流行毒株

摘要： 2021年,如果要让大家说出一个关键词的话,很多人可能会选“疫苗”。自新冠疫苗获批紧急使用以来,全国新冠疫苗接种超过了29亿剂次,新冠疫情动态清零的举措让我国再次成为全球抗疫的先进。但新冠疫情仍在全球蔓延,似乎有愈演愈烈之势。在“德尔塔”之后,流行毒株进入了“奥密克戎”时代,其传染性更强,传播速度更快,深深影响、改变了世界的政治、经济和生活。

摘要： 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性肠道传染病。为了解山东地区PEDV的遗传进化趋势,对2020—2021年收集的疑似猪流行性腹泻的临床病料进行RT-PCR检测。随后将处理好的病料上清液接种于Vero细胞进行PEDV病毒分离,并利用间接免疫荧光(IFA)进行验证,成功分离到一株PEDV毒株,命名为QH-202105。将分离株传代培养至第10代,提取RNA后进行扩增并全基因组测序,结合NCBI下载的参考序列对分离株的全基因组和S基因进行核苷酸同源性比对、系统发育树构建分析,结果显示,分离株与美国分离株USA/Colorado/2013核苷酸同源性最高,为99.1%,与CHM2013株同源性最低,为96.5%。经S基因氨基酸序列分析显示,分离株QH-202105在S基因的N端有60多处突变,两处氨基酸插入(包括第59~62位氨基酸的QGVN 4个氨基酸插入,第145位氨基酸N的插入)和两处氨基酸缺失(第115~118氨基酸的缺失,第167~168氨基酸的缺失)。进化树分析结果显示,分离毒株QH-202105为G2基因群,与CH/HNAY/2015和CH/ZJCX-1/2012亲缘关系最近,属同一进化分支。在此基础上,应用PROVEAN对QH-202105的S蛋白突变氨基酸进行功能预测,结果显示,在1361处(G→C)被判定为“Deleterious”,可以推测此处的突变对病毒的侵袭力可能存在间接影响。研究结果可为我国PEDV变异株的流行情况及防控提供参考。

摘要： 疫情汹涌多国仍采取线上授课一波未成,一波已作。近日,全球新冠肺炎疫情再迎新高峰。德尔塔毒株的肆虐尚未平息,含有大量突变、可能具备高传播性及免疫逃逸特征的变异毒株“奥密克戎”又席卷各地。自2021年底开始,奥密克戎已陆续成为西班牙、法国、英国、美国等多国主要流行毒株。2022年1月6日世界卫生组织举行的新冠肺炎疫情例行发布会上,世界卫生组织总干事谭德塞表示,在奥密克戎和德尔塔变种的推动下,全球感染病例飙升至创纪录水平,将出现一场“海啸”,多国医疗系统不堪重负,各国政府正在努力遏制已造成全球548万人死亡的新冠病毒。

摘要： 一、主要问题1.疫苗选择不当疫苗种类众多,如禽流感病毒血清型较多,不同血清型交叉保护性差,而养殖户在选择疫苗时往往机械照搬,不考虑本地流行毒株,导致免疫失败。

摘要： 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性肠道传染病,以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征,日龄越小,症状越严重,死亡率甚至高达90%~100%,对养猪业造成严重的经济损失。2010年以来中国多地发生PED,主要原因为毒株发生了变异,分析发现,流行毒株与经典的CV777毒株S和M基因有较大变异,提示疫苗使用需选择流行毒株制备的疫苗。本文针对广东某猪场在2022年5月份暴发PED的典型案例进行总结分析如下。

摘要： 为评估猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)灭活疫苗(HN1201-ΔgE株)免疫后对PRV流行毒株和经典毒株的保护效果,本研究对试验猪分别免疫PRV灭活疫苗(HN1201-ΔgE株)和PRV活疫苗(Bartha-K61),免疫后第0、7、10、14、17、21、24和28天采血测定PRV gB抗体,并分别使用PRV流行毒株HN1201株和经典毒株闽A株测定免疫后第0、7、14、21和28天血清的中和抗体水平,于免疫后第28天分别使用HN1201株和闽A株攻毒并观察,之后测定体温,测定攻毒后第7和14天PRV gE抗体,及攻毒后0～8 d的排毒情况.结果显示,HN1201-ΔgE免疫组较Bartha-K61免疫组gB抗体和中和抗体产生早,且抗体水平较高.两个免疫组试验猪在攻毒后虽然均无明显临床症状,且免疫组织化学检测(IHC)组织中的病毒抗原均为阴性,但HN1201-ΔgE免疫组试验猪脏器未见任何病理损伤,Bartha-K61免疫组试验猪部分脏器具有病理损伤.与未免疫对照组相比,2个免疫组试验猪在HN1201株和闽A株攻毒后,gE抗体转阳时间晚且排毒率低,HN1201-ΔgE免疫组gE抗体水平整体均低于Bartha-K61免疫组,攻毒后排毒检测中,Bartha-K61免疫组于2个毒株攻毒后第3～5天可检测到排毒,而HN1201-ΔgE免疫组全程未检测到排毒.研究结果表明,灭活疫苗(HN1201-ΔgE株)对PRV流行毒株和经典毒株均可提供完全保护.

