猪瘟病毒

摘要： 近年人们生活水平提高,人们对猪肉的消费水平也随之提高,对猪肉产品绿色健康的品质要求也逐渐升高.由于集约化、一体化养殖规模扩大,猪只相关疾病也逐渐增多.1925年中国首次出现猪瘟疫情,给中国养猪业造成巨大的经济损失.猪瘟兔化弱毒疫苗在中国问世,极大缓解了猪瘟疫情,但仍会出现零星散发的状态.

摘要： 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种猪的高度传染性和致死性病毒病,具有传染性强、流行广泛、发病率和死亡率高等特点,对养猪业危害极大。目前,疫苗免疫仍然是防控猪瘟的重要手段,而抗体检测是免疫效果的主要评价依据。现将猪瘟病毒抗体的主要检测方法:病毒中和试验、正向间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法等进行综述,以期为猪瘟疫苗的免疫效果评价和该病的防控提供理论参考。

摘要： 猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的高度传染性、致死性疾病,是公认对养猪业危害最严重的病毒性疾病之一。自1810年首次报告CSF疫情至今,CSF给世界养猪业造成了重大经济损失,持续威胁着全球猪肉生产和人类的食品安全。世界动物卫生组织将CSF列为最重要的法定报告传染病之一,在我国被列为一类传染病。现阶段CSF临床表现形式复杂多变,有死亡率很高的急性型或死亡率变化不定的亚急性型、慢性型、隐性型及持续感染型等,且常与多种疫病混合感染。目前,疫苗免疫接种仍然是全球大多数国家特别是发展中国家防控CSF的主要手段,CSFV抗原/抗体试验室诊断和临床检测技术的开发和应用对于CSF防控也起到非常重要的作用。随着生物技术的快速发展,更多的CSFV抗原/抗体检测技术和新型疫苗被开发和批准使用。综述CSFV抗原和抗体检测技术、CSFV减毒活疫苗和亚单位疫苗、载体疫苗等新型疫苗开发进展等,以期为更好地防控CSF提供参考。

摘要： 本研究旨在建立一种针对猪瘟病毒测定的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。通过优化一抗二抗的稀释倍数、细胞接毒时间、细胞固定条件等,建立能够测定猪瘟病毒的特异性方法。结果显示,建立的IPMA检测方法最优反应条件为接种CSFV,37°C、5%CO_(2)培养72 h后,用含0.3%H_(2)O_(2)的甲醇溶液固定10 min,5%BSA封闭处理,1:200倍稀释的高免血清作用2 h,以1:1000倍稀释羊抗兔HRP-IgG作为二抗作用1 h,AEC 37°C显色15 min。结论:成功建立能够快速对猪瘟病毒含量测定的方法,该方法特异性强、操作方便,可以在生产过程中对猪瘟病毒的产毒情况进行监测。

摘要： 为建立一种简便、快捷、特异、敏感的猪瘟病毒(CSFV)E2抗体的胶体金检测方法,本研究将E2蛋白用胶体金颗粒标记,作为金标抗原,将E2蛋白及其单克隆抗体包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线(T线)和质控线(C线),组装成检测猪瘟E2蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条。结果显示,该试纸条可在5~10 min完成检测,检测健康猪血清、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、口蹄疫A型病毒(FMDV-A)、口蹄疫O型病毒(FMDV-O)、塞内卡病毒(SVA)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)的阳性血清均无交叉反应;检测CSFV阳性血清的灵敏度可达1∶64(ELISA效价为1∶128);通过对田间101份猪血清样品进行检测,并与商品化猪瘟病毒抗体检测试剂盒的检测结果比较,两者的kappa值为0.92,为高度一致;试纸条在常温(18~25°C)和4°C条件下可分别稳定保存6个月和9个月。上述结果表明,本研究制备的试纸条具有较高的敏感性和特异性,且具有检测快速、操作简便、结果容易判断等特点,因此,对猪瘟现场检测有实际应用价值。

摘要： 猪瘟俗称“烂肠瘟”,是一种具有高度传染性的疫病,是威胁养猪业的主要传染病之一。生猪一旦感染了猪瘟病毒,就会出现高热、腹泻、呕吐、精神萎靡,不加控制会导致病毒扩散,进而导致生猪死亡。因此,[JP2]必须要注重开展生猪的检疫工作,有效地避免猪瘟的传播,减少养殖场的经济损失。本文对生猪检疫中猪瘟的鉴别诊断进行了分析,并且提出了相应的无害化处理方法,以此给相关人员提供相应的参考。

