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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

召开年：2015
召开地：深圳
出版时间： 2015-11-26

主办单位：中国药学会;中华预防医学会;中国医药生物技术协会

会议文集：2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会论文集

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1.ELISA法测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体的抗药抗体
- GAO Liu-cun;高柳村;LI Li;李黎;WANG Xu-jia;王绪甲;CHEN Fang;陈方;DONG Li-hou;董立厚;OU Lun;欧伦;SONG Hai-feng;宋海峰
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:建立测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体抗药抗体(ADA)的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体.rn 方法:在96孔板中包被治疗药物,以捕获食蟹猴血清中的抗药抗体,之后加入生物素标记的治疗药物与被捕获的抗药抗体结合,最后用链霉亲和素—辣根过氧化物酶偶联试剂作为检测试剂.以羊抗人的IgG作为对照品,对食蟹猴血清中的抗药抗体进行半定量.rn 结果:筛选判断阈值SNR为1.158,批内批间精密度小于20％,样品复孔OD值变异小于20％,确证判断阈值为38.4％游离药物抑制率.抗BLyS抗体连续给药13周食蟹猴体内产生抗药抗体.rn 结论:成功建立、验证并应用该方法测定了抗BLyS抗体的抗药抗体,为该药申请临床实验报批提供数据支持.
2.自体免疫细胞制备过程中外源性微生物污染的控制
- 肖琳;颜南飞
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:通过建立全面的质量管理体系,防止自体免疫细胞制备过程中制品受到外源性微生物污染,避免因使用自体免疫细胞制剂进行临床研究而传播疾病.结果:合一康生物综合国内外相关法律法规,结合细胞制备技术特点,建立了一套行之有效的系统的自体免疫细胞制备污染防控系统,四年来与医院合作完成肿瘤免疫细胞临床研究近万例,发放细胞20000多份,无一份污染,临床研究中无一例严重不良反应事件发生,也未发生一例生物安全事故及医疗纠纷.
3.基因排序对重组痘苗病毒免疫原性影响的研究
- 程飞
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:比较不同基因排序的重组MVA疫苗间免疫效力的差异.方法:在已构建完成的5基因重组MVA-BE1726D(RM-0)的基础上,重新设计出不同的基因排列组合,与穿梭质粒连接,通过同源重组的方式整合入MVA基因组,构建了另外四种重组MVA病毒载体(RM-1/2/3/4),进行动物试验.结果:五种重组MVA疫苗均能引起有效TH1型免疫反应,促进IFN-γ和IL-2等多种抗结核细胞因子的分泌,其中以RM-0和RM4的效果最为显著.同时发现基因排序的差异会对疫苗的免疫原性产生影响:RM-0显示出了较强的TH2型细胞免疫刺激作用.
4.蚀斑法检测用BHK21细胞对检测结果的影响分析
- Lü Wen-li;吕文利;ZHANG Xue;张雪;YUAN Jin;袁瑾;ZHAO Xin-hua;赵新华;XIAO Jian;肖健
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:分析BHK21细胞对病毒滴度检测(蚀斑法)系统的影响,降低检测系统误差.方法:比较BHK2,细胞以不同频次传代培养时的细胞生长状态,以及以不同接种浓度进行病毒滴度检测时其检测系统的稳定性.结果:BHK21细胞培养四天传代,其形态良好,边缘光滑,胞质透光性好,细胞分散均匀,细胞活率达95％以上;BHK21细胞以105个/mL浓度接种时,乙型脑炎减毒活疫苗及其病毒滴度参考品的变异系数分别为0.66％和0.64％,变异系数最小.结论:BHK21细胞培养四天传代、以105个/mL浓度接种时病毒滴度检测系统最稳定,为进行疫苗病毒滴度检测(蚀斑法)提供参考.
5.灭能与未灭能新生牛血清培养细胞效果比较
- ZHAO Xin-hua;赵新华;Lü Wen-li;吕文利;ZENG Shuai;曾帅;E Wen-juan;鄂文娟
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:为了比较未灭能新生牛血清与灭能新生牛血清体外培养动物细胞的效果,取用一批新生牛血清作为试验材料,采用60Coγ-射线照射和56℃30分钟两种方式进行灭能,并使用该灭能新生牛血清及未灭能新生牛血清培养MRC-5细胞和vero细胞,观察传代后不同血清培养条件下的细胞形态、增长倍数.rn 结果:两种细胞都是在使用未灭能的血清培养环境下增殖更多更快速;使用γ—射线照射剂量为8kGy和照射剂量为16kGy灭能的血清培养的两种细胞的增殖速度和数量低于未灭能血清培养的细胞;使用热灭能的血清培养的两种细胞的增殖速度和数量明显低于前两种血清培养的细胞.rn 结论:未经灭能的血清比灭能后的血清对培养vero细胞和MRC-5细胞的效果及促细胞生长增殖的效果好.
6.人凝血因子ⅧS/D灭活伪狂犬病毒与干热灭活细小病毒工艺验证的检测
- 邹浩勇;杨禅堂;李陶静;彭燕;邹莉;杨邦玲
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:通过对S/D法与干热法灭活人凝血因子Ⅷ制品中猪伪狂犬病毒和猪细小病毒的检测,评价病毒灭活效果.rn 方法:以猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为指示病毒,模拟人凝血因子Ⅷ生产工艺中的病毒灭活工艺,采用96孔板微量细胞病变法检测残余病毒滴度,评价S/D灭活伪狂犬病毒和干热灭活细小病毒的效果.rn 结果:模拟生产的3批人凝血因子Ⅷ经25±1℃S/D灭活处理15分钟后,3批制品的PRV滴度分别下降≥6.5个LgTCID50/0.1ml、≥6.8个LgTCID50/0.1ml、≥6.8个LgTCID50/0.1ml;模拟生产的3批人凝血因子经100±2℃干热处理30分钟灭活后,3批制品的PPV滴度分别下降4.00个LgTCID50/0.1ml、3.92个LgTCID50/0.1ml、3.94个LgTCID50/0.1ml.rn 结论:检测结果表明采用S/D法可以有效的灭活凝血因子类制品中的伪狂犬病毒,采用干热法对凝血因子类制品中的细小病毒也具有较好的灭活效果,为今后凝血因子类制品的病毒灭活验证工艺提供参考.
7.一种平台化方法——液质联用肽图法用于多种治疗性单克隆抗体的鉴别
- 桂芳;杨兰兰;张银川;潘勇兵
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:应用液相色谱质谱联用技术对多种治疗性单克隆抗体进行肽图分析,经质谱鉴定各个单克隆抗体识别抗原的CDR区相关的特征峰.rn 方法:贝伐珠单抗、利妥昔单抗、阿达木单抗、西妥昔单抗、生物类似药IgGl单抗MAb-RS经盐酸胍变性、DTT还原、烷基化处理后超滤置换缓冲液,采用胰酶进行酶切,反应结束后进行液质联用分析,采用MSE模式获得各个肽段母离子一级质谱数据及二级质谱数据,经Biopharmlynx软件分析鉴定出各个抗体CDR区对应的特征峰.rn 结果:各个抗体经软件分析在单一酶切的条件下序列覆盖率均达到90％以上;各抗体CDR区对应的特征峰所在的氨基酸序列均通过质谱鉴定出,利妥昔单抗轻链CDR1及CDR2位于同一胰酶酶切肽段内,二者被同时鉴别出;阿达木单抗2:T4及2:T9肽段只包含可变区部分氨基酸,并作为LC CDR1及LC CDR3的的鉴别肽段,HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中共流出;生物类似药MAb-RS的HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中也属于共流出肽段.rn 结论:本研究采用液质联用肽图法对多种治疗性单克隆抗体及一种生物类似药进行了针对单克隆抗体Fab段与抗原的结合区域CDR区进行专属性鉴别,结果表明该分析方法适用于单抗的专属性鉴别,今后可作为一种平台化方法应用于治疗性单克隆抗体开发过程及日常质控检测.
8.关于加快推进生物技术和农业科技创新的建议稿:一项大为提高生物菌种质量和农作物种子收获率的创新设想
- HUANG Sheng-qi;黄生琪
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：本文论述了提高生物菌种质量和培育农作物优质品种的可行性及部分相关实例,指出了研究的基本方向、设想和方法;在提高生物菌种质量和培育农作物优质品种的工艺上提出了创新的模拟太空环境法,可供生物制品、农业科研和管理人员借鉴、参考.
