流行性腹泻病毒

摘要： 在生猪养殖生产过程中,猪流行性腹泻是常见的一种由猪流行性腹泻病毒引起的传染性疾病。各个阶段的猪都能发生该病,发病后生猪会出现采食量下降、呕吐、腹泻等症状,如果治疗不及时,生猪会因脱水而死亡,给养殖场带来较大的经济损失。流行性腹泻病毒在自然界中广泛存在,如果养殖场饲养管理不科学,会导致该病毒的迅速传播并蔓延至整个养猪场,引起生猪发病。近年来,猪流行性腹泻发病率有逐年上升的趋势,因而该病的预防和治疗需要引起养殖户的重视,有利于养殖场获得良好的经济效益,也有利于推动我国生猪养殖业的健康发展。

摘要： 猪流行性腹泻病毒(PEDV)属冠状病毒科α冠状病毒属,可引起猪厌食、急性腹泻、呕吐和脱水,新生仔猪感染流行性腹泻病毒时,死亡率可达100%。1诊断1.1临床诊断PEDV感染猪可出现厌食、呕吐、腹泻、体重减轻、脱水等症状,各日龄猪均可感染PEDV。该病严重程度与猪的日龄有关,新生仔猪感染PEDV时,会发生腹泻和脱水而死亡。

摘要： 猪流行性腹泻最早出现在1971年的英国,农场主发现其养殖的育肥猪和架子猪出现了急性腹泻症状,而我国最早是在20世纪80年代后陆续发现了流行性腹泻病毒,并且在2021年发生了变异,传统疫苗对变异后的毒株保护率较低。猪流行性腹泻便在我国呈暴发性流行,猪的感染率与死亡率都比较高,给养殖户造成了巨大的经济损失。因此,必须要重视该病的治疗与预防工作,要求养殖户在日常养殖中树立科学养殖意识,加强对该病的预防,降低猪流行性腹泻对养猪行业的不利影响。

摘要： 1猪病毒性腹泻的临床特征猪病毒性腹泻的病原主要是病毒,如传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒等,发病猪常表现为呕吐、腹泻、脱水等,尤其是仔猪,腹泻严重的时候会极度消瘦,每一根肋骨都很容易看出来。该病具有极强的传染性,所有年龄段的猪群都可以感染该病,其中仔猪发病率和死亡率最高。随着日龄的增加,发病率和死亡率不断下降。发病猪只无体温升高的症状,濒临死亡的猪只体温会降低。猪病毒性腹泻没有严格的季节性,其中冬春季节发生的稍微多一些。近些年夏季暴发的猪病毒性腹泻病的案例也越来越多,且成为猪场一个新常态的疾病。目前,猪场常用的抗菌药物治疗该病的效果并不理想,甚至是无效治疗。

摘要： 猪流行性腹泻又称冬季腹泻,是由猪感染流行性腹泻病毒引起的肠道传染病。主要表现为水样腹泻、脱水、呕吐和哺乳仔猪死亡率高。该病主要发生在冬季和春季。所有年龄的猪均可感染。病后会出现严重腹泻、脱水、呕吐和体重减轻等症状。仔猪症状更为严重,死亡率也较高。

摘要： 猪流行性腹泻是一种急性的病毒性传染性疾病,具有广泛的接触性,传播范围较广,临床上以严重的腹泻、机体严重呕吐脱水为主要特征。任何年龄品种的猪群都可以发病,其中以哺乳阶段的仔猪危害最为严重,感染该种疾病的概率为100%,死亡率能够达到95%以上。大量研究结果表明,流行性腹泻病毒在世界各地广泛分布、广泛流行,常常呈地方性流行,造成的危害较为严重。

摘要： 为了对汨罗某规模化猪场仔猪腹泻病因进行确诊,采用流行病学调查、临床及病理诊断、实验室细菌培养及RT-PCR法检测可能导致仔猪腹泻的常见病原,同时以药敏试验法初步确定分离菌株对不同抗生素的敏感性,筛选敏感药物用于疫病的治疗.在发病仔猪肠道组织中检测到流行性腹泻病毒核酸阳性;在关节腔、腹股沟和颌下淋巴结中均检测到链球菌,且该致病菌对氧氟沙星、头孢噻呋钠等抗生素敏感.研究结果说明该病例是由PEDV和猪链球菌混合感染所致.

