聚合酶链式反应

摘要： 针对农林专业教学的特点,设计了“实时荧光定量PCR分析不同氮肥施用量下烟叶团棵期叶片中NtCIPK8的定量表达”实验,使学生了解不同施氮量下,相同组织中同一个基因的表达量不同的知识,还将基因表达的特点从一个抽象的概念转化为了具体的数字图形,同时使学生可以掌握实时荧光定量PCR技术的原理、方法和仪器的使用,为增强农林专业学生的科研能力和综合素质提供了新的内容。

摘要： 目的:紫河车在我国有悠久的药用历史,《中华人民共和国药典》自2015年版起不再收录紫河车及其中药成方制剂,但市场上仍有紫河车饮片及含紫河车的产品,并存在使用猪、牛、羊等动物胎盘伪充紫河车入药的现象。建立一种适用于紫河车饮片、干浸膏粉及配方颗粒的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据紫河车COⅠ基因序列筛选适用于紫河车饮片、干浸膏粉及配方颗粒的稳定引物区间,并在区间内筛选获得紫河车及其混伪品的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性及适用性考察。结果:当退火温度为60°C,循环数为33次时,紫河车正品饮片、干浸膏粉及配方颗粒均能扩增出约110 bp片段,其他3种伪品及阴性对照均无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确地鉴别紫河车及相关产品真伪。

摘要： 目的:探究急性呼吸道腺病毒(acute respiratory adenovirus,ADV)感染患儿混合感染的临床特征。方法:回顾性分析2019年1-9月于泉州市妇幼保健院·儿童医院接受治疗的63例ADV感染患儿的临床资料,采集其鼻咽部分泌物,使用实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术测定腺病毒、鼻病毒等30种呼吸道病原体,根据其病原体检出情况分为混合感染组及单一感染组。比较两组临床症状、流行病学、住院时间及转归情况。结果:经统计,63例ADV感染患儿中单一感染阳性率为19.05%(12/63),而混合感染阳性率为80.95%(51/63)。两组临床症状(咳嗽、发热、咳痰)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组性别、好发年龄段、临床诊断比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而发病季节分布情况比较,差异有统计学意义(P<0.05),混合感染组发病主要集中于4~9月(84.31%),单一感染组发病主要集中于4~6月(91.67%)。两组均痊愈出院,混合感染组住院时间长于单一感染组(P<0.05)。结论:ADV患儿混合感染的主要表现为咳嗽、发热及咳痰,男女比例为1.32∶1,好发年龄段为0~4岁,主要以腺病毒混合肺炎链球菌及肺炎支原体为主。

摘要： 山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)是一种由山羊支原体山羊肺炎亚种引起的严重疾病,偶有绵羊和野生反刍动物感染,具有超高的发病率和病死率。CCPP的病理特征为病变肺呈葡萄酒色,可完全肝化,通常伴随纤维素性胸膜炎,胸腔积聚大量积液。CCPP可通过血清学试验、DNA扩增(PCR、RFLP、杂交)和测序进行诊断。目前,抗生素疗法是CCPP的主要治疗方式,但长期使用抗生素易产生抗药性。文章针对不同时期提出的诊断方法和治疗措施进行梳理总结,以期为CCPP的防控和治疗提供参考与新思路。

摘要： 本文对克罗诺杆菌的特性进行了介绍,并围绕基于分子生物学快速检测技术(包含PCR技术、荧光定量PCR技术、等温扩增技术、其他技术)和免疫学快速检测技术(包含免疫磁珠检测技术、酶联免疫吸附检测技术、重组酶等温扩增试纸条检测技术、荧光脂质体免疫检测技术)展开分析,以供参考。

摘要： 本试验旨在对患病小鼠感染的螨进行鉴别诊断,首先,使用透明胶纸法和被毛采集法在显微镜下进行形态学观察鉴定,初步确定螨的种类;随后,选定螨18S rRNA基因,建立聚合酶链式反应(PCR)快速检测方法,并进行测序比对分析,从分子水平上进一步确认螨的种类。形态学观察结果显示,小鼠感染的螨呈白色,长椭圆形,中央稍宽,前后两端稍窄,有4对足;在螨体后3对足之间有特征性的突起;尾端的尾乳突有2根特征性的后端毛,初步鉴定为鼷鼠肉螨。PCR扩增虫体18S rRNA基因和序列比对结果显示,分离螨与鼷鼠肉螨的18S rRNA基因序列核苷酸相似性达98.68%。直接镜检结合PCR检测结果,表明患病小鼠感染了鼷鼠肉螨。