摘要： 为了解我国病死畜禽无害化处理环节病原灭活效果,2020年对11个省(自治区)52个病死畜禽无害化处理中心开展抽样检测、问卷调查。通过对样品进行病毒核酸检测和病毒核酸阳性样品病原活性检测发现,化制法、发酵法、碳化法、酸解法均可灭活非洲猪瘟、猪瘟、口蹄疫和猪繁殖与呼吸综合征等4种疫病病原。通过问卷调查发现,无害化处理中心因厂区布局、管理制度、操作措施等方面问题,存在终端产物被病原二次污染或病原随产物扩散至场外的风险。因此,要规范无害化处理企业建设,加强企业日常监管和无害化处理产物监管,降低病原传出风险。

摘要： 本研究将CSFV Erns和E2基因的主要抗原区进行克隆,构建pET32a-Erns和pET32aEK-E2重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达和纯化,以纯化的rErns、rE2重组蛋白为包被抗原,经条件优化,分别建立CSFV rErns和rE2抗体间接ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,分别获得约为47 kDa和42 kDa的重组蛋白,rErns重组蛋白主要在上清液中存在,rE2重组蛋白主要以包涵体形式存在。Western blot结果显示,纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了Erns蛋白最佳包被量为2.5μg/mL,rE2蛋白最佳包被量为0.625μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为0.25%PVA溶液,HRP标记的兔抗猪IgG二抗最佳稀释度为1∶2000,临界值分别为0.24和0.33。上述方法仅与CSFV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1∶1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%。本研究建立的间接ELISA方法可初步应用于CSFV Erns和E2抗体的检测,鉴别E2亚单位疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪瘟净化工作的实施。

摘要： 猪瘟和猪链球菌病是制约养猪业发展的两种主要传染病,并造成了巨大的经济损失。猪瘟病毒(HCV)属于黄病毒科瘟病毒属。该病毒含有单股RNA,粒子大多为圆形,直径为40~50nm。具有脂蛋白囊膜,在胞质中复制,通过芽生的方法成熟而释放。猪瘟病毒可通过口、鼻、泪腺、唾液及分泌物、尿和粪便排泄出来,易感猪采食了被污染的饲料和饮水或吸入含病毒的飞沫和尘埃时,均可感染发病;而感染猪瘟后,若病程稍长,继发猪链球菌病,则表现出复杂的症状,给诊断工作带来极大的难度。为此,应从多方面给猪场的疫病做进一步的诊断。

摘要： 猪瘟是由ASFV感染引起的一种可致猪类动物极高死亡率的疾病,其本质是动物瘟疫,也是国家联合卫生组织在通过了卫生法研究后,通报的一类疫病。猪瘟病毒在分子结构上是一种呈现双螺旋结构的DNA序列病毒,可以通过蜱虫进行血液传播与感染。在20世纪20年代,此类病毒首次在非洲被发现,并在50年代传播到各国。直到1990年,各个国家正式认识到了此病毒对于人类社会发展与动物生存的威胁,提出了针对此类病毒的防控手段与措施。

摘要： 猪瘟是由猪瘟病毒引起的严重危害全球养猪业的重大传染病.猪瘟病毒为黄病毒科瘟病毒属成员,病毒基因组是一大小为12.3kb的单股正链RNA,由基因组两端非编码区和一个大的开放阅读框组成,后者翻译产生一个多聚蛋白,其在宿主和病毒蛋白酶作用下进一步加工为4个结构蛋白(Core,Erns,El和E2)和8个非结构蛋白(Npro,P7,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A和NS5B).基于E2基因核苷酸序列的系统进化分析将猪瘟病毒分为3个基因型,11个基因亚型(1.1-1.4;2.1-2.3;3.1-3.4).上世纪90年代末,本实验室对收集自中国27个省市的110株猪瘟病毒流行毒株进行了系统进化分析,结果发现中国大陆流行的猪瘟病毒分别属于2.1,2.2,2.3和1.1亚型,其中2.1和2.2亚型毒株占据主导地位.随着时间的推移,中国流行的猪瘟病毒株也逐步发生了变化,近年来绝大部分猪瘟病例由基因2.1亚型毒株引起.2004年,中国台湾学者将基因2.1亚型分为2.1a和2.1b,上世纪90年代末导致欧洲多国猪瘟流行的毒株属于2.1a亚亚型.2012年,蒋大良等在湖南等省市发现有2.1c亚亚型毒株流行.

摘要： 目前中国猪瘟的感染类型主要是亚急性感染及慢性感染,引起仔猪生长迟缓,免疫力低下,但因发病缓慢或不易察觉,给中国的养猪业带来巨大损失,造成这种感染类型的原因有可能是致病力较低的毒株感染.观察中等致病力病毒RNA、病毒蛋白在体内的分布情况可以为猪瘟病毒在体内的复制分布规律提供科学的理论基础.

