骨髓间充质干细胞

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞治疗卵巢功能不全有不错的效果,但仍存在归巢效率低、效果欠佳等问题。目的:探讨电针疗法联合骨髓间充质干细胞治疗化疗型卵巢功能不全的效果。方法:从32只SD大鼠中随机选择8只做正常组,其余随机分为卵巢功能不全组、干细胞组、联合组,每组8只,采用腹腔注射环磷酰胺溶液制备卵巢功能不全动物模型。造模结束后,正常组不做处理,卵巢功能不全组尾静脉注射1 mL生理盐水,干细胞组与联合组尾静脉注射1 mL骨髓间充质干细胞悬液(细胞数为2×106),联合组大鼠进行电针治疗,30 min/d,持续7 d,治疗结束后取心脏血与卵巢组织观察疗效。结果与结论:①与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠血清雌二醇激素水平明显升高,卵泡刺激素水平明显降低;②与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠卵巢卵母细胞数量明显增加;③与干细胞组相比,联合组的骨髓间充质干细胞归巢水平明显增加(P=0.0043),CXCR4蛋白表达水平升高(P=0.036);④与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠卵巢凋亡细胞明显减少,Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高;与干细胞组相比,联合组Bax表达水平明显降低(P=0.0284),Bcl-2表达水平明显升高(P=0.0364);⑤结果显示,电针能促进骨髓间充质干细胞归巢,并增强骨髓间充质干细胞的抗凋亡作用。

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞已被广泛应用于临床治疗神经退行性相关疾病,但由于细胞在受损伤部位的存活率和迁移率低,从而降低了其疗效。目的:探讨miR-31是否能提高骨髓间充质干细胞的迁移和增殖能力。方法:培养和鉴定C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,将细胞分为对照组、miR-31 agomir组和miR-31 antagomir组。将第3代骨髓间充质干细胞接种于6孔板(1×105/孔),待细胞达到50%-80%融合度,将miR-31 agomir和miR-31 antagomir用不含血清的DMEM/F12培养基稀释后添加到6孔板,转染24 h后,用CCK-8分析细胞的增殖水平以及Transwell实验分析细胞的迁移能力,Western blot检测基质金属蛋白酶2和CXC趋化因子受体4的蛋白表达。结果与结论:①在不加转染试剂的情况下将miR-31成功转染至骨髓间充质干细胞,并发出红色荧光;②转染后,与对照组相比,miR-31 agomir组细胞的增殖能力增强,与时间呈正比(P<0.05);与对照组相比,miR-31 agomir组细胞的迁移能力增强(P<0.05),基质金属蛋白酶2和CXC趋化因子受体4蛋白表达上调(P<0.05);③结果表明,miR-31可以提高骨髓间充质干细胞的增殖能力,并且促进骨髓间充质干细胞的迁移,这为间充质干细胞高效靶向迁移至损伤部位奠定了基础。

摘要： 背景:研究证实骨髓间充质干细胞具有增加骨保护素水平、促进骨代谢的作用。目的:探讨骨髓间充质干细胞对骨质疏松大鼠骨代谢的影响。方法:实验所用健康SD大鼠42只,随机分为假手术组、骨质疏松组、干细胞移植组,每组14只,后2组采用去卵巢法制备大鼠骨质疏松症模型,造模成功后干细胞移植组经尾静脉移植骨髓间充质干细胞,移植28 d后采用ELISA法检测各组大鼠血清骨保护素、碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素、胰岛素样生长因子1水平;Western blot检测各组大鼠骨组织中FoxO1的表达;AG-IX生物力学万能试验机检测股骨最大载荷和断开裂载荷;苏木精-伊红染色观察大鼠骨形态学改变。结果与结论:①骨质疏松组骨保护素、碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子1水平低于假手术组(P<0.05),抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素水平高于假手术组(P<0.05);干细胞移植组骨保护素、碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子1水平高于骨质疏松组(P<0.05),抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素的表达水平低于骨质疏松组(P<0.05);②骨质疏松组最大载荷、断裂载荷值均低于假手术组(P<0.05);干细胞移植组最大载荷、断裂载荷值高于骨质疏松组(P<0.05);③干细胞移植组骨小梁明显增粗,排列较为有序,局部间隙较均匀,较骨质疏松组明显改善;④骨质疏松组大鼠骨髓组织中FoxO1蛋白表达水平低于假手术组(P<0.05);干细胞移植组大鼠骨髓组织中FoxO1蛋白表达水平高于骨质疏松组(P<0.05);⑤结果表明,骨髓间充质干细胞移植可提高骨质疏松大鼠骨代谢水平,其作用机制与促进骨保护素、碱性磷酸酶、FoxO1的表达有关。

