重组杆状病毒

摘要： 采用杆状病毒表达系统表达并纯化裂谷热病毒(RVFV)Gn蛋白,并对其反应原性进行鉴定。根据GenBank公布的Gn蛋白的序列,选取其主要抗原区Gn1设计引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pFastBac HTB载体,构建重组转移载体,并将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,经SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白正确表达后,将重组杆状病毒感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,最终获得纯度较高的Gn1重组蛋白。本研究为RVF新型疫苗研发及诊断试剂的研发提供了重要材料。

摘要： 为在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S和M蛋白,并探讨S和M蛋白能否自动组装成病毒样颗粒(VLPs)分泌至培养基中,本研究构建了3种不同的重组质粒(pFastBac-S、pFastBac-M和pFastBac-S-M),转化入DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定获得重组Bacmid,通过转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒(BV-S、BV-M和BV-S-M)。在悬浮培养的昆虫细胞Sf9中进行表达,表达分泌的上清通过蔗糖梯度离心进行浓缩纯化,最终获得分泌型的S-MVLPs。通过Western-blotting分析S和M蛋白的表达和分泌特性,透射电镜观察VLPs形态,间接ELISA检测VLPs与猪PEDV阳性血清的反应性,最后免疫小鼠后检验其免疫原性。结果显示,S和M蛋白均能以单独或共表达的形式(S-M)分泌至培养基中。电镜下可观察到由S-M蛋白形成的直径约为90~190 nm的VLPs。间接ELISA结果显示,S、M和S-M蛋白可与PEDV猪阳性血清发生特异性反应,免疫小鼠3次后可产生高水平特异性Ig G抗体。以上结果表明,在Sf9昆虫细胞中共表达S和M蛋白可以获得分泌型S-MVLPs,并具有良好的免疫原性。

摘要： 旨在利用杆状病毒表达系统构建1株对高致病性H7N9亚型禽流感病毒(A/Chicken/Huizhou/HZ-3/2016)攻击后的家禽提供保护的候选疫苗株。用同源重组的方法构建1株表达H7N9亚型禽流感病毒(A/chicken/Shaoxing/5201/2013株)血凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白的重组杆状病毒。用PCR技术鉴定重组杆状病毒rBac-SX5201HA的遗传稳定性,用间接免疫荧光方法和Western Blotting方法鉴定HA蛋白的表达情况,用血凝试验检测HA蛋白的体外活性,继而对重组疫苗在无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)鸡上进行免疫效力试验,并对免疫后21 d的SPF鸡血清进行抗体检测,对攻毒5 d后的鸡咽喉和泄殖腔棉拭子进行病毒分离。结果显示,重组杆状病毒rBac-SX5201HA在昆虫细胞中生长良好,且可稳定高效表达H7 HA蛋白,血凝效价可达2^(6);重组疫苗免疫SPF鸡21 d后可诱导2^(8.4)血凝抑制(Hemagglutinin inhibition,HI)抗体效价并能抵抗高致病性H7N9亚型禽流感病毒的攻击,免疫组SPF鸡群均未发病或死亡,仅有17%的SPF鸡在攻毒后第5 d出现排毒。可以看出,重组疫苗对高致病性H7N9亚型禽流感病毒攻击后的SPF鸡提供了100%的保护,且可有效抑制病毒在SPF鸡体内的复制。

