荧光定量PCR

摘要： 灰黄青霉D-756是1株灰黄霉素高产突变菌株,从转录水平揭示其灰黄霉素合成关键基因的表达情况,有助于了解其基因功能进而对菌株进行定向遗传改造。利用Primer3和Primer-BLAST设计引物,经qPCR验证,引物的扩增产物单一且扩增效率在90%~110%范围内,通过geNorm软件对TUBB、HISH3、RPS24和28S rRNA 4个候选内参基因的表达稳定性进行评价,选择评价结果中较为稳定的候选基因TUBB和RPS24作为内参基因,构建了一个适用于灰黄青霉D-756的qPCR体系。并用该体系检测灰黄青霉D-756中灰黄霉素合成关键基因gsfA在不同培养时间下的相对表达情况,为下一步研究灰黄霉素合成基因簇中各基因功能提供一个有力的工具。

摘要： 为探究光照强度对紫叶稠李花色素苷合成途径上关键基因及转录因子的影响,对紫叶稠李进行80%遮光处理,通过无参转录组测序,分析差异基因表达量、功能及富集通路情况。结果表明:差异基因主要富集在类黄酮生物合成途径。对花色素苷合成途径相关的差异基因进行荧光定量PCR验证,结果显示,相对全光照条件下,遮光处理下PAL、CHS、CHI、F3H、F3’H、DFR、ANS、UFGT基因表达量下调,MYB6、MYB10转录因子表达量相对上调。

摘要： 旨在建立H3亚型犬流感病毒(canine influenza virus, CIV)荧光定量PCR方法,利用该方法对病毒在犬肾细胞(MDCK细胞)上增殖特性进行研究。根据CIV的血凝素(HA)片段上的HA2基因保守区设计并合成特异性引物,构建CIV-HA重组质粒作为标准品,经过条件优化,建立H3亚型CIV荧光定量检测方法,对其敏感性、特异性和重复性进行评价,并将该方法应用于CIV在MDCK细胞上增殖特性的研究,与病毒滴度(TCID;)进行相关性分析。结果显示:该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,最低检测线可以达到20.8 copies/μL,与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、H1亚型流感病毒不发生交叉反应,批间、批内重复性良好(变异系数<1.1%)。将该方法应用于检测CIV在MDCK细胞上的增殖特性,与细胞培养法测定病毒滴度相比,二者具有较好的相关性。本研究初步建立了H3亚型CIV荧光定量检测方法,该方法可为CIV的增殖特性研究提供工具。

摘要： 为准确快速地检测出线粒体DNA拷贝数,建立新型多重荧光定量PCR(polymerase chain reaction)方案。该方案以高拷贝基因(300拷贝)替代以往单拷贝基因作为内参,减小线粒体拷贝数与内参基因拷贝数差异,同时,该方案在单管中检测线粒体和内参基因的拷贝数,消除了在不同管中检测内参基因和目的基因时的孔间差。此外考察了不同DNA抽提方法对线粒体DNA拷贝数检测结果的影响,并且构建质粒标准品(含有内参基因和线粒体DNA区段)。采用该方案检测100例中国人外周血样本线粒体DNA拷贝数,发现线粒体DNA拷贝数与年龄呈现负相关。该新型多重荧光定量PCR方案适用于大规模人群中线粒体DNA拷贝数的检测。

摘要： Class Ⅱ Transactivator(CIITA)作为重要的MHCⅡ类分子反式激活因子在抗原递呈细胞的成熟和功能实现过程中发挥关键作用,为建立一种快速检测猪源CIITA基因的方法,本研究根据GenBank中猪源CIITA基因序列设计引物,从猪肺泡巨噬细胞的总cDNA中扩增CIITA基因,并克隆到pCold-TF载体中获得重组质粒pCold-TF-CIITA。利用重组质粒pCold-TF-CIITA作为标准品建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。试验结果显示:该方法在1.68×10^(1)~1.68×10^(7) copies/μL范围内呈现出良好的线性关系,检测灵敏度可达16.8 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1%。利用该方法对不同细胞中的CIITA基因进行检测,结果显示该方法仅能够检测到猪源细胞中的CIITA基因。本试验结果表明,利用pCold-TF-CIITA作为标准品建立的CIITA基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于CIITA基因的定量检测。