9.DoE实验设计开发23价肺炎多糖疫苗层析纯化平台工艺
- JI Yu;季宇;Mattias AHNFELT;Mattias Ahnfelt;JIA Guo-dong;贾国栋
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:应用DoE实验设计建立一种新型23价肺炎多糖疫苗层析纯化工艺平台.rn 方法:将23F型肺炎粗糖样品作为开发样品溶解并在预处理后,采用DoE设计开发基于Capto Adhere的纯化工艺.色谱纯化过程采用流穿模式,通过DoE分析获得工艺参数,在该条件下将多糖和其他杂质分离,并作为纯化平台应用于其他多糖型.根据《欧洲药典》7.0的方法和标准,对样品的各项指标进行检测.rn 结果:23F型多糖在柱上流穿,多糖与蛋白和核酸完全分离,应用此工艺平台至其他多糖型上,纯化的多糖样品各项指标也均符合《欧洲药典》7.0的标准.rn 结论:通过DoE实验设计快速建立了一种新型肺炎多糖疫苗层析纯化工艺平台,缩短生产时间,提高产品质量,代替传统的有毒苯酚抽提工艺,可用于23价肺炎多糖纯化和23价肺炎多糖疫苗生产.
10.大肠杆菌表达B群脑膜炎fHbp V2型重组蛋白纯化、鉴定及其稳定性分析
- 孟夏萌;林福玉;郭林;任玉莹;徐颖之;郑海发
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:纯化大肠杆菌表达B群脑膜炎蛋白中的某单组份蛋白,并对其进行鉴定和稳定性分析.方法:将诱导表达后的大肠肝菌菌体用高压均质机破碎后,经离子柱和复合模式填料的3步层析柱纯化,并利用SDS-PAGE与HPLC分析纯度,经N端15个氨基酸测序鉴定,于4℃,37℃放置2个月分析稳定性.结果:纯度＞95％,N端15个氨基酸鉴定为正确,不加保护剂体系下4℃放置2个月无变化.结论:成功纯化了大肠杆菌表达B群流脑蛋白中单组份蛋白,纯化的蛋白稳定性较好,为进一步研究其免疫原性以及研发B群脑膜炎蛋白疫苗奠定了基础.
11.一种新的基于SPR技术的A型肉毒毒素的检测方法
- LU Wei-jia;卢卫嘉;QIN Hai-yan;WANG Jian-feng;AN Chen;MAO Xiao-yan
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：肉毒神经毒素是由肉毒梭菌分泌的一种神经毒素,可抑制神经元中乙酰胆碱的释放,麻痹呼吸肌.误食或呼吸系统以及外伤接触肉毒毒素或其污染物可引起急性的神经中毒,如处置不及时,可使人或哺乳动物快速死亡.传统分型检测肉毒毒素使用小鼠法,耗时长达4天,需要动物量大.所以有必要建立一种快速,有效的体外检测肉毒毒素的方法来取代传统的小鼠法.应用SPR技术建立了一种新的快速检测方法,可精确定量检测奶粉中BONT/A的含量,检测灵敏度可以达到ng/ml.本实验采用葡聚糖基质的芯片,应用氨基偶联法偶联肉毒诊断血清标准品,建立标准曲线,可以在数分钟内得到牛奶样品中肉毒毒素的准确血清型及有效含量.
12.破伤风类毒素抗原检测酶联免疫方法的建立及应用
- 王玲;张霖阳;潘殊男;赵俊;肖詹蓉
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:建立定量检测白喉—破伤风—无细胞百日咳疫苗生产过程中破伤风(tetanus toxiod,TT)的方法.rn 方法:破伤风类毒素免疫家兔以制备高效价血清抗TT抗体.辛酸—硫酸铵沉淀法纯化抗TT多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,建立双抗体夹心ELISA法.rn 结果:建立的方法与丝状血凝素、百日咳黏着素、百日咳毒素及白喉类毒素无交叉反应,特异性较好.该ELISA法在o.75-16mlf/ml TT测量区间有最佳线性,相关系数＞0.99.实验内和实验间检测14mlf/ml,12mlf/ml,6mlf/ml,3mlf/ml,1.5mlf/ml的TT,变异系数为4.7％～9.8％,回收率为92.7％～109％,精密度和准确度均符合常规质控要求,该法的定量限度为1.5mlf.rn 结论:建立的ELISA法可有效检测破伤风疫苗纯化过程中的TT含量,为破伤风疫苗质量控制奠定了重要基础.
13.脑膜炎球菌表面蛋白fHBP的亚家族特异性及其免疫原性
- WU gen-peng;吴根鹏;袁萍;YUAN ping;CHEN Mingliang;陈明亮;WANG yue-hong;王月红;WANG xiao;王晓;XU fan-hong;徐帆洪;CHEN Min;陈敏;张曦;ZHANG Xi;ZHU wei;朱为
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:原核表达脑膜炎球菌表面蛋白fHBP,研究其免疫原性.rn 方法:筛选A和B两个亚家族的fHBP基因序列分别克隆至质粒pET-24b(+)和pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-/HBP-A和pET-24b fHBP-B.转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备多克隆抗体.采用流式细胞术、血清杀菌力试验和被动免疫保护试验评估抗原的免疫原性.rn 结果:两个蛋白的重组表达质粒成功构建.fHBP-A以包涵体形式表达,fHBP-B以可溶形式表达,纯化后纯度均高于95％.重组蛋白免疫家兔制备抗血清,经流式细胞术检测可与靶菌发生特异性结合反应,血清杀菌力试验检测到明显的杀菌反应,被动免疫保护试验证明在NIH乳鼠体内抗血清能有效清除靶菌.各项试验均呈现显著的亚家族特异性.rn 结论:fHBP蛋白具有良好的免疫原性,可作为B群流脑疫苗的候选抗原.
14.重组卡介苗rBCG-BE1726D的鉴定及免疫原性评价
- Zhang Hai-feng;张海峰;Fang Xi-jing;方习静;Bi Lan;闭兰
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:鉴定重组卡介苗rBCG-BE1726D的特异性蛋白表达情况及评价其对小鼠的免疫原性.rn 方法:将冻干的菌株rBCG-BE1726D扩大培养后,超滤浓缩收集上清,超声破碎离心收获菌体,采用western-blot的方法进行特异性蛋白检测.用rBCG-BE1726D菌株和BCG菌株免疫Balb/c小鼠,8周后,流式检测小鼠脾淋巴细胞CD4、和CD8、T细胞的百分比,酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)及ELISA检测脾淋巴细胞γ干扰素(interferonγIFN-γ)的分泌水平.rn 结果:菌株rBCG-BE1726D经免疫印迹证实分泌或菌体内存在Ag85B,ESAT-6,RV2626c蛋白;rBCG-BE1726D菌株免疫小鼠后,流式检测CD4+/CD8+T细胞比值[(2.52±0.07)％]明显低于BCG组[(2.85±0.07)％,(P＜0.05)],CD8+T细胞比例[(12.89±0.23)％]玥显高于BCG组[(12.02±0.25)％,(P＜0.05)]和PBST对照组[(9.98±0.26)％,P＜0.05];ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ分泌水平,Ag85B刺激所产生的IFN-γ实验组明显高于对照组,BCG组(7.25±1.03)和rBCG-BE1726D组(9.50±2.60)间差异无显著性(P＞0.05),其他蛋白刺激后均有增高趋势,但各组间没有显著性差异,与ELISA检测结果基本一致.rn 结论:重组卡介苗rBCG-BE1726D有较强的免疫原性,能明显增强Balb/c小鼠的免疫应答水平,但与BCG相比,免疫原性无明显优势,此疫苗的应用前景需做进一步的保护力研究.
15.皮卡狂犬病疫苗的有效性和安全性评价
- 张守峰;张译;扈荣良;徐葛林;李伟;胡宇驰;刘媛;刘芳;徐书;李烈涛
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：单独使用狂犬病疫苗无法对暴露后人群进行全面有效的保护,常导致免疫失败,原因在于现有疫苗产生中和抗体较慢且难以诱导细胞免疫.因此,亟需开发更加安全有效的狂犬病疫苗.在本研究中,将皮卡佐剂引入狂犬病疫苗,成功制备了皮卡狂犬病疫苗.皮卡佐剂作为一种生化合成的双链RNA类似物,是TLR3的激动剂.试验结果显示,皮卡狂犬病疫苗能够增强动物机体的体液免疫和细胞免疫应答,且皮卡狂犬病疫苗对病毒暴露后免疫的保护率高达70％-80％,而无佐剂疫苗的保护率仅为20％-30％.毒理试验结果显示皮卡佐剂与皮卡狂犬病疫苗在小鼠中安全性良好.本研究表明皮卡狂犬病疫苗是一种安全有效的疫苗,极有希望成为下一代新型狂犬病疫苗,建议开展临床试验.
