重组质粒

摘要： 目的构建HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的绿色荧光蛋白重组质粒,明确其亚细胞定位。方法以构建含有570 bp的HCBP6外显子基因的绿色荧光蛋白重组质粒为基础,应用快速定点突变技术构建HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒。将重组质粒测序并进行序列比对。利用jetPRIME转染体系将HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒转染至细胞中,应用Real-Time PCR技术检测目的基因mRNA的表达,应用Western blot技术检测目的基因蛋白表达,应用荧光显微镜观察HCBP6不同位点磷酸化质粒的亚细胞定位。结果将测序的重组序列与目的基因进行比对,发现重组序列与目的基因完全一致,说明HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒构建成功。Real-Time PCR和Western blot表明,与对照组相比,实验组高表达HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的基因。免疫荧光显微镜可见10Ala主要在细胞质表达,WT、10Asp、151Ala、151Asp主要在细胞核表达。结论构建的HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒可成功转染细胞并在细胞中高表达,HCBP6不同位点磷酸化质粒亚细胞定位不同。

摘要： 目的构建Apobec-1互补因子(A1CF)真核表达质粒,转染肺癌细胞A549和H1299并检测其表达。方法提取肾癌细胞786-o中总RNA,经RT-PCR扩增人A1CF基因,通过酶切法插入pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-A1CF真核表达质粒,经BamHI和XbaI双酶切及DNA序列测序鉴定。Lipofectamine 2000脂质体转染肺癌细胞,Western blot法检测A1CF在肺癌细胞中的表达情况。划痕和Transwell小室实验观察A1CF对肺癌迁移侵袭能力的影响。结果酶切及测序结果显示pcDNA3.1(+)-A1CF中插入的片段序列测定结果与人A1CF序列一致,重组质粒转染两种肺癌细胞后,转染组的目的蛋白表达量明显增高,且E-cadherin和P-ERK表达水平也明显增高(P<0.05)。结论成功克隆人A1CF基因cDNA,并构建真核表达质粒。A1CF促进肺癌细胞迁移侵袭可能与ERK的磷酸化有关。

摘要： 目的:构建精神分裂症断裂基因1(DISC1)重组质粒pmirGLO-DISC13′UTR,分析和鉴定该重组质粒。方法:通过生物信息学分析精神分裂症病人差异表达miRNA-181b-5p与精神分裂症易感基因DISC1的结合位点,选取包含结合位点在内的上下游200 bp长度序列DISC13′UTR(1.26 kb-WT)人工合成目的基因,将合成的目的基因导入H343 pmirGLO空载体构建pmirGLO-DISC13′UTR,对构建的重组质粒进行分析和鉴定。结果:测序结果显示,DISC13′UTR(1.26 kb-WT)基因成功插于H343 pmirGLO质粒,pmirGLO-DISC13′UTR序列正确,与目标序列比较覆盖度为84%,相似度为100%。结论:成功构建了精神分裂症易感基因DISC1重组质粒pmirGLO-DISC13′UTR,为miRNA-181b-5p调控精神分裂症易感基因DISC1奠定了基础,可用于后续研究。

摘要： 目的构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒,并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能。方法以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板,将UBR5基因编码区序列分为前后两段,经聚合酶链式反应(PCR)扩增。两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中,通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293T)中,通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达。为了验证UBR5蛋白的功能,通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1(DKC1)蛋白的相互作用。结果成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒。经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中,并在HEK293T中表达。免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用。结论通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达。UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用。

摘要： 黑腹果蝇作为经典遗传学和分子遗传学模式生物,已经成为研究基因调控器官发育以及各种疾病发生的一个强有力的模型。为了探究Mlp84B在果蝇体内的表达定位及互作蛋白质,首先将含启动子元件的果蝇Mlp84B基因组融合GFP序列克隆至pUAST表达载体中,利用胚胎显微注射技术将构建好的重组质粒注射到果蝇早期受精卵;其次通过杂交获得红眼果蝇,经单果蝇建系、平衡子定位后获得稳定遗传的转基因果蝇;最后通过在果蝇体内检测到GFP的表达,同时经qRT-PCR检测到Mlp84B的表达水平上升,证实转基因果蝇构建成功。GFP定位结果显示,内源Mlp84B在果蝇肌肉系统表达,并且Mlp84B与Act57B在果蝇体内相互作用。实验结果表明,文中构建的UAS-Mlp84B-GFP转基因果蝇可以作为肌肉的标记品系,这为探究肌肉系统形成和稳态奠定了基础。

