BHK-21细胞

摘要： 【目的】研究鬼针草水提物(BPE)的体外抗伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PrV)作用。【方法】制备640 mg/mL(以生药计)的BPE,检测其对仓鼠肾上皮细胞(BHK-21)的毒性(半数中毒浓度(TC_(50)))及对PrV体外抗性(半数抑制浓度(EC_(50)))和治疗指数(TI)。采用CCK-8法检测BPE抗PrV的机制。采用间接免疫荧光法检测BPE对gB蛋白表达和PrV所致细胞凋亡的影响,采用实时荧光定量PCR方法检测BPE对PrV gB基因表达的影响。【结果】BPE对BHK-21细胞的TC_(50)为28.7 mg/mL,对PrV的EC_(50)为5.16 mg/mL,TI为5.56。BPE抗PrV的机制为抑制PrV增殖和灭活PrV。BPE可抑制PrV诱导的BHK-21细胞凋亡,抑制PrV gB基因和蛋白的表达。【结论】BPE具有明显的体外抗PrV活性。

摘要： 以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板,用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列,并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析;优化合成059基因编码序列,连接载体pET42a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌,采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白,并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度;将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层,分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育,利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0 h的细胞黏附GTPV的量,研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响。结果表明:成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列,其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域,显示出肝素结合活性;该蛋白羧基端有2个跨膜区,不利于蛋白质的表达,但优化DNA序列构建的重组质粒菌,经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达;免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性;Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06 mg/mL;荧光定量PCR检测数据显示,不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同,表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用,能降低病毒黏附到细胞的拷贝数。

摘要： 为考察BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)工艺参数及病毒增殖过程中代谢动力学,将PRV接种于BHK-21悬浮细胞,考察接毒时细胞密度、病毒感染复数(MOI)及收毒时间对病毒效价的影响,测定培养过程中葡萄糖(Gluc)、乳酸(Lac)和谷氨酰胺(Gln)浓度,计算病毒增殖过程中各参数代谢速率。结果显示,将MOI为0.01的PRV病毒接种BHK-21悬浮细胞,其病毒滴度在42 h达最高8.5 lgTCID;/mL。代谢参数检测结果表明,BHK-21细胞在接毒36 h后细胞开始出现死亡。PRV在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性为伪狂犬病毒的规模化培养及疫苗开发提供了技术基础。

摘要： 为探究灭活的羊口疮病毒(ORFV)调节宿主免疫应答后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的调控作用,本研究通过制备、灭活、纯化ORFV,采用RT-qPCR方法评估并分析在预先使用灭活的ORFV处理的BHK-21细胞中FMDV的复制情况以及细胞因子的变化情况。研究结果显示,灭活的ORFV上调细胞因子GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-6和IL-10的转录水平,显著抑制FMDV在BHK-21细胞中的复制。也就是说,灭活的ORFV通过上调宿主细胞因子的转录进而抑制FMDV复制。这一研究结果为灭活的ORFV作为免疫调节剂提供了依据并为其应用提供了可能性。

摘要： 为探究国内流行的牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)野毒株在鼠源BHK-21细胞中的复制生长特性,用间接免疫荧光、蛋白免疫印迹和透射电镜方法,确定了在BHK-21细胞系中能够感染中国流行的LSDV/FJ/CHA/2021毒株。蛋白免疫印迹和病毒生长曲线结果均表明,LSDV野毒株呈现时间依赖性的方式在BHK-21细胞中进行有效复制。电镜结果证明LSDV病毒工厂位于BHK-21细胞质内而非细胞核内。结果表明,LSDV国内流行毒株能够在BHK-21细胞中进行高效复制,为探究LSDV感染的致病机制、动物模型建立及弱毒疫苗的研制奠定重要理论基础。