16.无血清培养狂犬病毒的研究
- 李薇;孙燕;张香玲;陈军;张生琰
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:探讨建立无血清无动物源性培养基(VP-SFM)培养Vero细胞和狂犬病毒CTN-1V株的工艺,以期为生产中采用VP-SFM培养狂犬病毒提供一定的实验依据.rn 方法:采用VP-SFM培养Vero细胞和CTN-1V株,绘制病毒增殖曲线;比较不同代次的Vero细胞在VP-SFM中培养狂犬病毒滴度和效力;通过细胞生长、细胞病变观察、病毒增殖等指标检测来进行无血清和含血清培养CTN-1V株的比较;在250mL spin-ner flask中加入2g/L cytodex1,培养Vero细胞,细胞生长72小时按照0.02m.o.i接种CTN-1V株,收获狂犬病毒.rn 结果:采用VP-SFM培养CTN-1V株,病毒增殖良好;不同代次的Vero细胞在VP-SFM中培养的狂犬病毒滴度和效力均无显著性差异(P＞0.05);Vero细胞分别经无血清和含血清培养的病毒滴度和抗原含量比较均无显著性差异(P＞0.05);Vero细胞在VP-SFM上培养的狂犬病毒效力明显高于DMEM上,具有显著性差异(P＜0.05);搅拌瓶微载体系统培养Vero细胞和狂犬病毒,细胞贴壁均匀,生长良好,种毒后第4d起收获病毒,每天收获1个有效体积,可连续收获7-8次,平均病毒滴度为6.50lgFFU/mL、平均病毒效力为6.77IU/mL;平均抗原含量为2.57μg/mL.rn 结论:初步结果显示无血清培养狂犬病毒的结果不差于传统的含血清培养;初步建立了微载体系统、无血清培养Vero细胞和狂犬病毒的工艺.
17.H7N9型流感疫苗毒种(NIBRG-267)的传代稳定性
- Chen mei-li;陈美丽;宋歌;Song ge;Li qing;李清;Zhu xiao-yu;朱小宇;Chen yu;陈宇;Ke wei;柯伟;贾重来;Jia chong-lai;Zhang jin-feng;张劲峰
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:观察H7N9型流感疫苗生产用毒种(NIBRG-267)的传代稳定性,为制定毒种传代限定次数提供依据.rn 方法:通过SPF鸡胚传代NIBRG-267毒种,检测不同代次毒种的生物学指标,并对传代后的遗传稳定性指标,即关键基因(血凝素和神经氨酸酶)和其他基因进行序列分析.rn 结果:原始毒种E2连续传10代至E12代,各项生物学指标均保持良好的稳定性,E3-E12代病毒感染性滴度均不低于8.2LgEIDso/ml,血凝滴度均不低于1:480,VE3、VE4、VE5、VE12的HA基因和NA基因序列均与HA基因(GenBanK序列号:KF021597.1)、NA基因(GenB ank序列号:KF021599.1)的基因序列一致.rn 结论:H7N9型流感疫苗生产用毒种连续传10代,生物学和遗传稳定性均良好,为疫苗生产提供了可靠保证.
18.Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的研究
- 王辉;赵玉秀;李爱灵;梁宏阳;于守智;董圆;刘小娟;赵硕;李婉莉;张达伦
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)的生产工艺,并初步完成sIPV疫苗样品的相关检定与评价.rn 方法:应用篮式生物反应器培养Vero细胞,制备Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液,采用超滤方法对病毒收获液进行浓缩、柱层析方法进一步对病毒液进行分离纯化、最后经4％甲醛溶液灭活后获得单价灭活原液,按照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原含量配比配制成三价sIPV疫苗,并对疫苗进行宿主细胞DNA及牛血清白蛋白残留量(BSA)、宿主细胞蛋白(HCP,host cell protein)、甲醛含量、异常毒性、内毒素等相关检测,利用大鼠进行动物体内免疫原性考察,并对疫苗在动物体内的安全性进行初步评价,并对放置不同温度条件下的疫苗进行稳定性的初步考察.rn 结果:应用篮式生物反应器成功制备了高滴度水平的脊髓灰质炎病毒收获液,依次经超滤浓缩、分子筛、离子交换层析获得了纯度95％以上的病毒纯化液,杂蛋白去除率在99％以上;透射电镜扫描可见直径25-30nm的典型脊髓灰质炎病毒颗粒;配制的三价sIPV疫苗样品的各项检测结果均符合要求,在大鼠体内可产生高水平的中和抗体滴度,并且具有较好的安全性和热稳定性.rn 结论:初步建立了篮式反应器生产sIPV的疫苗生产工艺,疫苗各项检定结果均符合要求,动物体内法表明疫苗具有较好的免疫原性和安全性.
19.麻疹减毒活疫苗(2BS)猴体免疫原性评价
- 沈红杰;张宇;李海燕;闫磊;赵海波;王玮;郑晓丽
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:观察麻疹病毒长-47减毒活疫苗(2BS)在猴体的免疫原性.rn 方法:采用2BS细胞为基质制备的麻疹长-47(2BS)减毒活疫苗免疫食蟹猴,同时以鸡胚细胞(CEC)基质制备的麻疹减毒活疫苗作为对照.观察免疫后食蟹猴的一般状态,并于免疫后1、2、4、8周及3、6、9、12月采集静脉血,分离血清,血凝抑制法(Hemagglutination Inhibition assay,HI)检测血清中抗麻疹病毒(Measles virus,MV)抗体水平.rn 结果:疫苗接种后无不良反应发生.HI法检测结果显示,免疫后1周,两组抗体阳转率均为100％,几何平均滴度(GMT)分别为2BS组21.1和CEC组21.9;免疫后6个月,两组GMT值达到峰值,均为128;免疫后12个月,抗麻疹病毒抗体滴度仍保持在较高水平,GMT值分别为73.5和64.0.rn 结论:麻疹病毒长-47减毒活疫苗(2BS)具有良好的猴体免疫原性及免疫持久性.
20.病毒样颗粒呈递HPV16CTLs抗原表位对小鼠TC-1移植肿瘤韵免疫干预
- 褚晓杰;李杨;龙琼;夏烨;姚宇峰;孙文佳;黄惟巍;杨旭;刘存宝;马雁冰
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特性.rn 方法:根据文献选择有效的HPV16E7CTLs表位,经基因重组将其DNA片段克隆于乙肝核心抗原优势表位.重组蛋白诱导表达后,经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜分析鉴定.制备的VLPs以预防性和治疗性策略分别对小鼠移植肿瘤进行免疫干预,检测小鼠肿瘤大小变化;此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以ELISA检测IFN-γ表达水平,ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞.rn 结果:呈递HPV16E749-57CTLs表位的重组VLPs可通过基因重组技术有效制备;VLPs预防性免疫完全抑制了TC-1小鼠移植肿瘤生长;VLPs治疗性免疫显著抑制了2-3mm肿瘤的增长,对于5～6mm甚至更大的肿瘤(8～9mm),同样具有明显抑制作用;VLPs结构对疫苗肿瘤抑制效果非常重要;疫苗免疫小鼠脾细胞具有提高的IFN-γ、降低的IL-4与TGF-β1表达,以及增强的分泌IFN-γ的淋巴细胞水平;此外,VLPs刺激机体产生了有效的免疫记忆应答,至少可持续15周;机体预存的抗载体抗体对VLPs疫苗发挥作用未产生显著影响.rn 结论:本研究强烈提示VLPs可激发有效的细胞免疫应答,是有潜力的治疗性疫苗载体.
21.人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的表达及免疫原性评价
- LI Hua;李华;杨婷;YANG Ting;YUE Lei;岳磊;HE Xiao-juan;何晓娟;ZHU Fan-li;朱凡丽;XIE Tian-hong;谢天宏;SONG Xia;龙润乡;杨蓉;LONG Run-xiang;YANG Rong;罗芳宇;谢忠平;LUO Fang-yu;XIE Zhong-ping
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性.rn 方法:采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blots鉴定后,用Ni亲和层析柱进行纯化.重组蛋白免疫ICR小鼠,用ELISA方法检测血清抗体效价,进行其免疫原性评价.rn 结果:重组的原核表达质粒经双酶切及测序证明构建成功;表达的F1融合性蛋白片段大小1104bp,表达的蛋白大约368个氨基酸,其相对分子量为44KDa.表达的F1融合性蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白纯度达90％.重组F1蛋白免疫小鼠效价最高可达1:4096.rn 结论:原核表达的重组RSV F1蛋白免疫原性好,为单克隆抗体的制备及检测试剂盒的研究奠定基础.