摘要： 背景:钛作为骨替代材料已在口腔种植领域中得到广泛应用,但其生物惰性会影响植入早期与骨组织形成稳定的结合,因此探索通过表面改性来提高钛的成骨活性是很有必要的。目的:探讨钛表面载阿司匹林的壳聚糖微球与聚多巴胺复合涂层对体外成骨细胞活性的影响。方法:取纯钛片,表面分别构建聚多巴胺涂层和载阿司匹林的壳聚糖微球与聚多巴胺复合涂层,采用扫描电镜和接触角检测对改性前后钛片的表面微观形貌和亲水性进行表征,检测纯钛表面阿司匹林纳米微球涂层的体外缓释性能。将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种于纯钛片与两种改性钛片上培养,采用细胞骨架染色观察钛片表面细胞的铺展形态,CCK-8实验测定细胞的增殖活性,碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色评估钛片表面细胞的成骨分化能力。结果与结论:①扫描电镜显示,纯钛表面相对光滑,聚多巴胺改性后出现沉积物及颗粒状突起,阿司匹林微球呈圆球形且粒径分布均匀;聚多巴胺涂层组与阿司匹林微球涂层组钛片的亲水性均明显优于纯钛组(P<0.05);阿司匹林在微球的包裹下呈现缓慢持续释放;②细胞骨架染色显示,纯钛表面的细胞伸展不充分,聚多巴胺涂层组钛片表面的细胞伸出少量伪足,阿司匹林微球涂层组钛片表面的细胞伸展良好;③CCK-8实验结果显示,3组钛片均无明显细胞毒性,且随着细胞培养时间的延长,阿司匹林微球涂层组钛片表面的细胞增殖速率高于其他两组(P<0.05);④阿司匹林微球涂层组钛片表面细胞的碱性磷酸酶活性最高,免疫荧光显示该组细胞中成骨相关蛋白碱性磷酸酶的荧光强度最强;⑤结果表明,纯钛表面载阿司匹林的壳聚糖微球缓释涂层可以增强大鼠骨髓间充质干细胞的增殖和黏附,并促进其成骨向分化。

摘要： 背景:糖皮质激素诱导骨坏死的确切机制尚不清楚,氧化应激是重要的机制之一。目的:综述目前已知相关文献,总结激素型骨坏死与氧化应激之间的关系,了解氧化应激在激素型骨坏死中的发病机制。方法:检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库和Pub Med数据库中与激素型骨坏死和氧化应激的研究进展相关的文献,并通过阅读摘要进行初筛,最终共纳入96篇文章进行综述分析。结果与结论:(1)活性氧将间充质干细胞、骨细胞、成骨细胞、破骨细胞及血管之间所形成的信号交流网络紧密地联系在一起,抑制其成骨和血管生成,从而在激素型股骨头坏死中发挥着重要作用;(2)文章分别阐释了活性氧在骨代谢中的作用情况,其主要通过Wnt/β-catenin、MAPK、核转录因子κB和PI3K/AKT等信号通路调控骨代谢中的细胞增殖、凋亡及分化,从而介导糖皮质激素所导致的骨形成和吸收失衡;(3)由于目前激素型骨坏死的机制比较复杂,其具体机制过程尚未明确;另外由于目前技术限制,抗氧化策略并未对疾病产生非常显著的影响;(4)未来应基于现有的相关机制,进一步了解氧化应激在激素型股骨头坏死骨组织损伤中的机制研究;并进一步分析活性氧参与调控的不同信号通路,从而为临床治疗骨坏死提供治疗靶点的研究方向。

摘要： 背景:目前研究表明,M2型巨噬细胞能够促进成骨分化并呈网络状调控,外泌体可携带大量信息参与细胞间的信号传导,M2型巨噬细胞来源外泌体是否能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,有待研究。目的:探究M2型巨噬细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:培养鼠源性巨噬细胞系RAW264.7与鼠骨髓间充质细胞系CP-M131,培养至第3代,应用白细胞介素4诱导巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,从M2型巨噬细胞培养上清中提取外泌体,然后用终质量浓度为0,30,60,90 mg/L的外泌体与骨髓间充质干细胞共培养72 h后收集样本,以及60 mg/L M2型巨噬细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞共培养24,48,72 h后收集样本,Western blot检测骨髓间充质干细胞中成骨相关因子RUNX2和碱性磷酸酶蛋白表达,茜素红染色检测矿物质沉积情况。结果与结论:①成骨相关因子RUNX2及碱性磷酸酶的表达水平与巨噬细胞外泌体质量浓度密切相关,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05),干预72 h RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05);②茜素红实验结果表明,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组钙结节含量较高(P<0.05),干预72 h钙结节含量较高(P<0.05);③结果表明,M2型巨噬细胞分泌的外泌体能够诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。