摘要： 目的 构建共表达P1和3CD的重组杆状病毒,利用昆虫细胞重组表达2型脊髓灰质炎病毒(poliovirus type 2,PV2)的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),制备PV2-VLP进行初步免疫原性研究.方法 基于粉纹夜蛾细胞(High5)密码子偏好性,将PV2的P1基因和3CD基因进行序列优化,并对P1基因进行稳定性突变,构建突变型rBac-PV2-P1 s-3 CD和野生型rBac-PV2-P1-3 CD杆状病毒.Western blot分别检测目的 蛋白表达量,离子交换层析纯化PV2-VLP,透射电镜观察VLP高级结构确定组装效率.免疫大鼠评估免疫原性.结果 成功构建了可稳定表达P1s蛋白和3CD蛋白的重组杆状病毒.Western blot结果表明热稳定性突变后VLP产量相比野生型有所提高.电镜观察发现直径约30 nm的三维结构,表明VLP成功组装.动物实验结果表明,重组制备的PV2-VLP具有免疫原性,且能有效刺激产生中和抗体.结论 用昆虫细胞-杆状病毒表达系统可成功制备有效的VLP类疫苗,为PV-VLP疫苗的研制提供参考.

摘要： 为证实插入了禽流感HA、NA和M1基因的重组杆状病毒(VLP01株)能表达HA、NA和M1蛋白并自行组装成具有禽流感形态的病毒样颗粒,对VLP01株的细胞培养上清进行离心纯化或透析处理,获得的表达产物用电镜、Western Blot、ELISA进行鉴定.电镜观察表达产物,可见禽流感病毒样颗粒;以Western Blot方法用HA、NA和M1抗体分别检测表达产物,可见特异性条带;以NA多抗为捕获抗体、HA单抗为检测抗体建立双抗体夹心ELISA方法检测表达产物,结果为阳性,说明表达产物为同时含有HA蛋白和NA蛋白的病毒样颗粒.结果显示,VLP01株能够表达HA、NA和M1蛋白,并自行组装成禽流感病毒样颗粒分泌到细胞培养上清中.

摘要： 目的:通过构建p53基因重组杆状病毒载体并调控其在肝癌细胞特异表达,为临床实现p53基因精准治疗肝癌奠定基础.方法:将正常细胞的p53基因通过基因工程的手段连入杆状病毒表达载体,并且通过肝脏组织特异性启动子a p o E和m i R-122反义序列两个元件双调控实现p53基因在肝癌细胞中的靶向表达.重组杆状病毒载体转染昆虫细胞生产高滴度病毒,所获病毒分别感染肝癌细胞系和正常肝细胞,检测p53基因在上述两组细胞中m R N A和蛋白的表达水平.结果:在正常肝脏细胞L O2细胞系中转染p53基因重组杆状病毒,病毒基因m R N A表达无明显改变,病毒蛋白在LO2细胞系中的增殖无显著改变,无抑制LO2细胞系凋亡的能力,但p53基因重组杆状病毒基因mRNA在HepG2细胞中表达增加,病毒蛋白在H e p G2细胞中靶向表达.结论:p53基因重组杆状病毒载体构建成功,可达到靶向治疗肝癌患者的目的.

摘要： 为了提高低代次重组杆状病毒的病毒滴度和获得足量低代次种子批,以最大程度满足产业化生产的需求,本研究以表达猪细小病毒(PPV)衣壳蛋白VP2的重组杆状病毒质粒(Bacmid)为研究对象,分别转染贴壁Sf9细胞和高密度悬浮ExpiSf9细胞。通过重组杆状病毒滴度测定、SDS-PAGE、Western blot以及血凝效价测定等方法,对获得的重组杆状病毒滴度和VP2蛋白表达量进行评价。结果表明,高密度悬浮转染获得的P0代重组病毒滴度、VP2蛋白表达水平和血凝效价均要高于贴壁转染方式,同时高密度悬浮转染可获得足量的P0代重组杆状病毒种子批,可为后续外源蛋白表达提供足量同质的低代次毒种,有效解决重组杆状病毒代次比较窄的问题,为后续重组杆状病毒相关产品的产业化生产奠定研究基础。

摘要： 为了获得具有活性的鸭圆环病毒Cap蛋白,笔者通过PCR方法获得鸭圆环病毒I型完整Cap基因片段,将其克隆到昆虫杆状病毒基因组中,获得重组杆状病毒qBac-P-Cap,其病毒效价TCID50可以达到9.25.重组杆状病毒可在悬浮Sf9细胞中表达具有活性的鸭圆环病毒Cap蛋白.研究表明蛋白表达最佳收获时间为120 h,纯化后蛋白表达量可以达到200 μg/mL.这为进一步研究Cap蛋白功能和大规模制备鸭圆环疫苗奠定了基础.

