猪伪狂犬病毒

摘要： 为将ST贴壁细胞通过自主驯化,使其能在ST-S细胞无血清培养基中悬浮生长且能稳定传代,在摇瓶中实现高密度生长,并应用于猪伪狂犬病毒(PRV)悬浮培养,经ST-A低血清培养基适应培养,对一株贴壁的ST细胞进行了无血清的全悬浮驯化,并将PRV在悬浮细胞中连续盲传培养.结果显示:ST悬浮细胞能在无血清培养基中传代,培养48 h至第3代后,所能达到的最终细胞密度为3.00×106 cells/mL以上;PRV连续培养至第5代,毒价可达到109.0 TCID50/mL.结果表明,用专用培养基可使ST贴壁细胞实现悬浮驯化,并可应用于PRV悬浮培养.本研究为获得高密度ST悬浮细胞和提高PRV增殖效率奠定了技术基础.

摘要： 猪伪狂犬病作为猪的一种急性、高度接触性传染病,多发生于秋冬等寒冷季节,通常在一定的地区内暴发流行,各个年龄段的猪均易感,阳性感染率常年居高不下,该病的流行严重威胁生猪养殖业的健康发展,给广大养殖户带来了严重的经济损失。但是,目前尚没有针对该病的特效治疗药物,且不同年龄段的猪之间症状差异较大。由此可见,规模化养猪场应该采取以疫苗接种为主,逐步净化为辅的防控措施,建立健全生物安全措施,树立“防大于治”的养殖理念。本文就猪伪狂犬病的流行现状、诊断方法、防控策略以及面临的挑战等方面进行了论述,以期为广大养殖户提供借鉴与思考。

摘要： 为了解湖南省伪狂犬病毒(PRV)病原特征及遗传变异情况,从湖南娄底某猪场采集疑似感染伪狂犬病(PR)病料,通过细胞传代、PCR鉴定、间接免疫荧光试验(IFA)等进行病毒分离鉴定;对该毒株的gC、TK和gE基因进行PCR扩增及测序,分析其变异情况。结果表明,临床病料接种PK15细胞后有1份样品出现细胞病变,经过PCR和IFA鉴定结果表明分离的毒株为PRV(命名为HuN-LD株),盲传第6代病毒的滴度为10^(7.5)TCID_(50)/mL。与参考PRV毒株相比,该毒株gE、TK和gC基因序列与国内流行变异株对应序列同源性最高,与其他毒株同源性相对较低。基于gC基因序列构建的系统进化数分析结果表明,该毒株与国内2011年后流行变异株亲缘关系最近,属于同一分支,但与国外流行的毒株(NIA3和Becker等)相隔较远,属于不同分支。提示成功分离得到1株PRV变异株,该结果可为湖南省PRV流行病学研究及疫苗研发等提供科学依据。

摘要： 本研究根据GenBank中的PRV UL27基因、CSFV ORF1基因和PEDV N基因的保守序列设计1对特异性引物,通过对三重PCR反应条件的优化,建立快速检测PRV、CSFV和PEDV的三重PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。结果表明:引物对PRV、CSFV、PEDV能进行特异性扩增,目的片段大小分别为401bp、213bp、518bp,三重PCR方法特异性好,对PRV、CSFV、PEDV的检测限分别为12pg、0.05pg、3.5pg。建立的三重PCR方法具有特异性强、敏感性较好、快速简便等特点,可用于这三种病毒的同时检测和鉴别诊断。

摘要： 针对猪细小(PPV)、猪伪狂犬(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)病毒的保守区域设计用于构建荧光定量PCR体系的引物和探针.以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系,并对三重荧光定量PCR体系进行优化并进行特异性、灵敏性、重复性等试验.最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系分别检测病料以进行比较.结果表明:三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增;三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10 copies/μL;单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5%以内;单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系.应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对164份临床组织样品进行检测,其中PPV阳性检出率为16.7%,PRV阳性检出率为10%,PRRSV阳性检出率为18.9%;普通PCR检测中PPV阳性检出率为6.5%,PRV阳性检出率为3.6%,PRRSV阳性检出率为7.5%.说明本研究建立的PPV、PRV和PRRSV三重荧光定量PCR检测方法符合临床检测要求并且比普通PCR方法更敏感、更特异.