摘要： 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)作为一种新型的猪肠道腹泻病毒,建立快速有效的检测手段十分必要。本研究根据PDCoV N基因中的保守序列设计了1对特异性引物,PCR扩增后克隆至pEASY-Blunt Zero载体,构建了阳性质粒pEASY-PDCoV/N。以阳性质粒pEASY-PDCoV/N为模板,建立了检测PDCoV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并对其敏感性、特异性和重复性等进行了优化与验证。结果显示,C_(1)值与标准模板在5.83×10^(7)~5.83×10^(1)copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.999,线性方程的斜率为-3.323,最低检测限度为5.83×10^(1)copies/μL。该方法特异性和重复性均较好,对PEDV、PRV、TGEV等病毒均未出现检测信号,批内和批间变异系数分别小于1%和2%。利用建立的PDCoV荧光定量PCR检测方法对60份猪腹泻样品进行核酸检测,阳性率为18.3%,比普通PCR检出率高6.7%。结果表明,该方法可适用于临床快速检测PDCoV,为该病的预防和控制提供技术支持。

摘要： 目的:建立食物中毒样品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli)的检测方法,并对分离的大肠埃希氏菌进行生化鉴定和药敏分析。方法:根据E. coli特异性基因设计引物和探针序列,建立荧光定量PCR检测体系,并使用VITEK系统对分离的E. coli进行生化鉴定和药敏分析。结果:成功建立了荧光定量PCR检测E. coli的方法,方法检测灵敏度高(LOD为10 CFU·mL^(-1))、特异性强,应用该方法对10份食物中毒样品中的E. coli进行检测,发现4份阳性样本,纯培养后获取4株E. coli,进一步的VITEK生化鉴定结果表明这4株分离株为E. coli,药敏分析结果显示4株E. coli分离株均表现为多重耐药株。结论:本研究建立的荧光定量PCR能够灵敏、准确地检测食物中毒样品中的E. coli,且通过生化鉴定和药敏分析掌握食物中毒样品中E. coli的生化特征,为预防和控制E. coli引发的食物中毒提供了科学依据。

摘要： 为褐飞虱Nilaparvata lugens(Stal)的绿色防控提供理论参考依据,于2011年和2012年在调查了浙江富阳不同品种稻田褐飞虱和蜘蛛的发生密度后,利用荧光定量PCR分子探针技术分析了9科27种3807头蜘蛛对褐飞虱的捕食作用。研究结果表明,在水稻Oryza sativa L.不同生育期,稻田总的褐飞虱和蜘蛛密度等参数值均随调查时间呈规律性变化,且在调查时间点间出现了显著性差异(P<0.05);各科蜘蛛对褐飞虱的捕食阳性率均随水稻生育期的发展呈增加趋势,整体上,狼蛛科Lycosidae、皿蛛科Linyphiidae、球腹蛛科Theridiidae、肖蛸科Tetragnathidae、跳蛛科Salticidae和园蛛科Araneidae捕食率在DAT21,DAT35和DAT77,DAT91之间有显著性差异(P<0.05);2012年两品种稻田的褐飞虱和蜘蛛密度等参数值均显著高于2011年的值,两年间汕优63(SY63)稻田的褐飞虱和蜘蛛密度均显著高于IR64的密度;2012年各科蜘蛛对褐飞虱的捕食阳性率显著高于2011年的值(P<0.05),且狼蛛科和球腹蛛科对褐飞虱的捕食阳性率在两品种间存在显著性差异(P<0.05);稻田4种蜘蛛优势种拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata(B9senberg&Strand)、八斑球腹蛛Theridion octomaculatum(Boes.et Str.)、食虫瘤胸蛛Oedothorax insecticeps(Boes.et str.)和锥腹肖蛸Tetragnatha maxillosa(Thoren)的捕食阳性率均随褐飞虱种群密度的增加而增加,该捕食功能反应曲线可用非线性模型P=aN/(1+bN)拟合;除锥腹肖蛸外,其它3种的捕食功能反应曲线均呈饱和状态;拟环纹豹蛛捕食褐飞虱的DNA残留量显著高于八斑球腹蛛、锥腹肖蛸和食虫瘤胸蛛的残留量(P<0.05)。本研究结果充分说明稻田各蜘蛛类群对不同生育期、不同品种水稻的褐飞虱均具有较强的捕食作用,是生物防治策略中的重要因素,应加强田间蜘蛛的保护工作和增强自然天敌的控害功能。