摘要： [目的]研究柑橘凤蝶Papilio xuthus细胞系RIRI-PX1的单细胞克隆株RIRI-PX1-C24的生物学和重组蛋白表达特性.[方法]用野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(wild-type Autographa californica multiple nucleopolyhedrosis virus,wt-AcMNPV)侵染RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1,检测细胞对野生型病毒的敏感性;使用重组绿色荧光蛋白杆状病毒(AcMNPV-GFP)、重组β-半乳糖苷酶杆状病毒(AcMNPV-Gal)以及重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(AcMNPV-SEAP)分别侵染细胞系RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1,在之后的24,48,72,96,120,144和168 h检测3种重组蛋白的表达量;通过简单重复序列区间(inter simple sequence repeat,ISSR)标记比较RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1的遗传相似性.[结果]亲本细胞系RIRI-PX1和克隆株RIRI-PX1-C24均能被wt-AcMNPV侵染,其中RIRI-PX-C24对wt-AcMNPV的敏感性较RIRI-PX1有显著提高.3种重组蛋白均能在2个细胞系中表达,其中重组绿色荧光蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平远高于在亲本细胞系RIRI-PX1中的表达水平,但重组β-半乳糖苷酶蛋白和重组分泌型碱性磷酸酶蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平较在RIRI-PX1中的无显著提高.用10条ISSR引物进行的RIRI-PX1-C24和RIRI-PX12个细胞系的指纹图谱分析中,4条引物扩增条带在这2个细胞系间存在差异;2个细胞系的遗传相似性范围在0～ 83.33％之间,说明克隆株及其亲本细胞系在基因型上存在差异.[结论]通过对柑橘凤蝶细胞系RIRI-PX1进行单细胞克隆,确实获得了使重组绿色荧光蛋白表达水平有显著提高的克隆株RIRI-PX-C24,其利用价值仍需进一步的研究.

摘要： 本研究分别与ph,AcGFP,DsRed,Luc2和β-Galac 5种基因的PCR产物，共转染BmN细胞，3-5天后可以观察到细胞发病，通过相差显微镜可看到多角体、荧光显微镜看到相应的绿色和红色荧光，底物分解反应检测到相应的酶活。经SDS-PAGE和Western Blot检测进一步证实目的基因表达。该载体也可与AcGFP,DsRed的PCR产物直接共转染5龄起蚕产生重组病毒表达GFP和RFP。本研究成功建立重组杆状病毒快速无缝克隆的方法，该方法可能为生物技术药物的研发提供新的工具。

摘要： 猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1编码的Rep蛋白与病毒复制相关，其与转录中剪切所得的小Rep’蛋白是病毒复制所必须的。为了构建表达PCV2-Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒，采用PCR法从病毒感染细胞中扩增Rep和Rep’蛋白基因，并克隆到杆状病毒转移载体(pBlueBac4．5/V5-His-TOPO)。将重组质粒与线性化杆状病毒DNA共转染昆虫细胞(Sf-21)，经同源重组和蚀斑筛选，获得2株高效表达PCV2-Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒。经3次克隆的重组毒株毒价达7．0×107和3．0×107pfu／mL。蛋白表达分析表明，PCV2-Rep和Rep’蛋白分子量为36．0 ku和20．4 ku，占总蛋白含量的6．2％和10．1％;这两种重组蛋白均可与PCV2抗体产生特异性反应，具有良好的免疫活性。用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白，其纯度达到92．5％和93．6％。本研究获得的PCV2-Rep和Rep’蛋白，为PCV2疫苗免疫与野毒感染之间鉴别诊断及病毒复制机制的研究奠定了基础。