摘要： 目的运用生物信息学分析家蝇(Musca domestica L.)肌动蛋白5 C(Actin-5 C)基因,构建Actin-5 C启动子双荧光素酶报告基因表达载体。方法使用伯克利果蝇基因组计划(BDGP)在线分析软件、Promoter 2.0和在线比对启动子网站(FPROM)等多种启动子预测工具,分析、预测家蝇肌动蛋白Actin-5 C基因5′端上游非编码区,根据预测结果构建截短式启动子萤火虫荧光素酶报告基因重组质粒,转染草地贪夜蛾卵巢细胞系sf9细胞,并使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行萤火虫荧光素酶报告基因的检测。结果Actin-5 C基因5′端上游的-2609~-94 bp,预测有启动活性,且分值达0.8分以上,其中-2198~-2148 bp分值最高、达0.98分;在-220 bp和-1444 bp处分别检测到CAAT和TATA盒信号,经比较取最有可能的1156 bp(-1236~-80 bp)、1745 bp(-1825~-80 bp)及2059 bp(-2139~-80 bp)截断启动子片段,构建pGL 3-1156、pGL 3-1745及pGL 3-2059质粒,RT-PCR检测到3种重组质粒中的萤火虫荧光素酶报告基因转录成功。结论生物信息学预测工具研究家蝇Actin-5 C基因启动子可以简化认知基因的过程,根据预测结果构建了家蝇Actin-5 C基因萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。

摘要： 本研究计划构建能同时表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)优势抗原基因的重组质粒并研究其免疫效果,旨在为BVD-IBR二联核酸疫苗的研制提供参考.采用PCR扩增目的基因E0及gD并将其依次连接至真核表达载体pVAX1-1RES中,构建pVAXl-E0-IRES-gD重组真核表达载体;将pVAX1-E0-IRES-gD转染至293T细胞中,间接免疫荧光法检测目的基因在细胞中的表达情况;将pVAX1-E0-IRES-gD以不同剂量采用肌内注射的方式接种小鼠,通过抗体水平和细胞因子检测以及脾淋巴细胞增殖试验对该重组质粒的免疫效果进行评价.结果表明,成功构建pVAX1-E0-IRES-gD重组质粒,目的基因在293T细胞内成功表达.在抗体和细胞因子水平以及脾淋巴细胞增殖能力这3个指标,重组质粒组均极显著高于空载体和阴性对照组,高剂量免疫组优于中、低剂量组;另外,高剂量重组质粒免疫组与二联灭活疫苗组相比无显著性差异.结果显示,成功构建了共表达BVDV E0和IBRVgD基因的重组质粒,体外表达检测证明目的蛋白具有良好的反应原性,动物免疫试验证明其能刺激机体产生良好免疫应答.

摘要： 目的 运用生物信息学分析家蝇(Musca domestica L.)肌动蛋白5 C(Actin-5 C)基因,构建Actin-5 C启动子双荧光素酶报告基因表达载体.方法 使用伯克利果蝇基因组计划(BDGP)在线分析软件、Promoter 2.0和在线比对启动子网站(FPROM)等多种启动子预测工具,分析、预测家蝇肌动蛋白Actin-5 C基因5′端上游非编码区,根据预测结果构建截短式启动子萤火虫荧光素酶报告基因重组质粒,转染草地贪夜蛾卵巢细胞系sf9细胞,并使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行萤火虫荧光素酶报告基因的检测.结果 Actin-5 C基因5′端上游的-2609～-94 bp,预测有启动活性,且分值达0.8分以上,其中-2198～-2148 bp分值最高、达0.98分;在-220 bp和-1444 bp处分别检测到CAAT和TATA盒信号,经比较取最有可能的1156 bp(-1236～-80 bp)、1745 bp(-1825～-80 bp)及2059 bp(-2139～-80 bp)截断启动子片段,构建pGL3-1156、pGL3-1745及pGL3-2059质粒,RT-PCR检测到3种重组质粒中的萤火虫荧光素酶报告基因转录成功.结论 生物信息学预测工具研究家蝇Actin-5 C基因启动子可以简化认知基因的过程,根据预测结果构建了家蝇Actin-5 C基因萤火虫荧光素酶报告基因表达载体.

