核型多角体病毒

摘要： 以甜菜夜蛾幼虫作为替代宿主增殖草原毛虫核型多角体病毒(GrNPV)的研究结果表明,GrNPV在甜菜夜蛾体内连续传代2次后得到了GrNPV-Se2,GrNPV-Se2切片电镜图具有典型的杆状病毒特征.分别提取GrNPV-Se2与GrNPV基因组,电泳结果表明GrNPV-Se2与GrNPV基因组大小相同.设计GrNPV多角体基因引物,对GrNPV-Se2与GrNPV基因组进行PCR验证,结果GrNPV与GrNPV-Se2基因组的多角体基因PCR产物带型相同,表明用甜菜夜蛾幼虫成功增殖了草原毛虫核型多角体病毒GrNPV.

摘要： 选用3种核型多角体病毒对斜纹夜蛾、棉铃虫进行室内毒力测定.结果表明,3种核型多角体病毒浸卵处理对2种夜蛾的卵孵化无明显影响,孵化率均≥91.67％;对浸卵处理后的初孵幼虫的校正死亡率都较高,说明3种核型多角体病毒对两种夜蛾科的2龄幼虫均表现出较强的毒性.

摘要： 核型多角体病毒(Nucleopolyhedrovirus,NPV)应用广泛,已被开发成微生物杀虫剂和用于重组蛋白表达等.NPV具有两种病毒颗粒:包埋型病毒粒子(occlusion-derived virus,ODV)和芽生型病毒粒子(budded virus,BV),两者的构成和组装存在差异.病毒包涵体在肠道中溶解后释放出ODV进行初级感染,子代核衣壳通过质膜出芽产生BV引发全身性的次级感染.病毒感染昆虫后能引发宿主的免疫反应,同时NPV病毒已进化出多种策略抑制或逃避宿主的免疫反应,如免疫信号通路、黑化和凋亡等过程.本文将总结鳞翅目特异性NPV与宿主的互作研究,着重介绍NPV的侵染机制、NPV与宿主免疫系统互作的研究进展.

摘要： 为进一步了解微胶囊化斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura nuclear polyhedrosis virus,SINPV)在宿主体内的侵染过程,以明胶/羧甲基纤维素(Carboxymethylcellulose,CMC)为壁材,茶多酚为固化剂,斜纹夜蛾核型多角体病毒为芯材的病毒微胶囊,通过建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对染病的斜纹夜蛾幼虫中肠、血淋巴及完整虫体的数个时间点所取样本进行病毒量检测,探究微胶囊化斜纹夜蛾核型多角体病毒在其宿主幼虫体内不同组织中的增殖动态.结果显示,微胶囊化病毒在初始阶段病毒增殖速度低于未包埋病毒,到达中肠组织和血淋巴组织平台期的时间分别晚10、20 h,最终幼虫体内中肠组织病毒基因拷贝数稳定在105～105.5,血淋巴内病毒基因拷贝数稳定在104～105,微胶囊化并未改变病毒在昆虫体内的增殖规律,对昆虫的灭活效率取决被包埋病毒的活性.

摘要： 2017-2020年,在江苏和浙江将茶尺蠖病毒制剂茶核·苏云菌应用于茶园茶尺蠖、灰茶尺蠖的防治,对多年、多点的应用效果进行了总结,并概述了近年来茶尺蠖病毒制剂在我国茶园的推广应用情况.在实践中发现,施用10 000 PIB/μL·2 000 IU/μL茶核·苏云菌悬浮剂100 mL/667m2,对茶尺蠖的防效最高可达85.9％;150 mL/667m2处理对灰茶尺蠖的防效最高可达76.5％.茶尺蠖病毒制剂在浙江、江苏、江西、安徽、河南、广东、四川7个省份得到推广应用,累计应用面积达4481.3 hm2,呈逐年上升趋势.