摘要： 为获得能自主进入细胞的单域抗体(sdAb),将抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)的sdAb与一种细胞穿膜肽(TAT)融合表达,并纯化重组TAT-sdAb蛋白.用ELISA方法检测TAT-sdAb与M蛋白的结合活性,免疫荧光试验验证其穿Vero细胞膜活性、最适作用时间和剂量,并将TAT-sdAb与胞内PEDV进行共定位研究.结果证实,sdAb与TAT融合表达不影响其与M蛋白的结合活性,在使用剂量为50μg/mL、作用3 h时,能明显观察到其进入Vero细胞,并与胞内的PEDV呈现共定位分布.结果表明,融合TAT的sdAb具有抗原结合活性和穿膜活性,为基于单域抗体的药物研发提供了理论基础,为PEDV感染细胞的动态过程研究提供了可靠工具.

摘要： 养殖家畜的冠状病毒,如猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),其基因序列与蝙蝠体内冠状病毒基因序列高度相似,可引起猪肠道感染并导致仔猪大量死亡,对动物健康危害极大.本研究基于对美国猪群PEDV流行毒株表观流行率的数据挖掘作为先验信息,以2019年美国生猪入境中国西南陆路口岸的实验室抗体筛查为知识更新,利用贝叶斯统计推断方法,估计美国猪群PEDV发生的真流行率分布.结果显示,PEDV在美国猪群中的真流行率分布中位值(median)为0.005 22(95％CI=0.000 424～0.022 5),95％的高置信上限(upper confident limit,UCL)的流行率分布为3％.后验分布流行率高度右偏的概率密度统计特性推断美国猪群PEDV真流行率最大可能分布主要集中在2.5％百分位数(P2.5％=0.000 2)与中位数(P50％=0.005 22)之间,但不同生猪畜群间PEDV真流行率分布值可能会存在有小概率溢出分布大于0.03(P≤2.5％)的可能.此外,在现阶段口岸筛查的试剂选择方面,建议口岸首先使用基于N蛋白的ELISA抗体作为初筛,然后以基于S1重组蛋白ELISA抗体筛查作为复筛,来提高口岸对来自美国生猪的 冠状病毒入境我国的风险认知、管控和鉴别能力.以先验分布和口岸实验室检测结果优化为基础的贝叶斯统计推断监测技术,可以为在现有知识和认知基础上最大程度阻断来自异域病原微生物入侵提供基于科学证据的风险决策技术支持,对口岸检验检疫、抽样监测和风险决策具有突破性的意义.

摘要： 为了明确某猪场初生仔猪腹泻的病因,应用PCR、核酸序列分析、细菌分离鉴定以及动物实验等方法,对该病例进行了实验室诊断.从病仔猪的肠道及其内容物中检测到了猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白基因,该基因片段与近年国内流行的PEDV变异株的同一性在99％以上.同时从病猪的肝脏和脾脏中分离到了致病性大肠杆菌,该分离株具有一般大肠杆菌的形态特征、培养特性和生化特点,但产生H2S,其16S rRNA基因序列与已知大肠杆菌的同一性高达99.9％.遗传进化分析表明分离菌株与产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)处于同一分支.Balb/c小鼠(n=8)经腹腔感染分离菌株5h开始死亡,至感染后20h,感染小鼠全部死亡.此外,该大肠杆菌分离株只对多粘菌素B敏感,对常用的第三代头孢菌素类药物中介,而对其他常用的多种氨基糖苷类、喹诺酮类药物以及复方新诺明等多种药物耐药.该结果表明,猪流行性腹泻病毒与产硫化氢大肠杆菌混合感染是本次仔猪腹泻的病因,提示当前猪场大肠杆菌的耐药性相当普遍,应该引起养殖人员、临床兽医和相关部门的高度重视.

