猪细小病毒

摘要： 随着更加敏感和具有更多选择性的新型分子生物学技术应用于猪病原检测,对养猪业具有重要经济意义的病毒性疾病的流行病学研究也得到进一步的开展,而越来越多病毒以及经典病毒的检测数据也不断增加.猪细小病毒,是引起猪繁殖障碍的重要传染性病原.直到最近仍认为该病毒的遗传变异性较低,可通过疫苗接种可达到防止该病毒造成的猪繁殖障碍.但随着对该病毒的持续研究,人们对疫苗防治新兴的猪细小病毒毒株的有效性产生了怀疑.随后的研究更是从根本上改变了对猪小病毒的进化及免疫学的看法,而疫苗对新出现毒株的有效中和能力较低.这些发现对猪细小病毒的感染过程有了较为重大的进展.本文对猪细小病毒病流行病学、临床症状、发病机理进行综述,旨在为猪细小病毒感染引起的猪繁殖障碍病的预防和控制提供参考.

摘要： 猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type-2,PCV2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的病原体。PCV2在各个国家和地区都普遍存在,且各个阶段的猪群均表现出极强的易感性。PCV2感染后主要是侵害猪的免疫系统,使机体处于免疫抑制状态,从而继发感染其他病原微生物,严重影响养猪业的经济发展。PCV2的危害性并不只是针对于该病毒,而是因主要表现在它与猪副嗜血杆菌、猪链球菌、猪肺炎支原体、猪蓝耳病病毒以及猪细小病毒等的继发感染。

摘要： 用MTT法检测羌活有效活性成分阿魏酸对PK-15细胞的安全浓度,采用3种给药方法优化最佳给药方式,梯度给药优化最佳抗病毒增殖浓度及作用时间,用RT-qPCR检测炎症因子和细胞因子的表达水平。结果显示,羌活有效活性成分阿魏酸对PK-15细胞的最高安全浓度为160μmol/mL。最佳给药时间是猪细小病毒(PPV)感染细胞4 h后,且羌活有效活性成分阿魏酸呈剂量依赖性关系显著降低PPV的病毒表达;与空白组相比,羌活有效活性成分阿魏酸显著降低PPV感染PK-15诱发IL-1β、IL-2、IL-8、IL-6、IL-12、IL-18和TNF-α的表达,显著升高PPV感染PK-15诱发IL-17的表达。表明羌活有效活性成分阿魏酸抑制PPV在PK-15细胞中的增殖,降低PPV感染细胞激活炎症因子的表达水平,有良好的抗炎和抗病毒活性。

摘要： 非洲猪瘟的传入给我国养殖行业造成无法预估的损失,当地政府职能部门与行业主管部门有必要科学采取猪瘟防治措施,加大对传染病的有效防控。基于非洲猪瘟形势下的猪细小病毒,通过对病毒的病原体与临床症状分析,掌握病毒临床特点,经过流行病学分析与实验室诊断,提出科学有效的病毒防控措施,即重视非洲猪瘟与猪细小病毒混合感染的危害性、做好疫苗防控工作、采取综合防控措施,从而提高猪的成活率。

摘要： 为了解四川地区猪细小病毒在猪群中的感染情况,对四川地区存在母猪流产情况的猪场进行抽样检测,采集10个猪场的20个样本,提取核酸,利用PCR方法进行猪细小病毒特异性片段的扩增,并选取阳性产物进行测序和序列分析。结果显示,检测样本中猪细小病毒阳性率为40%(8/20),序列分析发现,猪细小病毒阳性样本与吉林长春毒株DJH24(MK092384)、湖南毒株HuN1(MH183298)聚为一支,核苷酸序列之间一致性为96.56%。本研究为四川地区猪细小病毒防控提供了参考依据。

摘要： 猪场感染猪细小病毒非常普遍,无论免疫疫苗与否,几乎80%以上猪场都可以监测到猪细小病毒的存在。目前已有的疫苗效果大都不错,但是“新”基因型的出现给PPI(猪细小病毒病)防控带来了更大挑战,同时也提示人们尽管PPI目前还可防可控,但是如果不重视疾病防控与净化,任由病毒长期大面积污染,病毒的变异可能会加剧,对养殖场来说就是巨大的潜在疾病风险。

摘要： 针对猪细小(PPV)、猪伪狂犬(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)病毒的保守区域设计用于构建荧光定量PCR体系的引物和探针.以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系,并对三重荧光定量PCR体系进行优化并进行特异性、灵敏性、重复性等试验.最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系分别检测病料以进行比较.结果表明:三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增;三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10 copies/μL;单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5%以内;单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系.应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对164份临床组织样品进行检测,其中PPV阳性检出率为16.7%,PRV阳性检出率为10%,PRRSV阳性检出率为18.9%;普通PCR检测中PPV阳性检出率为6.5%,PRV阳性检出率为3.6%,PRRSV阳性检出率为7.5%.说明本研究建立的PPV、PRV和PRRSV三重荧光定量PCR检测方法符合临床检测要求并且比普通PCR方法更敏感、更特异.