摘要： 目的建立并评估基于微流控芯片(MC)技术检测布鲁氏菌(简称布氏菌)核酸的方法,以提高布鲁氏病(简称布病)的诊断能力。方法设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程。设计微流控全自动核酸检测(MC⁃PCR)与基因测序符合性测试、与实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)、TaqMan探针法检测比较实验;评估MC⁃PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最低检出限。结果研究组与对照组核酸溶解曲线图纵坐标峰值所对应的横坐标一致,呈现单一的溶解峰,温度相同,表示为相同的扩增产物。核酸不同提取方法之间Ct值差异有统计学意义(P0.05)。基因测序的Kappa值为0.659,与MC⁃PCR具有高度的一致性,MC⁃PCR与基因测序阳性结果符合率100%,总符合率82.5%。准确性:结果符合率为100%;特异性:结果阴性率100%;重复性:结果均可以检出布氏菌;检出限:浓度为825 copies/mL时,MC⁃PCR与qPCR、TaqMan探针法检出率差异有统计学意义(χ^(2)=24.699,P<0.05),经两两比较,MC⁃PCR检出率高于qPCR和TaqMan探针法。精密度:结果均可以检出布氏菌。结论MC⁃PCR检测布氏菌核酸的检测方法安全、快捷、及时、精准,可以应用于临床。这将提高布病诊断率,对布鲁氏菌病的防治起到重要作用。

摘要： 农产品质量安全快速检测技术样品前处理简单,对设备要求不高,简便快速,是当前农产品质量安全监管工作的重要技术支撑。本文综述了基于生物技术的农产品质量安全快速检测方法的研究进展,包括酶抑制技术、免疫学技术(酶联免疫吸附测定、免疫层析、生物芯片)、生物传感器技术和聚合酶链式反应技术,并展望了其发展方向,以期为后续研究提供参考和借鉴。

摘要： 牛支原体在全球范围内分布广泛,可引起动物呼吸道疾病、乳房炎、关节炎、中耳炎和生殖系统疾病等,给全球养牛业造成严重的经济损失。牛支原体疾病往往具有高度传染性,且用一般药物治疗的效果并不理想,加上现阶段尚无有效的牛支原体疫苗,因此需要快速准确的诊断来预防和控制牛支原体疾病。本文综述了各种可用于诊断牛支原体疾病的方法,并分析其优缺点,旨在为有效防控牛支原体疾病提供参考。

摘要： 目的基于荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,用于老年恶性肿瘤筛查。方法根据Foxp3基因保守序列,设计特异性引物,构建实时荧光定量PCR反应体系;收集临床恶性肿瘤和体检者各60例的血液标本,用构建的方法进行检测并比较两组的差异。结果成功构建荧光定量PCR反应,并对反应体系、反应条件进行优化。临床标本检测发现,恶性肿瘤组Foxp3mRNA相对表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功构建Foxp3的实时荧光定量PCR方法,对恶性肿瘤早期筛查、辅助诊断具有重要意义。

摘要： 目的：建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应方法,快速定量检定临床标本中的白色念珠菌并进行抗真菌药物敏感性分析. 方法：针对白色念珠菌内转录间隔区和26S核糖体核糖核酸基因设计特异性引物和探针,构建含有上述基因的标准质粒进行定量分析,建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,评价其特异性、灵敏度、重复性和稳定性.对1185份临床标本中的白色念珠菌进行检测,同时进行真菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定.对所有真菌分离株进行抗真菌药物敏感性试验. 结果：研究结果显示,建立的白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法专属性强,能准确检出白色念珠菌,而与其他念珠菌属真菌、非念珠菌属真菌、细菌、寄生虫和病毒均无交叉反应,特异性为100％.该技术灵敏度高,能精确定量检测白色念珠菌DNA线性范围达11个数量级,白色念珠菌最低检测限度为5个菌落形成单位.该方法重复性非常好,组内和组间相对标准偏差均小于2％.测试中相关系数、斜率和效率没有显著变化,表明该方法稳定性好,精密度高.将其成功应用于临床标本中白色念珠菌载量的定量检测,用普通PCR和基因克隆测序分析进行了确证.整个检测过程可在2h内完成,可以用作定量分析快速诊断方法.应用TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应从1185份临床标本中检出94份白色念珠菌阳性标本,真菌培养获得8株存活的白色念珠菌,抗真菌药物敏感性试验分析结果显示：这些白色念珠菌分离株对制霉菌素、咪康唑、克霉唑、益康唑、氟康唑、沃尔康唑均敏感,但对两性霉素B、酮康唑、特比萘芬、氟胞嘧啶已经产生了耐药性. 结论：本研究新开发评价的TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应,可以快速简易,精准稳定,特异灵敏地定量检定白色念珠菌,适用于动物源性产品中白色念珠菌检测、食品药品生物制品医疗器械安全检查、环境监测、流行病学调查.