摘要： 为探讨不同营养条件下甜菜夜蛾Spodoptera exigua对甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)的敏感性及取食行为响应,本研究通过改变甜菜夜蛾人工饲料配方建立高蛋白低糖(简称高蛋白)、中蛋白中糖(简称中蛋白)、低蛋白高糖(简称低蛋白)3种营养品系,观察不同营养品系幼虫对SeMNPV的敏感性,以及染毒前后对不同营养饲料的取食趋性.结果 显示,高蛋白、中蛋白、低蛋白3种营养品系中,SeMNPV对甜菜夜蛾初孵幼虫的半数致死浓度(LC50)分别是1.76×105 PIB/mL、2.85×105 PIB/mL和2.10×104 PIB/mL.统计分析显示,中蛋白品系的LC50显著高于低蛋白品系,高蛋白品系的LC50同其余两种品系相比无显著性差异.以8×105 PIB/mL浓度的病毒饲喂甜菜夜蛾初孵幼虫,3种营养品系的半数致死时间(LT50)分别是6.07 d、6.85 d和5.20 d,中蛋白品系的存活时间显著长于低蛋白品系,高蛋白品系的LT50同其余两种品系相比无显著性差异.未染毒状态下,低龄幼虫偏向蛋白质含量较高的饲料,而高龄幼虫则偏向于高糖的饲料;染毒状态下,甜菜夜蛾各龄期幼虫都偏向于取食蛋白质含量较高的饲料.以上研究结果表明,营养条件的变化可以显著影响甜菜夜蛾幼虫对SeMNPV的敏感性,染毒后幼虫明显偏向于蛋白质含量高的饲料,推测蛋白质可能有助于提高甜菜夜蛾幼虫对SeMNPV的抵抗力.

摘要： 近日,昆士兰州政府对一款防治草地贪夜蛾的生物农药Fawligen获紧急使用批准表示欢迎。Fawligen含有特异性防治草贪的活性成分-核型多角体病毒,由AgBiTech在美国生产。

摘要： 主要从天敌资源、信息化合物和微生物源农药三个方面对茶尺蠖生物防治技术进行概总结概括,重点对茶尺蠖核型多角体病毒制剂的使用技术及无锡地区使用方法进行介绍,病毒制剂对低龄期幼虫防治效果较好,虫口密度较大时也可与植物源农药混用施用.

摘要： 通过试验,30亿PIB/mL甜菜夜蛾核型多角体病毒SC对甜菜夜蛾防效很好,由于病毒能够在数代害虫之间传播流行,所以药效可持续较长时间,使用浓度以750倍液为宜,防效可达82％,可在生产中大面积推广使用.

摘要： 为了探索家蚕核型多角体病毒（BmNPV）蛋白间的相互作用，采用CLONTECH SMART (switching mechanism at5′end of RNA transcript)技术，在酵母菌株Y187中构建了感染BmNPV家蚕中肠组织的cDNA文库。家蚕五龄第三天添食BmNPV，提取感染后12小时与96小时家蚕中肠组织的总RNA并混合均匀。利用经修饰的CDSⅢ引物合成 cDNA第一链，在反应体系中再加入SMARTIII-modified Oligo作为cDNA第二链合成的引物，进行长距离LD-PCR合成双链cDNA，后者经CLONTECH CHROMA SPINTE-400柱纯化后，与线性载体质粒pGADT7-Rec共转化入感受态酵母菌Y187中，二者利用酵母细胞内较高的同源重组酶活性，进行同源重组产生环形有复制活性的文库质粒，然后在缺亮氨酸(LEU)培养基板上筛选出所有克隆，即为感染BmNPV家蚕中肠组织的cDNA文库。实验结果表明：提取RNA的A260/A280=1.82，纯度较高；双链cDNA文库大于0.2 kb，且弥散较长，成瀑布条带状；该文库具有基因多样性和足够大的库容量，共获得6.8×108转化子，滴度为4.4×107cfu/ml，文库扩增后，插入cDNA的平均长度为750 bp，文库的重组率为95%。该文库的构建为筛选相互作用蛋白并进一步阐明其生理意义提供了基础。