摘要： 【目的】探究猪细小病毒HNLY201301株的遗传特性及其对小鼠的致病性。【方法】对HNLY201301株进行遗传学分析、生物学分析以及小鼠攻毒试验。【结果】HNLY201301株属于经典猪细小病毒1型(PPV1),具有强毒株的遗传特性。该毒株可在猪肾(PK-15)细胞上复制,其滴度最高可达10^(-8.45)TCID_(50)/mL。该毒株的血凝谱广,能凝集小鼠、大鼠、豚鼠、兔、鸡、鸭和猪的红细胞。该毒株可通过静脉注射和阴道灌注感染小鼠,主要引起小鼠子宫损伤。【结论】细小病毒仍在我国猪场间流行,且具有较强致病性,对该病的防控应引起重视。

摘要： 猪细小病毒病是由病毒引起的一种猪的繁殖障碍性疾病。一旦猪群感染细小病毒病,必须立即诊断和治疗并做好预防工作,以降低养猪场的经济损失。通过对猪细小病毒病的临床症状、病理变化和诊断要点进行介绍,同时提出有效的科学防控措施,以期为今后的养猪生产提供技术参考。

摘要： 猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是造成母猪繁殖障碍的重要致病原之一,并在世界范围内广泛流行,感染后可造成猪的死木胎综合征(Stillbirth,mummification,embryonic death and infertility,SMEDI),即母猪产死胎、木乃伊胎、胚胎发育不良和死亡及母猪不孕等[1]。PPV在临床上常与猪圆环病毒(PCV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病原产生共感染并引发猪的免疫抑制,给猪场带来巨大的经济损失[2]。

摘要： 依次采用含8％、4％、2％、1％小牛血清MEM培养基驯化IBRS-2细胞,并在驯化好的IBRS-2细胞上接种猪细小病毒N株(PPV N株),以确定PPV N株在该培养体系下的生长情况.结果用含8％、4％、2％小牛血清MEM培养基各进行5代次驯化,IBRS-2细胞能完全适应且生长状态良好;当血清浓度降至1％时,仅传代1次,细胞就无法保持良好状态,细胞出现贴壁较差,拉网,生长停滞等现象.各血清浓度培养体系中细胞生长曲线测定结果显示,在细胞培养的0、24、48、72、96h各组细胞密度与常规培养的对照组差别不明显.因此用MEM培养基培养IBRS-2细胞时,血清最低含量为2％.用该体系培养IBRS-2细胞接种PPVN株后,通过TCID50和HA测定病毒滴度.结果显示,2％血清培养的PPV N株病毒滴度平均值与常规条件培养(6～10％血清)的无明显差别,表明该体系可用于PPVN株的增殖.本试验成功驯化出了能在低含量血清培养条件下生长良好的IBRS-2细胞,血清浓度可以降低到2％,且PPVN株在该低含量血清培养的IBRS-2细胞中能良好增殖.

摘要： 利用正交试验对猪细小病毒(PPV)N株在IBRS-2细胞转瓶培养的工艺参数进行优化,为PPV N弱毒疫苗的大量培养工艺提供参考.设细胞培养液pH值(7.0、7.2和7.4)、接毒时间(0、24和48h)、接毒剂量(0.10％、1.00％和10.00％)、收毒时间(48、72和96h)等因子和水平.结果表明,PPVN株转瓶培养的优化工艺参数为细胞培养液pH值7.2,采用同步接毒,接毒剂量为0.10％,收毒时间为接毒后96h.其中收毒时间是影响PPVN毒价的最主要因素.

摘要： 猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍的重要病原之一,给养猪业带来巨大经济损失.本文从PCR、核酸探针和环介导等温扩增技术等方面对猪细小病毒的分子生物学诊断技术进行综述,为猪细小病毒病的诊断及防制提供参考.