22.毕赤酵母组成型启动子PGCW14和PAOXl-PGCW14双启动子在HPV18L1蛋白表达中的应用
- 薛亚慧
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:探索毕赤酵母组成型启动子PGCW14和PAOX1-PGCW14双启动子在HPV18L1蛋白表达中的应用.rn 方法:构建重组质粒PGCW14-HPVl8L1和PAOX1-HPV18Ll-PGCW14-HPVl8L1,通过电转获得重组KM71菌株,并用Western blot筛选阳性克隆比较不同启动子类型HPV18L1蛋白的表达量;选取三种型别重组菌株高表达的单克隆进行SL摇瓶培养,每24小时取样,通过Western blot比较不同时间点的表达量差异.rn 结果:(1)成功构建重组质粒PGCW14-HPVl8L1和PAox1-HPV18Ll-PGCW14-HPVl8L1;(2)筛选得到相应阳性重组KM71菌株;(3)5L摇瓶培养显示PGCW14型别重组菌株的表达量相当甚至高于PAOX1型别重组菌株,双启动子重组菌株的表达量相比于其他两种没有明显优势.rn 结论:(1)成功利用新型组成型启动子PGCW14和PAOX1-PGCW14双启动子表达HPV18L1蛋白;(2)新型组成型启动子PGCW14提供了一个可以代替PAOX1启动子表达外源蛋白的有效选择,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案.
23.发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒灭活疫苗生产用毒株的筛选及鉴定
- 戴新宪;郝春生;陈蕾;刘林;李阿茜;刘宇;支惠;李秀玲
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：背景:发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)是一种新发病毒传染性疾病,其病原发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syn-drome bunyavlrus,SFTSV)在2010年被分离并首次报道.目前没有针对该疾病的特异性治疗方法,加快研制安全有效的预防用疫苗对控制该疾病具有重要意义.rn 目的:本研究的目的是从临床样本中分离病毒毒株,经过充分比较研究后,确定一株适合疫苗生产的毒株,为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒灭活疫苗的研制奠定基础.rn 方法:使用Vero细胞从临床样本中分离病毒株,经噬斑纯化鉴定后进一步适应传代.按照《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》的要求,比较各个毒株在细胞中的传代适应性、免疫原性、交叉保护性以及遗传稳定性等指标,筛选出一株疫苗生产用毒株,按照要求建立三级种子库并进行检定.rn 结果:经过综合比较筛选,确定AH12株为疫苗生产用毒株并成功建立三级种子库.rn 结论:AH12株在Vero细胞上增殖比较典型、具有较好的免疫原性和交叉保护性.基于AH12株建立的三级种子库经全面检定,结果符合《中国药典》三部(2010版)要求,为疫苗生产奠定的坚实基础.
24.无菌药品灌装过程无菌评估的新研究
- ZHU Rui-fang;朱瑞芳;SHI Zheng-guo;石正国
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：培养基模拟灌装试验被官方认定为评估非最终灭菌产品的无菌保障性能的有效手段.在组织模拟灌装试验的过程中,往往严密关注”干预和最差条件”,而忽略了其作为无菌灌装工艺管理的工艺验证的本质.要组织好模拟灌装试验,就有必要立足于工艺验证的管理要求,对无菌灌装工艺的过程进行梳理,全面的设计无菌灌装工艺,并通过模拟灌装试验进行试验考察.并做好无菌灌装生产的持续工艺确认.此外,本文也探讨了一种在线直接取样,用于评估灌装过程无菌性能及污染状况的灌装机技术.
25.以CHO细胞为基质的单抗生产中无血清培养基的优化
- 叶星;毛晓燕
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：单克隆抗体药物特异性高且疗效显著,是近年来研究的热点药物之一,在肿瘤的诊断与治疗、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等方面具有广阔的应用前景.抗体药物治疗的特点是所需剂量大且治疗周期长,故市场需求量巨大.因此,基于大规模生物反应器的哺乳动物细胞(特别是CHO细胞)培养技术已逐渐成为生产单抗药物的核心技术.哺乳动物细胞培养技术包括工程细胞株的筛选、无血清培养基的开发与优化、生物反应器培养工艺的优化等环节.本文重点介绍无血清培养基的发展、分类及优化策略.抗体产量与宿主细胞生存环境密切相关.因此通常在无血清培养基中添加一些额外的营养物质如糖类、氨基酸、脂类、维生素及微量元素等,以增加细胞密度、活率和延长培养周期,最终提高抗体产量.利用实验设计(DOE)的方法可以快速且高效的得到最优的无血清培养基配方及生物反应器的培养条件,从而建立经济高效的单抗体药物生产工艺.
26.抗TNF-α单克隆抗体体外生物学活性检测方法的优化及验证
- PAN Yong-bing;潘勇兵;ZHANG Ya-ting;张雅婷;ZHANG Yin-chuan;张银川;SONG Gui-zhi;宋桂芝;GUI Fang;桂芳;BI Lan;闭兰
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:对抗TNF-α单抗体外生物学活性测定方法进行条件优化,并进行方法学验证.rn 方法:对L929细胞活性测定中不同染色液浓度、细胞密度、放线菌素D及rhTNF-α浓度等条件进行摸索,确定最佳实验条件,并对该方法的精密度、专属性进行验证,并绘制质量控制图.rn 结果:抗TNF-α单抗可以抑制rhTNF-α对L929细胞的杀伤作用,其反应呈剂量—效应关系.结晶紫染色液、rhTNF-α、细胞密度、放线菌素D最适宜浓度分别为0.2％,1ng/ml,1.5x l05cells/ml及0.8μg/ml.重复性实验结果显示,ED50值的均值为(44.18+6.858)ng/ml,相对标准偏差RSD为15.522％;中间精密度结果显示,不同人员测定的ED50值均值为(41.19±3.05)ng/ml,RSD为7.40％;专属性结果显示,随着抗TNF-α单抗浓度的降低,细胞的存活率随之降低,而其它抗体则无此现象,专属性较好.rn 结论:已建立的L929细胞测定抗TNF-α单抗方法可用于常规检定.
27.单抗类药物在抗结直肠癌临床试验中的研究探讨
- SHI Yin;石茵;HUANG Xia-meng;黄夏梦;WANG Hua-qian;王华倩;WAN Ting;王霆
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:结直肠癌(CRC)是最常见的恶性肿瘤之一,目前结直肠癌治疗以手术为首选方法,术后辅以化疗和放疗综合治疗.近年来,随着人们对肿瘤细胞信号转导途径研究的不断深入,分子靶向治疗逐渐成为研究热点,本文现就单克隆抗体治疗结直肠癌的临床试验进展做一综述.rn 方法:搜集截止2014年1月1日,全球在Clinicaltrials.gov上注册,并在近5年有更新的抗结直肠癌多肽类(单抗)药物临床试验信息.rn 结果:晚期转移性结直肠癌的分子靶向治疗近年来显示出了一定的疗效,截止2014年1月1日,在Clinicaltrials.gov上注册的抗结直肠癌单克隆抗体药物试验已达60余项,其中Ⅲ期有9项.rn 结论:分子靶向治疗大大改善了结直肠癌患者的治疗预期,联合化疗药物可提高化疗疗效,延长患者生存期.有望成为继手术、化疗、放疗后又一种结直肠癌的有效治疗手段.但在实际应用中仍存在一些问题.
28.STAGO全自动血凝仪在人凝血因子活性测定上的应用
- Liu Zhao-yang;刘朝阳;Cheng Peng-fei;程鹏飞;Xu ying-mei;徐樱妹;郁佳俊;马雷钧
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:通过对新添置的STAGO全自动血凝仪实施设备确认,以证明该仪器适用于人凝血因子活性测定实验要求.rn 方法:对STAGO全自动血凝仪按照GMP要求进行安装确认(IQ)、运行确认(OQ)和性能确认(PQ).IQ方面实施信息核查并记录;OQ方面实施准确度确认测试、精密度确认测试包括批内精密度确认及批间精密度确认;干扰实验测试确认及参考范围验证确认.PQ方面取本公司制备的人凝血因子Ⅷ配制六份人凝血因子Ⅷ样品,按STAGO凝血分析仪相关SOP进行效价检测,6份样品检测值之间的RSD小于20％.rn 结果:各阶段操作均符合设备确认要求及预期使用目的.IQ实施了全面设备核查并做了记录;OQ准确度确认测试采用厂家提供的正常及病理值质控血清各项目分别测定3次,其均值均落在厂家提供的质控范围内;批内精密度确认及批间精密度确认的CV值均小于10％;干扰实验测试确认结果显示随机组与对照组相比的平均偏差小于10％;参考范围验证确认结果显示其均值、SD及结果落在正常参考范围的例数与总标本数的比例(即R值)R＞O.9;PQ中CV值为1.95010符合规定.rn 结论:该STAGO全自动血凝仪成功实施了全面的设备确认,该仪器符合人凝血因子活性测定实验要求.
