悬浮培养

摘要： 为将ST贴壁细胞通过自主驯化,使其能在ST-S细胞无血清培养基中悬浮生长且能稳定传代,在摇瓶中实现高密度生长,并应用于猪伪狂犬病毒(PRV)悬浮培养,经ST-A低血清培养基适应培养,对一株贴壁的ST细胞进行了无血清的全悬浮驯化,并将PRV在悬浮细胞中连续盲传培养.结果显示:ST悬浮细胞能在无血清培养基中传代,培养48 h至第3代后,所能达到的最终细胞密度为3.00×106 cells/mL以上;PRV连续培养至第5代,毒价可达到109.0 TCID50/mL.结果表明,用专用培养基可使ST贴壁细胞实现悬浮驯化,并可应用于PRV悬浮培养.本研究为获得高密度ST悬浮细胞和提高PRV增殖效率奠定了技术基础.

摘要： 为了在重组杆状病毒上获得高丰度表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白,利用细胞贴壁培养和悬浮培养法培养重组杆状病毒Vbacmin-PPRV-N 120 h,用显微镜观察不同时间点细胞形态变化,随后在培养24、48、72、96、120 h时分别收集培养液,以ELISA方法检测PPRV N蛋白表达量,并用SPSS软件对数据进行统计分析.显微镜下观察发现,在感染重组杆状病毒后,两种方式培养的细胞随着时间增加,均由形态大小均匀、圆形、透亮、折光性好,变为大小不均匀、折光性差,并且出现了很多细胞碎片.根据ELISA检测结果,摇瓶悬浮培养条件下PPRV N蛋白的表达量显著高于贴壁培养,摇瓶悬浮培养的昆虫细胞蛋白表达量在96 h达到最高峰,120 h蛋白表达量开始下降,贴壁培养的昆虫细胞蛋白表达量在120 h达到最高峰.研究表明,用昆虫杆状病毒系统大规模表达PPRV N蛋白时更适合用摇瓶悬浮培养方法.本研究为优化昆虫细胞表达PRRV N蛋白的培养条件提供了参考.

摘要： 通过对铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养的生长指标及多糖、生物碱、总蛋白质、硒含量等指标进行评价,优化铁皮石斛富硒悬浮培养条件,为开发富硒铁皮石斛产品提供理论依据与物质基础。研究结果表明,优化的铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养基为MS+2.0 mg·L^(−1)6-BA+0.50 mg·L^(−1) NAA+30 g·L^(−1)蔗糖+0.05 mg·L^(−1) Na_(2)SeO_(3),接种量为100 g·L^(−1),pH为5.8,继代周期为30 d,此时原球茎的硒含量最高,可达4.01 mg·kg^(−1),多糖含量为34.79%、生物碱含量为0.026%、总蛋白质含量为28.25%。试验成功建立了富硒铁皮石斛原球茎悬浮培养体系。

摘要： 目的:建立西洋参细胞悬浮培养体系。方法:通过不同激素和物理影响因素筛选出西洋参细胞培养的最佳条件。结果:将西洋参愈伤组织接种于附加0.5mg·L^(-1)2,4-D+0.1 mg·L^(-1)KT+0.2 mg·L^(-1)NAA的MS培养基上最适合西洋参愈伤组织的生长;用西洋参愈伤组织制作西洋参细胞,发现西洋参悬浮细胞生长曲线类似“S”型;通过改变西洋参细胞悬浮培养的外界条件发现,西洋参悬浮细胞生长的最佳接种量为1.5 g/30mL,摇床转速和光照条件对西洋参细胞生长影响没有显著差异。结论:建立了西洋参细胞悬浮培养体系,该技术为西洋参细胞的扩大培养和有效成分的提取提供了物质基础。

摘要： 建立和优化了一种醉金香葡萄悬浮细胞合成白藜芦醇的工艺。以细胞生长和白藜芦醇生物合成量为响应值,通过单因素实验、Plackett-Burman、响应面实验考察了不同碳源、氮源、前体、诱导剂和激素等因素对醉金香葡萄细胞悬浮培养基合成白藜芦醇的影响。结果表明,在醉金香葡萄悬浮细胞的最佳培养条件下,单位葡萄细胞中白藜芦醇的最高表达量为(3026.64±56)μg/g,与对照组相比提高了51.13倍,为后续实现利用醉金香葡萄细胞悬浮培养生产白藜芦醇提供了理论基础。