摘要： 猪瘟病毒(CSFV)的E2蛋白是引起猪体产生针对猪瘟保护性抗体的主要抗原,构建可稳定表达CSFV E2蛋白的细胞系,可为E2蛋白功能研究及基因工程猪瘟疫苗的研制提供物质基础。本研究将CSFV E2基因克隆至慢病毒表达载体,构建重组慢病毒表达质粒pCDH-E2。将pCDH-E2重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,获得重组慢病毒。将该慢病毒感染BHK-21细胞,经嘌呤霉素抗性筛选结合有限稀释法筛选出可表达CSFV E2蛋白的BHK细胞系。Western blot分析结果显示,所构建的重组细胞系传至第10代仍能稳定表达CSFV E2蛋白。该细胞系的建立为研制猪瘟新型重组疫苗及其生产奠定基础。

摘要： 研究发现,塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是引发猪原发性水疱病(PIVD)的主要原因,感染猪的鼻吻、蹄冠部出现水疱性病变,还可造成新生仔猪死亡.为探索SVA在BHK-21细胞中培养的适宜条件,笔者分别从同步接毒法、单层接毒法、细胞浓度、收毒时间、血清含量等方面设计试验开展研究.本试验结果为制备高效价的SVA抗原提供了数据资料.

摘要： 根据《兽用生物制品生产用细胞系试验技术指导原则》,将BHK-21细胞原始细胞库F11代传至F52代,取其中部分代次按照《制造及检验试行规程》进行细胞形态、纯净性、胞核学检查、细胞致瘤性检验、病毒培养适应性检验.结果 表明,BHK-21细胞F11～F52代各指标的鉴定结果符合规程要求.为确保细胞种子稳定性,建议疫苗生产用细胞限定在43代以内.

摘要： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由CSF病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,临床上主要以高热稽留、广泛性出血和高死亡率为主要特征.猪瘟对养猪业危害严重,造成巨大的经济损失,是各国防控、检疫的重要传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录,为需申报的(notifiable)动物性传染病,在我国被列为“一类动物疫病”.国内外常用猪瘟兔化弱毒疫苗来控制猪瘟,尽管此类疫苗对猪瘟的防治起到了重要的作用,但这类活疫苗存在一个不足之处,即无法与野毒感染进行鉴别诊断.甲病毒载体的特点是可以作为一种基因转移平台,其保留了复制酶基因,可控制载体RNA在胞浆中高水平复制,而且该载体能够诱导细胞凋亡,相比其他常规的DNA疫苗具有更高的生物安全性.本实验构建基于重组甲病毒复制子的猪瘟DNA疫苗,并对其在BHK-21细胞中的表达特性进行了初步的研究.

摘要： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由CSF病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,临床上主要以高热稽留、广泛性出血和高死亡率为主要特征.猪瘟对养猪业危害严重,造成巨大的经济损失,是各国防控、检疫的重要传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录,为需申报的(notifiable)动物性传染病,在我国被列为“一类动物疫病”.国内外常用猪瘟兔化弱毒疫苗来控制猪瘟,尽管此类疫苗对猪瘟的防治起到了重要的作用,但这类活疫苗存在一个不足之处,即无法与野毒感染进行鉴别诊断.甲病毒载体的特点是可以作为一种基因转移平台,其保留了复制酶基因,可控制载体RNA在胞浆中高水平复制,而且该载体能够诱导细胞凋亡,相比其他常规的DNA疫苗具有更高的生物安全性.本实验构建基于重组甲病毒复制子的猪瘟DNA疫苗,并对其在BHK-21细胞中的表达特性进行了初步的研究.

摘要： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由CSF病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,临床上主要以高热稽留、广泛性出血和高死亡率为主要特征.猪瘟对养猪业危害严重,造成巨大的经济损失,是各国防控、检疫的重要传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录,为需申报的(notifiable)动物性传染病,在我国被列为“一类动物疫病”.国内外常用猪瘟兔化弱毒疫苗来控制猪瘟,尽管此类疫苗对猪瘟的防治起到了重要的作用,但这类活疫苗存在一个不足之处,即无法与野毒感染进行鉴别诊断.甲病毒载体的特点是可以作为一种基因转移平台,其保留了复制酶基因,可控制载体RNA在胞浆中高水平复制,而且该载体能够诱导细胞凋亡,相比其他常规的DNA疫苗具有更高的生物安全性.本实验构建基于重组甲病毒复制子的猪瘟DNA疫苗,并对其在BHK-21细胞中的表达特性进行了初步的研究.