摘要： 猪伪狂犬病(PR)是一种由伪狂犬病毒引起的猪急性流行病,临床表现为母猪繁殖障碍,仔猪发烧、腹泻和共济失调,育肥猪呼吸困难和种公猪生殖障碍。猪是猪伪狂犬病毒的天然宿主,发病猪、隐性感染猪和康复猪是重要的传染源。由于该病发病率和死亡率很高(仔猪病死率可达100%),又缺乏有效治疗药物控制,传播速度快,严重危害养猪业,被世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类动物疫病,我国列为二类动物传染病。因此,养猪场需要加强科学监测,掌握流行现状,开展该病的综合防治和净化。

摘要： 试验旨在探究螺旋藻多糖(Spirulina platensis polysaccharide,PSP)的抗氧化作用,首先经过酶解水提法得到螺旋藻多糖,然后经过DEAE-52纤维素层析柱和Sephacryl S-200凝胶层析柱分离纯化后得到螺旋藻多糖组分1(PSP-1)。将小鼠分为3个不同剂量药物组(200、100 mg/kg·BW和50 mg/kg·BW)、猪伪狂犬病毒(PRV)组和对照组共5个组别(A、B、C、D、E组)进行试验,采用试剂盒法测定小鼠血清中一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和丙二醛(MDA)的分泌水平以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、髓过氧化物酶(MPO)、黄嘌呤氧化酶(XOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果表明:在使用了不同剂量的药物之后,血清中NO、MDA水平和MPO活性均极显著降低(P<0.01);iNOS、XOD活性在A组和B组均极显著降低(P<0.01);同时,血清中SOD活性均极显著升高(P<0.01);GSH-Px活性和CAT活性在A组和B组极显著升高(P<0.01),在C组显著升高(P<0.05)。由此可见,PSP-1能够缓解PRV感染小鼠引起的氧化应激,具有一定的抗氧化性,可为动物病毒性疾病的治疗提供思路。

摘要： 1病原引起猪病毒性腹泻的病因较多,目前已查明的致泻性病毒有:猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2-4型、猪蓝耳病毒、猪博卡病毒、猪伪狂犬病毒等。目前我国养猪行业检出率较高的致泻性病毒有:猪轮状病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒。猪致泻性病毒在温度为0°C~10°C的环境下活性最强,在0°C以下的温度能存活较长的时间,因此每年冬春交、秋冬交是猪患致泻性病毒疾病的高发时段。此病毒在高温、干燥的环境下自行大量灭杀,也可人为使用消毒剂、紫外线光照的办法杀毒。对于寄生在粪尿、垫料、动物机体组织内的病毒较难杀灭。猪病毒性腹泻比细菌性腹泻致死率低,但其发病时的症状非常严重,患病猪排泄水样粪便,机体快速脱水,造成体内电解质代谢紊乱,从而引起严重的继发或并发感染[1]。

摘要： 针对目前固定床生物反应器结构复杂、易产生泡沫等缺点,研发结构简单且可无泡通气的新型固定床生物反应器,并对该反应器的混合时间、kL a、细胞分布均匀性和细胞捕获能力进行测定.并进一步利用该反应器实施低密度接种Vero细胞进行细胞培养并扩增猪伪狂犬病毒.试验结果表明,该新型固定床反应器的混合时间、kL a与传统STR反应器相当,细胞捕获能力良好且细胞在反应器中分布均匀.采用低密度接种时Vero细胞可在该反应器中进行良好的生长,接毒5 d后累计收获的病毒总颗粒数达到10.37 log10 TCID50,相当于2.3×105剂量疫苗.该研究为细胞源疫苗的生产提供了新的反应器与技术.