摘要： 为分析2015年-2016年广东省猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株的遗传变异情况,本研究采用RT-PCR技术对16株PEDV流行毒株S1基因进行克隆和测序,并将测序结果与Genbank中PEDV参考毒株S1基因进行同源性分析并构建系统进化树.结果显示,16株流行毒株间核苷酸序列同源性为93.8％-100.0％,与国内参考毒株间核苷酸序列同源性为70.7％-98.1％.PEDV S1基因遗传进化分析表明,16株流行毒株与国内大部分流行毒株亲缘关系较近,与疫苗毒株CV777、中国早期分离株CH/S、韩国流行毒株DR13、泰国流行毒株TH/AY/2.7/12、日本毒株14JM/01、美国毒株Minnesota/XW001等亲缘关系较远.此外,分离的16株毒株与华南地区2014年之前分离毒株CH/GDQY/2011、CH9/FJ、CH/GDGZ/2012、FM/YN/2013等属群不同,亲缘关系较远.说明广东省当前流行的PED存在新基因型,并已经成为优势毒株.

摘要： 为从腹泻仔猪肠道内分离鉴定猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),分析病毒遗传变异特征,明确其致病性.将无菌处理的腹泻仔猪小肠及其内容物悬液接种到Vero-81细胞,收获培养物,应用RT-PCR、免疫过氧化物酶单层试验和透射电镜等技术对其进行鉴定;分析其遗传变异特征;用分离毒株经口腔感染5头3d健康初生仔猪,观察仔猪临床表现和病理变化,检测病毒在组织中的分布,分析病毒血症和经粪便排毒的动态.分离到了一株PEDV变异病毒(命名为HBMC2012株),其可引起明显的细胞病变,与当前国内及美国流行的PEDV毒株同源性高,处于同一分支,与2010年之前的国内流行PEDV毒株、欧洲株CV777和韩国株DR13同源性低,处于不同分支;分离毒株S基因序列出现11bp和3bp的插入、6bp的缺失以及多处碱基对置换等突变.HBMC2012株可以导致仔猪出现典型的PED临床症状与病理变化,病毒主要分布于空肠后端、回肠和十二指肠黏膜上皮细胞内,病毒血症和粪便排毒至少持续14d.HBMC2012分离株为基因变异毒株,与国内近年流行的PEDV毒株同源性高,对初生仔猪具有明显的致病性.

摘要： 猪流行性腹泻是严重危害养猪业的主要传染病之一.本文概述了猪流行性腹泻病毒实验室检测方法的研究进展.在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查等.在分子生物学方面,主要依靠国内外相继建立起核酸杂交技术、RT-PCR法和实时荧光定量RT-PCR法等.介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床兽医科技工作者建立快速、简便、准确、实用的检测方法提供参考。

摘要： 为了解福建省猪流行性腹泻病毒(PEDV)毒株ORF3和M基因变异情况，本研究从4个不同规模猪场发生仔猪“顽固性腹泻”疾病的病料中扩增到4株PEDV的ORF3和M基因，并进行了序列分析。结果表明：4株PEDV ORF3基因均含有675个碱基，编码224个氨基酸，与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为89.7％-100.0％，氨基酸的同源性为94.7％-99.6％，其中以FIPT毒株核苷酸的同源性与CV777truncated毒株最低为89.7％，FINP毒株核苷酸的同源性与中国北方流行的cH ZKFG 11毒株最高为100.0％。M基因含有681个碱基，编码226个氨基酸，与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为94.8％-100.0％，氨基酸的同源性为94.8％-99.6％，其中以FTPT毒株核苷酸的同源性与日本D89752毒株最低为94.8％，FTNP毒株核苷酸的同源性与韩国CPFl93、泰国毒株最高为100.0％。4株PEDV毒株均与国内外流行强毒株的亲缘关系较近，与attenuate DRl3弱毒株的亲缘关系较远。

