猪流行性腹泻病毒

摘要： 本试验旨在研究单月桂酸甘油酯(Monolaurin,ML)对猪流行性腹泻病毒感染(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)仔猪肝脏抗氧化能力和脂代谢基因表达的影响。选取24头健康的7日龄断奶仔猪(杜×长×大),随机分成对照组、PEDV组和PEDV+ML组,每组8个重复,每个重复1头猪。试验期8 d,于试验第0~7天给PEDV+ML组仔猪口腔灌服100 mg/kg·BW的ML,其组仔猪口腔灌服等体积的人工乳,于试验第5天对PEDV组与PEDV+ML组仔猪口腔灌服1×104.5 TCID50的PEDV,对照组灌服等体积的PBS溶液。于试验第8天早上空腹称重,全部仔猪麻醉后屠宰取肝脏检测。结果显示:与对照组相比,PEDV组出现肝脏脂肪变性、细胞空泡化和肝细胞排列无序,肝脏蛋白质和过氧化氢(H2O_(2))含量提高(P<0.05),肝脏过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性降低(P<0.05),肝脏Ke IcH样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、谷胱甘肽硫转移酶ω2(GSTO_(2))、载脂蛋白A4(APOA4)、载脂蛋白C2(APOC2)基因的相对表达量上调(P<0.05)。与PEDV组相比,PEDV+ML组缓解了PEDV感染仔猪肝脏细胞形态的异常与脂肪变性,提高了肝脏蛋白质、DNA含量和SOD活性(P<0.05),降低了肝脏H2O_(2)和丙二醛(MDA)含量(P<0.05),上调了肝脏核因子E2相关因子2(Nrf2)、脂肪酸合成酶基因(FASN)基因的相对表达量(P<0.05),下调了肝脏APOA4和APOC2基因的相对表达量(P<0.05)。以上结果表明,PEDV感染仔猪导致了肝脏组织形态异常并降低了肝脏抗氧化和脂质代谢能力,而添加ML可有效缓解PEDV感染导致的仔猪肝脏细胞损伤,并提高仔猪肝脏抗氧化和脂质代谢能力。

摘要： 猪流行性腹泻是一种病毒性感染引起的腹泻,病原为猪流行性腹泻病毒,具有传染性强、发病率高、死亡率高的特点,任何生产阶段的猪都有可能患此病,尤其是哺乳仔猪、断奶仔猪和育肥猪,患病率更高,并且猪龄越小,发病症状越严重,死亡率越高。所以,在生猪养殖中,必须做好猪流行性腹泻的诊治,避免造成重大经济损失。

摘要： 近年来,随着生猪养殖规模化的大力发展,猪场疫病的发生率呈上升趋势。猪流行性腹泻是一种由猪流行性腹泻病毒引起的常见、急性的、高接触性的肠道传染疾病,临床上主要表现为水样腹泻、呕吐、脱水及机体消瘦,严重时可发生死亡。1971年,该病首次在英国发生,在20世纪80年代初陆续传播至我国.

摘要： 猪流行性腹泻是导致仔猪腹泻的重要传染病,及时准确地诊断对该病的防控具有重要意义。2021年初,湖南娄底某规模化猪场仔猪发病,临床以呕吐、腹泻和消瘦等症状为主,剖检后取肠组织样品送至实验室进行诊断,提取核酸后以PCR/RT-PCR法检测PEDV、TGEV、PORV和PDCOV等病原核酸,仅检出PEDV核酸,未检测到其他病原核酸。通过进一步序列分析,结果表明,该毒株的S1基因与国内流行的变异株同源性最高,提示该猪场流行的毒株为变异株。

摘要： 旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较。结果显示,建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL^(-1),血清最佳稀释比例为1∶1;酶标抗体的最佳工作浓度为1∶5000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清,均无交叉反应;PEDV阳性血清的灵敏度为1∶16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1∶32)的敏感性相当;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,说明具有良好的重复性和稳定性;对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较,两者的kappa值为0.87,为高度一致。综上表明,本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测。