摘要： 为了对一株经过鉴定、纯化的猪伪狂犬病毒(PRV)黑龙江省现地分离株进行评估,对现地分离株进行了继代培养和分离,以经典PRV Ra株为对照,测定不同培养时间的病毒含量,绘制毒株的生长曲线,同时利用分离株的细胞培养物对家兔、小鼠和分离动物进行致病力试验.结果 显示:分离株比Ra株病毒含量先达到峰值,并且相同培养时间时病毒含量高于Ra株,同时确定其最佳培养时间为42h;致病力试验中攻毒组动物均出现了不同程度的典型临床症状.说明PRV现地分离株致病性能良好.

摘要： 目的:观察黄芪、板蓝根配伍对猪伪狂犬病毒体外抑制作用研究.rn 方法:筛选抗病毒中药黄芪、板蓝根,采用细胞病变(CPE)抑制实验,观察黄芪、板蓝根单味药及配伍水煎液对PK-15单层细胞上猪伪狂犬病毒(PRV)的抑制作用.rn 结果:单独应用板蓝根水煎液体外对PRV有显著抑制作用,其对PRV的最小直接杀灭浓度为0.63mg/ml,最小阻断浓度为0.33mg/ml;单独应用黄芪水煎液对PRV的抑制作用不明显.板蓝根、黄芪1∶1配伍水煎液对PRV的抑制作用显著增强,其对PRV的最小直接杀灭浓度提高为0.32mg/ml,最小阻断浓度提高为0.080mg/ml.rn 结论:黄芪、板蓝根配伍对猪伪狂犬病毒(PRV)有显著的抑制作用.

摘要： 猪圆环病(Porcine Circovirus Disease,PCVD)由猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)感染引起,其发病表现包括断奶多系统衰竭综合征(PMWS)、肾病皮炎综合征(PDNS),并参与引起猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和猪繁殖障碍等.PCV已知有3个型,PCV1不致病,临床圆环病多由PCV2引起,而目前有越来越多的病猪体内检测到PCV3的存在,但致病力不详.猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的猪的急性传染病,各个阶段猪群均易感,可引起日龄较小猪的神经症状急性死亡和顽固性腹泻,引起中大猪发生猪呼吸道疾病综合征,引起种母猪发生流产、死胎和种公猪不育.自2012年从我国东北开始监测到猪伪狂犬强毒株的流行,并不断呈扩散趋势,使此前一直呈现稳定的猪伪狂犬病开始抬头.本文结合一例保育猪猪圆环病毒和猪伪狂犬病毒混合感染案例的诊治,阐述整个发病、诊断及处理和转归全过程,希望能为各位养殖业主和兽医提供参考.

摘要： 目的:建立可视化检测猪伪狂犬病毒的环介导等温扩增技术,为临床检测PRV提供技术支撑.方法:本研究根据GenBank中PRVgB基因的保守序列,设计一套特异性引物,并对反应条件进行优化,建立了PRV的LAMP可视化检测方法.结果:该方法能在常规水浴锅65°C30min内实现对目的片段的大量扩增,检测结果可通过肉眼观察颜色直接判定,该方法具有很高的特异性,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型等均无交叉反应;该方法的敏感性高达1fg.应用于临床检测,检测结果与普通PCR一致.结论:建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合基层兽医用于PRV感染的快速检测.

摘要： 本文分离了2013年广东流行的3株猪伪狂犬病毒,对其gB基因进行了序列测定.取来自伪狂犬病发病猪场的46份血清,分别用广东2013毒株Heyuan2013、鄂A株和Bartha株进行微量血清中和试验.核苷酸序列分析表明,2013年广东流行毒株相互之间gB基因核苷酸序列相似性为99.7-100％,而与疫苗株Bartha-K61相似性在97.8-98.0％.这表明2013年这几处发病均为同一毒株流行造成.氨基酸序列比对结果表明,gB基因的N发生17个氨基酸的插入、替换或缺失.微量血清中和试验表明,用3个毒株测得的中和抗体效价呈显著的差异,河源野毒株＞鄂A株＞Bartha.以上结果提示gB基因的变异可能是伪狂犬病毒产生血清学变化的原因之一.