摘要： 以猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株的RNA为模板，通过RT-PCR扩增获得的3个相互重叠的cDNA克隆覆盖了S基因，序列比对结果表明：PEDV CH/JL株S基因与CV777、Brl/87、JS、KPEDV和Chinju99毒株S基因核苷酸序列的同源性分别为96～97%、96～87%、96～41%、94～02%和93～93%，氨基酸序列的同源性分别为96.17%、95.88%、96.10%、92.36%和92.05%；分子进化树分析结果显示，PEDV CH/JL株S基因与JS毒株S基因亲缘关系最近，处于同一群。利用DNAstar Protean程序预测了PEDV CH/JL株S蛋白一个抗原表位区(83～276aa)，将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞，在终浓度110mmol/L的IPTG诱导下获得了表达，Western blot结果显示，预测的抗原表位区GST融合蛋白能与猪流行性腹泻病毒多克隆抗血清反应，提示该抗原表位区含有线性抗原表位。

摘要： 应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段，并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF，编码由441个氨基酸残基组成的多肽，未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%；推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板，用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF，其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体，构建的重组质粒命名为pET-30a-PN；将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，在IPTG诱导下进行表达；SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白，重组蛋白以包涵体形式存在；薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%；Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应，说明该重组蛋白具有免疫学活性。

摘要： 为了解目前国内猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行现状,本研究对上海和江苏地区猪场进行了PEDV流行株的分离鉴定.根据GenBank中PEDV的基因序列,对其M基因设计检测引物.检测临床采集的猪腹泻样品,2份临床样品能扩增出特异性目的条带,测序结果证实为PEDV M基因片段.将检测为PEDV阳性的样品接种Vero细胞,并添加不同浓度的胰酶进行病毒传代培养,在添加适量胰酶的Vero细胞上分离到两株病毒并能稳定传代、增殖.选择第22代病毒饲喂新生仔猪,进行回归试验,结果两株细胞毒均能使1日龄仔猪出现典型腹泻症状,进一步证实成功分离到PEDV,命名为JSLS/PEDV/1/2014和JS/PEDV/2/2014株.遗传进化分析,JS/PEDV/2/2014和JSLS/PEDV/1/2014分离株的M基因分别与中国毒株HLJ-2012、BJ-2012-1亲缘性最近;S基因与Ⅰ群PEDV流行毒株亲缘性最近;两个毒株的ORF3基因均存在51个碱基缺失,与DR13处于同一大分支,与CV777亲缘性较远.

摘要： 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是近年来引起仔猪发生呕吐、腹泻、脱水死亡的主要病原，本文就PEDV的病原学、致病机理及疫苗的研究进展进行综述，并指出研究中存在的问题及对未来的展望，希望能为有效防控猪流行性腹泻提供新的思路。

摘要： 为比较猪流行性腹泻疫苗不同免疫途径的免疫效果,本研究以临床分离的PEDV病毒分别制备不同剂型的疫苗,通过注射、口服、滴鼻以及口服加滴鼻对产前40 d的母猪进行免疫,以评价疫苗的免疫保护力.对疫苗免疫的母猪血清ELISA抗体检测表明,试验组和对照纽部分母猪在免疫前和分娩时的血液中能检测到IgG抗体,但效价不高,且试验组跟对照纽的滴度相当;乳汁中IgG抗体检测表明,乳汁中IgG含量明显高于母猪血液中的含量,在乳汁中维持2d～3d后降为阴性,其中滴鼻组和口服组的含量最高;乳汁中IgA抗体检测表明,乳汁中PEDV IgA的含量均为阳性,滴鼻组抗体滴度最高,其次为口服组,联合免疫的抗体效价最低.攻毒试验表明,攻毒对照组仔猪全部死亡,滴鼻组只出现一过性腹泻,且在36 h内完全康复,其它各免疫组都出现不同程度的腹泻和死亡.本研究表明,滴鼻免疫能产生较好的免疫效果,具有良好的应用前景.