摘要： 研究旨在对努比亚山羊脂肪和肥胖相关蛋白(fat mass and obesityassociated protein,FTO)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体.取努比亚山羊背最长肌组织作为试验材料,采用RT-PCR扩增出FTO基因的编码区,测序鉴定后对得到的序列用相应的分析软件进行生物信息学分析,然后将FTO基因片段与pMD19-T载体连接后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,构建pMD19-T-FTO载体,测序正确的重组质粒双酶切后,连接pEGFP-N1载体构建pEGFP-N1-FTO真核表达载体,然后转染3T3-L1细胞,培养48 h后,在荧光显微镜下观察细胞表达荧光的情况.结果表明,试验成功克隆了努比亚山羊FTO基因的编码区,序列长度为1518 bp,编码505个氨基酸,分子质量为57142.24 u.努比亚山羊FTO基因编码区序列与NCBI上公布的山羊、牛、绵羊、猪、原鸡、小鼠的相似性分别为98.7％、96.4％、98.3％、87.2％、64.3％、81.7％,该基因系统进化树分析显示,努比亚山羊与山羊遗传距离最近,与原鸡遗传距离最远,在不同物种中具有高度保守性.努比亚山羊FTO蛋白二级和三级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主.构建的真核表达载体pEGFP-N1-FTO转染3T3-L1细胞48 h后,在显微镜下观察到绿色荧光的表达,说明FTO基因真核表达载体构建成功.本试验构建努比亚山羊FTO基因真核表达载体,其在3T3-L1细胞中成功表达,为以后研究FTO基因与山羊脂肪代谢的相关性奠定基础.

摘要： 目的 构建NaV1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定.方法 将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Se-pharos 4B分离纯化后采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量,pull-down方法检测GST-IQ融合蛋白的生物学活性.结果 构建的IQ重组质粒经限制性内切酶和基因测序双重鉴定显示质粒构建成功,融合蛋白经纯化后其浓度和纯度均较高,并具有能够与CSL蛋白浓度依赖性结合的生物学活性.结论 本研究成功构建了可以表达生物活性蛋白的NaV1.5钠通道IQ基序原核表达载体,为深入探讨NaV1.5钠通道的生物学功能奠定了重要的物质基础.

摘要： 目的：将APJ羧基端的一个丝氨酸突变为丙氨酸,用于Apelin介导的信号转导的机制研究.方法：以APJ-pcDNA3.1(+)为模板,使用PCR技术以及酶切、连接、转化挑菌以及酶切鉴定等技术.结果：质粒酶切鉴定以及测序结果正确.结论：成功构建了APJ突变体重组质粒,该质粒可用于Apelin介导的信号转导的机制研究.

摘要： 目的：构建α-烯醇化酶(alphaenolase,ENO1)重组表达质粒,并研究其表达形式.rn 方法：以人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)总RNA为模板合成cDNA;根据ENO1基因序列,设计上下游引物,以cDNA为模板,经多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增得到目的基因片段ENO1;用T4DNA连接酶连接酶切产物和原核表达载体pET28(a),获得重组表达质粒pET28(a)-ENO1;将pET28(a)-ENO1在BL21(DE3)E.Coli.大肠杆菌中诱导表达,分别取菌液上清和沉淀进行SDS-PAGE电泳,确定重组质粒的表达形式.rn 结果：重组表达质粒pET28(a)-ENO1中的ENO1测序结果与GeneBank上的序列一致;pET28(a)-ENO1以可溶性表达为主.rn 结论：ENO1重组质粒的成功构建及其可溶性为主的表达形式的确定,为研究ENO1的生物学活性及功能奠定了基础.