摘要： 西尼罗河病毒(West Nile virus，WNV)是一种危害严重的虫媒性、人兽共患传染病病原。到目前为止，尚无有效的药物和疫苗来控制和预防WNV感染，发展新型疫苗迫在眉睫。本研究构建了在CMV启动子下，表达西尼罗河病毒prM/E蛋白的重组杆状病毒：Bac-G-prM/E和Bac-prM/E。两种重组杆状病毒均能在哺乳动物细胞内高效表达E蛋白。小鼠肌肉注射Bac-G-prM/E和Bac-prM/E(注射剂量为108、109 PFU/只)能诱导产生针对WNV的特异性中和抗体及IFN-γ，并呈明显的剂量依赖性。其中，Bac-G-prM/E免疫原性强于Bac-prM/E。此外，Bac-G-prM/E和.Bac-prM/E免疫小鼠后能引起TNF-α，IL-2和IL-6等细胞因子的释放。表明重组杆状病毒能诱导机体产生强大的体液免疫和细胞免疫，可以作为西尼罗河病毒候选疫苗。

摘要： 本研究构建pFast Bac I-VSVG-CMV-P12A3C转移载体质粒，然后转入含有穿梭质粒的感受态DH10Bac中发生转座作用，经过蓝白斑筛选，获得稳定的重组杆粒。将重组杆粒转染SF9昆虫细胞，获得含有口蹄疫病毒Asia I P12A3C基因的重组杆状病毒，此病毒转到BHK-21cell并经间接免疫荧光方法鉴定P12A3c基因在哺乳动物细胞中获得表达。此研究为抗Asia I口蹄疫病毒活病毒载体疫苗的研究奠定了基础。

摘要： 探讨抗CD22人源化基因工程多价微型抗体在杆状病毒表达系统中的表达。构建含有抗CD22人源化基因工程多价微型抗体基因的重组杆状病毒表达质粒pAcSG2-CH3，并在Sf9细胞中表达。通过对表达产物进行PCR和免疫荧光反应鉴定，证实获得了可以稳定表达抗CD22人源化基因工程多价微型抗体的重组杆状病毒并通过空斑试验纯化病毒，其中一株纯化病毒的滴度达到4.5×107pfu/mL；结论杆状病毒表达系统能够很好的表达抗CD22人源化基因工程多价微型抗体分子，这就为这治疗白血病药物的开发和应用打下了基础。

摘要： 采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1176bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N.再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒.IFA和Westernblot分析表明重组N蛋白可以被辣根过氧化物酶(HRP)标记的组氨酸单抗(anti-His)识别,表明IHNV N基因在昆虫细胞Sf9中获得了正确表达.本试验扩增了IHNV全长N基因序列,并首次构建了杆状病毒表达系统,成功的表达了N蛋白,为IHNV N蛋白相关功能研究奠定物质基础.本研究所构建的重组杆状病毒可大量增殖，该表达系统既能保持原蛋白的结构和抗原特性，又能在Sf9细胞上获得大量核衣壳蛋白，为获得单体蛋白和单克隆抗体的制备做好准备，为进一步研究IHNV的感染机制和鲑、鳟鱼类的免疫机制以及鱼类传染性造血器官坏死病血清诊断试剂盒的研制奠定了基础。