摘要： 近几年来,世界范围内的猪群出现了多种新型猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的感染,其中我国南方地区的猪群也出现了不同程度的感染.本研究利用PCR方法对实验室保存的2008-2013年期间的送检病料,进行猪细小病毒2型(PPV2)、PPV3、PPV4、猪类博卡病毒(PBo-likeV)和猪博卡病毒(PBoV)感染的分子流行病学调查,结果显示阳性率依次为46.4％、21.1％、6.8％、12.3％和5.5％.结合PRRSV和PCV2检测结果,并对新型细小病毒与这2种病毒共感染情况进行初步分析,结果显示PPV3和PRRSV、PBo-likeV和PCV2混合感染的几率较高,提示它们在感染过程中可能存在着协同作用.本研究为细小病毒流行病学和致病机理的研究奠定了一定的基础.

摘要： 猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的重要病原体之一,能够在PK-15、ST和IBRS2等细胞中增殖,并且产生典型的细胞病变效应(CPE),但目前对其致病机制仍不清楚.本研究首先应用MTT法检测不同病毒滴度的PPV体外感染对PK-15细胞活性的影响,通过AO/EB染色和DNA片段化分析检测细胞内核的变化情况,利用Annexin V FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率,从而确定细胞凋亡是否发生,根据Caspase的活性检测及Western blot技术分析死亡受体通路和线粒体通路在凋亡过程中是否被激活.结果表明,1MOI及以上的病毒滴度感染PK-15细胞24h后,细胞的生长活性被显著抑制,并呈现一定的剂量和时间依赖关系.PPV感染导致P K-15细胞染色质固缩,核聚缩、碎裂,形成凋亡小体,最终细胞膜失去完整性.感染细胞的基因组DNA发生明显的片段化,并且DNA片段化程度随着病毒感染剂量增加或感染时间的延长而加剧.细胞调亡率随着病毒感染时间的延长而逐渐上升.Caspase活性检测结果显示,在PPV感染细胞内,Caspase-9与Caspase-3被显著的活化,而Caspase-8活性未检测到明显变化.Western blot检测结果显示,1MOI的PPV感染细胞时,细胞内Caspase-3的底物PARP被降解,促凋亡蛋白Bax表达量随感染时间的延长而逐渐增加,抑制凋亡分子Bcl-2蛋白表达量显著减少,并且6h后细胞浆内Bax向线粒体转位,Cyt c和Smac由线粒体释放到细胞浆中,然而,Fas、FasL及Bid、tBid蛋白表达水平变化不显著.另外,在PPV感染的细胞中,凋亡通路上游信号分子p53蛋白的表达量显著上调,MDM2的表达水平下降,p53抑制剂PFT-a可以有效抑制凋亡过程中Bcl-2表达量的减少和Bax的增加,与对照组相比,PFT-α处理的细胞内Caspase-3的活性和细胞凋亡率显著降低.因此,PPV体外感染能够诱导PK-15细胞发生凋亡,激活Bcl-2家族介导的线粒体通路,并且p53在该凋亡通路中发挥重要作用.本研究将为PPV感染的分子致病机制提供一定的理论依据.

摘要： 根据GenBank登录的猪细小病毒株NADL-2(NC001718)的NS1基因序列设计一对特异性引物,采用PCR技术扩增猪细小病毒疫苗株NS1基因,将PCR扩增产物克隆入pTA2栽体构建重组质粒pTA2-NS1,并进行测序鉴定.测序结果显示,构建的pTA2-NS1质粒含有一个ORF,全长1989 bp,共编码662个氨基酸,与GenBank登录的猪细小病毒参考株NADL-2、Kresse株的NS1基因的核苷酸同源性分别99.85％、99.65％,氨基酸同源性分别为99.70％、99.70％.上述结果说明试验成功构建了含有猪细小病毒NS1基因的重组质粒pTA2-NS1.应用DNAStar软件及在线ProtScale、SignalP4.0、TMHMM、Scansite、PSORTⅡ等生物信息学软件对NS1基因及其编码蛋白进行生物信息学分析,结果显示NS1分子量为75.7KD,等电点PI为6.82,是弱酸性蛋白;NS1蛋白不合信号肽序列,没有跨膜区,为可溶性蛋白,主要定位于细胞核内,T199、Y309、T338、T512、S631、T635为其潜在磷酸化位点.以上研究分析为进一步开展NS1蛋白功能研究奠定基础.