摘要： 背景:研究表明骨髓间充质干细胞源外泌体在多种呼吸系统炎症及疾病损伤模型中表现出强大的修复和再生能力,但在慢性阻塞性肺疾病中的研究较少,且尚未有研究将外泌体雾化吸入应用于慢性阻塞性肺疾病的模型实验中。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞源外泌体通过雾化吸入途径对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症和肺部损伤的治疗作用,并且明确最适治疗剂量。方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并提取鉴定其外泌体。脂多糖联合烟熏28 d建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型,然后给予低剂量(0.5×10^(8)particles/kg)、中剂量(1.0×10^(8)particles/kg)、高剂量(1.5×10^(8)particles/kg)外泌体雾化吸入治疗以及外泌体(1.5×10^(8)particles/kg)尾静脉注射治疗,模型组雾化1 mL PBS,对照组不造模、雾化1 mL PBS。连续雾化或注射治疗5 d,最后一次雾化或注射治疗后的第2天开始检测,使用小动物肺功能仪测试各组肺功能指标,ELISA检测支气管肺泡灌洗液及血清中的白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平,苏木精-伊红染色和Masson染色从组织学评估肺组织改变。结果与结论:①骨髓间充质干细胞来源外泌体在透射电镜下显示为椭圆形的双层膜囊泡结构,呈典型的杯口状,粒径分析提示外泌体的峰直径为91.7 nm,占比为97.3%,颗粒浓度为3.3×10^(9) L^(-1),并且外泌体表面蛋白CD9和CD63高表达;②与尾静脉注射外泌体相比,雾化吸入外泌体显著改善了慢性阻塞性肺疾病大鼠的肺功能、肺组织切片胶原沉积和肺组织病理变化,并且明显降低了支气管肺泡灌洗液和血清中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平,且低剂量外泌体治疗效果最为显著;③以上结果表明,雾化吸入骨髓间充质干细胞来源外泌体可以减轻慢性阻塞性肺疾病的炎性损伤,并且最适剂量可能为0.5×10^(8)particles/kg。

摘要： 背景:细胞在缺氧条件下会发生功能的变化,而间充质干细胞分泌的外泌体可以缓解细胞缺氧带来的病理性损伤。目的:探讨不同浓度氯化钴对成肌细胞功能变化的影响,并进一步研究骨髓间充质干细胞来源外泌体对成肌细胞缺氧凋亡和活性氧产生的作用。方法:体外分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,通过超速离心法提取外泌体,采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot对外泌体进行鉴定。应用0,50,100,200μmol/L氯化钴干预C2C12成肌细胞1,3,5,7 d,CCK-8检测成肌细胞增殖活性变化;干预5 d,qRT-PCR检测成肌分化基因MyHC、MyoD、MyoG的表达水平,改良吉姆萨染色观察成肌细胞融合情况;干预3,5 d,流式细胞仪检测细胞凋亡率;干预3 d,使用DCFH-DA染色观察细胞活性氧水平。成肌细胞分为4组:对照组(0μmol/L氯化钴),氯化钴组(200μmol/L氯化钴),外泌体组(200μmol/L氯化钴+50 mg/L外泌体),NAC组(200μmol/L氯化钴+2 mmol/L抗氧化剂NAC)处理,干预3 d,检测凋亡率和活性氧水平。结果与结论:①外泌体呈杯口状结构,粒径分布在30-150 nm之间,CD9、TSG101表达阳性;②氯化钴对成肌细胞的增殖、分化有显著抑制作用(P<0.05),并且促进了细胞凋亡(P<0.05),高浓度的氯化钴对成肌细胞的功能抑制作用更加明显;③外泌体能够降低200μmol/L氯化钴所诱导的成肌细胞缺氧凋亡和活性氧水平(P<0.05),并与抗活性氧试剂NAC具有相似的作用(P<0.05);④结果表明,氯化钴对成肌细胞的生理功能抑制作用具有一定的浓度和时间依赖性,而骨髓间充质干细胞来源外泌体与NAC具有相似的抗缺氧凋亡和降低活性氧产生的作用,其机制可能为外泌体通过降低活性氧产生的途径而缓解了成肌细胞的缺氧凋亡。