摘要： 目的：构建小鼠PICK1基因的真核表达载体myc-PICK1.方法：从小鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增PICK1序列,所得片段及真核表达载体pRK5-myc用SalⅠ和NotⅠ双酶切,后连入pRK5-myc载体中.重组质粒经SalⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后送公司测序.结果：PCR扩增得到预期1.2 kb大小的目的片段,经SalⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确重组质粒送公司测序,结果与预期一致.Myc-PICK1重组质粒转染Hela细胞,进行免疫染色能看到定位于胞浆的蛋白表达.结论：成功构建了myc-PICK1载体,为后续研究奠定了基础.

摘要： 本文构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列.采用RNAi技术,设计并合成3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),将其转染小鼠C2C12细胞,实时定量PCR检测细胞中MEF2C基因mRNA的表达,Western blot鉴定细胞中MEF2C基因蛋白的表达.结果显示,重组质粒经PCR扩增后显示产物大小与预期一致,产物经双酶切及测序鉴定该序列与NCBI提供的序列一致;重组质粒转染C2C12细胞后,实时定量PCR结果表明MEF2C基因mRNA表达受到不同程度抑制,抑制率分别为33.67％±2.51％、21.00％±3.60％、71.67％±4.04％;Western blot结果表明MEF2C基因蛋白表达受到不同程度抑制,抑制率分别为47.33％±0.05％、38.25％±0.16％、67.27％±0.12％.本试验成功构建猪MEF2C基因干扰重组质粒,最终确定干扰质粒(siRNA-3)具有最佳干扰效果,证实MEF2C基因的干扰质粒能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为探讨该基因与肌肉肉质性状的关系提供理论基础.

摘要： 本研究根据草莓镶脉病毒基因组序列设计PCR引物,用于筛选不同草莓样品,通过优化RT-PCR反应体系,建立了能稳定灵敏的检测草莓镶脉病毒技术体系.应用检测体系,成功对SVBV病毒侵染的草莓叶片材料进行了RT-PCR扩增,得到了期望大小的条带278bp特异带.测序后经blast序列比对,结果表明该特异带为草莓镶脉病毒序列.以此片段利用pEASY-T5Zero克隆载体构建重组质粒作为标准品,将标准重组质粒用NanoDrop2000进行浓度检测,按10倍梯度稀释成108～101拷贝/μl,建立了检测SVBV的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR方法.结果表明,此方法标准曲线的相关系数大于0.99,敏感性可达到101拷贝/μl,约为普通PCR的1000倍;用该方法检测了部分草莓品种的DNA样品.该方法具有很高的敏感性和稳定性,可用来快速检测草莓植株是否感染SVBV.

摘要： 目的：制备用于CYP4F2和β-actin基因mRNA实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测的标准品质粒与标准曲线.rn 方法：通过PCR扩增出CYP4F2和β-actin目的片断,纯化后直接连接于pGEM-Teasy载体,转化E·coli DH5α宿主菌,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析.rn 结果：CYP4F2和β-actin基因目的片段均成功重组,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的Real-time PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.rn 结论：成功构建了CYP4F2和β-actin基因实时Real-time PCR标准品质粒和标准曲线.

摘要： 目的：获得小鼠肝炎病毒(MHV)S1、S2、M及N结构蛋白基因,构建4个相应基因的重组质粒.rn 方法：依据Genbank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计S1、S2、M及N结构蛋白基因4对特异性引物,以A59毒株RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体,构建重组质粒.经双酶切鉴定正确后,测序确认.将测序结果与Genbank序列比对.rn 结果：确认扩增得到的S1、S2、M及N核酸序列与Genbank序列公布的相似度分别为100％,99％,100％和99％.rn 结论：成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立了RT-PCR快速检测实验小鼠MHV的方法奠定基础.