摘要： 对采自湖北省内16家规模化养猪场的650份组织样品分别进行猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)和猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的病原学检测。结果表明:除PCV4未检出阳性外,PCV1、PCV2、PCV3、PEDV单一感染的样品阳性率分别为1.08%、4.15%、2.46%和6.46%;在双重感染中,以PEDV+PCV2的阳性率最高,达3.54%,其次为PCV2+PCV3,其阳性率为1.54%;在多重感染中,以PEDV+PCV2+PCV3的阳性率最高,为2.00%。虽然PEDV、PCV感染的阳性率较前期调查结果有所下降,但它们在湖北省内流行仍较广,且以混合感染为主。

摘要： 采集广西25个猪场的病料,对猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性组织样品进行全S基因扩增。将41株全S基因进行序列比对及遗传进化分析,41株PEDV的S基因之间核苷酸同源性为94.8%~100%,与参考毒株核苷酸同源性为89.3%~99.4%。S基因进化树图谱显示,广西当前流行的PEDV可分为2个谱系。Attenuated-DR13、CV777和该研究中的CHGXLC055-92013、CHGXLC055-52013、CHGXGP035-72013和CHGXGP035-82013为Cluster1;Cluster3包括该研究另外37株毒株、韩国株Spk1、HuN和日本株NK等参考毒株。表明广西大部分毒株S基因与欧洲株CV777、LZC等国内早期毒株存在较大的差异,进化树亲缘关系比较远;在抗原表位区域存在较大变异,当前的CV777疫苗株在防控PEDV入侵时可能不会产生良好的免疫保护效果。

摘要： 为表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中和抗原表位COE蛋白,分析其免疫原性,为PEDV的检测和亚单位疫苗的开发奠定基础。参考GenBank中PEDV COE基因序列,人工合成并经生物信息学综合分析后,将合成的基因片段插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-COE,将鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希氏菌TransB(DE3)中,用IPTG诱导目的蛋白表达,并进行SDS-PAGE鉴定;然后用纯化的目的蛋白与弗氏不完全佐剂乳化,免疫猪后用ELISA方法检测猪血清中PEDV特异性抗体水平。结果表明,目的蛋白在大肠埃希氏菌TransB(DE3)中获得表达,用His标签纯化得到了与预期大小35 ku相符的COE融合蛋白,经复性、浓缩后的蛋白浓度为1.85 mg/mL。用该蛋白作为亚单位疫苗免疫猪,ELISA方法检测免疫猪产生了高滴度的血清PEDV特异性抗体。表明原核表达的COE蛋白具有良好的免疫原性,可作为候选的亚单位疫苗。

摘要： 本研究旨在从临床仔猪腹泻样品中分离猪流行性腹泻病毒(PEDV),并对其S基因进行测序分析。对腹泻仔猪小肠样品进行RT-PCR检测、病毒的分离培养、RT-PCR和间接免疫荧光鉴定、S基因测序及遗传演化分析。结果显示:仔猪腹泻由流行性腹泻病毒引起;在Vero细胞上成功分离流行性腹泻病毒,命名为XP2018,该毒株细胞病变明显,并且连续传代细胞病变稳定;该毒株S基因全长为4161 bp,与中国经典毒株CV777 S基因核苷酸同源性为92.6%,氨基酸同源性为91.0%;与近年来中国分离的其他毒株S基因核苷酸同源性为96.9%~97.6%,氨基酸同源性为96.9%~98.0%;与美国参考毒株S基因核苷酸同源性为96.9%~97.6%,氨基酸同源性为96.6%~98.3%;遗传进化分析显示XP2018毒株与与目前中国流行毒株在同一分支,与经典毒株CV777不在一个分支上。本研究成功分离1株猪流行性腹泻病毒流行毒株,为PEDV疫苗研发奠定了基础。