摘要： 背景:目前对酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)分子机制的体外研究主要集中在基因敲除小鼠来源成骨细胞或骨髓间充质干细胞,鲜见报道骨质疏松模型大鼠来源骨髓间充质干细胞中CKIP-1表达的研究。目的:探讨下调CKIP-1基因前后骨质疏松状态骨髓间充质干细胞成骨分化能力的变化。方法:用维甲酸诱导雌性SD大鼠骨质疏松模型,采用全骨髓贴壁法体外培养骨质疏松组、正常组大鼠骨髓间充质干细胞。成骨诱导后进行茜素红染色、碱性磷酸酶染色及实时定量RT-PCR检测骨桥蛋白、Runx2 mRNA的相对表达,实时定量RT-PCR检测成骨诱导过程中2组细胞中CKIP-1的动态表达;通过基因转染沉默CKIP-1基因,成骨诱导后进行茜素红染色、碱性磷酸酶染色及实时定量RT-PCR检测骨桥蛋白、Runx2 mRNA的相对表达。结果与结论:①与正常组相比,骨质疏松组骨髓间充质干细胞茜素红染色钙结节定量、碱性磷酸酶活性及骨桥蛋白、Runx2的mRNA水平降低(P<0.05),骨质疏松组骨髓间充质干细胞中CKIP-1基因动态表达水平总体偏高;②与未下调CKIP-1的骨质疏松组骨髓间充质干细胞相比,下调CKIP-1基因表达后,骨质疏松组骨髓间充质干细胞茜素红染色钙结节定量、碱性磷酸酶活性及骨桥蛋白、Runx2的mRNA水平明显升高(P<0.05);③结果表明,维甲酸诱导的骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成骨能力降低,下调CKIP-1基因可以部分提高其成骨分化能力。

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞可被诱导分化为纤维软骨细胞作为组织工程中的种子细胞,而细胞因子转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β1)和TGF-β3在诱导分化中的作用,目前仍是研究热点。目的:综述TGF-β1和TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的相关文献,为进一步指导TGF-β诱导骨髓间充质干细胞分化为纤维软骨细胞提供理论依据,同时为今后的临床上半月板损伤和退化的治疗提供新策略。方法:计算机检索PubMed、中国知网和万方医学网数据库1990年1月至2022年3月收录的文献。英文数据库检索词:“Transforming Growth Factor beta 1,Transforming Growth Factor beta 3,Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,meniscus,fibrochondrocyte”,中文数据库检索词:“TGF-β1,TGF-β3、骨髓间充质干细胞、半月板、纤维软骨细胞”,根据筛选标准,最终纳入78篇文献进行综述。结果与结论:①TGF-β主要分为TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3共3种亚型,其中研究较多的细胞因子是TGF-β1和TGF-β3。②TGF-β主要通过TGF-β/Smad信号通路激活细胞核内的SOX9转录因子进而诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞。③TGF-β1可诱导骨髓间充质干细胞向透明软骨细胞分化,伴随培养时间的延长,透明软骨细胞可发生去分化变成纤维软骨细胞;④TGF-β3主要诱导骨髓间充质干细胞向纤维软骨细胞分化,同时促进Ⅰ型胶原和蛋白聚糖合成分泌。⑤目前,关于半月板损伤和退化的治疗,临床上采用的治疗方案均不理想,组织工程的出现为其治疗提供了新的策略,具体方法是将诱导因子和骨髓间充质干细胞植入到半月板损伤部位,可以起到恢复半月板功能及再生纤维软骨组织的作用,但是目前实验尚处于体外和动物模型阶段,其在临床上用于半月板受损的治疗和可用性仍需要后续大量的临床研究去研究探索。