摘要： 为评价H9N2亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗对流行毒株的免疫保护效果,将禽流感病毒HF株灭活疫苗和商品化鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗分别以0.3 mL/只接种21日龄SPF鸡,3周后采血测定HI抗体效价,并用2018年-2019年分离的4株H9亚型禽流感病毒分别进行攻毒.结果显示,免疫后21 d,HF株灭活疫苗免疫组HI抗体效价达到9.1 log2以上,商品化疫苗HI抗体效价几何平均值则为6.3 log2以内.4株H9亚型禽流感病毒流行毒株以107.0 EID50的剂量静脉攻毒后,HF株灭活疫苗免疫组可抵抗流行毒株的攻击,保护率为100％;而商品化疫苗对流行毒株的攻毒保护率仅为40％～60％.说明H9N2亚型禽流感病毒HF株灭活疫苗具有较强的免疫原性,能使免疫鸡抵抗流行毒株的攻击.

摘要： [目的]本试验旨在研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株JS2013诱导Vero细胞凋亡的相关机制。[方法]用添加5μg·mL^(-1)胰酶的Vero细胞成功扩增PEDV JS2013毒株后,采用倒置显微镜、间接免疫荧光、流式细胞术、Hoechst染色、细胞活性计数(CCK-8)以及Western blot等方法,检测Vero细胞感染JS2013后产生的病变、凋亡细胞比例、细胞活性、凋亡相关蛋白的表达等。[结果]PEDV JS2013感染Vero细胞后6 h即有少量病毒进入细胞,24 h后出现典型合胞体病变,PEDV JS2013诱导Vero细胞凋亡呈剂量依赖性,并且显著抑制Vero细胞活性。Hoechst染色后可以观察到明显的凋亡小体。Western blot结果表明,感染PEDV JS201348 h后激活Caspase 8和Caspase 9,60 h左右激活Caspase 3。[结论]PEDV流行毒株JS2013可以诱导Vero细胞凋亡。

摘要： 本刊讯新冠变异病毒德尔塔毒株在全球加速传播,多个国家和地区疫情卷土重来甚至再现疫情高峰。据世界卫生组织的最新数据,截至7月25日的一周已在至少132个国家和地区出现,导致新冠确诊病例和死亡病例激增。世界卫生组织先前预判,德尔塔毒株传播力强,将在未来数月成为全球主要流行毒株。

摘要： 旧患未除,新疾又起。近日,世界各国正先后经历着新冠肺炎疫情的又一个高峰。在此次疫情的传播中,德尔塔变异毒株成为疫情蔓延的主因之一。德尔塔是新冠病毒变异毒株,最早于2020年10月出现在印度,被确定为印度第二波疫情的主要驱动因素之一。随后,德尔塔变体进一步发生变异,衍生出“德尔塔+”或AY.1变体。2021年7月2日,世卫组织举行新冠肺炎疫情例行发布会,世卫组织总干事谭德塞表示,德尔塔变异毒株正在很多国家成为流行毒株。至2021年7月29日,据世卫组织报道,德尔塔新冠变种病毒已经传播至世界132个国家和地区。

摘要： 根据GenBank公布的CSFV标准参考毒株全基因组序列,设计11对引物,应用RT-PCR方法分别对11个片段进行扩增福建流行毒株CN-FJLY的全基因组,与参考毒株进行序列分析比较.结果表明福建流行毒株CN-FJLY基因组全长为12296bp,与参考毒株SXCDK、HEBZ、GXWZ02、HNLY-2011和Zj0801的全基因组核苷酸同源性为93.0％～97.0％,而与1.1亚群的中国强毒Shimen、疫苗株HCLV全基因组核苷酸同源性为84.4％～85.3％.基于全基因组及E2基因构建的遗传进化树分析结果表明福建流行毒株CN-FJLY属于2.1b亚群,与Shimen株、HCLV疫苗株亲缘关系较远.与HCLV相比较CN-FJLY基因组变异较大的是5'UTR、E-、E2、P7、NS2、NS5A、NS5B和3'UTR.综上表明福建省猪瘟流行毒株正在向远离疫苗株的方向变异.