摘要： 目前用于预防PRRS主要是灭活苗和弱毒苗,灭活苗的效果不稳定,经常导致免疫失败;弱毒苗存在毒力返强的危险,而且有可能传播疫苗毒.相关研究数据显示,PRRSV ORF6(M蛋白)也与病毒中和作用有关,而且M蛋白在细胞免疫中居主要地位,为进一步研究M蛋白的功能以及重组杆状病毒Bacmid—ORF6的免疫效果奠定基础.猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)在我国自1996年发现以来，已在全国范围内爆发流行。如何建立一种快速、准确、经济、安全、实用、标准规范性的PRRS检测方法，是整个兽医界所面临的一个课题。本实验研究对TA-12分离株的ORF6全基因序列进行了扩增、克隆，用杆状病毒做载体，构建了ORF6基因的真核表达载体，此载体可高效表达外源基因。这个表达体系的主要特点是可以获得大量抗原性、免疫原性较好的，与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白。重组杆状病毒感染昆虫细胞后，可以对外源蛋白进行许多真核细胞的转录后加工作用，包括糖基化、磷酸化、酰基化、正确的信号肽切割、蛋白水解以及适当的折叠作用，而且还可将重组蛋白聚集定位于天然蛋白的同一细胞器上，还能进行适当的寡聚化装配，因此是表达有生物活性的蛋白质的理想载体。本研究对于PRRS的流行病学调查、病原学研究及诊断防治均具有重要意义。

摘要： 根据DHV-Ⅰ基因组序列设计并合成一对特异性引物，通过RT-PCR方法扩增DHV-Ⅰ(A66株)VP1基因。用限制性内切酶EcoR /HindⅢ消化VP1基因和转移载体pFastbacⅠ，在T4 DNA连接酶作用下将二者连接构建转移质粒pFastbac-VP1。经PCR，双酶切及测序鉴定后将其转化含穿梭载体Bacmd的感受态细胞DH10bac中，蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP1，在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9，获得重组杆状病毒rvBac-VP1。SDS-PAGE分析表明，VP1基因在昆虫细胞中获得表达，表达产物分子量约为27KDa.westcm-blot检测表明，表达产物能与抗DHV-Ⅰ阳性血清发生反应，具有良好的反应原性。

摘要： 采用环磷酰胺免疫抑制法，用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原，Shimen-E2蛋白作为免疫原，免疫BALB/c小鼠，取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测，该单克隆抗体能够与石门株发生反应，同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群猪瘟野毒发生特异性反应，并具有中和活性，而与猪瘟兔化弱毒疫苗株不发生反应。该单克隆抗体可以用于鉴别猪瘟野毒株和猪瘟兔化弱毒疫苗株。

摘要： 采用环磷酰胺免疫抑制法，用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原，Shimen-E2蛋白作为免疫原，免疫BALB/c小鼠，取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测，该单克隆抗体能够与石门株发生反应，同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群猪瘟野毒发生特异性反应，并具有中和活性，而与猪瘟兔化弱毒疫苗株不发生反应。该单克隆抗体可以用于鉴别猪瘟野毒株和猪瘟兔化弱毒疫苗株。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以HBM信号肽‑gD‑His标签或HBM信号肽‑gD‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和SpeI和HindIII之间酶切位点处；所述gD为编码跨膜区片段缺失的gD蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白制备亚单位疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽‑gB‑His标签或GP67信号肽‑gB‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；所述gB为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白制备单亚基疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明公开了一种重组杆状病毒和其应用及构建该重组杆状病毒的载体。所述载体包括杆状病毒表达供体质粒和外源蛋白融合表达载体，所述杆状病毒表达供体质粒以pFastBac1杆状病毒表达载体为骨架，在其多克隆位点连接有NEDD8基因；所述外源蛋白融合表达载体包括所述的杆状病毒表达供体质粒以及插入所述杆状病毒表达供体质粒的外源蛋白基因，所述的NEDD8基因与外源蛋白的N端或/和C端相连。所述重组杆状病毒由所述的外源蛋白融合表达载体同源重组到杆状病毒基因组中并转染昆虫细胞得到。本发明利用NEDD8基因能够使杆状病毒外源目的蛋白如GFP表达量增加4倍以上。