摘要： 目的：比较左归丸与右归丸促成骨分化的影响及作用机制. 方法：无菌培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),分别制备左归丸和右归丸高、低剂量含药血清,分为对照组(CON组)、左归丸低剂量组(ZD组)、左归丸高剂量组(ZG组)、右归丸低剂量组(YD组)和右归丸高剂量组(YG组).采用CCK8、碱性磷酸酶(AKP)试剂盒、ALP染色检测各组细胞增殖、成骨活性和分化能力,RT-qPCR检测FNDC5、Runx2、Osterix、BMP2、Tgif2和PPARγmRNA表达,Western blot检测FNDC5、Runx2、BMP2蛋白表达. 结果：CCK8显示各组细胞7d内增殖呈上升趋势;含药血清干预3d,ZG组AKP活性明显高于其余各组(P＜0.01);干预7d,ZD、ZG、YG组AKP活性明显高于CON组(P＜0.01),且ZG组AKP活性明显高于YD、YG组(P＜0.05,P＜0.01);ALP染色显示干预3、7d各含药血清组ALP染色阳性率均高于CON组,其中ZG组更为明显(P＜0.01).PT-qPCR显示,含药血清干预第3天ZG、YG组BMP2表达高于CON组(P＜0.05),第7天ZG组Runx2、Osterix显著高于CON组(P＜0.05,P＜0.01),各组Tgif2和ZG、YG组PPARγ表达显著低于CON组(P＜0.05,P＜0.01);Western blot显示,干预3d时ZG组FNDC5蛋白表达水平高于CON、YD和YG组(P＜0.05);各组BMP2、Runx2蛋白表达水平明显高于CON组(P＜0.05),ZG和YG组Runx2蛋白表达水平较ZD和YD组明显升高(P＜0.05);干预7d时,ZG组FNDC5蛋白表达水平明显高于CON、ZD、YD组(P＜0.05);各组BMP2、Runx2蛋白表达水平较CON组均明显升高(P＜0.05),ZG组BMP2、Runx2蛋白表达水平均高于YD和YG组(P＜0.05). 结论：左归丸和右归丸均能一定程度促BMSCs成骨分化,其中左归丸在促进成骨活性及成骨分化能力略强于右归丸.二者促成骨分化的差异可能与其上调FNDC5、BMP2、Runx2表达程度相关.

摘要： 目的：探讨甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-Dil)标记的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在大鼠脑缺血再灌注后缺血区的归巢情况. 方法：采用线栓法对Wistar大鼠制作脑缺血再灌注(middle cerebralartery occlusion,MCAo)模型.将造模成功动物分为对照组和治疗组,治疗组为用CM-Dil标记的骨髓间充质干细胞.对照组动物8只,治疗组动物14只.对照组动物给予生理盐水,治疗组动物于分组后尾静脉注射CM-Dil标记的骨髓间充质干细胞.术前对所有参与造模动物进行神经功能缺损评分,注射细胞后24h、7d、14d分别对各组大鼠进行神经功能缺损评分,注射细胞后24h、14d,应用免疫荧光观察缺血区标记的骨髓间充质干细胞.术后14d,处死动物,对其进行脑梗塞面积测量. 结果：1.骨髓间充质干细胞可以明显改善大鼠脑缺血再灌注(MCAo)后神经功能缺损症状但未减少梗塞面积.2.注射细胞后24h及14d CM-Dil标记的骨髓间充质干细胞聚集在大鼠脑缺血区. 结论：CM-Dil标记BMSC可以用来进行脑缺血治疗机理方面的研究,缺血区聚集的骨髓间充质干细胞能改善大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能.

摘要： 下腰痛是疼痛门诊最常见的症状,而椎间盘退变是其主要诱因.骨髓间充质干细胞BMSC可修复退变椎间盘,但机制不清.研究证实BMSCs可通过分泌抗炎蛋白TSG-6发挥器官保护作用.目前尚未见BMSCs通过分泌TSG-6保护退变椎间盘的相关研究.因此本实验将深入研究BMSCs及TSG-6对退变椎间盘的保护作用及具体机制,并观察其对下腰痛的治疗效果.

摘要： 目的：观察毛冬青甲素(IlexoninA,IA)干预大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)后基质细胞衍生因子(SDF-1)特异性受体CXCR4(Chemokine C-X-C motif receptor4)和Wnt通路中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成激酶(GSK3β)的表达情况,探讨IA预处理促进BMSCs体外迁移的分子机制. 方法与结果：全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠并行BMSCs鉴定.以Wnt信号通路的激动剂Wnt3a、抑制剂Dkk1干预,Western blot法观察β-catenin、GSK3β与CXCR4的表达关系.CXCR4、β-catenin蛋白表达:与对照组相比,Wnt3a组、IA组显著增强,Dkk1组显著减弱(P＜0.05);与Wnt3a组、IA组分别相比,IA+Wnt3a组CXCR4蛋白显著增强(P＜0.05);与Dkk1组相比,IA+Dkk1组显著增强(P＜0.05);与IA组相比,IA+Dkk1组β-catenin显著减弱(P＜0.05).GSK3β蛋白表达情况:与对照组相比,Wnt3a组、IA组显著减弱(P＜0.05);与Wnt3a组、IA组分别相比,IA+Wnt3a组显著减弱(P＜0.05),与Dkk1组相比,IA+Dkk1组显著减弱(P＜0.05);与IA组相比,IA+Dkk1组显著减弱(P＜0.05). 结论：IA上调CXCR4的表达,可能与BMSCs的Wnt/β-catenin信号通路激活有关,发挥其促迁移的作用.