摘要： 为进一步了解河南地区猪细小病毒(PPV)的变异特点,利用PCR方法,对河南郑州、周口、济源等地采集的疑似PPV感染的病料进行检测.PCR检测为阳性的病料经处理后,同步接种猪睾丸细胞盲传6代,对4株PPV全基因组进行分段克隆及测序,并与GenBank登录的国内外PPV流行株全基因组进行比较.结果表明,获得的4株PPV全基因组序列全长均为4679bp.4个毒株之间的核苷酸同源性介于99.6％-99.8％之间,与其他毒株间核苷酸同源性为98％-100％,遗传进化较为稳定.本试验为PPV在河南地区分子流行病学调查及遗传变异分析奠定了基础.

摘要： 本研究为探讨纳米铝胶佐剂猪细小病毒灭活疫苗对猪体的免疫效果,探明纳米铝胶佐剂的免疫增强作用。将制备的纳米铝胶佐剂和常规铝胶佐剂PPV灭活疫苗与市售的PPV油乳剂灭活疫苗做对比,接种猪体后进行免疫效果比较,在免疫后0、1、2、3、4、5、6周应用HI和ELISA试验方法检测接种猪的体液免疫水平;用流式细胞仪检测免疫猪的细胞免疫水平。结果显示:PPV纳米铝胶佐剂疫苗能显著提高机体产生抗体的速度,产生有效保护抗体时间早于油乳剂疫苗和常规铝胶佐剂疫苗,但抗体持续时间较短;细胞免疫检测结果表明,3种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫应答,但各组之间差异不显著。纳米铝胶佐剂具有增强PPV灭活疫苗免疫效果的作用。

摘要： 目的:通过对S/D法与干热法灭活人凝血因子Ⅷ制品中猪伪狂犬病毒和猪细小病毒的检测,评价病毒灭活效果.rn 方法:以猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为指示病毒,模拟人凝血因子Ⅷ生产工艺中的病毒灭活工艺,采用96孔板微量细胞病变法检测残余病毒滴度,评价S/D灭活伪狂犬病毒和干热灭活细小病毒的效果.rn 结果:模拟生产的3批人凝血因子Ⅷ经25±1°CS/D灭活处理15分钟后,3批制品的PRV滴度分别下降≥6.5个LgTCID50/0.1ml、≥6.8个LgTCID50/0.1ml、≥6.8个LgTCID50/0.1ml;模拟生产的3批人凝血因子经100±2°C干热处理30分钟灭活后,3批制品的PPV滴度分别下降4.00个LgTCID50/0.1ml、3.92个LgTCID50/0.1ml、3.94个LgTCID50/0.1ml.rn 结论:检测结果表明采用S/D法可以有效的灭活凝血因子类制品中的伪狂犬病毒,采用干热法对凝血因子类制品中的细小病毒也具有较好的灭活效果,为今后凝血因子类制品的病毒灭活验证工艺提供参考.

摘要： 采取一步醇沉和分步醇沉法提取4种山药多糖CYPS总、CYPS40、CYPS60、CYPS80.,测定安全浓度后分别从125μg.mL-1倍比稀释5个浓度,将4种山药多糖以先加山药多糖再加病毒的方式加至PK-15培养体系中,用MTT法检测山药多糖对PPV感染PK-15的影响;实时荧光PCR检测PK-15培养体系中PPV含量.结果显示,在7.8～125 μg.mL-1范围内山药多糖组A570值和PPV含量分别显著高于和低于对照组,表明山药多糖可以增强PK-15抵抗PPV感染和清除PPV能力,且以CYPS80的增强细胞活性和抗PPV感染效果最好.

摘要： 本发明公开了猪细小病毒BQ-C株及其在制备猪细小病毒灭活疫苗中的应用，属于生物疫苗领域。本发明的猪细小病毒BQ-C株具有免疫原性好、培养特性好等优点，将本发明的猪细小病毒（BQ-C株）接种ST细胞，收获培养物，用二乙烯亚胺（BEI）灭活后，与法国赛比克公司的商品化MontanideTM ISA15AVG佐剂混合乳化制成猪细小病毒灭活疫苗。实验证明，使用本发明制备得到的猪细小病毒灭活疫苗免疫初产健康阴性母猪能够预防由猪细小病毒引起的疾病，而且此疫苗具有安全、产生抗体快、免疫期持久等优点。