摘要： 为克服犬瘟热疫苗现有生产工艺的缺陷,试验采用10 g/L Cytodex-1型微载体,按每个微载体15~20个细胞的细胞接种量接种至微载体培养Vero细胞,细胞培养液为10%NBS的DMEM培养液。结果显示,当细胞密度达到8×10^(6)CFU/mL时接种犬瘟热病毒,最佳培养时间30 h,接毒剂量按照MOI为0.1接种犬瘟热病毒液;当细胞病变达到50%时,病毒感染细胞时间为30 h,收获毒液。按照上述摸索生产工艺参数,收获的犬瘟热病毒液的病毒液滴度每病毒含量≥10^(8.5)TCID_(50)/0.1 mL。将收获的病毒液冻存及下游相关的灭活处理,作为制备犬瘟热疫苗的抗原。研究表明,试验大幅度提升犬瘟热病毒培养量,效价批间差异性均一,实现了产业化反应器悬浮培养代替细胞工厂的技术路线。

摘要： 为考察BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)工艺参数及病毒增殖过程中代谢动力学,将PRV接种于BHK-21悬浮细胞,考察接毒时细胞密度、病毒感染复数(MOI)及收毒时间对病毒效价的影响,测定培养过程中葡萄糖(Gluc)、乳酸(Lac)和谷氨酰胺(Gln)浓度,计算病毒增殖过程中各参数代谢速率。结果显示,将MOI为0.01的PRV病毒接种BHK-21悬浮细胞,其病毒滴度在42 h达最高8.5 lgTCID;/mL。代谢参数检测结果表明,BHK-21细胞在接毒36 h后细胞开始出现死亡。PRV在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性为伪狂犬病毒的规模化培养及疫苗开发提供了技术基础。

摘要： 采用LC-MS联用技术,对樟叶越桔悬浮培养细胞的次生代谢产物进行分析鉴定;应用面积归一法计算出各代谢物的相对含量。结果表明:鉴定出208种化合物,包括酚酸类79个、黄酮类70个、萜类15个、原花青素类12个、苯丙素类12个、生物碱类11个和其他类衍生物9个,相对含量分别为33.244%、23.167%、19.786%、15.138%、1.401%、2.200%和5.064%。酚酸类化合物中包含酚苷34个和其他酚酸衍生物45个,相对含量分别为22.072%和11.172%,黄酮类化合物中包含黄酮苷类58个和其他黄酮类衍生物12个,相对含量分别为13.765%和9.402%。值得注意的是,相对含量大于1%的化合物共有26个,相对含量总和为72.180%,为樟叶越桔悬浮培养细胞的主要代谢产物。其中,含量最高的化合物为原花青素A2(8.655%),其次为儿茶素(8.030%)、马斯里酸(7.503%)、2–羟基齐墩果酸(7.318%)和樟叶越桔苷B(3.705%)。研究结果将为进一步阐明樟叶越桔中咖啡酰熊果苷类物质的高产机制提供科学依据。

摘要： 为探讨猪脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)来源外泌体对脂肪源神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱导的调控作用,采用含20 ng/mL表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、20 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和2%B27的无血清DMEM/F12培养基,将ADSCs诱导成细胞球,通过免疫荧光技术检测神经干细胞标记蛋白巢蛋白(Nestin)和神经干细胞RNA结合蛋白(Musashi1)的表达,提取ADSCs外泌体,通过纳米粒径跟踪分析(NTA)和透射电镜技术对外泌体进行检测,PKH67染色后荧光显微镜观察ADSCs对外泌体的摄取情况,外泌体与ADSCs共培养作为试验组,不加外泌体作为对照组,qPCR检测外泌体对Nestin和Musashi1基因表达的影响。结果显示:ADSCs经诱导培养获得细胞球,免疫荧光检测显示所获得的细胞球Nestin和Musashi1抗体阳性,表明为诱导形成了神经干细胞;提取的ADSCs外泌体通过NTA和透射电镜检测,符合外泌体特征,而且外泌体能够完整进入ADSCs的细胞质;外泌体处理可以促进Nestin和Musashi1基因的表达(P<0.05)。结论:猪ADSCs外泌体可以促进ADSCs向NSCs分化,研究结果为进一步探索干细胞外泌体对NSCs诱导的影响提供参考。

摘要： 旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^(-3)接种于密度为2×10^(6) cells·mL^(-1)的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5μg·mL^(-1)时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。