摘要： 目的:将基因巨噬细胞集落刺激因子(GM-SCF),白介素-21(IL-21)和视黄酸早期转录因子-1(Rae-1)构建成重组质粒,观察重组质粒对小鼠皮下模型的疗效.rn 方法:利用RTPCR的方法将GM-SCF,IL-21和Rae-1构建成重组质粒,将小鼠皮下植模型分6组,分别为control组,IRES/GFP,IRES/IL21,IRES/GM-SCF,IRES/GM-SCF-IL21和IRES/combination组,每组15只,分别予以相应的基因治疗,观察各组60天的生存率,并观察小鼠机体干扰素-佰(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)水平的变化.rn 结果:pGM-CSF-GFP-IRES-Rae-1-IL-21已经成功构建,control组到第14d小鼠全部死亡;IRES/GFP组到第16d小鼠全部死亡;治疗60天后,IRES/GM-SCF组剩2只模型小鼠存活,其存活率为13.33％;IRES/IL21组的模型存活仅剩1只,其存活率为6.67％;IRES/GM-SCF-IL21模型存活11只模型小鼠,其存活率最高为73.33％.IRES/GM-SCF-IL21组的存活率明显高于其他各组(P＜0.05或＜0.01).治疗后1d ～6d IRES/combination,IRES/GM-SCF-IL21,IRES/GM-SCF和IRES/IL21组的IL-2和INF-γ水平出现逐渐升高的,以IRES/combination水平最高,IRES/GM-SCF-IL21次之,IRES/GM-SCF和IRES/IL21组水平相对较低(P＜0.01),6d～10d,IRES/combination在的IL-2和INF-佰水平仍为稳步增长,而IRES/GM-SCF-IL21,IRES/GM-SCF和IRES/IL21组出现逐渐下降.治疗结束时,IRES/GM-SCF-IL21组的IL-2和INF-佰水平较IRES/GM-SCF和IRES/IL21组明显增高(p＜0.01),而IRES/GM-SCF和IRES/IL21组的IL-2和INF-佰水平较IRES/GFP和control组明显增高(p＜0.01),以IRES/combination在的IL-2和INF-佰水平最高(p＜0.01).rn 结论:联合GM-SCF,IL-21和Rae-1基因具有明显抑制小鼠肝癌的作用,其机理与机体的免疫激活有关.

摘要： 目的:构建大鼠EPHX2基因的过表达重组质粒,转染至人胚肾293T细胞,检测其在细胞中的表达及对P65 mRNA水平表达的影响.方法:提取大鼠肾脏组织总RNA,应用RT-PCR方法扩增编码EPHX2基因的cDNA,克隆至T-载体并测序,经亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定并再次测序,获得过表达重组质粒.用磷酸钙共沉淀法将重组质粒DNA瞬时转染至HEK293T细胞,Westem Blot方法检测重组质粒在蛋白水平的表达,RT-PCR方法检测其对P65 mRNA水平表达的影响.结果:1)测序结果证实PCR扩增获得编码大鼠EPHX2的cDNA序列正确;2)磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,融合蛋白成功表达;3)RT-PCR结果显示重组质粒转染组P65mRNA表达升高.结论:成功构建大鼠EPHX2的重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达并升高P65 mRNA水平的表达.

摘要： 本研究首先对新疆吐鲁番及和静地区该病的流行情况进行调查,筛选了阳性病料.采用PCR方法,利用设计的三对特异性引物分别扩增牛环形泰勒虫新疆株Tams1基因的三段区域(全长基因,扩增片段缺乏N端及C端疏水区、仅缺乏N端疏水区区域),构建三种重组表达载体,通过SDS-PAGE电泳分析比较三种重组质粒蛋白表达量及表达形式,最终筛选获得高可溶性表达重组质粒.优化其表达条件,并对纯化的蛋白进行Western blot分析.结果:新疆吐鲁番及和静地区牛环形泰勒虫病阳性率为52.3％(219/419).在37°C条件下,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导表达4h后,缺乏N端及C端疏水区的靶重组质粒表达出大小为53KDa的可溶性蛋白；而含全长基因或仅缺乏N端疏水区的质粒表达产物分别为55KDa、56kDa大小的包涵体蛋白,最终筛选得到了能够高表达可溶性蛋白的质粒.蛋白诱导条件优化结果表明,在37°C、0.5mmol/L IPTG诱导4h的表达条件下,可溶性蛋白表达量最高,达1.39mg/ml.纯化后的蛋白能与相应抗体特异性结合.本次结果表明环形泰勒虫病在新疆吐鲁番地区流行严重,表达的可溶性蛋白可作为诊断性抗原,以此建立环形泰勒虫病免疫学检测方法.本研究为开展环形泰勒虫病的早期检测和疫苗研究提供了技术支持.