摘要： 2011年以后,从北到南,我国多数养猪地区的许多原本伪狂犬病(Pseudorabies,PR)阴性的猪场逐渐转阳.随后有研究表明,本次流行的伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)毒株相对经典毒株(SC株)而言,多个基因有较大的差异,毒力也更强,且现有的商品化疫苗对其感染的保护力相对更差(通过羊的免疫攻毒试验).中和抗体作为评估疫苗免疫保护水平的一个重要指标，引起了一些养猪企业和科研院所的研究兴趣，他们对不同品牌的PRV疫苗免疫后诱导猪体产生新流行毒株中和抗体的水平及特点展开了一系列的研究。本文将简要介绍三个有代表性的该类研究成果，也将分享此系列研究给人们带来的一些启示，以增进大家对目前不同品牌PRV疫苗对流行毒株感染保护情况及近年来PR流行特点的了解，希望能给各位养猪同仁在疫苗选择及不同感染类型猪场综合防控方面提供一些借鉴。

摘要： 伪狂犬病被国际动物卫生组织(OIE)列为二类传染病,近些年由于伪狂犬病流行呈上升趋势,以及造成的巨大经济损失,许多国家己将伪狂犬病列为了重点防疫并计划最终根除的猪病之一.随着分子生物学发展,人们对伪狂犬病病毒的基因结构、基因功能、检测手段以及疫苗预防方法有了更深入的认识.本文就猪伪狂犬病毒相关方面的研究进行了综述,以期对中国伪狂犬病毒基因及其基因变异的研究提供一定依据,同时结合本实验室对伪狂犬病gE/gB基因建立的多重PCR净化的病原学研究和国家对该病采用gE/gB-ELISA检测血清学净化方法进行了综合,为制定猪伪狂犬病防治及净化提供理论参考.

摘要： 本实验室根据已发表的PRV的gC、gE序列，设计和合成了两对引物，建立了区分PRV变异株和经典株的方法，对2016年期间江苏、河北、山西、山东等省份的大中型猪场送检的35份病料进行PRV检测，检测出9份阳性病料并对其gC、gE序列进行扩增，应用DNAstar序列分析软件，将扩增的序列与GenBank中登录的32个PRV变异株和17个经典PRV株的核苷酸序列进行比对分析，结果显示9个PRV阳性毒株均为PRV变异株。gE基因比对结果显示:所测得的PRV毒株之间核酸序列同源性均很高，gC基因比对结果显示:所测得的毒株与2012年以来的变异株的核昔酸同源性及推测的氨基酸同源性，与经典株的核昔酸同源性及推测的氨基酸同源性相对较低。

摘要： 伪狂犬病又称奥叶基氏病,可引起多种家畜及野生动物的高度接触性、急性传染病.该病传播范围广、流行速度快,每年给世界养猪业带来不可估量的经济损失,是危害养殖业的重要疫病之一.近年来,疫苗免疫后的猪场多有该病发生,因此,分离流行毒株制备疫苗对于预防该病的发生意义重大.本研究通过蚀斑纯化、PCR鉴定、序列分析以及电镜观察表明分离到PRV流行毒株，所分离的毒株病毒滴度达到108.75 TCID50/ml，这与许多文章报道的流行毒株毒力相当，为开发PRV流行株疫苗奠定了基础。

摘要： 本研究采用CRISPR/Cas9技术，结合同源重组，互换Bartha-K61和JS-2012-△gE/gI的gB基园，拯救重组病毒并进行测序。对重组病毒及其亲本毒进行生物学特性分析，致病性分析。以小鼠为动物模型，对重组毒以及亲本毒进行致病性比较分析。梯度剂量攻毒后结果发现，重组病毒与亲本毒相比致病性存在一定差异。以上数据说明，本研究中获得的重组病毒BJB和JBJ可以应用于gB抗原变异的评价分析。