摘要： 生物反应器是维持细胞体外生长繁殖的核心设备,其主要的部件搅拌系统直接影响着生物反应器的性能.针对普通机械搅拌式反应器机械配合有间隙,易使发酵液染菌、维护复杂且维护成本高的问题,以及单以磁力搅拌系统应用在大容量反应器时搅拌不均匀的问题,提出了以顶磁力搅拌为主底磁力搅拌为辅的动物细胞悬浮培养反应器磁力搅拌系统.利用计算流体力学原理,对搅拌桨的形状和参数进行设计,给出了磁力搅拌器的合理转速.通过CFD中的ANSYS FLUENT仿真软件对反应器内流场进行模拟,分析了不同搅拌速度和桨叶形状下产生的流场,对比分析速度矢量场与剪切矢量场的仿真结果,为实际培养过程搅拌速度的设定提供依据.结果表明:以顶磁力搅拌为主底磁力搅拌为辅的反应器新型磁力搅拌系统,卫生等级高,在低于动物细胞临界剪切力的情况下搅拌更均匀且无沉淀.

摘要： 花青素具有强的抗氧化、抗辐射、抗衰老、清除自由基等活性,能预防心脏病,增强动脉、静脉和毛细血管弹性,保护脑细胞,增强记忆力,增进视力等药理功效.近年来花青素的全球销售额每年超过1亿美金,并逐年增长.我们的前期研究中发现,利用茶叶愈伤组织可获得高含量花青素,具有非常重要的开发价值.本论文以茶叶愈伤组织为材料,通过考察不同激素组成、不同茶树品种、不同碳源、培养温度等因素对悬浮培养细胞中花青素生物合成的影响,确定了悬浮培养茶叶细胞制备花青素的最佳工艺,为茶花青素的开发提供了新的途径.

摘要： 本研究以豆瓣绿无菌苗叶片为外植体诱导获得质地疏松、稳定性高的颗粒状胚性愈伤组织,开展胚性细胞悬浮培养研究.结果表明:豆瓣绿胚性愈伤组织最适继代培养基为MS+30g/L蔗糖+琼脂6g/L+6-BA1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L,继代间隔14d;体细胞悬浮最佳培养基为MS+30g/L蔗糖+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,继代间隔7d;体细胞悬浮最佳碳源为蔗糖,蔗糖最佳浓度为30g/L;体细胞悬浮摇床最佳转速为110r/min.本研究考察激素种类、激素浓度、碳源种类、糖浓度、摇床转速对体细胞胚悬浮体系的影响,并采用解剖镜进行形态学观察,为后期研究体细胞胚胎形态结构奠定基础.

摘要： 利用动物细胞培养基质生产病毒疫苗已经成为疫苗行业越来越普遍的生产工艺,但对于疫苗生产过程中的物质与能量代谢情况以及相应的调控工艺研究还鲜有报道.本文首先在实验室自制的低血清培养基上优化病毒的接毒时间、MOI、收毒时间,优化生物反应器微载体悬浮培养PK-15细胞生产猪细小病毒(PPV)的工艺.在此基础上进一步研究PPV病毒接种PK-15细胞前后胞内ATP, NADH、中心碳代谢流的变化情况，系统研究PK-15细胞在病毒接种后的代谢迁移情况。在物质与能量代谢研究的基础上，结合活细胞传感仪、尾气质谱仪、在线取样系统以及补料流加系统等高效的动物细胞反应器控制体系，建立高效的PPV病毒生产工艺。

摘要： 目的:为了更好地保护特有的珍稀濒危植物金铁锁这一特色药源,利用植物组织及悬浮培养技术,对金铁锁的不定根进行培养,不定根在液体培养中除了产量得到扩大外,其生长过程中所产生的次生代谢产物(金铁锁的很多有效成份)会在培养液中富集。方法:对金铁锁不定根的离体培养进行研究。通过在培养基中添加不同浓度的生长素,筛选并建立了能够从金铁锁茎段有效诱导金铁锁快速繁殖不定根的培养基；再对该不定根进行悬浮培养研究,得到适宜不定根悬浮生长的培养基；使用高效液相对悬浮培养的不定根、培养液和金铁锁药材进行对比分析。结果:诱导金铁锁不定根生长的较适宜培养基:1/2MS+蔗糖20g/L+6-BA0.5mol/L+NAA1.0mol/L;诱导金铁锁不定根悬浮培养的培养基:1/2MS+蔗糖30g/L+NAA2.0 mol/L;经高效液相检测,发现培养物中含有和中药材金铁锁块茎中部分相同的化学成分,但总含量较低。