摘要： 本发明公开了猪细小病毒L株及在制备猪细小病毒病灭活疫苗中的用途。本发明所分离毒株的微生物保藏号是：CGMCC No.3352。该毒株与NADL-2株及China株具有极高的同源性、保持高的繁殖力，病毒稳定。应用二乙烯亚胺灭活该病毒的抗原液，加入油佐剂制得双向油乳剂灭活苗；用所制备的灭活疫苗对10276头猪(多数为初产母猪)进行了疫苗接种实验，免疫剂量为猪肌肉注射2ml/头，一次接种灭活疫苗，现地免疫期可达6个月以上。超剂量接种10ml/头，单剂量3次重复接种后，均未发现任何异常反应，说明本发明灭活疫苗具有良好的免疫原性及安全性。

摘要： 本发明公开了一种同时检测猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒的多重实时荧光定量PCR方法。本发明方法同时检测四种病毒都呈良好的线性关系，构建的标准质粒10倍系列稀释的各个点均在一条直线上，CT值与拷贝数之间均呈良好线性关系，回归分析显示，二者相关系数为R

摘要： 本发明公开了一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1、3、4所示基因片段，用于分别检测伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型。本发明公开了一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒。本发明基因芯片和试剂盒可以有效检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型病原，还能区分猪伪狂犬病毒的疫苗株与野毒株感染，具有特异性好、灵敏性高和保存期长等特点，耗时短，检测快速，检测结果的观察直观，无需昂贵的设备，可以迅速掌握畜禽疫病的感染情况，临床应用前景良好。

摘要： 本发明公开了猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒检测用引物、探针及检测试剂盒。所述检测用引物和探针为序列表SEQIDNO：1至SEQIDNO：9，本发明还提供了猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒的检测试剂盒。本发明所选引物和探针特异性非常强，一次能检测三种病毒，节约成本、减少步骤，提高效率。本发明方法具有高特异性、高灵敏度，高效率、低成本的特点，适合较大量样品的分析。

摘要： 本发明公开了猪细小病毒BQ-C株及其在制备猪细小病毒灭活疫苗中的应用，属于生物疫苗领域。本发明的猪细小病毒BQ-C株具有免疫原性好、培养特性好等优点，将本发明的猪细小病毒（BQ-C株）接种ST细胞，收获培养物，用二乙烯亚胺（BEI）灭活后，与法国赛比克公司的商品化MontanideTM ISA15AVG佐剂混合乳化制成猪细小病毒灭活疫苗。实验证明，使用本发明制备得到的猪细小病毒灭活疫苗免疫初产健康阴性母猪能够预防由猪细小病毒引起的疾病，而且此疫苗具有安全、产生抗体快、免疫期持久等优点。

摘要： 本发明公开了猪细小病毒L株及在制备猪细小病毒病灭活疫苗中的用途。本发明所分离毒株的微生物保藏号是：CGMCC No.3352。该毒株与NADL-2株及China株具有极高的同源性、保持高的繁殖力，病毒稳定。应用二乙烯亚胺灭活该病毒的抗原液，加入油佐剂制得双向油乳剂灭活苗；用所制备的灭活疫苗对10276头猪(多数为初产母猪)进行了疫苗接种实验，免疫剂量为猪肌肉注射2ml/头，一次接种灭活疫苗，现地免疫期可达6个月以上。超剂量接种10ml/头，单剂量3次重复接种后，均未发现任何异常反应，说明本发明灭活疫苗具有良好的免疫原性及安全性。

摘要： 本发明公开了一种同时检测猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒的多重实时荧光定量PCR方法。本发明方法同时检测四种病毒都呈良好的线性关系，构建的标准质粒10倍系列稀释的各个点均在一条直线上，CT值与拷贝数之间均呈良好线性关系，回归分析显示，二者相关系数为R

摘要： 本发明公开一种快速检测猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)的RDA方法及试剂盒，包括特异性引物组以及RDA荧光标记探针，以实现对猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒的安全、特异、灵敏、简便的检测，从而弥补现有传统检测技术的不足。本发明中提供的试剂盒可省去核酸提取步骤，在恒温条件下20min内实现对三种病毒的检测，特异性为100％，与普通PCR方法相比，RDA荧光法在恒温下反应，不需变温，不需复杂仪器，而且反应时间短，适用于现场快速检测。本发明的方法及其试剂盒具有操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、成本低廉等特点，可为猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1、3、4所示基因片段，用于分别检测伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型。本发明公开了一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒。本发明基因芯片和试剂盒可以有效检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型病原，还能区分猪伪狂犬病毒的疫苗株与野毒株感染，具有特异性好、灵敏性高和保存期长等特点，耗时短，检测快速，检测结果的观察直观，无需昂贵的设备，可以迅速掌握畜禽疫病的感染情况，临床应用前景良好。