摘要： 指纹的个体识别在案件侦查中起着重要的作用,但是在案件中经常会遇到特征点少、残缺不全或模糊不清的指纹,因此通过对指纹进行DNA检验对案件的侦查有重要的意义.

摘要： 指纹的个体识别在案件侦查中起着重要的作用,但是在案件中经常会遇到特征点少、残缺不全或模糊不清的指纹,因此通过对指纹进行DNA检验对案件的侦查有重要的意义.

摘要： 指纹的个体识别在案件侦查中起着重要的作用,但是在案件中经常会遇到特征点少、残缺不全或模糊不清的指纹,因此通过对指纹进行DNA检验对案件的侦查有重要的意义.

摘要： 指纹的个体识别在案件侦查中起着重要的作用,但是在案件中经常会遇到特征点少、残缺不全或模糊不清的指纹,因此通过对指纹进行DNA检验对案件的侦查有重要的意义.

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 本案系因遗产纠纷对男性个体间是否存在叔(伯)-侄关系进行判别的亲缘鉴定。由于本案被鉴定人均为男性，其他已确立血缘关系的个体的生物学样本无法提供，我们首先想到的是同一父系关系鉴定。Y染色体为男性特有，除在拟常染色区外，遗传过程中不交换重组，呈父系遗传。由于所有Y-STR连锁遗传，其所有基因座分型应视为一个单倍型。所以Y-STR在明确个体间是否存在同一父系亲缘关系的案件中有应用价值，但Y-STR有较高的突变率。本例中Y-STR分型仅有1-2个基因座不符合统一父系遗传规律。对于此类少见情形的报道较少，我们提供本例以供同行间探讨。

摘要： 本发明涉及一种便携式实时PCR装置及利用便携式实时PCR装置的PCR测量方法，根据本发明的实施例的便携式实时PCR装置包括：底座部，形成有设置空间；多个下部加热部，设置于所述底座部的所述设置空间中；下部光学测量部，设置于所述底座部，并布置在与所述下部加热部不同的位置，提供测量光或接收所述测量光；腔室组件，包括分别安置于所述下部加热部及所述下部光学测量部的多个腔室部，所述腔室部配备为能够从任意一个所述下部加热部移动到另一个所述下部加热部或所述下部光学测量部，其中，所述腔室部包括：腔室部主体，用于收容腔室单元，在所述腔室单元形成有在内部收容检体单元的检体单元收容空间，其中，所述腔室单元包括：腔室单元主体，形成有所述检体单元收容空间；及盖单元，从上方遮挡所述腔室单元主体的所述收容空间，其中，所述检体单元的作为宽度对比高度的比例的纵横比形成为大于0且小于1。

摘要： 本发明涉及PCR的反应体系，其包括PCR反应所必需的试剂；和含氟化合物，其中，所述含氟化合物被配制为在所述反应体系中以自由氟离子和氟离子的任何结合形式计的浓度为4mM至24mM。该反应体系提高了检测的特异性。本发明还涉及用于PCR的试剂盒及含氟化合物的用途。

摘要： 本发明的一实施例涉及一种反复配置有图案加热器的聚合酶链式反应热块及包括其的聚合酶链式反应装置，由此，在反复配置有加热器的热块中，可防止从个别加热器中发生的放射形热分布及由此引起的相邻加热器之间不均匀的热重叠，来相当地改善聚合酶链式反应收率，且由于不需要额外的温度调节单元，因而可相当地贡献于装置的小型化及集成化，进而，可利用反复配置有加热单元的热块及板形状的聚合酶链式反应部，来同时且迅速扩增多个核酸样品，并测定连续的光学信号或电化学信号，来实时确认核酸扩增过程。