摘要： 为了提高家蚕对核型多角体病毒（BmNPV）的抵抗能力，将带有lef-1 dsRNA 表达盒和neo基因表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo 通过精子介导法导入蚕卵，经G418和GFP的双重筛选结合分子生物学鉴定，证实获得了转基因家蚕。对G6代2龄转基因家蚕接种BmNPV，结果显示转基因家蚕的死亡率比对照组下降了10%-30%，表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕的定量PCR 检测结果显示转基因家蚕体内的lef-1 mRNA水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍，最高下降了104倍。进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。同时经济性状调查结果显示转基因家蚕的全茧量、茧层量和茧层率与正常家蚕无明显差异。

摘要： 用天然毒素蛋白杀灭害虫是农林病虫害防治的一个重要发展方向。利用家蚕核型多角体病毒（BmNPV）多 角体蛋白基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因（BmK ITa1）融合表达，经SDS-PAGE分析表明，通过融合表达策略构 建的含有蝎毒素蛋白基因的重组病毒具有较高的蝎毒素蛋白表达水平。以家蚕和棉铃虫为供试昆虫，探讨蝎毒素蛋 白的杀虫效果，结果表明：经口添食含重组病毒表达的蝎毒素蛋白的BmN细胞液对不同龄期家蚕幼虫均具有毒性，尤其对低龄幼虫的毒性较强，蚁蚕添食后的死亡率达80%;给1 龄期的家蚕和棉铃虫幼虫经口添食含有不同剂量重 组蛋白的细胞破碎液，当添食剂量在2.8 μg/头时，家蚕的死亡率即达100%，棉铃虫的死亡率达74%。研究结果提示：BmNPV多角体蛋白编码基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因融合表达，可提高蝎毒素蛋白的表达水平，且重组病毒表 达的蝎毒素蛋白具有较好的杀虫活性，在较低剂量下即可对低龄昆虫产生良好的杀灭效果。

摘要： 目的：通过对本所长期室内人工饲养繁育的不同季节不同龄期的棉铃虫 (Heliothis armigera)进行体内外的微生物分离培养和鉴定，掌握棉铃虫体内外微生物携带情况。方法：利用普通培养基和真菌培养基分别对棉铃虫体内外进行微生物分离培养、纯化，通过菌落形态观察、革兰氏染色和显微镜观察进行初步鉴定，然后应用16SrRNA和18SrDNA分析技术对分离的细菌和真菌进行进一步的鉴定。同时，利用PCR技术对棉铃虫的高度致病病毒-核型多角体病毒（HaNPV）进行扩增检测。结果：分离培养得到4株芽孢杆菌（Bacillus）：分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis），蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）和芽孢杆菌（Bacillus）。4株真菌（fungi）：其中2株为酵母菌(Yeasts)，1株为青霉菌(Aenicil lium Link)，1株为曲霉菌（Aspergillus Micheli）。检测核型多角体病毒（HaNPV）为阴性。

摘要： 高效性诱芯对害虫具有较强的诱集力、致病力强的病毒株系对害虫有很强染病致死力。利用斜纹夜蛾和甜菜夜蛾性诱剂将成虫诱集到带有高浓度病毒场合，使雄虫感染病毒，再借害虫的交配繁殖习性，将病毒传递到子代，可取得50%～90 %的防治效果，强化了生物防治的控害效果，减少了化学农药的使用量，有助于食用农产品的安全生产。

摘要： 为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性，构建了带有BmNPV ie-1、lef-1 dsRNA双表达盒的转基因载体piggyantiIE-lef1-Neo。结果显示：表达双元dsRNA的稳定转化Bm细胞，对 BmNPV的增殖表现出明显的抑制作用，特别是在接种病毒后的72-120h。通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点，结果显示：在转化细胞中，外源DNA 可通过随机整合或按照piggyBac 特定的转座位点TTAA 插入细胞基因组。为了获得实用性抗BmNPV 家蚕，我们通过精子介导的方法获得了转基因R6 家蚕，经过继代筛选转基因家蚕已进入G3代，相关后续工作仍在进行。