摘要： 细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的核心技术,结合筛选驯化的高表达细胞株和个性化细胞培养基,控制细胞培养过程,实现提高生产效率及产品质量、降低生产成本的目的,是当前国际上生物制品生产的主流模式.本文就国内外细胞悬浮培养产业化发展现状及其关键技术进行介绍和讨论.悬浮培养技术最大优势是通过更为精确有效的工艺控制手段，在获得最大产量的同时能稳步提高产品的质量。

摘要： 研究了显齿蛇葡萄细胞悬浮培养的基本条件，同时测定了悬浮液中二氢杨梅素的含量。确定了细胞悬浮培养的基本条件是：取继代培养4代之后的愈伤组织接种，以12.5 g／L的接种量接种在附加6-BA(2.0mg／L)，2，4-D(1.0 mg／L)，NAA(0.5 mg／L)的MS培养基上，添加100 ml／L的椰子汁，起始pH5.8.110 r／min，光照强度为250～350 Lx，光照培养12h／d.25±1°C下培养6 d。经过优化培养之后的悬浮液中二氢杨梅素含量为0.829 g／mL。

摘要： 微藻的生长受很多因素的影响,本文通过对海洋底栖硅藻进行悬浮培养,研究培养基中柠檬酸铁浓度对舟形藻生长及理化成分的影响,为舟形藻的扩大培养及在饵料方面的大规模应用提供理论基础.实验结果如下:当培养基中柠檬酸铁浓度为2mg/L时,藻细胞密度最大,可达4.97万个/mL,同时比生长速率也最大,可达0.076d-1.藻细胞的理化成分受柠檬酸铁浓度的影响显著,当培养基中柠檬酸铁浓度为8mg/L时,单个藻细胞中蛋白质含量、多糖含量、粗脂含量均为最高,说明高浓度的铁素有利于胞内理化成分的积累,但不利于细胞的生长.当柠檬酸铁浓度为4mg/L时,单个藻细胞中的叶绿素和类胡萝卜素含量最高.由此可见,高浓度铁素有利于胞内理化成分的积累,低浓度铁素有利于舟形藻细胞的生长.

摘要： 本试验进行了BHK21细胞贴壁悬浮的驯化，优化培养基，对细胞培养过程中其生理状态及细胞质量控制做了研究，从而为动物细胞培养生产生物技术药物提供可借鉴的研究思路，为建立动物细胞规模化培养技术平台奠定基础。

摘要： 通过对低温胁迫培养下的发状念珠藻一些生理指标进行的测定,结果表明在低温胁迫环境下发状念珠藻中脯氨酸含量,蔗糖含量以及硝酸还原酶含量都会有明显上升,叶绿素a的含量下降.

摘要： 本发明提供了一种印楝细胞悬浮培养基及细胞悬浮培养方法。所述印楝细胞悬浮培养基是在基本培养基的基础上优化组分配比，并添加了一定量的钒酸钠、L‑半胱氨酸、酪氨酸、烟酰胺、二硫苏糖醇、β‑D‑半乳糖、环己六醇磷酸酯、胺鲜酯、6‑BA、蜕皮激素、硝普钠、二辛基磺基琥珀酸钠、辣蓼草汁和地黄连汁；所述细胞悬浮培养方法包括以下步骤：1）无菌试管苗的获得，2）愈伤组织诱导与继代培养，3）细胞悬浮培养。应用本发明的培养基及培养方法不仅能获得稳定的印楝细胞悬浮培养体系，还能显著提高悬浮细胞的生物量和印楝素含量，为印楝细胞规模化培养生产印楝素提供了技术支撑，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了能悬浮培养的牛肾细胞及其悬浮培养方法与应用。本发明牛肾细胞MDBK悬浮培养方法省去了细胞消化、换液、频繁分种等大量人工操作，培养方法简便、快速，而且采用反应器培养实现了工艺自动化，不仅提高了单位体积的细胞产量，还解决了传统贴壁培养细胞批间存在差异的技术难题。本发明的牛肾细胞MDBK及其悬浮培养细胞可用于各类敏感病毒的培养、抗体蛋白生产、疫苗生产、产品外源病毒检验等领域。

摘要： 本发明公开了一种枇杷细胞悬浮培养液及悬浮培养方法。其中，培养液包括：MS基本培养基，2,4-D0.5-6.0mg/L；NAA0.5-6.0mg/L；IBA0.5-6.0mg/L；KT0-4.0mg/L；BA0-4.0mg/L；蔗糖1-3.5%；pH4.0-6.5。培养方法为愈伤组织在该培养液中培养。本发明建立了枇杷细胞液体培养体系，采用本发明最佳方式培养，枇杷细胞培养物中熊果酸的得率为36.49mg/g·DW。