摘要： 本研究采用CRISPR/Cas9技术，结合同源重组，互换Bartha-K61和JS-2012-△gE/gI的gB基园，拯救重组病毒并进行测序。对重组病毒及其亲本毒进行生物学特性分析，致病性分析。以小鼠为动物模型，对重组毒以及亲本毒进行致病性比较分析。梯度剂量攻毒后结果发现，重组病毒与亲本毒相比致病性存在一定差异。以上数据说明，本研究中获得的重组病毒BJB和JBJ可以应用于gB抗原变异的评价分析。

摘要： 本发明公开了一种伪狂犬病毒基因缺失株，该基因缺失株是由野生型伪狂犬病毒PRV株gE基因序列缺失若干个碱基引起阅读框移码突变而构建成的伪狂犬病毒gE基因缺失株。本发明还公开了一种猪伪狂犬病灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：构建伪狂犬病毒gE基因缺失株；训化猪睾丸细胞并将其悬浮培养；接种伪狂犬病毒gE基因缺失株，当细胞有80％‑90％以上病变时，收获细胞培养物，得含上清液的细胞毒液；取上清液测定毒价，将检测合格的细胞毒液置于灭菌容器内灭活；灭活后的细胞毒液与佐剂混合，得猪伪狂犬病灭活疫苗。本发明制备的猪伪狂犬病灭活疫苗，免疫原性好、免疫周期长，免疫后无副反应、安全可靠，能有效保护伪狂犬病毒流行株的感染。

摘要： 本发明公开了一种六基因缺失的猪伪狂犬病毒、猪伪狂犬病疫苗以及制备方法，涉及动物生物制品领域。本发明提供六基因缺失的猪伪狂犬病毒的保藏编号为CGMCC No：16290。该六基因缺失的猪伪狂犬病毒缺失六个基因，致病性被去除，其免疫原性被有效保留，使用该猪伪狂犬病毒制备的疫苗，可诱导机体产生更高级剂量的干扰素，在紧急免疫接种方面具有更好的免疫效果。

摘要： 本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒及其应用和重组猪伪狂犬病活疫苗，涉及动物生物制品领域。本发明提供的重组猪伪狂犬病毒的保藏编号为CGMCC No：16289。该重组猪伪狂犬病毒是经人工改造后得到的，其致病性被去除，缺失了伪狂犬病毒TK、gI、gE、11K和28K基因，并能表达猪流行性腹泻病毒S截短蛋白融合猪CD40L蛋白的融合蛋白。使用该重组猪伪狂犬病毒制备的重组伪狂犬病活疫苗免疫猪后可以使猪获得抵抗猪流行性腹泻病毒和猪伪狂犬病毒攻毒的免疫力。免疫效果较好，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了猪伪狂犬病毒毒株及用其制备的猪伪狂犬病灭活疫苗。本发明从猪场母猪死胎的脑、扁桃体等组织中分离并通过传代适应得到一株猪伪狂犬病毒毒株，其微生物保藏号是：CGMCC No.5013。本发明所分离的病毒株在ST细胞上增殖快、滴度高，可诱导动物产生高滴度中和抗体，具有良好的免疫原性。本发明还公开了一种制备猪伪狂犬病灭活疫苗的方法，包括：培养本发明猪伪狂犬病毒毒株，获得病毒液；加入灭活剂，将病毒液灭活；配制油相和水相，乳化，即得。本发明还对灭活疫苗的各工艺参数进行了优化。免疫保护效力和安全性试验表明，本发明灭活疫苗具有良好的免疫原性及安全性。

摘要： 本发明涉及抗猪伪狂犬病毒技术领域，尤其是涉及辣蓼黄酮乙酸乙酯部分在抗猪伪狂犬病毒中的应用及抗猪伪狂犬病毒的药物。本发明研究发现辣蓼黄酮乙酸乙酯部分具有体外抗猪伪狂犬病毒的效果，FEA通过阻断猪伪狂犬病毒、抑制猪伪狂犬病毒增殖和直接灭活猪伪狂犬病毒这三种作用方式抗PRV。本发明研究发现FEA对PRV有一定抑制作用，主要通过抑制病毒增殖及直接灭活病毒两种方式发挥抗病毒效果，且呈剂量依赖性，对于PK‑15细胞，FEA浓度100μg/mL～200μg/mL范围内抗病毒效果最好。本发明研究发现FEA对PRV感染的PK‑15细胞有较强保护作用，能够减轻细胞病变程度，提高细胞活性，恢复正常的细胞单层现象。