摘要： 大肠埃希菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7,E.coli O157∶H7)作为一种食源性致病菌,其分布广泛、危害性大。为了研制一种基于E.coli O157∶H7的既能实现快速、简单和灵敏检测,又能够实现常温储存及运输的试剂盒,本研究利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术,结合真空冷冻干燥技术,研制了保留核酸检测性能、易于常温储存及运输、减少气溶胶污染的E.coli O157∶H7荧光定量冻干检测试剂盒。研制的试剂盒采用冻干技术保留了核酸扩增试剂的检测性能,复水后,在Taq DNA聚合酶的作用下通过循环扩增实时监测荧光信号的积累,实现荧光定量检测,所提出的方法在40 min内可检测到2.1 copies/μL的eaeA基因。该技术为E.coli O157∶H7的检测提供良好的研究基础和技术参考,填补了市场灵敏度高、便于储存的E.coli O157∶H7检测试剂盒的缺乏。

摘要： 【目的】液泡型ATP酶(vacuolar-type proton ATPase,V-ATP酶)维持着适合真核细胞内膜室生化功能的pH环境。本研究旨在克隆草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda V-ATP酶V_(1)结构域E、F、G和H亚基基因,并对其时空表达谱进行分析。【方法】采用RT-PCR技术克隆了草地贪夜蛾V-ATP酶E、F、G和H亚基基因,通过实时荧光定量PCR技术测定了其在草地贪夜蛾不同发育阶段的表达动态。【结果】V_(1)结构域E、F、G和H亚基在鳞翅目昆虫之间具有高度保守性,且均与斜纹夜蛾Spodoptera litura同源性最高。E~H亚基在草地贪夜蛾所有发育时期均有表达,且都出现了在卵期和蛹期表达量低,雄成虫中高量表达的现象,同时不同的亚基在不同发育阶段表达量又有差异。【结论】本研究克隆了草地贪夜蛾V-ATP酶E、F、G和H亚基基因,明确了其在不同发育阶段的表达水平,为进一步研究基因功能以及筛选分子靶标奠定了基础。

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用. 方法：比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV.考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测. 结果：MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为109～104拷贝/μl,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μl,特异性强.应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染.阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV(NC_001630.1)序列比对,一致率为96％. 结论：建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,为同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒提供了方法.

摘要： 目的：建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用. 方法：比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV.考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测. 结果：MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为109～104拷贝/μl,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μl,特异性强.应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染.阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV(NC_001630.1)序列比对,一致率为96％. 结论：建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,为同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒提供了方法.

摘要： 目的：建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用. 方法：比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV.考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测. 结果：MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为109～104拷贝/μl,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μl,特异性强.应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染.阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV(NC_001630.1)序列比对,一致率为96％. 结论：建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,为同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒提供了方法.

摘要： 目的：建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用. 方法：比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV.考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测. 结果：MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为109～104拷贝/μl,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μl,特异性强.应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染.阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV(NC_001630.1)序列比对,一致率为96％. 结论：建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,为同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒提供了方法.

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本发明提供了一种三重荧光定量PCR引物探针组与三重荧光定量PCR试剂盒，涉及生物技术领域。本发明的PCR引物探针组包括SEQ ID NO.1所示的APP‑F、SEQ ID NO.2所示的APP‑R、SEQ ID NO.3所示的APP‑探针，SEQ ID NO.4所示的HPS‑F、SEQ ID NO.5所示的HPS‑R、SEQ ID NO.6所示的HPS‑探针，SEQ ID NO.7所示的Pm‑F、SEQ ID NO.8所示的Pm‑R、SEQ ID NO.9所示的Pm‑探针。将该引物探针组制备成试剂盒，可特异的同时检测APP、HPS和Pm，灵敏度能达到10拷贝/μl。