摘要： 本发明涉及含有水溶性聚合物的动物细胞的悬浮培养用添加物和培养基、以及包括用含有水溶性聚合物的培养基对动物细胞进行悬浮培养的动物细胞的悬浮培养方法，根据本发明，能够提供在动物细胞的悬浮培养中，可抑制因搅拌、振荡、回流、气体通风等物理刺激导致的胰岛素等培养基成分的析出、提高动物细胞的培养效率和培养细胞的品质的动物细胞的悬浮培养用添加物、悬浮培养用培养基和悬浮培养方法。

摘要： 本发明涉及一种细胞悬浮培养生物反应器及细胞悬浮培养的方法，所述细胞悬浮培养生物反应器包括柔性材质的罐体，所述罐体包括第一腔体和第二腔体，所述第一腔体为柱体或台体，所述第二腔体为倒椎体，所述第一腔体上设有接种口、培养基入口和出气口，所述第二腔体上设有进气口，安装在所述第二腔体内的空气分布装置与所述进气口连接，所述进气口连接通气装置，使得无菌气体经所述通气装置进入所述空气分布装置后，分散成均匀的气泡。本发明通过所述细胞悬浮培养生物反应器，在较小通气比条件下，实现细胞悬浮培养的最佳效果，且体系氧传质系数适宜，剪切力适宜，空气成本低，产品收率高，适合细胞的大规模标准化培养的产业化应用。

摘要： 本发明提供了一种印楝细胞悬浮培养基及细胞悬浮培养方法。所述印楝细胞悬浮培养基是在基本培养基的基础上优化组分配比，并添加了一定量的钒酸钠、L‑半胱氨酸、酪氨酸、烟酰胺、二硫苏糖醇、β‑D‑半乳糖、环己六醇磷酸酯、胺鲜酯、6‑BA、蜕皮激素、硝普钠、二辛基磺基琥珀酸钠、辣蓼草汁和地黄连汁；所述细胞悬浮培养方法包括以下步骤：1）无菌试管苗的获得，2）愈伤组织诱导与继代培养，3）细胞悬浮培养。应用本发明的培养基及培养方法不仅能获得稳定的印楝细胞悬浮培养体系，还能显著提高悬浮细胞的生物量和印楝素含量，为印楝细胞规模化培养生产印楝素提供了技术支撑，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了能悬浮培养的牛肾细胞及其悬浮培养方法与应用。本发明牛肾细胞MDBK悬浮培养方法省去了细胞消化、换液、频繁分种等大量人工操作，培养方法简便、快速，而且采用反应器培养实现了工艺自动化，不仅提高了单位体积的细胞产量，还解决了传统贴壁培养细胞批间存在差异的技术难题。本发明的牛肾细胞MDBK及其悬浮培养细胞可用于各类敏感病毒的培养、抗体蛋白生产、疫苗生产、产品外源病毒检验等领域。

摘要： 本发明公开了一种枇杷细胞悬浮培养液及悬浮培养方法。其中，培养液包括：MS基本培养基，2,4-D0.5-6.0mg/L；NAA0.5-6.0mg/L；IBA0.5-6.0mg/L；KT 0-4.0mg/L；BA0-4.0mg/L；蔗糖1-3.5%；pH4.0-6.5。培养方法为愈伤组织在该培养液中培养。本发明建立了枇杷细胞液体培养体系，采用本发明最佳方式培养，枇杷细胞培养物中熊果酸的得率为36.49mg/g·DW。

摘要： 本发明公开了一种龙脑樟细胞悬浮培养液及悬浮培养方法。其中，培养液包括：MS基本培养基2，4-D 1.5-2.5mg/L；6-BA 0.4-0.8mg/L；LH 100-1000mg/L；椰汁0-250mg/L；CH500-1500mg/L；和蔗糖2-5％；pH值为5.0-7.0。培养方法为愈伤组织在该培养液中培养。本发明建立了龙脑樟细胞液体培养体系，采用本发明最佳方式培养，龙脑樟细胞培养物中右旋龙脑的得率为3.79μg/g·DW。

摘要： 本发明能够以悬浮状态培养细胞并且能够将培养出的细胞容易地回收。实施方式涉及的悬浮培养用添加剂是为了悬浮地培养细胞而添加于培养基的培养基添加剂，其含有纤维素低聚物。实施方式涉及的培养基组合物是能够悬浮地培养细胞的培养基组合物，其含有纤维素低聚物。实施方式涉及的细胞的培养方法包括在该培养基组合物中培养细胞。