摘要： 为了解山东省猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)基因组遗传演化特征,将山东省滨州市某猪场的PEDV阳性样品接种Vero E6细胞,结果成功分离到1株PEDV,将其命名为SD20BZ01株。通过RT-PCR分段扩增病毒基因组,经测序、拼接获得SD20BZ01株全基因组序列,并将其与GenBank收录的参考毒株序列进行同源性比对和遗传进化分析。全基因组序列分析结果显示,SD20BZ01株与我国2010年以来流行的GII-b亚群变异株序列同源性为97.8%~98.7%,明显高于CV777、DR13、SM98、SD-M等早期经典毒株,因此SD20BZ01属于GII-b亚群变异株。基于S基因的遗传进化关系与基于全基因组序列的遗传进化关系基本一致。与CV777株相比,SD20BZ01株S蛋白在中和抗原表位COE处有10个氨基酸突变,与近年来变异株S蛋白的氨基酸序列基本一致,说明GII-b亚群PEDV的变异规律逐渐趋于稳定。本研究为山东省PEDV流行病学研究及其流行控制策略的制定提供了理论依据。

摘要： 为了建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段.以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,建立PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法,评价方法的特异性、批内与批间重复性及其与国外试剂盒的符合率,分析ELISA的检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性.结果显示,当抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1500倍稀释时,建立的ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10％,与现有试剂盒的总符合率为94.8％,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P＜0.001).

摘要： 本研究运用利用生物信息学软件预测了猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea virus,PEDV)S1蛋白的1个B细胞中和线性表位.为了验证S1蛋白中该中和线性表位的存在,并鉴定其中和活性,本研究构建了含有该B细胞线性表位截短S1基因的重组质粒pGEX-4T-S1,通过蛋白电泳和Westernblotting确定该重组质粒可以在原核细胞表达,将该重组蛋白纯化,免疫BALB/c小鼠,三次免疫后,眼眶静脉采血进行间接免疫荧光及中和试验.蛋白电泳、Westem blotting和间接免疫荧光试验结果表明,截短S1蛋白能够在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,并能够引起机体的体液免疫反应;中和试验结果表明,该免疫血清能有效中和PEDV,中和效价为1∶64.该研究结果对猪流行性腹泻病毒免疫机制和新型疫苗的研究具有重要的借鉴意义.

摘要： 为分析2015年～2016年广东省猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株的遗传变异情况,本研究对16株来自广东地区的PEDV流行株部分S1基因进行克隆和测序,并将测序结果与GenBank中PEDV参考株S1基因进行同源性分析并构建系统进化树.结果显示,16株PEDV流行株间核苷酸序列同源性为93.8％～100.0％,与国内参考株间核苷酸序列同源性为70.7％～98.1％.PEDVS1基因遗传进化分析显示,16株流行株与国内大部分流行株亲缘关系较近,与疫苗株CV777、中国早期分离株CH/S、韩国流行株DR13、泰国流行株TH/AY/2.7/12、日本株14JM/01、美国株Minnesota/XW001等亲缘关系较远.此外,16株PEDV流行株与华南地区2014年之前分离株CH/GDQY/2011、CH9/FJ、CH/GDGZ/2012、FM/YN/2013等属群不同,亲缘关系较远.试验结果表明广东省当前流行的PEDV存在新基因型,并已经成为优势病毒株.

摘要： 猪流行性腹泻病毒是猪流行性腹泻的病原体,是危害世界养猪业的重要病原.获得可以在细胞培养中稳定有效生长和增殖的分离毒株,是研究其致病性、开展病毒学和血清学研究以及开发疫苗的基础.本研究应用Vero细胞从广西腹泻仔猪肠道内容物中分离获得1株猪流行性腹泻病毒,命名为CH/GX/2015/750A.该毒株可以稳定有效地在Vero细胞生长增殖,并引起典型的细胞病变;已在Vero细胞连续传代25代,病毒滴度随着培养代次的增加逐渐提高并稳定在7.50log10TCID5o/mL.应用下一代测序技术对分离毒株的全基因序列进行测定,该毒株全基因组序列长28038bp;与22个参考毒株的全基因序列比对显示,核苷酸同源性为96.8％～99.8％,其中与YC2014株同源性最高99.8％.全基因和S基因系统进化分析显示,PEDV CH/GX/2015/750A分离毒株属于Ⅱa亚群,与YC2014、PEDV-WS毒株亲缘关系密切.