摘要： 猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的猪的高度接触性、致死性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的法定传染病之一.致病机理的研究是从根本上控制疫病的途径之一,而病毒增殖中RNA的复制和蛋白的合成是CSFV致病机理研究的重要内容之一.因此在RNA水平上研究CSFV的感染及复制机制具有重要的科学价值.本文旨在建立一种新的可视化原位杂交方法,用于研究CSFV RNA在细胞内的定位和分布规律,对阐述CSFV的致病机理具有重要的理论指导依据.

摘要： 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种以高热、出血和高病死率为特征的高度接触性传染病.2017年6月湖北省某规模化养殖场出现哺乳仔猪疑似猪瘟病毒感染.采集其淋巴结、扁桃体、脾脏和肾脏匀浆后提取病毒RNA进行RT-nPCR鉴定为猪瘟病毒阳性,扩增E2片段后连接T载体进行测序分析.

摘要： 研究不同亚群猪瘟病毒在不同细胞上的生长特性及病毒含量的差异性,本研究用3株病毒在PK-15及ST细胞上进行传代培养,收集上清液,用三种不同的方法测定了病毒含量.研究表明,不同亚群猪瘟病毒对宿主细胞有偏嗜性,1.1群毒株在PK-15细胞上的增殖效率显著高于ST细胞,感染后12日,病毒滴度可达5×106TCID50/ml;2.1群毒株在ST细胞上传代较稳定,病毒滴度可达106TCID50/ml;三种病毒含量测定方法存在较好的相关性.

摘要： 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种高死亡率、高接触性急性传染病.最新的研究表明,CSFV被分为11个基因亚型,其中CSFV基因2.1亚型分为10个亚型(2.1a-2.1j),除基因2.1d亚型在印度外,其余9个基因亚型均在中国出现.本研究证明了2014～2016年广东部分地区主要是以CSFV基因2.1亚型(2.1b,2.1c,2.1i,2.1j)为主,为广东近年来的CSFV基因分型、遗传进化提供参考依据.

摘要： 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是危害中国养猪业最重要的传染病之一.自20世纪50年代末推广使用猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗以来,有效控制了CSF在中国的暴发流行,但猪瘟仍在国内不间断流行.开展中国分子流行病学研究,实时跟踪CSFV的变异特征及抗原性变异程度,监测新的CSFV流行毒株的情况和疫苗对流行毒株的有效性,对中国猪瘟防控具有十分重要的意义.

摘要： 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一类高度接触性、致死性传染病,严重危害全球养猪业.研究和了解猪瘟病毒的复制过程对揭示猪瘟病毒的致病机制起着至关重要的作用.随着RNA原位杂交技术的发展,在培养细胞或组织切片中可视化观察猪瘟病毒RNA的分布动态,对RNA水平上研究CSFV的感染及复制机制具有重要的科学价值.本文旨在建立一种新的可视化原位杂交方法,用于研究CSFV RNA在PK15细胞内的定位和分布规律,对阐述CSFV的致病机理具有重要的科学意义.

摘要： 为研究CSFV RNA在体外细胞内的定位和分布规律,本实验采用新型的Quantigene ViewRNA原位杂交法对猪瘟病毒在PK15细胞中RNA复制进行研究,首次建立了CSFV RNA可视化原位杂交检测技术,并对CSFV中等致病力毒株在细胞中的RNA定位分布进行了研究,发现病毒RNA吸附和进入靶细胞的时间早于0.5hpi,观察到CSFVRNA有在细胞核内的生活史.

摘要： 为研究猪瘟病毒RNA在感染组织中的分布动态,本实验采用新型的QuantigeneView RNA原位杂交法对猪瘟病毒组织中RNA进行定位检测,能准确反映病毒RNA在组织中的分布位置,为阐明猪瘟病毒在组织细胞中的复制规律提供理论依据.

摘要： 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光RT‑PCR检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了三套分别针对非洲猪瘟病毒CP530R基因、猪瘟病毒5’‑UTR基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因的特异性引物及Taqman探针和阳性对照，并利用这三套引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的三重荧光RT‑PCR检测体系，可在3～4小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地同时检出非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸，可用于家猪及其相关样本中微量非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸的同时检测。