摘要： 采用紫外线照射处理苏芸金杆菌、家蚕白僵菌、家蚕核型多角体病毒（NPV）和家蚕微孢子虫（N.b），观察紫外线照射对家蚕病原的灭活效果。结果是当紫外线照射时间为22.0min和24.0min时，即可分别达到完全杀灭苏芸金杆菌和家蚕白僵菌的效果；当照射时间为6.0min和12.0min时，也可分别达到完全杀灭家蚕核型多角体病毒和家蚕微孢子虫的效果。说明紫外线照射处理对4种家蚕病原具有明显的抑杀作用。

摘要： 本试验对湖北省保存的11个中系和10个日系家蚕品种资源进行了NPV添食,调查其发病率,结果中系发病率最高的品种是27,平均发病率为45.56％,最低的品种为E春,平均发病率为34.86％;日系发病率最高的品种是812,平均发病率为48.84％,最低的是9902,平均发病率为32.62％.对发病率进行SPSS方差分析,发现中系品种资源间不存在显著差异,而日系品种资源间存在显著差异,其中9902的抗性较强,812的抗性较差.

摘要： 本试验对湖北省保存的11个中系和10个日系家蚕品种资源进行了NPV添食,调查其发病率,结果中系发病率最高的品种是27,平均发病率为45.56％,最低的品种为E春,平均发病率为34.86％;日系发病率最高的品种是812,平均发病率为48.84％,最低的是9902,平均发病率为32.62％.对发病率进行SPSS方差分析,发现中系品种资源间不存在显著差异,而日系品种资源间存在显著差异,其中9902的抗性较强,812的抗性较差.

摘要： 本发明提供了一种能够快速鉴别棉铃虫核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的多重引物，所述多重引物分别根据如SEQ ID NO:11‑12所示的序列中的至少一条以及SEQ ID NO:13‑15所示的序列中的至少一条设计。本发明还提供一种用于鉴别棉铃虫核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的方法以及试剂盒，其使用所述多重引物。本发明相比现有技术有具有高度的特异性和准确性，在棉铃虫核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒生物农药的生产中提高产品质量的监控效率具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的方法及其重组杆状病毒和应用，该方法敲除家蚕核型多角体病毒的gp64基因，在此基础上回复截短了18个氨基酸的gp64基因，构建的重组病毒半数致死时间较对照延长了32小时，达到显著差异，但是重组病毒的一步生长曲线和对照没有显著差异。本发明制备用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒，可以有效延迟感染家蚕幼虫的死亡时间，不影响病毒的增值。本发明的重组杆状病毒为利用家蚕杆状病毒表达系统在虫体内制备外源蛋白提供了更长时间。本发明提供的方法简单明了，易于理解、操作简单易行，效率高。

摘要： 本发明属于生物检测技术领域，涉及家蚕微孢子虫、家蚕核型多角体病毒和家蚕浓核病毒的三重荧光PCR检测方法及试剂盒和引物、探针。本发明分别设计了各自的引物和探针，并在3个探针上标记了不同的荧光信号，在优化了PCR反应体系的条件下，实现三重荧光定量PCR同步检测蚕微孢子虫、家蚕核型多角体病毒和家蚕浓核病毒。不仅可实现DNA同步提取，也可以进行荧光PCR同步检测，大大简化了检测方法，并通过荧光补偿的程序，有效地消除了因荧光信号的交集而引起的假阳性。该方法能快速、特异和灵敏的一次性鉴别检测蚕微孢子虫、家蚕核型多角体病毒和家蚕浓核病毒，可提高早期检出率，有效防止疾病的传播，减少经济损失。

摘要： 本发明提供了一种能够快速鉴别棉铃虫核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的多重引物，所述多重引物分别根据如SEQ ID NO:11‑12所示的序列中的至少一条以及SEQ ID NO:13‑15所示的序列中的至少一条设计。本发明还提供一种用于鉴别棉铃虫核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的方法以及试剂盒，其使用所述多重引物。本发明相比现有技术有具有高度的特异性和准确性，在棉铃虫核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒生物农药的生产中提高产品质量的监控效率具有重要意义。