摘要： 目的:建立家兔氟骨症模型,耳缘静脉和关节腔注射移植自体间充质干细胞(BMSCs),观察其对氟中毒治疗的有效性. 方法:健康3月龄新西兰家兔94只,雌雄各半,分为空白对照组20只和模型组74只,空白对照组饮常规自来水,模型组饮含氟化钠300mg/L的自来水.90d后,空白对照组和模型组家兔各取8只,测定家兔股骨骨密度、血清中碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(BGP)浓度、股骨骨氟含量、X线观察骨骼影像变化、HE染色观察股骨组织病理学进行家兔氟骨症模型鉴定.分离家兔BMSCs,成骨诱导和成脂诱导分化检测BMSCs多向分化潜能,流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定BMSCs.模型鉴定后剩余78只家兔分为示踪部分(单次/多次耳缘静脉注射、单次/多次关节腔注射、示踪溶剂对照组、示踪空白对照组,6只家兔/组)和治疗部分(单次/多次耳缘静脉注射、单次/多次关节腔注射、自然恢复组、治疗溶剂对照组、治疗空白对照组,6只家兔/组).示踪部分用BrdU标记BMSCs移植入家兔体内,免疫组化检测示踪BMSCs,治疗部分家兔,自体移植BMSCs后观察60d后,测定家兔股骨骨密度,血清中ALP及BGP浓度、股骨骨氟含量、X线观察治疗前后骨骼影像学变化,HE染色观察股骨组织病理学改变. 结果:氟化钠染毒90d后,模型组骨密度、ALP浓度、BGP浓度、骨氟含量及骨小梁面积均高于对照组,股骨X线影像可见家兔股骨骨密度升高,骨质硬化、骨纹理粗化,HE染色股骨表现为骨小梁数目增多、排列紊乱,证实家兔氟骨症模型成功建立.分离培养的BMSCs经鉴定表现出成骨及脂肪细胞的生物学特征,流式细胞术检测显示细胞表面表达CD44、CD90,不表达CD34、CD45,确认所分离细胞为骨髓间充质干细胞.示踪免疫组化结果显示BrdU阳性表达.多次耳缘静脉及关节腔注射移植治疗组骨密度、ALP、BGP、骨氟、骨小梁面积较自然恢复组下降.X线显示股骨上骨斑消失,骨密度降低,紊乱骨纹有所恢复;HE染色显示骨髓腔间隙增大,骨小梁数目减少,同时伴有部分新生成的粗细不均、排列整齐、骨髓间隙较均匀的正常骨小梁.而单次耳缘静脉/关节腔注射移植BMSCs疗效观察未发现有治疗效果. 结论:氟骨症家兔自体BMSCs移植能修复受损骨组织,有效改善氟骨症病理损害,耳缘静脉移植和关节腔注射移植两个移植途径疗效相当且多次移植疗效优于单次移植,以上为地方性氟中毒氟骨症患者的治疗提供了新的思路和方向.

摘要： 目的：为了明确小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)自我更新能力及其分化能力,观察其增殖、凋亡,倍增能力及向成骨细胞和脂肪细胞分化能力等,我们需要寻求适宜有效的小鼠BM-MSCs体外培养方法.方法：我们利用全骨髓贴壁培养法分离培养2周龄的WT小鼠来源的BM-MSCs,倒置相差显微镜观察其形态特征.鉴定实验,一组用成骨细胞诱导剂诱导小鼠BMSCs向成骨细胞分化,通过碱性磷酸酶(ALP)染色和总克隆染色观察钙化结节.另一组加入成脂细胞诱导剂培养细胞,通过油红O染色观察脂肪细胞.结果：小鼠BM-MSCs形态呈梭形,可传代10代左右,具有增殖及多项分化能力,成骨及成脂实验均为阳性.

摘要： 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对过氧化氢(H2O2)诱导的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的保护作用,并探讨其机制. 方法：用bFGF干预H2O2处理的BMSCs,MTT法检测bFGF处理的BMSCs活性,LDH试剂盒检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,TUNEL法检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达及细胞中Bcl-2/Bax比值. 结果：bFGF能显著改善细胞活性(P＜0.05),降低LDH漏出量及凋亡率(P＜0.05),减少细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达(P＜0.05),上调细胞的Bcl-2/Bax比值(P＜0.05). 结论：bFGF可能通过减少细胞IL-6和TNF-α的表达以及上调Bcl-2/Bax比值,从而增强BMSCs的抗H2O2损伤能力.

