疫情作出确定性诊断。对临床疑似CCPP羊进行了确定性诊断，结果从4只病死山羊的肺组织与胸腔积液中均检测出Mo核酸存在，表明山羊己感染CCPP主要病原Mo。且患病山羊继发感染大肠埃希氏杆菌，对多种常见抗生素表现明显的耐药性。本实验首次在贵州省检测到Mo存在，为以后合理制定防控措施预防CCPP暴发流行提供了科学依据。相关研究资料表明，Mo侵入机体后，可致病羊免疫力低下，因而易继发感染细菌性疾病。饲养管理者应加强山羊CCPP防治意识，对羊群进行科学合理的免疫，并注重合理规范用药，避免继发耐药细菌感染。

摘要： 本发明提供构建猪肺炎支原体小鼠发病模型的方法及鉴别强弱毒株的方法，属于动物模型领域。构建方法是对小鼠进行两次攻毒，第一次攻毒后13‑15天，获得小鼠发病模型；第二次攻毒是在第一次攻毒后42‑54小时进行的；每次攻毒时，向每只小鼠的左右鼻孔各滴入至少25μL 109CCU/ml的猪肺炎支原体培养物，然后对每只小鼠腹腔注射至少50μL 109CCU/ml的猪肺炎支原体培养物。鉴别强弱毒株的方法是构建小鼠发病模型，通过对小鼠肺脏病变进行评分等鉴别强弱毒株。本发明弥补了猪肺炎支原体体外细胞模型不能模拟体内环境的缺陷，也解决了多株猪肺炎支原体菌株在本体动物猪上进行试验的成本和场地等饲养环境的制约。

摘要： 本发明涉及猪肺炎支原体突变株，以及用于制备所述突变株的方法。其还涉及用于所述方法的载体、疫苗组合物以及包含用于针对猪地方性肺炎和其他猪疾病的所述突变株的接种试剂盒。本发明还涉及将猪肺炎支原体作为用于表达重组蛋白质和其他目的DNA序列的宿主的应用。

摘要： 本发明公开一种肺炎支原体抗原及其在同时定量检测末梢血中肺炎支原体IgG、IgM含量中的应用，本发明所述突变的肺炎支原体抗原P80，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述的肺炎支原体抗原P80与抗体的免疫反应性较天然抗原提高了约34.6％。本发明的肺炎支原体抗原P80结合量子点免疫层析技术，克服了现有肺炎支原体抗体检测方法如免疫层析试验(ICA)和酶联免疫分析法(ELISA)技术等仅能定性或半定量检测，且进行MP‑IgM和MP‑IgG检测必须进行2次实验等存在的不足，可以同时实现MP‑IgM和MP‑IgG的检测，从而区分患者是近期感染还是既往感染，减少误诊率。

摘要： 本发明提供一种肺炎支原体检测用试剂盒、其制备方法以及肺炎支原体的检测方法。该试剂盒包括校准品、样本处理液、磁微粒试剂、标记抗体试剂、清洗液和激发物。

摘要： 本发明提供构建猪肺炎支原体小鼠发病模型的方法及鉴别强弱毒株的方法，属于动物模型领域。构建方法是对小鼠进行两次攻毒，第一次攻毒后13‑15天，获得小鼠发病模型；第二次攻毒是在第一次攻毒后42‑54小时进行的；每次攻毒时，向每只小鼠的左右鼻孔各滴入至少25μL 10

摘要： 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，包括如下步骤：(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；(2)用所述抗原包被酶标板，37°C温箱1h后4°C过夜；加入封闭液，37°C封闭2h；加入200倍稀释的血清样品，37°C孵育1h；加入用5％脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37°C孵育1h；(3)用PBST洗板后加入TMB显色液，37°C孵育10min；加入终止液终止反应；酶标仪读取OD450nm值。本发明iELISA方法敏感性可达98％，操作简单，样本处理量大，不仅可用于Mccp和Mo两种病原血清学阴性羊的筛选，还可用于实验中Mccp抗体水平的监测。

摘要： 本发明公开了一株绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体制剂筛选中的应用，所述绵羊肺炎支原体的分类命名为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020907，保藏日期为2020年12月14日。本发明所提供的菌株NJ01培养生长速度快、滴度高，可达1010CCU/mL，在特定培养基中经复苏传代培养后，只需要10‑72h即可变色，这为抗绵羊肺炎支原体制剂的测定节约了时间，提高了效率，可用于抗支原体制剂的快速筛选等。

摘要： 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，包括如下步骤：(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；(2)用所述抗原包被酶标板，37°C温箱1h后4°C过夜；加入封闭液，37°C封闭2h；加入200倍稀释的血清样品，37°C孵育1h；加入用5％脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37°C孵育1h；(3)用PBST洗板后加入TMB显色液，37°C孵育10min；加入终止液终止反应；酶标仪读取OD

摘要： 本发明提供一种绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重荧光定量PCR方法，分别设计一对针对绵羊肺炎支原体特异性检测引物Mo‑F、Mo‑R及一条荧光探针Mo‑P，一条针对丝状支原体山羊亚种的特异性检测引物Mmc‑F、Mmc‑R及一条荧光探针Mmc‑P，并确定了针对绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种的双重应荧光定量PCR方法的特异性引物及应荧光探针的浓度。本发明提供的双重荧光定量PCR方法可以同时检测和鉴别绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种两种支原体，具有快速、准确、特异性强、重复性好等优点，同时还可节约成本，适用于对以上两种支原体所引起的羊支原体性肺炎的快速检测和流行病学调查提供有效手段。

摘要： 本发明公开了一种具有免疫原性的绵羊肺炎支原体HSP70‑P113融合蛋白，由绵羊肺炎支原体热休克蛋白基因