摘要： 一种用转化哺乳动物细胞和培养转化细胞生产所需的肽的方法可以通过用骨髓瘤细胞作为哺乳动物细胞和/或用具有SV40早期启动区顺序的载体予以改进，该启动区顺序位于所需的肽编码基因的5′末端上行链上和3′末端下行链上。

摘要： 本发明提供了一种重组质粒pET28a‑Ag43、表面展示质粒、重组工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。所述重组质粒pET28a‑Ag43，自转运蛋白Ag43编码基因插入到质粒pET28a的EcoRI和HindIII多克隆位点处；所述自转运蛋白Ag43编码基因具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。外源蛋白基因片段可以通过双酶切方式快速连接至重组质粒的多克隆位点，构建重组工程菌，实现外源蛋白在细胞表面展示表达，不需要破壁释放胞内蛋白酶，同时酶蛋白固定到细胞表面，方便酶蛋白的回收和重复利用。

摘要： 一种合成的鸭β-防御素-2基因、含该基因的重组质粒与重组酵母转化子及重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其中重组鸭β-防御素-2基因参照GenBank中注册的鸭AvBD2基因cDNA基因序列，同时根据酵母密码子偏好性对鸭AvBD2基因成熟肽段核苷酸序列进行改造，然后利用基因合成方法合成，含该基因的重组质粒重组质粒的构建过程依次是：（1）鸭β-防御素-2基因上游引物、下游引物的设置过程；（2）鸭β-防御素-2基因片段的PCR扩增过程；（3）重组质粒pPICZα-A-AvBD2的构建；重组鸭β-防御素-2蛋白的重组酵母阳性转化子的生产方法包括（1）重组质粒的制备和线性化、（2）毕赤酵母电转化感受态细胞的制备、（3）毕赤酵母的电击转化；重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法包括（1）阳性酵母转化子的诱导表达。本发明与已有技术相比，具有抗菌促生长活性，适合于在畜牧生产中进行应用，而且生产成本低、生产效率高的优点。

摘要： 一种重组质粒、重组质粒制备方法、重组杆粒及其应用，所述重组质粒基因组整合了IBDV VP2成熟蛋白的基因序列、GP67蜂毒信号肽基因、His标签蛋白基因序列和终止密码子，且保持了IBDV的开放阅读框编码基因和GP67蜂毒信号肽基因各自的生物学功能；所述VP2成熟蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示序列；所述GP67蜂毒信号肽基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示序列；所述His标签蛋白基因序列如SEQ ID NO.3所示序列。本发明在VP2蛋白基因前面加了一个有利于病毒蛋白表达的蜂毒信号肽GP67，外源蛋白出核后昆虫细胞（Sf9）自身的酶会自动将其切下从而与外源蛋白分离开，不会影响外源蛋白的表达，提高VP2蛋白的胞外表达量。

摘要： 本发明提供一种重组质粒、利用该重组质粒制备的重组杆状病毒以及该病毒在间日疟传播阻断疫苗制备中的应用。该重组质粒由一段重组序列插入到pFastBacDual质粒中构建而成，该重组序列为根据CMV、Pph、SP、TM已知序列，在SP和TM序列间加入Xba I酶切位点和Xho I酶切位点，CMV-F前加入KpnI酶切位点，TM-R后加入HindIII酶切位点形成。该重组杆状病毒由Pvs25基因插入到上述重组质粒并通过转座与穿梭载体Bacmid的基因组进行同源重组，然后转染家蚕细胞，在家蚕细胞内包装得到。此生产疫苗的方法具有安全性好、生产成本低、易于大规模生产操作的特点。