摘要： 钛和钛合金具有较高的机械强度、良好的耐腐蚀性和与骨相近的弹性模量,是骨科中常用的移植材料.但是钛合金表面的生物活性较差,容易导致在移植物表面形成纤维包裹,导致移植物松懈甚至脱落.天然骨表面具有许多微纳结构，富含多种具有促进骨形成的矿物微量元素。通过在钛合金表面构建微纳结构，模拟天然骨表面，可以有效促进骨髓间充质干细胞向成骨分化，加速骨修复。本研究将Mg元素掺杂在TiO2纳米管中，构建Mg掺杂的纳米表面，研究了该表面对骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化功能的影响，以及相关的分子机制。

摘要： 研究了骨髓间充质干细胞(bMSCs)和由传统二仙汤(EXD)调控的基因谱.中草药配方广泛用于绝经后骨质疏松症的治疗.六个月大的卵巢切除的小鼠用EXD 治疗.3 个月后,通过μCT 和组织学评估骨量免疫组化检测.通过集落形成单位成纤维细胞评估骨髓间充质干细胞的自我更新和分化能力,集落形成单位-脂肪细胞和碱性磷酸酶染色.结果表明EXD发挥了骨保护作用.

摘要： 目的：探讨BMSCs移植联合电针刺激对脑出血(ICH)的作用及其对GAP-43表达的影响. 方法：将GFP标记的BMSCs常规复苏、培养和传代;利用脑立体定位仪在SD大鼠脑尾壳核内注射胶原酶和肝素构建ICH模型;ICH模型大鼠随机分为对照组(NS组)、BMSCs移植组(BMSCs组)和BMSCs移植联合电针组(Ea-BMSCs组),分别将生理盐水和BMSCs注入模型鼠尾壳核内,并用电针刺激Ea-BMSCs组大鼠百会穴和大椎穴,在不同时间点对大鼠行神经损害程度评分(NSS评分),采用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠脑组织GAP-43mRNA及蛋白的表达情况. 结果：造模后移植前各组为脑中度损伤,NSS评分一致,无统计学差异(P＞0.05);移植后第5天和7天BMSCs组与NS组比较NSS评分显著下降(P＜0.05);第5天、7天和14天Ea-BMSCs组分别与BMSCs组和NS组比较NSS评分下降明显(P＜0.05);移植后第5天、7天和14天,Ea-BMSCs组和BMSCs组GAP-43mRNA及蛋白表达水平较NS组水平显著升高(P＜0.05);而在第7天和14天Ea-BMSCs组较BMSCs组表达更强(P＜0.05). 结论：BMSCs移植联合电针刺激较单纯BMSCs移植能更有效促进ICH大鼠脑组织GAP-43表达,进而促进轴突生长,有利于神经组织重塑.

摘要： 本发明涉及从脐带血中分离和培养间充质干细胞/祖细胞的方法，还涉及将脐带血来源的间充质干细胞/祖细胞分化成各种间充质组织的方法。所述方法包括如下步骤：将脐带血覆盖在Ficoll-Hypaque溶液上；将Ficoll-Hypaque溶液上的脐带血离心，获得单核细胞层；使通过单核细胞单层培养获得的细胞与针对间充质干细胞/祖细胞特异性抗原的抗体反应预定的孵育期；使用细胞分选仪仅分离与其相应抗体相结合的细胞；将分离的细胞培养，从而获得具有高纯度和极好生存能力的间充质干细胞/祖细胞。本发明的间充质干细胞/祖细胞能够分化成包括软骨细胞和成骨细胞在内的各种间充质组织。因此，根据本发明的细胞分离和培养方法能够实现间充质干细胞/祖细胞的大规模生产，本发明获得的细胞在受损间充质组织的再生和治疗上是有用的。

摘要： 本发明涉及一种用于直接分化胚胎干细胞来源间充质干细胞的培养基、用其制备间充质干细胞的方法、由此制备的间充质干细胞以及包括其的细胞治疗剂，根据一方面的培养基组合物和方法，不仅可以在短时间内以高产率制备间充质干细胞，而且由于没有胚状体形状的步骤，因此制备工艺简单，并且可以获得具有均质性的细胞，从而具有可以在比现有方法更短的时间内提供细胞治疗剂的效果。

摘要： 本发明的目的在于，提供包含治疗效果好的MSC的细胞制剂。提供一种活化的MSC的制造方法，包括使用具有由纤维构成的三维结构的细胞培养载体在含有哺乳动物胎儿附属物来源的活化剂的培养基中培养MSC的工序。此外，还提供选自由p16