摘要： 本发明公开了用于家蚕核型多角体病毒、质型多角体病毒二重PCR的检测引物及其应用与试剂盒，属于家蚕养殖技术领域。本发明所述的检测引物包括SEQ ID NO.1～4所示的引物。本发明还公开了家蚕核型多角体病毒、质型多角体病毒二重PCR检测方法及检测试剂盒。本发明通过引物设计、条件优化以及特异性、敏感性、重复性试验，成功建立了BmNPV、BmCPV二重PCR的检测方法，该方法可用于两种主要家蚕病毒病的快速鉴别诊断及流行病学调查。

摘要： 本发明公开了一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法，包括如下步骤：纱布过滤粗提、离心精提纯化、根据沉淀的不同颜色，分梯度的收集管壁内的乳白色沉淀，小勺去除及纯水冲刷等，直至收集液程乳白色，回收液重复该步骤；乳白色多角体液，6000r/min离心10min，去上清液，纯水冲刷表面的异色层，收集中间纯色的多角体，留存的底部杂质层与表面液又进行离心提纯；重复数次，直至沉淀表面及管壁、管底，无异色，加入适量纯水，浓度为1.0‑1.5×109个/ml，4°C保存备用。本发明采用分梯度纱布过滤，有效提升离心机纯化速度；离心提纯时不加入其他物质，提取的家蚕核型多角体病毒多角体比较纯，可以高效的超多量提取家蚕核型多角体病毒多角体。

摘要： 本发明提供一种抗家蚕核型多角体病毒（BmNPV）的anti‑BmNPV‑RNA分子及家蚕抗病毒制剂，其具有SEQ ID NO.1所示的RNA序列。本发明还提供一种家蚕抗病毒制剂，所述抗病毒制剂中至少包含anti‑BmNPV‑RNA。通过试验证明，添加本发明anti‑BmNPV‑RNA的溶液能显著抑制BmNPV在家蚕细胞中的复制及增殖，可用于家蚕NPV病毒病的防治，专一性强、抗病毒效果良好、对家蚕及其他生物无危害等特性。

摘要： 本发明公开了一种延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的方法及其重组杆状病毒和应用，该方法敲除家蚕核型多角体病毒的gp64基因，在此基础上回复截短了18个氨基酸的gp64基因，构建的重组病毒半数致死时间较对照延长了32小时，达到显著差异，但是重组病毒的一步生长曲线和对照没有显著差异。本发明制备用于延长家蚕感染核型多角体病毒死亡时间的重组杆状病毒，可以有效延迟感染家蚕幼虫的死亡时间，不影响病毒的增值。本发明的重组杆状病毒为利用家蚕杆状病毒表达系统在虫体内制备外源蛋白提供了更长时间。本发明提供的方法简单明了，易于理解、操作简单易行，效率高。

摘要： 一种降低棉铃虫单包埋衣壳核型多角体病毒G4毒株突变率病毒的构建方法，该方法是以fp25k基因未发生突变的野生型HaSNPV G4毒株的病毒粒子为实验材料；通过构建含fp25k基因的质粒，进行两次定点沉默突变；再通过构建含荧光蛋白的质粒，进行共转染、荧光筛选和空斑纯化后得到突变后的G4病毒。本方法得到的病毒消除了野生型病毒传代时导致高突变率产生的遗传因子，稳定性强。

摘要： 本发明属于生物检测技术领域，涉及家蚕微孢子虫、家蚕核型多角体病毒和家蚕浓核病毒的三重荧光PCR检测方法及试剂盒和引物、探针。本发明分别设计了各自的引物和探针，并在3个探针上标记了不同的荧光信号，在优化了PCR反应体系的条件下，实现三重荧光定量PCR同步检测蚕微孢子虫、家蚕核型多角体病毒和家蚕浓核病毒。不仅可实现DNA同步提取，也可以进行荧光PCR同步检测，大大简化了检测方法，并通过荧光补偿的程序，有效地消除了因荧光信号的交集而引起的假阳性。该方法能快速、特异和灵敏的一次性鉴别检测蚕微孢子虫、家蚕核型多角体病毒和家蚕浓核病毒，可提高早期检出率，有效防止疾病的传播，减少经济损失。