摘要： 本发明提供了一种重组质粒pET28a‑Ag43、表面展示质粒、重组工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。所述重组质粒pET28a‑Ag43，自转运蛋白Ag43编码基因插入到质粒pET28a的EcoRI和HindIII多克隆位点处；所述自转运蛋白Ag43编码基因具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。外源蛋白基因片段可以通过双酶切方式快速连接至重组质粒的多克隆位点，构建重组工程菌，实现外源蛋白在细胞表面展示表达，不需要破壁释放胞内蛋白酶，同时酶蛋白固定到细胞表面，方便酶蛋白的回收和重复利用。

摘要： 本发明涉及动物基因工程与动物病毒学技术领域，特别涉及重组质粒、重组病毒载体、重组病毒毒株及其应用、重组蛋白及含有该蛋白的亚单位疫苗。本发明构建了高效表达猪蓝耳病病毒GP5蛋白的重组杆状病毒毒株BacSC-Dual-GP5，使其具有更好的免疫原性。本发明重组毒株所表达的重组蛋白除去融合部分，其产物表达产量非常高。用研制的PRRSV-GP5亚单位疫苗制品对本动物是安全的。疫苗免疫效力试验结果表明，所有疫苗免疫后28天抗体检测全部转阳；强毒攻击试验结果表明，1ml和2ml免疫组均获得100％保护，0.5ml组获得80％(4/5)保护。b pnum="1" />

摘要： 本发明提供了一种新型冠状病毒的重组S蛋白、重组质粒、重组菌及制备外泌体药物或外泌体疫苗的应用，涉及疫苗技术领域。本发明所述重组S蛋白，包括刺突蛋白S的亚基S1和亚基S2，利用linker连接S1蛋白与S2蛋白，组成重组S蛋白，使各组分相互协调补充，具有良好的免疫原性、安全性和生物活性，能够诱导机体产生有效抗体，从而抑制新型冠状病毒的生长，可有效预防感染新冠病毒。本发明采用人工外泌体携带形式，将重组S蛋白电转入外泌体中，可改善所携带治疗剂的药代动力学和药效学特征，从而增强治疗效果，同时减少不良毒性和副作用，其具有广泛的细胞黏附分子，有助于穿透生物屏障。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体公开一种家猪ISG15重组蛋白及其编码基因、重组质粒、重组菌株和应用。家猪ISG15重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码所述家猪ISG15重组蛋白的基因，及包含所述基因的重组质粒和重组菌株。所述家猪ISG15重组蛋白、基因、重组质粒、重组菌株之任一在制备治疗猪伪狂犬病（PR）药物中的应用。本发明ISG15重组蛋白可以有效减少伪狂犬病病毒（PRV）的抗原量，能够有效控制PRV急性感染，为控制病毒感染提供了新途径。

摘要： 一种合成的鸭β-防御素-2基因、含该基因的重组质粒与重组酵母转化子及重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其中重组鸭β-防御素-2基因参照GenBank中注册的鸭AvBD2基因cDNA基因序列，同时根据酵母密码子偏好性对鸭AvBD2基因成熟肽段核苷酸序列进行改造，然后利用基因合成方法合成，含该基因的重组质粒重组质粒的构建过程依次是：（1）鸭β-防御素-2基因上游引物、下游引物的设置过程；（2）鸭β-防御素-2基因片段的PCR扩增过程；（3）重组质粒pPICZα-A-AvBD2的构建；重组鸭β-防御素-2蛋白的重组酵母阳性转化子的生产方法包括（1）重组质粒的制备和线性化、（2）毕赤酵母电转化感受态细胞的制备、（3）毕赤酵母的电击转化；重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法包括（1）阳性酵母转化子的诱导表达。本发明与已有技术相比，具有抗菌促生长活性，适合于在畜牧生产中进行应用，而且生产成本低、生产效率高的优点。