摘要： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由CSF病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,临床上主要以高热稽留、广泛性出血和高死亡率为主要特征.猪瘟对养猪业危害严重,造成巨大的经济损失,是各国防控、检疫的重要传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录,为需申报的(notifiable)动物性传染病,在我国被列为“一类动物疫病”.国内外常用猪瘟兔化弱毒疫苗来控制猪瘟,尽管此类疫苗对猪瘟的防治起到了重要的作用,但这类活疫苗存在一个不足之处,即无法与野毒感染进行鉴别诊断.甲病毒载体的特点是可以作为一种基因转移平台,其保留了复制酶基因,可控制载体RNA在胞浆中高水平复制,而且该载体能够诱导细胞凋亡,相比其他常规的DNA疫苗具有更高的生物安全性.本实验构建基于重组甲病毒复制子的猪瘟DNA疫苗,并对其在BHK-21细胞中的表达特性进行了初步的研究.

摘要： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由CSF病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,临床上主要以高热稽留、广泛性出血和高死亡率为主要特征.猪瘟对养猪业危害严重,造成巨大的经济损失,是各国防控、检疫的重要传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录,为需申报的(notifiable)动物性传染病,在我国被列为“一类动物疫病”.国内外常用猪瘟兔化弱毒疫苗来控制猪瘟,尽管此类疫苗对猪瘟的防治起到了重要的作用,但这类活疫苗存在一个不足之处,即无法与野毒感染进行鉴别诊断.甲病毒载体的特点是可以作为一种基因转移平台,其保留了复制酶基因,可控制载体RNA在胞浆中高水平复制,而且该载体能够诱导细胞凋亡,相比其他常规的DNA疫苗具有更高的生物安全性.本实验构建基于重组甲病毒复制子的猪瘟DNA疫苗,并对其在BHK-21细胞中的表达特性进行了初步的研究.

摘要： 为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别连接到痘苗病毒转移载体pSTK上,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP.通过脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒.利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性.结果证明：辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性.表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础.

摘要： 为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别连接到痘苗病毒转移载体pSTK上,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP.通过脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒.利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性.结果证明：辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性.表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础.

摘要： 为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别连接到痘苗病毒转移载体pSTK上,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP.通过脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒.利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性.结果证明：辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性.表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础.

摘要： 为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别连接到痘苗病毒转移载体pSTK上,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP.通过脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒.利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性.结果证明：辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性.表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础.

摘要： 为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别连接到痘苗病毒转移载体pSTK上,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP.通过脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒.利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性.结果证明：辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性.表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础.

摘要： 本发明公开了一种增强病毒增殖的方法，并构建了先天性免疫系统重构的BHK21细胞群，用于增殖病毒。本发明公开的方法为病毒增殖打开了新思路，扩大了BHK21细胞的应用范围，为能够防治病毒的疫苗的研制打下了坚实的基础。

摘要： 本发明涉及病毒培养技术领域，具体涉及BHK‑21细胞克隆株及利用BHK‑21细胞克隆株全悬浮培养新城疫病毒的方法。本发明提供BHK‑21细胞克隆株QYHZZ‑BHK‑21，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021133。该BHK‑21细胞克隆株能够在全悬浮无血清培养过程中快速增殖，保持较高的细胞活率，在接种新城疫病毒后，能够使得病毒快速繁殖，在较短时间内获得较高的病毒HA效价，制备得到的新城疫病毒抗原的质量较好，具有较高的免疫原性和安全性。本发明提供的全悬浮无血清培养方法适用于新城疫病毒及其疫苗的规模化生产，为细胞源疫苗的生产提供了技术基础。

摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种BHK‑21细胞系BHK‑21‑BP‑2克隆株及其在全悬浮细胞培养中的应用。本发明提供BHK‑21‑BP‑2克隆株，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17588。该克隆株在进行全悬浮细胞培养接种伪狂犬病毒后，细胞病变快，产生病毒毒价高，24h～48h即可收毒；收毒时只需离心收获上清，不需反复冻融，生产工艺简单；生产的病毒抗原液的总蛋白含量低，获得的有效病毒抗原完整性高，抗原质量好，具有优异的免疫原性和安全性；制备的伪狂犬病毒疫苗具有稳定性高、批间差异小、免疫效果好、安全性高的优势。

摘要： 本发明属于病毒疫苗生产技术领域，具体涉及一种乳仓鼠肾细胞BHK‑21‑E‑200及作为病毒疫苗生产细胞株的应用。本发明提供了一种能够稳定传代且高产口蹄疫病毒疫苗的细胞株BHK‑21‑E‑200，相较原始BHK‑21细胞，所述的细胞株BHK‑21‑E‑200的146s含量提升90％，且无外源性污染；而且所述的细胞株BHK‑21‑E‑200的单位细胞产毒量较原始BHK‑21细胞升高90％以上，且生长速率较原始BHK‑21细胞提升，能够用于口蹄疫病毒疫苗的高效生产。

摘要： 本发明公开了一株适应无血清悬浮培养的BHK‑21‑SC细胞株和用该细胞株制备疫苗抗原的方法，所述BHK‑21‑SC细胞株为幼金仓鼠肾细胞株，该细胞株的保藏编号为CGMCC No.16817。所述细胞株按0.5‑0.6ⅹ10

摘要： 本发明涉及微生物领域，提供了一株BHK‑21细胞系Gs克隆株，保藏编号为：14735。该细胞克隆株按照本发明的培养条件进行培养，以0.6×106/ml‑1.0×106/ml传代时，培养48小时细胞密度达到8.0×106/ml‑1.2×107/ml，细胞活力在91％以上；培养72小时细胞密度达到1.5×107/ml‑2.0×107/ml，细胞活力在92％以上；培养96小时细胞活力仍处在80％以上。本发明所提供的BHK‑21细胞系Gs克隆株可用于动物病毒的大规模悬浮培养，能简化疫苗生产工艺，较好的维持病毒抗原稳定等优点，并能缩短疫苗生产周期，提高生产效率，具备突发疫情中疫苗供应应急的能力。

摘要： 本发明公开了一种增强病毒增殖的方法，并构建了先天性免疫系统重构的BHK21细胞群，用于增殖病毒。本发明公开的方法为病毒增殖打开了新思路，扩大了BHK21细胞的应用范围，为能够防治病毒的疫苗的研制打下了坚实的基础。

摘要： 本发明提供了一种BHK21悬浮细胞克隆株的筛选方法，由该筛选方法得到的BHK21悬浮细胞克隆株，特别是BHK21悬浮细胞克隆株BHK21‑KLXF‑QZ5。本发明还涉及BHK21悬浮细胞克隆株在制备病毒抗原中的应用。本发明的BHK21悬浮细胞克隆株解决了病毒抗原含量低的难题。

摘要： 本申请提出了利用无血清培养基培养BHK21细胞的方法及其在制备疫苗中的用途，所述方法包括：将BHK21细胞接种在DMEM/F12培养基中；和在适于BHK21细胞增殖的条件下，对所述BHK21细胞进行培养。利用本发明的方法可以实现在无血清条件下有效地降低培养结团率、提高增殖倍数，在提高产能效率的同时降低血清等动物源性添加物的安全风险，本发明对于无血清细胞培养的工业化应用具有极强的现实意义。

摘要： 本申请提出了用于培养BHK21细胞的化学限定培养基、添加剂及其应用。根据本申请的实施例，本申请的发明人提出了一种用于BHK21细胞的化学限定培养基添加剂，该培养基添加剂可以添加至DMEM/F12培养基，从而获得化学限定培养基，该化学限定培养基能够用于对BHK21细胞进行悬浮培养，并且意外地实现了培养结团率的降低、增殖倍数的提高。