摘要： 近年来,猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)给哺乳仔猪造成了严重的损失.M蛋白是PEDV重要的跨膜结构蛋白,是基因工程疫苗和诊断试剂的理想抗原.本实验设计M基因的特异性引物,扩增M基因,将鉴定正确的重组质粒转化致BL21感受态细胞,IPTG诱导表达及条件的优化.结果表明,重组表达的融合蛋白PET-32a-M大小约为43kD,与预期大小相符.SDS-PAGE电泳分析发现,在IPTG浓度为1.0mmoL/L,温度为37°C,诱导时间为6h时,蛋白表达效果最佳.Western-Blot结果进一步显示,重组蛋白PET-32a-M在体外可以被成功表达.

摘要： 目的:应用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,明确其抗原活性. 方法:通过RT-PCR扩增截短的PEDV N蛋白(truncated N protein,tN蛋白)基因;构建包含tN蛋白基因的原核表达质粒(pET32a-PEDV-tN),将质粒转化E.coli BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白;通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组tN蛋白的表达及其免疫反应原性;用提纯的tN蛋白皮下接种Blab/c小鼠,通过ELISA和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)检测重组tN蛋白的免疫原性. 结果:应用RT-PCR扩增到了预期705bp的tN蛋白基因;在E.coli BL21内,携带tN蛋白基因的重组质粒能够以可溶性表达形式诱导表达重组tN蛋白;该蛋白在体外可以与猪抗PEDV抗体特异性结合,能够诱导小鼠产生特异性抗体. 结论:应用原核表达系统实现了截短猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的可溶性表达,该蛋白具有良好的完全抗原活性.

摘要： 猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪急性肠道传染病及仔猪死亡严重影响养猪业发展,研制具有针对性的有效激发局部黏膜免疫的口服疫苗具有潜在价值.本研究以包含中和抗原表位(COE)的PEDV S1截短体蛋白为靶基因,构建重组酿酒酵母菌株.基于酵母表面展示技术,检测该重组酿酒酵母菌株表达蛋白的免疫原性及发酵动力学特征,继而以小鼠的口服免疫效果评估其作为候选疫苗的潜力,为后续研究PEDV口服疫苗提供新思路.

摘要： 本研究根椐GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株和变异株、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪星状病毒(PAstV)基因序列,分别设计5对引物,在建立各病毒单一RT-PCR技术的基础上,优化多重RT-PCR反应条件,建立了一种特异性强、灵敏度高的能同时检出多种病毒的多重RT-PCR检测方法.通过特异性试验证实该法能特异性的检测PEDV、TGEV、PRoV、PAstV,而与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)病毒、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应;重复性试验获得一致的目的片段;敏感性试验显示能检出的混合质粒最低限度为8.41×101copies/μL.结果表明,本研究建立的猪腹泻相关病毒多重RT-PCR检测方法高效、敏感、特异,可用于PEDV经典株与变异株、TGEV、PRoV、PAstV的快速鉴别诊断和流行病学调查.

摘要： 目的：为了建立一种鉴别猪猪流行性腹泻强毒和疫苗毒的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法. 方法：根据猪流行性腹泻病毒基因组基因设计一对通用引物和2条特异性MGB探针,通过反应体系和反应条件的优化,进行特异性、灵敏度和重复性检验. 结果：该方法在通过StepOnePlus分析软件可得出该病毒强弱毒的标准曲线的相关单数(R2)均为:0.993,斜率为:-3.122,扩增效率为109.102％.扩增曲线圆滑平整且在一定范围(108拷贝/μL-102拷贝/μL)内都具有良好的线性关系.说明该标准曲线的各个点有明显的线相关性,梯度稀释很好.与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)均无交叉反应,具有高特异性. 结论：成功建立了一种能快速、敏感、特异地鉴别猪流行性腹泻炎强毒和疫苗毒的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法.