摘要： 本发明公开了一种增强杆状病毒感染性的方法及其重组杆状病毒和应用，该方法将埃博拉GP蛋白基因重组到杆状病毒基因组上，产生的重组病毒经过测定，可以明显提高杆状病毒的滴度，增强感染性，可以在病毒繁殖扩增过程中，加入少量病毒可达到高的感染性，节省生产成本。本发明的使用不但可以降低杆状病毒扩增成本，同时获得的高感染性重组杆状病毒也可改善杆状病毒作为生物杀虫剂杀虫速度慢等缺点；本发明还可促进昆虫杆状病毒与宿主细胞相互作用、杆状病毒受体以及杆状病毒入侵宿主的机制等研究的发展，本发明提供的方法简单明了，易于理解、操作简单易行，效率高。

摘要： 本发明提供了一种杆状病毒基因组的合成方法及其在重组杆状病毒构建中的应用，属于生物技术领域。本发明提供的一种杆状病毒基因组的合成方法，包括使用引物组合和穿梭载体。引物组合包括杆状病毒全基因组扩增引物组合和线性载体扩增引物组合，应用该引物组合合成的基因片段，可在酵母中通过多片段的拼接合成出杆状病毒基因组，方便对杆状病毒基因组的任意位点进行改造；该方法中用于完整基因组拼接的穿梭载体带有能在昆虫细胞方便检测的基因，所合成的杆状病毒基因组可通过转染昆虫细胞获得有感染活性的病毒，方便用于拯救基因组改造后的杆状病毒；应用上述方法构建重组杆状病毒，方便快速高效，利于推广应用。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以HBM信号肽‑gD‑His标签或HBM信号肽‑gD‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和SpeI和HindIII之间酶切位点处；所述gD为编码跨膜区片段缺失的gD蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白制备亚单位疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽‑gB‑His标签或GP67信号肽‑gB‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；所述gB为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白制备单亚基疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明公开了一种重组杆状病毒和其应用及构建该重组杆状病毒的载体。所述载体包括杆状病毒表达供体质粒和外源蛋白融合表达载体，所述杆状病毒表达供体质粒以pFastBac1杆状病毒表达载体为骨架，在其多克隆位点连接有NEDD8基因；所述外源蛋白融合表达载体包括所述的杆状病毒表达供体质粒以及插入所述杆状病毒表达供体质粒的外源蛋白基因，所述的NEDD8基因与外源蛋白的N端或/和C端相连。所述重组杆状病毒由所述的外源蛋白融合表达载体同源重组到杆状病毒基因组中并转染昆虫细胞得到。本发明利用NEDD8基因能够使杆状病毒外源目的蛋白如GFP表达量增加4倍以上。

摘要： 本发明公开了一种增强杆状病毒感染性的方法及其重组杆状病毒和应用，该方法将埃博拉GP蛋白基因重组到杆状病毒基因组上，产生的重组病毒经过测定，可以明显提高杆状病毒的滴度，增强感染性，可以在病毒繁殖扩增过程中，加入少量病毒可达到高的感染性，节省生产成本。本发明的使用不但可以降低杆状病毒扩增成本，同时获得的高感染性重组杆状病毒也可改善杆状病毒作为生物杀虫剂杀虫速度慢等缺点；本发明还可促进昆虫杆状病毒与宿主细胞相互作用、杆状病毒受体以及杆状病毒入侵宿主的机制等研究的发展，本发明提供的方法简单明了，易于理解、操作简单易行，效率高。

摘要： 本发明提供了一种杆状病毒基因组的合成方法及其在重组杆状病毒构建中的应用，属于生物技术领域。本发明提供的一种杆状病毒基因组的合成方法，包括使用引物组合和穿梭载体。引物组合包括杆状病毒全基因组扩增引物组合和线性载体扩增引物组合，应用该引物组合合成的基因片段，可在酵母中通过多片段的拼接合成出杆状病毒基因组，方便对杆状病毒基因组的任意位点进行改造；该方法中用于完整基因组拼接的穿梭载体带有能在昆虫细胞方便检测的基因，所合成的杆状病毒基因组可通过转染昆虫细胞获得有感染活性的病毒，方便用于拯救基因组改造后的杆状病毒；应用上述方法构建重组杆状病毒，方便快速高效，利于推广应用。