摘要： 本发明涉及评估间充质干细胞(MSC)群体的伤口愈合效力的方法。此外，本发明涉及选择用于在cGMP条件下产生干细胞群体的MSC的方法，选择用于产生用于后续药物施用的干细胞群体的MSC群体的方法。此外，本发明涉及选择用于生成主细胞库的MSC群体的方法，以及鉴定适合作为用于产生用于药物用途的MSC群体的起始材料的组织的方法。所述方法包括测定培养基中由MSC分泌至培养基中的选自血管生成素1(Ang‑1)、转化生长因子β(TGF‑β)、血管内皮生长因子(VEGF)和肝细胞生长因子(HGF)的至少两种蛋白质的水平。

摘要： 本发明的目的在于，提供一种对各种疾病发挥优异的治疗效果的新的间充质干细胞及含有该间充质干细胞的新的药物组合物、以及它们的制备方法。本发明为一种ROR1阳性的间充质干细胞。上述ROR1阳性的间充质干细胞优选为CD29、CD73、CD90、CD105及CD166阳性，优选源自脐带或脂肪。

摘要： 本发明涉及从脐带血中分离和培养间充质干细胞/祖细胞的方法，还涉及将脐带血来源的间充质干细胞/祖细胞分化成各种间充质组织的方法。所述方法包括如下步骤：将脐带血覆盖在Ficoll－Hypaque溶液上；将Ficoll－Hypaque溶液上的脐带血离心，获得单核细胞层；使通过单核细胞单层培养获得的细胞与针对间充质干细胞/祖细胞特异性抗原的抗体反应预定的孵育期；使用细胞分选仪仅分离与其相应抗体相结合的细胞；将分离的细胞培养，从而获得具有高纯度和极好生存能力的间充质干细胞/祖细胞。本发明的间充质干细胞/祖细胞能够分化成包括软骨细胞和成骨细胞在内的各种间充质组织。因此，根据本发明的细胞分离和培养方法能够实现间充质干细胞/祖细胞的大规模生产，本发明获得的细胞在受损间充质组织的再生和治疗上是有用的。

摘要： 本发明公开了一种免疫调节功能增强型脐带间充质干细胞、干细胞制剂及脐带间充质干细胞的制备方法。本申请通过分离脐带组织，将获得的间充质干细胞种子细胞进行细胞因子分泌水平的检测，对符合要求的种子细胞给与添加了炎性因子组合的特定培养基进行传代培养，从而获得免疫调节功能增强型脐带间充质干细胞。上述制备方法制得的间充质干细胞强化了其免疫调节功能，对免疫调节功能紊乱人群及自身免疫性疾病的治疗更具有针对性。

摘要： 本发明涉及一种改良的间充质干细胞培养基、骨髓间充质干细胞及其培养方法和应用，该改良的间充质干细胞培养基包基础培养基、第一组分和褪黑素，第一组分选自辅酶Q10及米托蒽醌甲磺酸盐中的至少一种，第一组分的工作浓度为1μM～20μM，褪黑素的工作浓度为1μM～20μM，第一组分与褪黑素的摩尔比为1：(0.2～10)。上述改良的间充质干细胞培养基能够提高间充质干细胞中线粒体活性和线粒体数量。

摘要： 本发明属于细胞培养技术领域，特别涉及一种骨髓间充质干细胞培养基及骨髓间充质干细胞培养方法。所述骨髓间充质干细胞培养基包括基础培养基、血清、庆大霉素、两性霉素B、维生素C、碱性成纤维细胞生长因子和地塞米松。所述基础培养基为DEME。所述血清为胎牛血清、人体血清中的任意一种。本发明提供的骨髓间充质干细胞培养基培养能够增强骨髓间充质干细胞的增殖能力和附着效率，同时不影响骨髓间充质干细胞的多功能性，有利于骨髓间充质干细胞的临床研究和应用。

摘要： 本发明涉及一种改良的间充质干细胞培养基、骨髓间充质干细胞及其培养方法和应用，该改良的间充质干细胞培养基包基础培养基、第一组分和褪黑素，第一组分选自辅酶Q10及米托蒽醌甲磺酸盐中的至少一种，第一组分的工作浓度为1μM～20μM，褪黑素的工作浓度为1μM～20μM，第一组分与褪黑素的摩尔比为1：(0.2～10)。上述改良的间充质干细胞培养基能够提高间充质干细胞中线粒体活性和线粒体数量。