摘要： 本发明公开一种生物技术领域中的基于树枝状聚合物的聚合酶链式反应优化方法，在聚合酶链式反应体系里加入树枝状聚合物材料作为添加剂优化聚合酶链式反应，所述的树枝状聚合物包括与至少两个树枝状分支共价结合的多价核，及通过至少两代扩展，使聚合度至少达到2.0的分支结构。通过对该种树枝状聚合物进行梯度稀释或浓缩，以浓度梯度方式加入到该聚合酶链式反应体系中，以实际扩增达到优化目的的范围为所需该树枝状聚合物的有效用量范围。本发明具有优化扩增的效果显著，添加剂成本低廉，易于保存，应用广泛的优点。扩增产物的特异性得到显著提高，在某些反应中产物的产量也得到明显的提高。

摘要： 本发明提供一种能够高效地进行聚合酶链式反应(PCR)的PCR装置以及PCR方法。上述PCR装置是如下的装置：向容器(30)填充比重比反应液(60)小且不与反应液(60)混和的液体(50)，控制部以容器(30)的上方部分的液体(50)成为第一温度，下方部分的液体(50)成为比第一温度低的第二温度的方式驱动控制第一加热部(151)和第二加热部(152)，以在液体(50)中成为球状的反应液(60)通过基于电场的库伦力在液体(50)的上方部分与下方部分之间反复进行上下移动的方式驱动控制电场产生部，在下侧电极(10)与上侧电极(20)之间产生电场。

摘要： 本发明涉及一种用于聚合酶链式反应的检测机构及聚合酶链式反应装置，其中检测机构包括至少一个激发模块组，每个激发模块组包括两个激发模块，激发模块组能够提供两种波长的激发光；激发光纤，与激发模块组连接，激发光纤能够将激发光传输到至少一个反应试管，每个反应试管均接收两种波长的激发光；接收光纤，能够收集并传输反应试管的荧光信号；至少一个接收模块组，与接收光纤连接，每个接收模块组包括两个接收模块，以分别接收来自同一个反应试管的两种波长的荧光信号，并将荧光信号转换为电信号输出；检测机构分时地对所述反应试管进行检测，并复用所述接收模块组获得输出结果。

摘要： 本发明的一实施例涉及一种反复配置有图案加热器的聚合酶链式反应热块及包括其的聚合酶链式反应装置，由此，在反复配置有加热器的热块中，可防止从个别加热器中发生的放射形热分布及由此引起的相邻加热器之间不均匀的热重叠，来相当地改善聚合酶链式反应收率，且由于不需要额外的温度调节单元，因而可相当地贡献于装置的小型化及集成化，进而，可利用反复配置有加热单元的热块及板形状的聚合酶链式反应部，来同时且迅速扩增多个核酸样品，并测定连续的光学信号或电化学信号，来实时确认核酸扩增过程。

摘要： 本发明公开一种生物技术领域中的基于树枝状聚合物的聚合酶链式反应优化方法，在聚合酶链式反应体系里加入树枝状聚合物材料作为添加剂优化聚合酶链式反应，所述的树枝状聚合物包括与至少两个树枝状分支共价结合的多价核，及通过至少两代扩展，使聚合度至少达到2.0的分支结构。通过对该种树枝状聚合物进行梯度稀释或浓缩，以浓度梯度方式加入到该聚合酶链式反应体系中，以实际扩增达到优化目的的范围为所需该树枝状聚合物的有效用量范围。本发明具有优化扩增的效果显著，添加剂成本低廉，易于保存，应用广泛的优点。扩增产物的特异性得到显著提高，在某些反应中产物的产量也得到明显的提高。

摘要： 本申请实施例提供了一种数字聚合酶链式反应芯片聚合酶链式反应芯片及其制备方法和数字聚合酶链式反应装置，以解决现有聚合酶链式反应芯片加工工艺复杂、操作复杂、容易产生气泡、以及使用起来工艺成本高的技术问题。该数字聚合酶链式反应芯片包括：第一功能层，所述第一功能层的表面构造为对聚合酶链式反应溶液具有排斥性；以及多个第二功能区域，分别设置在所述第一功能层的表面，构造为对所述聚合酶链式反应溶液具有亲和性。

摘要： 本实用新型所公开的用于聚合酶链式反应试验的反应柜，包括柜体(1)和底架(2)；所述柜体(1)由顶板(11)、底板(12)、背板(13)、前面板、第一侧板和第二侧板围合构成；所述柜体(1)的前面板为活动设置。本实用新型所公开的用于聚合酶链式反应试验的反应柜，柜体的前面板为活动设置，这样可根据反应试验的需要调节前面板的高度，在便于柜体内保持无菌及适宜试验操作的温度、湿度等环境要求的前提下也可便于试验人员进行操作。