摘要： 本发明涉及病毒分析检测领域，具体涉及一种消除非洲猪瘟病毒检测假阳性的方法，是在提取待测样品DNA进行病毒粒子DNA检测之前，加入DNase I与待测样品共孵育。本发明利用Dnase I对样品进行预处理，有效区分了游离ASFV核酸和ASFV粒子，避免了实际检测中出现假阳性的现象，提高了检测的准确性。另外，本发明改善了PCR和qPCR的引物，进一步提高了对ASFV粒子的检测限。最后，本发明得到的PCR和qPCR试剂盒，能够快速采样检测，特异性灵敏，价格低廉，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了三套分别针对非洲猪瘟病毒CP530R基因、猪瘟病毒5’-UTR基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因的特异性引物及Taqman探针和阳性对照，并利用这三套引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的三重荧光RT-PCR检测体系，可在3～4小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地同时检出非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸，可用于家猪及其相关样本中微量非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸的同时检测。

摘要： 本发明公开了一种检测非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒的引物组合物及应用。所述引物组合物含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示的引物；所述应用为核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示的引物在制备检测非洲猪瘟和/或猪瘟的试剂盒中的应用。本发明提供了检测非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒的引物，并建立了非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒双重RAA琼脂糖凝胶电泳法的检测方法。通过使用本发明提供的引物对待测样本的基因组DNA和/或cDNA进行重组酶介导的等温扩增，再进行琼脂糖凝胶电泳检测，可快速、准确地检测出是否存在非洲猪瘟病毒和/或猪瘟病毒，具有操作简便、检测效率高等优点，对防控非洲猪瘟和猪瘟以及促进养猪业的发展具有重要的应用价值。

摘要： 本发明提供了非洲猪瘟病毒检测用生物材料、试剂盒和非诊断目的的非洲猪瘟病毒的检测方法，属于分子检测技术领域；所述非洲猪瘟病毒检测用生物材料，包括与非洲猪瘟病毒捕获探针化学结合的AuNPs@ZnFe2O4@COF材料以及负载有非洲猪瘟病毒标记探针和辅助探针的CuO2。本发明的非洲猪瘟病毒检测用生物材料能够特异性结合非洲猪瘟病毒并显色，能够用于检测非洲猪瘟病毒。

摘要： 本发明提供了一种引物探针组及其应用和一种检测非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪丹毒丝菌的试剂盒。本发明提供的试剂盒同时含有非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪丹毒丝菌的引物探针组，6条引物及3条探针同时加入到一个反应体系中，且互不干扰，使用本发明的试剂盒检测非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪丹毒丝菌时，一次扩增反应可完成三种病原筛查。对非洲猪瘟病毒、猪丹毒丝菌、猪瘟病毒的最低检测限均为24.9copies/μL，具有很好的灵敏性，而且具有良好的特异性，稳定性好，且操作简便。

摘要： 本申请涉及病毒检测的技术领域，具体公开了一种非洲猪瘟病毒P32重组蛋白、及用于非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测的试剂盒。该非洲猪瘟病毒P32重组蛋白用于特异性结合非洲猪瘟病毒抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示；该试剂盒包括所述非洲猪瘟病毒P32重组蛋白或包括包被所述非洲猪瘟病毒P32重组蛋白的酶标反应板；该试剂盒还包括酶结合物、标准阳性对照品、标准阴性对照品、样本稀释液、浓缩洗液、底物溶液、终止液；以及该试剂盒的检测方法、判定方法和用途。本申请提供的非洲猪瘟病毒P32重组蛋白及其试剂盒，能够用于非洲猪瘟病毒抗体的检测。

摘要： 本发明提供了一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，包括含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒；VP73的上游引物，VP73的下游引物，β‑Actin的上游引物，β‑Actin的下游引物；VP73的探针，β‑Actin的探针。该试剂盒操作简便，价格低廉，耗时短，具有较高的灵敏性和特异性，具有广阔的市场前景和商业价值。本发明还提供了一种检测非洲猪瘟病毒方法，以含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒作为阳性对照，以猪肌动蛋白基因β‑Actin作为内参对照基因；从检测的最初阶段进行监控，能够监测整个病毒检测过程，完美的体现了内参质控的作用，增加了检测结果的准确性。

摘要： 本发明公开了一种用于猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒双重一步直扩实时荧光定量RT‑PCR检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒包含核酸提取液、2×Direct qRT‑PCR Mix、酶混合液、阴性对照，阳性对照以及引物和探针的混合物，其中所述的引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示，所述的探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示探针的5’端分别标记荧光报告基团HEX和FAM；所述探针的3’端标记小沟结合物(MGB)和荧光淬灭基团(BHQ‑1)。本发明可实现在一个反应中同时对猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒进行快速鉴别检测，具有特异性高，稳定性好，操作简便的优点。不仅适用于科研单位定量分析，而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种探针组合物，其是用于对猪瘟野毒及其疫苗、非洲猪瘟病毒、猪非典型瘟病毒进行鉴别诊断的探针组合物；本发明还涉及包含该组合物的基因芯片和试剂盒。