29.全人源抗人TNF-α单克隆抗体注射液对食蟹猴的长期毒性试验
- ZHANG Nan;张囡;WANG Jiong;王炯;ZHANG Ya-ting;张雅婷;SONG Gang;宋刚;ZHAN Shan-shan;詹珊珊;PAN Yong-bing;潘勇兵
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:评价全人源抗人TNF-α单克隆抗体注射液对食蟹猴的长期毒性.rn 方法:将40只食蟹猴,随机分成5组,分别为阴性对照组、阿达木单抗对照组(10mg-kg-1)、全人源抗人TNF-α单克隆抗体注射液低(2mg·kg-1)、中(10mg·kg-1)、高(50mg·kg-1)剂量组,经皮下注射每周给药1次,连续给药5次,停药后恢复期4周.试验期间,对动物进行临床观察、体重、体温、心电图、血细胞计数、凝血功能、血液生化、尿液、眼科、免疫指标、脏器及组织病理学观察,同时进行血药浓度检测,分析毒代动力学参数.rn 结果:试验期间各组动物的临床观察、体重、体温、心电图参数、眼科检查、血细胞计数、凝血功能、血生化、尿液分析、淋巴细胞亚群、细胞因子、血清免疫球蛋白和血清补体等指标均未见与给药相关的具有毒理意义的改变;本品和阿达木单抗均可引起动物体内产生抗药抗体,且具有中和活性.本品在体内基本呈线性动力学特征.相同剂量下和阿达木单抗对照品免疫原性和代谢动力学特征相似.rn 结论:全人源抗人TNF-α单克隆抗体注射液未观察到不良反应的剂量(NOAEL)为50mg·kg-1,相当于临床拟用剂量(0.67mg·kg-1)的75倍.
30.应用小鼠肝坏死模型分析重组全人源抗TNF-α单克隆抗体的体内中和活性
- ZHANG Yating;张雅婷;潘勇兵;PAN Yongbing;ZHANG Yinchuan;张银川;ZHANG Kun-ming;张坤明;REN bin;任彬;SONG Guizhi;宋桂芝;GUI Fang;桂芳;BI Lan;闭兰;ZHANG Nan
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:应用肝坏死小鼠模型,对抗TNF-α单克隆抗体的体内活性进行测定.rn 方法:摸索D-半乳糖胺(D-GalN)致敏时间及TNF-α对小鼠的致死剂量;采用D-GalN致敏小鼠,腹腔注射TNF-α建立肝坏死小鼠模型,并测定抗TNF-α单克隆抗体的体内活性.rn 结果:确定D-GalN致敏时间为10分钟;确定TNF-α的致死剂量为100μg/kg体重;采用Probit回归拟合对活性测定结果分析,结果显示拟合度较好,3批供试品对C57BL/6小鼠的半数有效剂量(ED50)分别为0.505mg/kg、0.434mg/kg、0.609mg/kg;3批对照品的ED50分别为0.455mg/kg、0.571mg/kg、0.484mg/kg;供试品与对照品对C57BL/6小鼠的体内活性无统计学差别(P＞0.05).rn 结论:联合应用D-GalN和TNF-α可造成小鼠肝坏死,从而导致小鼠死亡.抗TNF-α单克隆抗体可阻断其效应.抗TNF-α抗体对TNF-α抑制作用呈现剂量—效应关系.
31.恶性疟原虫CSP基因在毕赤酵母中的分泌表达
- Wang aixiu;王爱秀;Lei Qing;雷清;Chen Qiaoli;陈俏丽;Li Gang;李刚;Chen Yong;陈勇;Jiang Lin;蒋琳
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:应用毕赤酵母表达系统,表达出恶性疟原虫环子孢子蛋白(circumsporzoite protein,CSP),便于恶性疟疾疫苗的进一步研究.方法:根据GenB ank得到恶性疟原虫7G8的基因序列,选取该序列628-1194位基因,以密码子最佳化为原则合成基因后构建酵母表达载体CSP/pGAPZaA,电转毕赤酵母菌PDI-GS115,获得酵母重组体.三角瓶规模表达重组菌,获得表达上清.结果:SDS-PAGE电泳、Dot-blotting、Western bloting检测表达上清,显示有弱阳性表达.结论:在毕赤酵母中实现了CSP基因的表达,为恶性疟疾疫苗的研发奠定了基础.
32.一种新型抗胃泌素17疫苗的体液免疫原性与抗原性研究
- HE Qing;贺庆;GAO Meng;高濛;Qi Mei-wei;戚胜美;GAO Hua;高华;WANG Jun-zhi;王军志
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:研究一种新型抗胃泌素17疫苗的体液免疫原性与抗原性.rn 方法:疫苗以方案(0.5mg·只-1×免疫1次.2周-1×免疫3次,i.m)对新西兰大白兔(雌性,n=6)进行免疫,以酶联免疫吸附实验(en-zyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫开始后第4、6、8周动物血清内IgG抗体滴度;以竞争性ELISA法检测各类人源蛋白[酰胺化胃泌素17(amidated gastrin17,G17)、甘氨酸延伸型胃泌素17(glyeine-extend gastrin17,gly-G17)、胃泌素34(gastrin34,G34)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)]对疫苗抗体结合抗原的抑制率.rn 结果:免疫开始后第4周所有动物体内均可检测到抗体滴度,第6周抗体滴度达到最大值(P＜0.05vs4weeks),第8周抗体滴度恢复至第4周水平(P＞0.05vs4weeks);随上述蛋白浓度升高(10-4、10-3、10-2、10-1、100、101、102μM),G17、gly-G17对抗体结合抗原的抑制率均显著升高,其抑制率分别为11.1％、14.8％、20％、26.5％、45％、74.5％、80.8％,11.6％、15.8％、19.1％、25.3％、45.3％、73％、78.2％;而G34、VIP对抗体结合抗原的抑制率均接近0％.rn 结论:该新型抗胃泌素17疫苗具有较好的体液免疫原性与抗原性.
33.白喉类毒素酶联免疫检测法的建立及初步应用
- 张霖阳;王玲;潘殊男;赵俊;肖詹蓉
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:建立测定吸附无细胞百白破联合疫苗中白喉类毒素(Diphtheria Toxoid,DT)含量的检测方法.rn 方法:免疫家兔制备高效价抗DT血清,纯化抗DT多克隆抗体并进行酶标记,建立ELISA双抗体夹心法.rn 结果:对建立的ELISA双抗体夹心法的特异性、最佳线性范围、精密度、准确度、定量限度、适用性的一系列验证试验表明,该方法与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)、百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)、百日咳丝状血凝素(Filamantoushemagglutinin,FHA)与粘着素(Pertactin,Prn)无明显交叉反应,特异性较好.在0至0.016Lf/ml测量区间有最佳线性,相关系数r＞0.99,经实验内10次及不同试验间3次测定0.0128、0.0064、0.0032、0.0016、0.0008、0.0004、0.0002Lf/ml中的DT含量,精密度及准确度验证均符合常规质控要求,因此该方法的定量限度为0.0008Lf/ml.rn 结论:该方法能够检测出吸附无细胞百白破联合疫苗原液中白喉类毒素含量,通过检测白喉类毒素与不同氢氧化铝佐剂吸附前和解吸附后的抗原含量,计算出吸附率,比较不同氢氧化铝佐剂的吸附效果.该方法为吸附无细胞百白破联合疫苗的质量控制奠定了重要基础.
34.肺炎支原体MP559融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定
- CHEN Chen;陈晨
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：采用生物信息学软件对肺炎支原体表面膜蛋白Pl,P116及P30进行抗原表位分析,筛选其中抗原表位较富集的优势抗原片段作为目的蛋白;优化筛选的基因序列,使其能在合适的原核表达载体中进行高效表达.构建重组质粒pET28a(+)-MP559并转化到E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,采用金属螯合层析技术对含有His标签的目的蛋白进行分离纯化,经过SDS-PAGE和Western blot的验证,获得了较高纯度的His-MP559.使用His-MP559抗原对新西兰大耳白兔进行免疫,兔颈动脉取血制备兔抗血清.为肺炎支原体疫苗的进一步研究奠定了基础.