摘要： 本发明公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。本发明还公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测试剂盒，可以用于定性检测蔬菜中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。

摘要： 一种用于检测水貂圆环病毒的荧光定量PCR引物组和荧光定量PCR试剂盒，涉及水貂圆环病毒检测领域，包括：MiCV荧光定量PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品；MiCV荧光定量PCR反应液包括上下游引物、TBPremix Ex TaqTMII和ddH2O；上游引物：5'‑AGGGCCTTTGGGCATCATTG‑3'；下游引物：5'‑CCCGCCTGCAAACTGAAGAA‑3'。本发明根据水貂圆环病毒的Cap基因保守序列设计引物，通过反应体系和条件优化建立了基于SYBR Green II的实时荧光定量PCR技术并组装试剂盒，该试剂盒具有稳定性好、敏感性和特异性较高等优点。

摘要： 本发明属于D型流感病毒检测技术领域，具体涉及D型流感病毒荧光定量PCR与LAMP荧光定量PCR引物对及其应用。D型流感病毒主要感染动物中包括猪和牛，对畜牧业的发展具有一定的威胁，提供稳定可靠的检测方法具有重要的意义。本发明提供了一种用于D型流感病毒实时荧光定量PCR检测的引物序列及相应的试剂盒，该引物针对D型流感病毒HE基因中的保守序列进行设计，能够实现良好的检测特异性和灵敏度，敏感性比普通PCR和荧光定量LAMP均高100倍，可以实现大量通用样品的检测，可对D型流感病毒进行快速、高敏感度的实时荧光定量PCR检测，对于提高D型流感病毒的检测精度具有重要的意义。

摘要： 本发明提供了一种鉴别肝螺杆菌的荧光定量PCR方法，将包含有PCR引物的反应体系进行荧光定量PCR反应；PCR引物包括上游引物和下游引物；反应体系包括以下组分：上游引物，下游引物，SYBR Premix Ex TaqⅡ，ROX Reference DyeⅡ，样品DNA模版，ddH

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液及试剂盒和荧光定量PCR方法。所述荧光定量PCR反应液，包括如下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10×SYBR荧光染料，10×PCR buffer，溶质体积百分数为30％的甘油溶液和Ex-Taq酶。本发明优化了PCR实验的荧光定量PCR反应液，特别是加入一定比例的甘油溶液，以保证Ex-Taq酶的活性，加入BSA与DMSO的组合保证了Tag酶的稳定性及活性并减少引物二聚体的形成，减少荧光定量PCR反应液配置时间，所得PCR反应液可以长期保存在-20°C中，使用方便。

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本申请公开了一种荧光定量PCR反应系统、试剂盒及核酸定量检测方法，所述荧光定量PCR反应系统利用核酸内切酶特异性地产生一段Flap序列，所述Flap序列可作为一段核苷酸序列扩增时的引物，而该核苷酸序列上存在多个的发光探针结合区段，因此，当该核苷酸序列扩增时，发光探针被DNA聚合酶切割而产生荧光信号。由于该核苷酸序列上结合有多个发光探针，且Flap序列的数量与待荧光定量PCR检测的目标基因的数量相关，所以所述荧光定量PCR反应系统可实现对目标基因的特异性扩增，且信号强度大大提升，从而提高了对临界样本的检测灵敏度。

摘要： 本实用新型公开了一种荧光定量PCR光学激发装置及成像装置、荧光定量PCR仪，其中荧光定量PCR光学激发装置包括光源，该光源的出光方向上设有激发光滤光片和二向色镜，还包括设于激发光滤光片与二向色镜之间的光均匀化透镜组；所述光均匀化透镜组包括平行透镜、复眼透镜和积分透镜，激发光滤光片、平行透镜、复眼透镜、积分透镜、二向色镜沿光源的出光方向依次设置；所述光源为宽光谱光源。本实用新型能够获得照度均匀的激发光，并能够在不同的光谱通道进行检测，使用寿命长，光源更换次数少；成像效果好；尤其适用于微流体芯片的荧光定量PCR检测。