摘要： 本发明公开了一种制备猪伪狂犬病毒gD蛋白的方法及猪伪狂犬病毒亚单位疫苗和应用，所述疫苗包括(1)猪伪狂犬病毒gD蛋白，所述gD蛋白的浓度为30～200μg/头份；(2)猪GM‑CSF蛋白，所述GM‑CSF蛋白的浓度为10～80μg/头份；(3)药学上可以接受的佐剂。制备该疫苗中gD蛋白的方法包括：1)将密码子优化后的猪伪狂犬病毒gD蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪伪狂犬病毒gD蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪伪狂犬病毒gD蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到重组猪伪狂犬病毒gD蛋白。该疫苗具有可工业化生产、成本低、质控容易、免疫效果好等优点。

摘要： 本发明提供了一种猪伪狂犬病毒的融合蛋白、制备方法、应用及包含猪伪狂犬病毒的融合蛋白的疫苗，涉及生物技术领域，本发明提供的猪伪狂犬病毒的融合蛋白包括猪伪狂犬病毒gB蛋白区段、猪伪狂犬病毒gC蛋白区段和猪伪狂犬病毒gD蛋白区段。该融合蛋白是将猪伪狂犬病病毒的gB蛋白区段、gC蛋白区段和gD蛋白区段的基因序列串联表达得到。本发明通过对gB、gC和gD的基因序列进行分析，选取其中抗原性好，易高表达的区域进行串联，得到的融合蛋白具有抗原性好，表达量高的优点，同时兼具广谱性好，制备得到的抗体滴度高并且可以预防多种亚型的猪伪狂犬病毒的优点。

摘要： 本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒及其应用和重组猪伪狂犬病活疫苗，涉及动物生物制品领域。本发明提供的重组猪伪狂犬病毒的保藏编号为CGMCC No：16289。该重组猪伪狂犬病毒是经人工改造后得到的，其致病性被去除，缺失了伪狂犬病毒TK、gI、gE、11K和28K基因，并能表达猪流行性腹泻病毒S截短蛋白融合猪CD40L蛋白的融合蛋白。使用该重组猪伪狂犬病毒制备的重组伪狂犬病活疫苗免疫猪后可以使猪获得抵抗猪流行性腹泻病毒和猪伪狂犬病毒攻毒的免疫力。免疫效果较好，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种六基因缺失的猪伪狂犬病毒、猪伪狂犬病疫苗以及制备方法，涉及动物生物制品领域。本发明提供六基因缺失的猪伪狂犬病毒的保藏编号为CGMCC No：16290。该六基因缺失的猪伪狂犬病毒缺失六个基因，致病性被去除，其免疫原性被有效保留，使用该猪伪狂犬病毒制备的疫苗，可诱导机体产生更高级剂量的干扰素，在紧急免疫接种方面具有更好的免疫效果。

摘要： 本发明公开了猪伪狂犬病毒毒株及用其制备的猪伪狂犬病灭活疫苗。本发明从猪场母猪死胎的脑、扁桃体等组织中分离并通过传代适应得到一株猪伪狂犬病毒毒株，其微生物保藏号是：GCMCC No.5013。本发明所分离的病毒株在ST细胞上增殖快、滴度高，可诱导动物产生高滴度中和抗体，具有良好的免疫原性。本发明还公开了一种制备猪伪狂犬病灭活疫苗的方法，包括：培养本发明猪伪狂犬病毒毒株，获得病毒液；加入灭活剂，将病毒液灭活；配制油相和水相，乳化，即得。本发明还对灭活疫苗的各工艺参数进行了优化。免疫保护效力和安全性试验表明，本发明灭活疫苗具有良好的免疫原性及安全性。