35.A群流脑多糖分批发酵动力学模型的建立
- XIA Yong;夏永;王斌;WANG Bin;WANG Gong-xiao;王公孝;He Bo-qiang;何伯强;LI Ying-wei;李应伟;WANG Zhi-jie;王智杰;WANG Xue-ling;王学林;许蓉华;XU Rong-hua;XIONG Hui-ling;熊慧玲
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:建立A群流脑多糖SL罐分批发酵动力学模型,为实现A群流脑多糖发酵过程的控制、优化和工艺放大提供理论基础.rn 方法:利用分批发酵的数据以Logistic方程建立菌体生长动力学模型、以Leudedeking-Piret方程建立产物形成动力学模型、以底物消耗的物料平衡方程建立底物消耗的动力学模型,并使用Origin求解获得三个模型的参数.rn 结果:菌体的最大比生长速率(μmax)0.9188h-1,最大菌体浓度(xmax)1.0172g/L,与菌体生长速率关联的产物合成常数(a)0.1894g/L/h,与菌体浓度关联的产物合成常数(B)0.0132g/L/h,菌体对底物的得率(Yx)1.3374g/g,产物对底物的得率(Yp)2.3768g/g,菌体的维持因子(m)1.5002.rn 结论:建立的动力学模型能较好反映A群流脑多糖分批发酵过程中菌体生长、A群流脑多糖合成和基质消耗的的变化规律.
36.磷酸铝佐剂吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响
- YANG Yi-yao;杨溢尧;刘威;LIU Wei;LIAO Hong-mei;廖红梅;DU You;杜游;WANG Kai;王凯;GE Yong-hong;葛永红;XIONG Hui-ling;熊慧玲;江山;JIANG Shan;CUI Chang-fa;崔长法
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:探讨磷酸铝佐剂及其吸附率对9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗免疫原性的影响.方法:磷酸铝佐剂在不同条件下,与9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合物进行吸附,吸附率分别为17％,61％和80％,三种制剂经腹腔免疫NIH小鼠,ELISA法测定免疫后小鼠血清中抗荚膜多糖抗体效价.结果:磷酸铝佐剂吸附的制剂与未吸附的制剂相比,小鼠血清中抗体滴度有显著性差异(P＜0.05);磷酸铝佐剂吸附的制剂,吸附率不同,小鼠血清中抗体效价无显著性差异(P＞0.05).结论:磷酸铝佐剂可以有效提高9V型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗的免疫原性;磷酸铝佐剂吸附率的高低,对疫苗免疫原性无显著性影响.
37.冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)稳定剂的筛选
- MA Chao;马超;陆俭;LU Jian;SUN Yan;孙燕;CHEN Jun;陈军;LIU Peng;刘鹏;LI Shou-li;李守丽;于滢;YU Ying;ZHANG Yi;张轶
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:筛选出适合冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的热稳定性好、无明胶冻干稳定剂.rn 方法:以水分、外观、效价、热稳定性效价为指标,尤其效价和热稳定性效价,对A、B、c、D、E、F、G6种稳定剂配方进行系统的优化组合筛选,6种稳定剂分别含有蔗糖、乳糖、人血白蛋白、甘氨酸、精氨酸、明胶、尿素、甘露醇、右旋糖苷,其中A为现行疫苗生产配方.运用单因素五元设计法,筛选出最优稳定剂组合.rn 结果:方差分析结果显示D组无明胶稳定剂对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的M-ABT结果13.95,37℃放置4周M-ABT结果13.05;NIH效价1.94,37℃放置4周NIH效价1.56.rn 结论:D组无明胶稳定剂对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)有较好的保护作用.
38.脊髓灰质炎疫苗序贯免疫程序的研究与应用进展
- LI Hong-zhe;李洪哲;YANG Jing-si;杨净思
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：脊髓灰质炎(脊灰)是由脊髓灰质炎病毒引起的急性肠道传染病,传播广泛,对儿童的健康和生命危害极大.口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral attenuated poliovirus vaccine,OPV)是全球消灭脊灰行动的首选疫苗,但在极少情况下会发生疫苗相关麻痹型脊灰(Vaccine-associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP)和疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived Poliovirus,VDPV)病例.为了避免这些风险,近年来许多国家的常规免疫规划已不再单独使用OPV,而改用脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated polio vaccine,IPV).大部分国家在OPV转换成IPV期间,均采用了先接种1-2剂IPV,再接种≥2剂OPV的序贯接种程序.IPV-OPV序贯免疫方案可减少或预防VAPP,同时又能保持较高的体液免疫和肠道黏膜免疫力,更好地阻断脊灰病毒在自然界的循环.WHO建议,目前只使用OPV的国家应当在免疫程序中增加至少1剂次IPV.因此,这些国家应相应调整脊灰免疫策略,采取IPV-OPV序贯免疫策略或联合使用OPV和IPV的策略,相信这些转变将会加快全球消灭脊灰野毒株的进程.
39.两种H7N9流感病毒裂解疫苗的稳定性研究
- JIA Chong-lai;贾重来;陈美丽;CHEN Mei-li;LI Qing;李清;CHENG Wei-min;程为民;SONG Ge;宋歌;LI Yan;李燕;柯伟;KE Wei;ZHANG Jin-feng;张劲峰
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:对有佐剂和无佐剂的H7N9流感病毒裂解疫苗的稳定性试验数据分别进行分析,为确定这2种疫苗的有效期提供数据支持.rn 方法:采用WHO推荐的来自NIBSC的H7N9病毒株,按照流感疫苗生产工艺,制备H7N9流感病毒裂解疫苗及H7N9流感病毒裂解疫苗(佐剂)两种疫苗各3批,按照企业注册标准进行成品检定,合格后,分别在37℃和2-8℃条件下放置不同时间,进行稳定性试验.rn 结果:两种H7N9流感疫苗于37℃保存21d,血凝素滴度均有下降,其中H7N9流感病毒裂解疫苗组血凝素含量下降均值为13.69％,H7N9流感病毒裂解疫苗(佐剂)组下降均值为8.64％;两种H7N9流感疫苗于2-8℃保存18个月,血凝素含量下降缓慢,其中H7N9流感病毒裂解疫苗组血凝素含量下降均值为12.58％,H7N9流感病毒裂解疫苗(佐剂)组下降均值为9.55％;两种H7N9疫苗成品检测均符合企业注册标准.rn 结论:两种H7N9流感病毒裂解疫苗各项质量指标均符合《中国药典》三部(2010版)流感疫苗检定质量标准,HA含量下降幅度低于企业注册标准,疫苗稳定性良好.
40.复制缺陷型天坛株天花疫苗的动物安全性与免疫特性评价
- An huan-yu;安焕宇;Meng xin;孟昕;Shen li-peng;沈丽朋;An li-ying;安丽颖;Ruan li;阮力
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:对复制缺陷型天坛株天花疫苗的安全性和免疫原性进行评估.rn 方法:使用复制缺陷型天坛株天花疫苗分别对小鼠和乳鼠进行脑内注射,对青紫蓝家兔进行皮内注射,与复制型天坛株天花疫苗作为对照,检验其毒力;使用复制缺陷型天坛株天花疫苗分别对小鼠和青紫蓝家兔进行两次肌肉注射,并取血清检测中和抗体和Elisa抗体水平.rn 结果:与复制型天坛株天花疫苗相比,复制缺陷型天坛株天花疫苗的小鼠和乳鼠脑内毒力及家兔皮肤毒力均明显下降达l04倍以上,同时其免疫原性也相应下降,需要较大剂量进行两次免疫才能达到复制型天坛株天花疫苗单次免疫的效果.rn 结论:与复制型天坛株天花疫苗相比,复制缺陷型天坛株天花疫苗的安全性更好,但免疫原性明显下降.
41.HSV1亚单位疫苗gD1最佳免疫方案的确定
- QI Yong;齐永;徐亭亭;XU Ting-ting;PAN Ying;潘英;LI Su-qin;李素芹;XU Yi-fei;徐艺菲;WANG Xin-guo;王新国;CHEN Chen;陈晨;李素梅;LI Su-mei;LI Yue-xi;李越希
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:确定HSV1候选亚单位疫苗gD蛋白(gD1)的最佳配伍佐剂、免疫剂量以及免疫程序.rn 方法:使用不同佐剂(PBS、Alum、Poly I:C及Alum&Poly I:C)配伍不同剂量的gD1蛋白(2μg、10μg、30μg/只),制成12种注射制剂,后肢肌肉注射免疫随机分组的12组BALB/c小鼠,初次免疫后于第14、35天各加强免疫一次,每次免疫前及末次免疫后两周眼眶静脉窦取血,分离血清后使用ELISA方法测定其中特异性抗体效价,统计分析各组抗原诱导的体液免疫反应的差异以确定最佳免疫方案.rn 结果:初次免疫后,混合佐剂配伍抗原的各组小鼠血清中特异性抗体效价最高,混合佐剂(Alum&Poly I:C)+2μg gD1免疫组或混合佐剂+10μg gD1免疫组血清中特异性抗体效价分别显著高于任一单独佐剂+2μg gD1免疫组或任一单独佐剂+10μg gD1免疫组(P＜0.05),前两组小鼠血清中特异性抗体效价可分别达到后两组的8-10倍,混合佐剂配伍不同剂量的抗原组之间无显著差异(P＞0.05);第二次免疫后,混合佐剂组配伍抗原免疫小鼠血清抗体效价最高,混合佐剂+2μg gD1免疫组小鼠血清抗体效价显著高于其它佐剂+2μg gD1免疫组(P＜0.001),是后者的13-28倍,混合佐剂+2μg gD1组抗体效价显著高于混合佐剂+10μg(P＜0.05)或30μggD1组(P＜0.01),是后二者的2—4倍;第三次免疫后小鼠血清中特异性抗体效价较第二次免疫后有所降低,动物个体之间抗体效价差异大,均一性差,且佐剂与免疫剂量对抗体效价均无显著性影响(P＞0.05),混合佐剂+10μg gD1免疫组效果最佳.rn 结论:研究结果表明,在小鼠免疫模型中,使用Alum&Poly I:C的混合佐剂较使用任一单独佐剂可有效诱导更高水平的抗体产生,本研究中确定的gD1蛋白最佳免疫次数为两次,间隔两周,最佳免疫剂量为2μg/只小鼠.本研究为下一步HSV亚单位疫苗的临床研究奠定了实验基础.