摘要： 本文对PRV新流行毒株基因组特点，致病力，流行情况和防控进展进行总结，从而为更好地防控PRV新流行毒株提供参考。

摘要： 2011年以后,从北到南,我国多数养猪地区的许多原本伪狂犬病(Pseudorabies,PR)阴性的猪场逐渐转阳.随后有研究表明,本次流行的伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)毒株相对经典毒株(SC株)而言,多个基因有较大的差异,毒力也更强,且现有的商品化疫苗对其感染的保护力相对更差(通过羊的免疫攻毒试验).中和抗体作为评估疫苗免疫保护水平的一个重要指标，引起了一些养猪企业和科研院所的研究兴趣，他们对不同品牌的PRV疫苗免疫后诱导猪体产生新流行毒株中和抗体的水平及特点展开了一系列的研究。本文将简要介绍三个有代表性的该类研究成果，也将分享此系列研究给人们带来的一些启示，以增进大家对目前不同品牌PRV疫苗对流行毒株感染保护情况及近年来PR流行特点的了解，希望能给各位养猪同仁在疫苗选择及不同感染类型猪场综合防控方面提供一些借鉴。

摘要： 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是危害中国养猪业最重要的传染病之一.自20世纪50年代末推广使用猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗以来,有效控制了CSF在中国的暴发流行,但猪瘟仍在国内不间断流行.开展中国分子流行病学研究,实时跟踪CSFV的变异特征及抗原性变异程度,监测新的CSFV流行毒株的情况和疫苗对流行毒株的有效性,对中国猪瘟防控具有十分重要的意义.

摘要： 伪狂犬病又称奥叶基氏病,可引起多种家畜及野生动物的高度接触性、急性传染病.该病传播范围广、流行速度快,每年给世界养猪业带来不可估量的经济损失,是危害养殖业的重要疫病之一.近年来,疫苗免疫后的猪场多有该病发生,因此,分离流行毒株制备疫苗对于预防该病的发生意义重大.本研究通过蚀斑纯化、PCR鉴定、序列分析以及电镜观察表明分离到PRV流行毒株，所分离的毒株病毒滴度达到108.75 TCID50/ml，这与许多文章报道的流行毒株毒力相当，为开发PRV流行株疫苗奠定了基础。

摘要： 将H9亚型禽流感灭活疫苗(WD株)免疫21日龄SPF鸡,免疫后3周采血测定AI(H9)HI抗体,并用WD株及2004～2012年分离的8株H9亚型禽流感病毒对免疫鸡进行攻毒试验。结果显示试验鸡免疫三联灭活苗后21d,WD株作为HI抗原测定其H9HI抗体效价可达8.4 log2,可抵抗9个不同H9亚型禽流感流行毒株的攻击,总攻毒保护率达91.1％(41/45).以WD株制备的灭活苗具有良好的免疫原性,能抵抗不同年代不同地区分离的H9亚型禽流感流行毒株的攻击。

摘要： 为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)流行毒株的遗传变异情况和发展趋势,通过RT-PCR方法,对2015年1-8月份采自广西省各规模猪场的疑似样品进行PRRSV检测,并对阳性病料进行基因测序分析.结果显示:84份疑似样品中有40份检测为阳性,阳性率为47.6％,通过完整的ORF5基因序列遗传进化分析表明,广西地区流行毒株主要为美洲型PRRSV,且均与高致病性PRRSV高度同源.广西省各规模猪场毒株与2015年7月份采自广东肇庆某规模猪场的PRRSV分离毒株间的同源性均较低,经序列对比发现,广东肇庆分离毒株与美洲流行毒株NADC30高度同源.结果表明,广西地区主要流行毒株为美洲型高致病性PRRSV毒株,且与美洲流行毒株NADC30同源性较低,但广东地区已出现美洲流行毒株NADC30,提示广西地区需加强对PRRSV流行及变异的监测,以及采取有效防控策略的必要性.