摘要： 本发明公开了一种鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的PCR‑HRM引物、方法及其应用。本发明提供的引物对特异性好，使用一对引物即可对SADS‑CoV和PEDV进行PCR扩增，然后通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，采集荧光数据，根据两种病毒熔解曲线的不同来鉴别。本发明提供的检测方法不需要病毒的分离鉴定，缩短了鉴别病毒的时间；不需要凝胶电泳观察结果，PCR结束即可利用软件分析结果；费用低，不需要特异性探针，荧光饱和染料便宜易得；具有特异性好、敏感性高和重复性好的特点，可以准确、快速地进行区分，可以在临床检测中推广使用。

摘要： 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40°C‑65°C退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR检测引物。本发明多重RT‑PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT‑PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。

摘要： 本发明公开了一套用于同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的多重PCR引物组。本发明的引物组由三对引物组成，其中，用于猪流行性腹泻病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：1和2所示；用于猪传染性胃肠炎病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：3和4所示；用于猪轮状病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：5和6所示。应用本发明引物序列通过多重PCR方法可同时对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的不同毒株进行检测，结果均为阳性，而对其他常见猪源病毒检测结果均为阴性，说明本发明的引物组特异性强、重复性好；对病毒cDNA梯度稀释后进行PCR检测，说明该引物灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因芯片和试剂盒。本发明基因芯片包括它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，以及SEQ ID NO：5或6所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。本发明试剂盒包括前述基因芯片与扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因的试剂。本发明基因芯片和检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。

摘要： 本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HBXT/2018，属于病毒疫苗技术领域，所述病毒毒株PEDV CH/HBXT/2018保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.16215。本发明提供了包括所述病毒毒株S蛋白的基因序列的重组载体以及所述重组载体的构建方法。本发明所述病毒毒株位于G2a亚群，与中国疫苗经典毒株CV777分属于不同的群，亲缘关系更接近2010年后爆发的猪流行性腹泻疫情中分离获得的猪流行性腹泻病毒毒株，与现有流行毒株存在的基因型差异较小，可应用于制备猪流行性腹泻疫苗，免疫效果好。

摘要： 本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017，属于病毒疫苗技术领域，所述病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.16216。本发明提供了包括所述病毒毒株基因组的重组载体以及所述重组载体的构建方法。本发明所述病毒毒株位于G2b亚群，与中国疫苗经典毒株CV777分属于不同的群，与AJ1102和CHGD‑01毒株亲缘关系较近，亲缘关系更接近2010年后爆发的猪流行性腹泻疫情中分离获得的猪流行性腹泻病毒毒株，与现有流行毒株存在的基因型差异较小，可应用于制备猪流行性腹泻疫苗，免疫效果好。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒和猪急性腹泻综合征冠状病毒三重FQ‑PCR检测方法。本发明提供用于猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒检测的特异性引物和探针，并建立了猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒的三重FQ‑PCR检测方法。本发明的特异性引物、探针和检测方法的特异性强、灵敏度高、重复性好，为猪腹泻性疾病的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异的临床检测方法。

摘要： 本发明公开了一种鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的PCR‑HRM引物、方法及其应用。本发明提供的引物对特异性好，使用一对引物即可对SADS‑CoV和PEDV进行PCR扩增，然后通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，采集荧光数据，根据两种病毒熔解曲线的不同来鉴别。本发明提供的检测方法不需要病毒的分离鉴定，缩短了鉴别病毒的时间；不需要凝胶电泳观察结果，PCR结束即可利用软件分析结果；费用低，不需要特异性探针，荧光饱和染料便宜易得；具有特异性好、敏感性高和重复性好的特点，可以准确、快速地进行区分，可以在临床检测中推广使用。

摘要： 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40°C‑65°C退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。