42.埃可病毒6型表面特异性抗原的表达及快速检测技术的建立
- 李素梅;Sumei Li;Yong Qi;齐永;Tingting Xu;徐亭亭;Ying Pan;潘英;Suqin Li;李素芹;Jiameng Li;李佳萌;Chen Chen;陈晨;Xinguo Wang;王新国;徐艺菲;Yifei Xu;Yuexi Li;李越希
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:在原核细胞中表达埃可病毒6型的表面蛋白VP1,制备其多克隆抗体.rn 方法:筛选VP1抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX-4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1,分别转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High AffinityGST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化.以纯化后的VP1-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性.rn 结果:经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1构建正确;在相对分子质量约39000和20000处,分别可见VP1-GST和VP1-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的25％和30％,发现VP1-GST为可溶性蛋白,而VP1-His主要以包涵体的形式存在,需对VP1-His蛋白进行透析复性,纯度均在90％以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清.rn 结论:两种标签的融合蛋白均具有良好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为埃可病毒检测方法的建立奠定了基础.
43.基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用
- LIU Chun-yu;刘春雨;王馨;WANG Xin;YU Chuan-fei;于传飞;XU Gang-ling;徐刚领;ZHANG Feng;张峰;WANG Wen-bo;王文波;王兰;WANG Lan;GAO Kai;高凯
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:利用转基因细胞法建立抗HER2单抗的抗体依赖的细胞介导细胞毒效应(Antibody-De-pendent Cell-mediated Cytotoxicity,ADCC)的生物学活性检测方法.rn 方法:利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRⅢα转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay sys-tem)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,并对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗的ADCC效应的评价.rn 结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始浓度为4000ng·mL-1,1:4倍的稀释倍数,效靶比为15:1,诱导时间为20h.该方法具有良好的专属性;3次独立检测的日内及日间最大FI值及EC50值的变异系数均小于10％;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)％、(71.18±1.55)％、(133.17±9.91)％以及(166.55±15.73)％;对应回收率分别为(92.53±4.01)％、(94.91±2.07)％、(106.54±7.93)％、(111.04±10.48),变异系数CV(％)均小于10％,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应的评价.rn 结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法.
44.抗表皮生长因子受体单克隆抗体质量标准研究
- WANG Can;王灿;周勤;ZHOU Qin;LI Gao-ming;厉高慜;ZHAO Yu-hao;赵宇豪;ZHAO Qin;赵沁;WANG Hong;汪泓;WU Li-hong;吴利红;邵泓;SHAO Hong;CHEN Gang;陈钢
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:建立某一抗表皮生长因子受体单抗质量标准.rn 方法:流式细胞术检测相对结合活性,细胞增殖抑制法测定生物学活性;电喷雾质谱法测定其准确分子量;毛细管凝胶电泳法(CE-SDS),SDS-PAGE和分子排阻色谱法(SEC-HPLC)测定纯度;成像毛细管等电聚焦法(icIEF)和平板等电聚焦电泳法测定等电点;弱阳离子法测其电荷异质性;紫外分光光度法测其蛋白含量,其他各项指标检测按《中国药典》三部要求进行.rn 结果:对3批供试品进行测定,相对结合活性和增殖抑制活性平均值分别为83.3％和60.0％.电喷雾质谱法测定其准确分子量重链均为51KD,轻链均为24KD.还原型CE-SDS测其非糖基化重链含量平均值为2.1％,免疫球蛋白重链和轻链含量平均值为93.2％;非还原型CE-SDS测免疫球蛋白单体含量平均值为95.1％.SDS-PAGE和SEC-HPLC测纯度分别为97.9％和97.0％.icIEF和平板等电聚焦电泳法测定等电点,均与对照品一致,等电点范围均为8.0-8.9.3批供试品电荷异质性图谱均与对照品的一致.其他各项指标均符合《中国药典》2010版三部要求.rn 结论:建立了该抗表皮生长因子受体单抗的质量标准,可用于该品种的常规质量控制.
45.腺病毒抗原表位嵌合蛋白构建、表达及其免疫学研究
- 王新国;WANG Xin-guo;QI Yong;齐永;XU Ting-ting;徐亭亭;PAN Ying;潘英;LI Su-qin;李素芹;LI Jia-meng;李佳萌;LI Su-mei;李素梅;CHEN Chen;陈晨;徐艺菲;XU Yi_fei;LI Yue-xi;李越希
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:构建含有人腺病毒3型、7型、11型、14型及55型抗原表位的嵌合蛋白,并对其进行免疫学研究.rn 方法:利用ANTHEWIN等软件,通过计算机分析人腺病毒3型、7型、11型、14型及55型六邻体蛋白的氨基酸序列,分别筛选出各类型腺病毒六邻体蛋白中具有强抗原性片段.利用基因工程方法将筛选所得蛋白片段的核酸序列进行串联,并将构建所得的重组序列插入载体pET28a(+)中,利用原核表达系统对构建的嵌合蛋白进行表达纯化.将纯化所得的嵌合蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠,制备抗血清.利用ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性.rn 结果:纯化所得的嵌合蛋白浓度达到o.5mg/mL,具有较高的纯度.经4次免疫,小鼠抗血清效价达到640000,同时ELISA法证明嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性.本实验为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体以及诊断试剂奠定了基础.
46.发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原(糖蛋白)定量检测方法的建立
- 陈蕾;戴新宪;郝春生;李阿茜;李秀玲
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:建立SFTSV抗原(糖蛋白)的定量检测方法,用于疫苗生产过程中SFTSV抗原含量的监测.rn 方法:用SFTSV抗原分别免疫新西兰兔及BALB/c小鼠,制备抗SFTSV多克隆抗体和单克隆抗体.采用抗SFTSV多克隆抗体作为包被抗体、经HRP标记的单克隆抗体作为酶标抗体,构建SFTSV抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,确定该方法的线性范围、灵敏度,并对该方法的准确性、精密性、专属性进行验证.rn 结果:所建立的ELISA方法,线性范围为0.263～2.000μg/ml,定量限为0.263μg/ml,线性相关系数R2=0.9967;样品回收率介于85％～115％之间;变异系数CV＜15％;该检测试剂于37℃放置3d对样品进行检测,CV值＜15％.用该方法检测特异性检测SFTSV病毒株,而与布尼亚病毒属其他病毒、Vero细胞培养上清及其他生产辅料均无交叉反应.rn 结论:建立了SFTSV抗原的定量检测方法,为疫苗生产工艺过程质量控制奠定了基础.
47.发达国家和地区的成人免疫策略
- Duan Meng-juan;段梦娟;Li Li;王华庆;Liu Yan-min;Wang Hua-qing
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：本文总结了全球发达国家和地区的成人免疫策略,并对各种成人免疫策略进行了分类,主要划分为三类,分别为有综合性的成人免疫程序和疫苗推荐意见;仅针对成人中的特殊人群提出疫苗推荐意见;在推荐国内现有疫苗时,部分适用于成人的疫苗提及成人接种的内容,但并未独立列出,或者没有任何成人免疫的相关意见和信息.为中国制定成人免疫策略提供参考.