摘要： 本文为了监测鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(LaSota 株+M41 株+SS/94株)对H9亚型禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果,采用H9亚型禽流感病毒SS/94株及2009-2010年现地分离的3株H9亚型禽流感病毒对已免疫上述三联灭活苗的SPF鸡进行攻毒试验。结果显示,试验鸡以0.3 ml/只的剂量免疫三联灭活苗后21 d,其H9亚型禽流感病毒的HI抗体效价可达8～111og2,此抗体水平可抵抗2×106EID50的H9亚型禽流感病毒SS/94株、BLCN09株、WDZ09株、YT10株的攻击,攻毒保护率均达90%(9/10)以上。可见,以SS/94株作为禽流感疫苗抗原制备的三联灭活苗具有良好的免疫原性,能使免疫鸡抵抗2009-2010年期间现地分离的多株H9亚型禽流感病毒的攻击。

摘要： 为监测国内鸡马立克氏病病毒流行毒株毒力变异情况，分离MDV毒株，并研究其致病性。通过比较J-1株和分离毒株对BWEL-SPF鸡及HVT疫苗免疫和HVT/SB1双价疫苗免疫的SPF鸡的感染性试验，发现分离毒株HC135比J-1株的毒力强，阐明分离毒株向更强毒力演化。

摘要： 2012年以来,中国多地免疫伪狂犬基因缺失苗的猪场爆发伪狂犬病.为了解新流行PRVFJ-2015株的主要免疫相关基因序列遗传进化情况,本研究参照GenBank已公布的PRV全基因序列设计了4对特异性扩增引物,并将扩增片段进行克隆及测序分析.结果显示gB、gC及gD基因氨基酸序列与其他来源的分离株同源性分别为96.5％-100％、92.1％-100％和97.3％-100％;遗传进化关系表明PRV FJ-2015毒株gB、gC基因在毒株分离国家与分离时间具有一定遗传演化关系,gD基因具有福建区域性遗传演化关系;免疫相关基因的氨基酸序列均存在一定程度的差异,可能影响了病毒抗原性,是造成疫苗抗体不能完全中和病毒的原因之一.

摘要： 本发明涉及猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株鉴别诊断用引物及其检测试剂盒，属于生物技术领域。以总RNA为模板，利用鉴别诊断猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的检测引物进行RT‑PCR扩增，反应结束后根据扩增片段的数量和分子量大小判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，为猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的鉴别诊断提供了保证。

摘要： 本发明涉及猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株鉴别诊断用引物及其检测试剂盒，属于生物技术领域。以总RNA为模板，利用鉴别诊断猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的检测引物进行RT-PCR扩增，反应结束后根据扩增片段的数量和分子量大小判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，为猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的鉴别诊断提供了保证。

摘要： 本发明公开了一种能鉴别猪瘟疫苗毒株和流行毒株反转录-复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒，由反转录混合液、一扩混合液、二扩混合液、阴性对照和阳性对照组成。还公开了该试剂盒的检测方法。该方法针对猪瘟病毒NS5B基因设计5条引物，S1、S2为疫苗毒株与流行毒株外扩通用引物，S3、S4为疫苗毒株与流行毒株内扩通用引物，S5为疫苗株内扩特异性引物。经过引物浓度、聚合酶浓度、退火温度等优化，建立了鉴别诊断方法。本发明方法灵敏度高，特异性好，既能检测出流行毒株感染，又能判断是否是疫苗接种阳性，结果直观准确，适用于大范围猪瘟疫情普查诊断，避免误诊造成的损失。

摘要： 本发明提供一种鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和/或流行毒株一步法RT‑PCR诊断试剂盒，包括20μL RT‑PCR一步法酶、250μL酶缓冲液、300μL RNase Free dH2O、40μL混合引物、20μL阳性对照、20μL阴性对照、80μL DL2000及25μL 6×Loading Buffer；该试剂盒，与现有技术相比，具有操作简单，反转录与PCR扩增一步完成，减少了反应时间，避免了模板RNA的降解，提高了检测的敏感性等优点。该引物对猪传染性胃肠炎病毒、猪A群轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒和猪捷申病毒的扩增结果均为阴性，该方法最低能检出1pg的猪流行性腹泻病毒疫苗弱毒株和1pg的流行毒株模板，本试剂盒能广泛应用于基层检测机构，对猪场流行性腹泻病毒病的早期鉴别诊断、防控及净化有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种能鉴别新城疫Lasota疫苗毒株和基因Ⅶ型流行毒株复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒，由反转录混合液、一扩混合液、二扩混合液、阴性对照和阳性对照组成。该试剂盒针对新城疫病毒F基因设计6条引物，经过引物浓度、聚合酶浓度、退火温度等优化，建立了鉴别诊断方法。本发明方法灵敏度高，特异性好，既能检测出目前流行的新城疫基因Ⅶ型流行毒株感染，又能判断是否是Lasota疫苗接种阳性，结果直观准确，适用于大范围新城疫疫情普查诊断，避免误诊造成的损失。