摘要： 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性肠道传染病,为调查中国PEDV的流行现状及遗传进化情况,2015年在中国东北、华北、西北、西南、华中、华东和华南七个地区的41个猪场采集165份PEDV阳性病料.利用RT-PCR方法对PEDV的ORF3和51基因进行扩增，并对其进行遗传进化分析。其中41个ORF3基因和29个51基因测序成功。系统进化树分析显示，本试验鉴定的PEDV毒株属于non S-INDEL型毒株并呈现遗传多样性;与经典毒株CV777相比，HLJ2015/DP1-1毒株的51基因在1130-1141位之间缺失12个核苷酸。尽管，已经明确PEDV5蛋白插入突变、缺失突变和点突变是PEDV致病性改变的主要原因，但仍不能解释PEDV变异毒株与经典毒株差异的共性规律。因此，本研究能更好的诠释中国PEDV遗传变异和致病机制，阐明该问题将有利于PEDV遗传变异和致病机理的深入了解。

摘要： 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40°C‑65°C退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR检测引物。本发明多重RT‑PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT‑PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。

摘要： 本发明公开了一套用于同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的多重PCR引物组。本发明的引物组由三对引物组成，其中，用于猪流行性腹泻病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：1和2所示；用于猪传染性胃肠炎病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：3和4所示；用于猪轮状病毒检测的引物序列为SEQ？ID？NO：5和6所示。应用本发明引物序列通过多重PCR方法可同时对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的不同毒株进行检测，结果均为阳性，而对其他常见猪源病毒检测结果均为阴性，说明本发明的引物组特异性强、重复性好；对病毒cDNA梯度稀释后进行PCR检测，说明该引物灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因芯片和试剂盒。本发明基因芯片包括它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，以及SEQ ID NO：5或6所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。本发明试剂盒包括前述基因芯片与扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因的试剂。本发明基因芯片和检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。

摘要： 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂盒。本发明基检测试剂盒可以准确、有效的检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，且特异性强、灵敏度高、耗时短，检测快速，应用前景良好。

摘要： 本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HBXT/2018，属于病毒疫苗技术领域，所述病毒毒株PEDV CH/HBXT/2018保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.16215。本发明提供了包括所述病毒毒株S蛋白的基因序列的重组载体以及所述重组载体的构建方法。本发明所述病毒毒株位于G2a亚群，与中国疫苗经典毒株CV777分属于不同的群，亲缘关系更接近2010年后爆发的猪流行性腹泻疫情中分离获得的猪流行性腹泻病毒毒株，与现有流行毒株存在的基因型差异较小，可应用于制备猪流行性腹泻疫苗，免疫效果好。

摘要： 本发明提供了一株猪流行性腹泻病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017，属于病毒疫苗技术领域，所述病毒毒株PEDV CH/HNPJ/2017保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.16216。本发明提供了包括所述病毒毒株基因组的重组载体以及所述重组载体的构建方法。本发明所述病毒毒株位于G2b亚群，与中国疫苗经典毒株CV777分属于不同的群，与AJ1102和CHGD‑01毒株亲缘关系较近，亲缘关系更接近2010年后爆发的猪流行性腹泻疫情中分离获得的猪流行性腹泻病毒毒株，与现有流行毒株存在的基因型差异较小，可应用于制备猪流行性腹泻疫苗，免疫效果好。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒和猪急性腹泻综合征冠状病毒三重FQ‑PCR检测方法。本发明提供用于猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒检测的特异性引物和探针，并建立了猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒的三重FQ‑PCR检测方法。本发明的特异性引物、探针和检测方法的特异性强、灵敏度高、重复性好，为猪腹泻性疾病的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异的临床检测方法。

摘要： 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40°C‑65°C退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒多重RT-PCR检测引物。本发明多重RT-PCR对这3种病毒的最低检测量分别是4.05×101拷贝/μL、4.52×103拷贝/μL和5.47×103拷贝/μL，而对猪细小病毒（PPV），猪伪狂犬病毒（PRV）的扩增结果均为阴性。57份临床样品的多重RT-PCR检测结果显示，有1份同时感染这3种病毒，11份样品感染PDCoV，15份样品感染PEDV，1份样品感染TGEV，5份样品感染PDCoV和PEDV，1份样品感染PDCoV和TGEV。