48.重组人血白蛋白在哺乳动物细胞培养中的应用
- QIE Zheng-gang;郄正刚;MA Hai-yan;马海燕;HUANG Li-hua;黄丽华;WANG Shi-cong;王世聪
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目前,哺乳动物细胞大规模培养技术已经成为生物技术制药中不可缺少的一部分,利用动物细胞培养技术生产的生物制品越来越多,这些生物制品主要包括人用疫苗、基因工程药物、基因治疗药物、抗体药物以及动物疫苗等,而组织工程和干细胞疗法拓宽了细胞培养技术的应用范围.人血白蛋白作为动物细胞培养基中的重要组分之一,在动物细胞培养中已经应用了很多年.本文就重组人血白蛋白(Recombi-nant Human serum Albumin,rHSA)在哺乳动物细胞培养中的应用情况作一综述，指出重组人血白蛋白替代血源人血白蛋白用于细胞培养，可有效的促进和维持细胞生长，是细胞培养中血源人血白蛋白的替代品，而且可以减少培养基中胎牛血清的使用量。与血源人血白蛋白的对比试验表明，用重组人血白蛋白替代血源人血白蛋白，不仅能够达到完全相同的促细胞生长效果，安全性更优于血源人血白蛋白。这将有助于生物制药企业摆脱血液制品的安全风险高、供应紧张的局面。由于重组人血白蛋白应用基因工程技术生产，工艺稳定、参数可控、批间均一稳定，便于用户很好的控制工艺条件，提升产品品质。
49.无血清培养Vero细胞及其传代稳定性研究
- 李薇;张香玲;张生琰;孙燕;刘鹏;赵星文
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:探讨建立无血清无动物源性培养基(VP-SFM)培养非洲绿猴肾(African Monkey KidenyCell,Vero)细胞的工艺,以期为生产中采用无血清培养基培养Vero细胞及病毒性疫苗提供一定的实验依据.rn 方法:采用VP-SFM适应培养Vero细胞,建立无血清无动物源性Vero细胞库;对细胞库进行常规检定;绘制VP-SFM培养Vero细胞生长曲线;对无血清培养Vero细胞进行传代稳定性研究:比较140代、150代、160代Vero细胞在VP-SFM培养的1l和Cd;比较142代、147代、153代Vero细胞在VP-SFM培养的狂犬病毒滴度;比较无血清与含血清培养140代、150代、160代Vero细胞的队和Cd;分别在250mL spinner flask中加入2g/L cytodex I、在3L搅拌式生物反应器中加入3g/L cytodex I来培养Vero细胞,观察无血清、微载体搅拌培养Vero细胞贴壁和生长情况.rn 结果:建立无血清无动物源性Vero细胞库,细胞密度为4×106cells/mL,冻存前细胞活率为100％,复苏后细胞平均活率为94.20±3.95％,无菌检查和支原体检查合格;细胞在VP-SFM中复苏传代后生长良好,经过1天潜伏期后,第2天进入对数生长期,第8天进入平台期,第12天达最大细胞密度20.5×l05cell/mL,并维持至第14天,活细胞数开始下降,最大比生长速率为0.0254h-1.无血清培养Vero传代稳定性研究显示:140代、150代、160代间Vero细胞在VP-SFM培养的μ和Cd无显著性差异(P＞0.05);142代、147代、153代Vero细胞在VP-SFM培养狂犬病毒的滴度均无显著性差异(P＞0.05);140代、150代、160代Vero细胞在无血清和含血清培养基的μ和Cd比较均无显著性差异(P＞0.05).在3L生物反应器微载体系统中无血清培养Vero细胞,细胞贴壁、生长良好.rn 结论:初步建立无血清、无动物源性物质的Vero细胞库;采用方瓶静置培养或微载体搅拌培养均生长良好;Vero细胞传代稳定性良好;无血清培养结果不差于传统的含血清培养.
50.冻干人血浆补体的制备和稳定性研究
- Qin Hai-yan;秦海艳;Xiong Ying;熊颖;Lu Wei-jia;卢卫嘉;Chen Ji-jun;陈继军;Wang Jian-feng;王建锋;Mao xiao-yan;毛晓燕
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:制备冻干人血浆补体,探讨4种不同保存温度条件下冻干人血浆补体的稳定性.rn 方法:制备3批冻干人血浆补体,将每批样品分组保存在-70℃、4℃、25℃和37℃条件下,于保存第1、15、30、60、90、120、180、270、365天测定保存于-70℃和4℃条件下冻干人血浆补体总活性CH50,于保存第1、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120天测定保存于25℃和37℃条件下冻干人血浆补体总活性CH50.观察4种保存条件下冻干人血浆补体活性随时间的变化并评价样本稳定性.评价CH50为15U/ml的冻干人血浆补体用于治疗性抗体CDC活性检测是否可行.rn 结果:-70℃保存的3批冻干人血浆补体一年时间补体总活性CH50平均下降了19.5％,4℃保存的3批冻干人血浆补体一年时间补体总活性CH50平均下降了36.3％,25℃保存的3批冻干人血浆补体三个月补体总活性CH50平均下降了53.4％,37℃保存的3批冻干人血浆补体三个月补体总活性CH50平均下降了60.7％.与上市补体和CH50为30U/ml的冻干人血浆补体相比,CH50为15U/ml的冻干人血浆补体用于治疗性抗体CDC活性检测对检测结果无影响.rn 结论:在-70℃和4℃温度条件下保存的冻干人血浆补体的补体总活性CH50相对比较稳定,但随着保存温度的升高,补体总活性CH50下降有加速的趋势.CH50大于15U/ml的冻干人血浆补体可用于治疗性抗体CDC活性检测.
51.自动化溶液配制输送系统在水痘疫苗生产中的应用
- 郑波
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:应用自动化系统配制输送用于生产水痘疫苗的无菌溶液,以满足水痘疫苗细胞工厂的规模化量产需求,减少批间差异.方法:将采用自动化系统配制输送用于水痘疫苗的传代制备所需溶液,与人工操作方式进行对照,比较两种操作方式的细胞生长情况、操作时间等,并对制备的疫苗原液进行相关检定.结果:在同样细胞复苏量的情况下,采用自动化操作系统比人工操作生产的水痘疫苗批间差异小,操作时间短,且相关检测指标均合格.结论:利用自动化溶液配制输送系统制备用于生产水痘疫苗的无菌溶液,提高了批间均一性,降低人工劳动强度,缩短操作时间,减少转运等中间环节,降低污染风险,可满足水痘疫苗细胞工厂的大规模生产.
52.PEG定点修饰的猪狒重组尿酸酶的纯化和酶学性质分析
- 黄琳秋;江筠
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:制备PEG定点修饰半胱氨酸的重组尿酸酶,延长其半衰期,以期获得耐受性良好的新型尿酸酶制剂.方法:1)重组尿酸酶初步纯化后,用马来酰亚胺PEG对其突变引入的半胱氨酸修饰,优化修饰条件;2)对修饰产物进行纯化、鉴定,酶学性质分析,并在动物体内对其半衰期做初步研究.结果:成功建立了一套简单、高效的尿酸酶制备、修饰、纯化的方法.重组尿酸酶尿酸酶尿酸酶K103C酶活性为18.5U/mg,经修饰纯化后酶活为18.7U/mg,酶活性基本未有损失;小鼠体内半衰期由未修饰前的1小时延长到96小时.
53.HBsAg检测试剂定量性能分析
- 肖健;李克坚;喻剑虹;周诚;蓝海云;辜文洁
- 《2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会》 | 2015年
摘要：目的:以不同浓度的HBsAg血浆样品,分别对7种HBsAg定量检测试剂的检测范围、定量准确性及对3种HBsAg亚型的最低检出量性能进行评价.rn 方法:用WHO HBsAg标准品,应用平行线终点稀释方法进行定量标定5份血浆样品HBsAg浓度;以浓度值大于5x l04IU/ml的样品,评价试剂的有效检测范围;以浓度值在5.9-100IU/ml范围内的样品,评价试剂的定量准确性;检测3种HBsAg亚型样品,评价试剂对3种亚型的最低检出量.rn 结果:s试剂检测浓度为1600IU/ml的样品时,其相对偏差为-24％,并且随着样品的浓度升高相对偏差变大.K试剂检测浓度值大于3200IU/ml样品时,相对偏差大于98％.对于浓度值为100IU/ml以下样品的定量准确性,6种试剂平均相对偏差的绝对值小于15％,其中,K试剂为39％.试剂对3种HBsAg亚型(adr、adw和ay亚型)最低检出量检测数据的统计学分析表明,其中3种试剂无统计学意义(P＞0.05).4种试剂有统计学意义(P＜0.01).rn 结论:s试剂定量检测浓度值上限低于标示值2500IU/ml.K试剂检测高浓度样品时,存在HOOK效应,其它6种试剂定量测定相对偏差小于20％,4种试剂对ay亚型检测定量值偏低.