摘要： 本发明公开了一种能鉴别猪瘟疫苗毒株和流行毒株反转录-复合套式聚合酶链式反应诊断试剂盒，由反转录混合液、一扩混合液、二扩混合液、阴性对照和阳性对照组成。还公开了该试剂盒的检测方法。该方法针对猪瘟病毒NS5B基因设计5条引物，S1、S2为疫苗毒株与流行毒株外扩通用引物，S3、S4为疫苗毒株与流行毒株内扩通用引物，S5为疫苗株内扩特异性引物。经过引物浓度、聚合酶浓度、退火温度等优化，建立了鉴别诊断方法。本发明方法灵敏度高，特异性好，既能检测出流行毒株感染，又能判断是否是疫苗接种阳性，结果直观准确，适用于大范围猪瘟疫情普查诊断，避免误诊造成的损失。

摘要： 本发明公开了一种区分马传染性贫血中国弱毒疫苗株与美洲流行毒株的方法，包括：(1)从感染了待检测毒株的马外周血白细胞中提取DNA；(2)以该DNA为模板，以P1/P3为引物进行第一轮PCR扩增；(2)以P2/P3为引物进行第二轮PCR扩增；(3)PCR产物进行双酶切分析；如果酶切出了340bp，190bp和150bp片段，则该检测毒株为美洲流行毒株；如果仅切出了340bp片段，则该检测毒株为中国弱毒疫苗株。本发明方法可以对阿根廷代表毒株感染马和中国疫苗免疫马进行准确的区分，可以灵敏特异的检测感染马传贫病毒的马匹，能够鉴别到0.2ng细胞染色体DNA中的病毒特异性DNA片段，而且只用5－7小时就可以快速的进行区分。

摘要： 本发明公开了鉴别猪流行性腹泻病毒疫苗株与流行毒株的荧光定量PCR引物对和探针、试剂盒及其应用。本发明筛选获得特异性好的2条探针和1对特异性引物，使用一步法扩增试剂进行扩增，建立了一种可快速鉴别诊断PEDV疫苗株与流行毒株的荧光定量RT‑PCR检测试剂盒，只扩增猪流行性腹泻病毒疫苗株和流行株，而对猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒均无非特异性扩增，保证检测结果的准确性。本发明所建立的检测试剂盒具有较高灵敏度和特异性，同时具有较好的批内和批间检测的稳定性和准确性，可以实现PEDV毒株类型精准鉴定，符合检测标准，能广泛应用于PEDV临床监测和疾病诊断。

摘要： 本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HBXT/2018，属于病毒疫苗技术领域，所述病毒毒株PEDV CH/HBXT/2018保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.16215。本发明提供了包括所述病毒毒株S蛋白的基因序列的重组载体以及所述重组载体的构建方法。本发明所述病毒毒株位于G2a亚群，与中国疫苗经典毒株CV777分属于不同的群，亲缘关系更接近2010年后爆发的猪流行性腹泻疫情中分离获得的猪流行性腹泻病毒毒株，与现有流行毒株存在的基因型差异较小，可应用于制备猪流行性腹泻疫苗，免疫效果好。

摘要： 本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017，属于病毒疫苗技术领域，所述病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.16216。本发明提供了包括所述病毒毒株基因组的重组载体以及所述重组载体的构建方法。本发明所述病毒毒株位于G2b亚群，与中国疫苗经典毒株CV777分属于不同的群，与AJ1102和CHGD‑01毒株亲缘关系较近，亲缘关系更接近2010年后爆发的猪流行性腹泻疫情中分离获得的猪流行性腹泻病毒毒株，与现有流行毒株存在的基因型差异较小，可应用于制备猪流行性腹泻疫苗，免疫效果好。