分子鉴定

摘要： 为了进行分子辅助抗病育种的相关研究,需建立甜菜生尾孢菌的产孢和发病条件.将分离纯化的甜菜生尾孢菌HL001在西红柿培养基上使用涂抹方法接种,经25°C光照培养72 h可以得到大量分生孢子.用孢子悬浮液喷洒接种健康甜菜叶片,温度28°C、湿度90％,光照培养72 h转入常规培养,接种10 d后叶片开始发病并迅速蔓延到整个植株.本研究得到了有关甜菜生尾孢菌产孢和甜菜褐斑病发病的具体条件,对研究甜菜褐斑病抗性基因和甜菜对病原的免疫反应机理奠定了方法学基础.

摘要： 分离纯化野生蜜环菌菌丝培养物,研究菌丝体代谢物质对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、志贺氏菌和副溶血性弧菌的抑制作用.采集野生蜜环菌子实体,获得遗传同一性菌丝体纯培养物,振荡培养获得菌丝体代谢液,观察其对致病菌的抑菌效果.实验结果表明,分离纯化得到的菌丝体纯培养物与蜜环菌遗传同一,菌丝体代谢液对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、志贺氏菌和副溶血性弧菌等食品中常见的致病菌具有较好的抑制作用。

摘要： 目的利用ITS2(Internal Transcribed Spacer 2)序列及其二级结构对传统中药连钱草与其地方习用品及易混品进行分类鉴定。方法提取连钱草药材基原植物活血丹基因组DNA,扩增ITS序列并测序;同时从GenBank数据库中下载活血丹等共8个物种42条ITS序列,基于隐马尔可夫模型注释到ITS2序列。运用MEGA7软件进行种内种间序列差异分析,并构建Neighbor-jioning(NJ)进化树。同时利用ITS2 Database预测各样本ITS2二级结构,并利用4Sale软件比对一级结构和二级结构的联合矩阵,最终采用ProfDistS软件基于距离法构建Profile neighbor joining(PNJ)进化树。结果各物种种内最大遗传距离远小于种间最小遗传距离,Barcoding Gap存在于活血丹与各易混品之间;各物种的二级结构均存在差异;系统发育树显示各样本均独立分支。结论ITS2可以作为准确鉴别中药连钱草与其地方习用品及易混品的DNA条形码,为连钱草的基原鉴别及安全用药提供了科学依据。

摘要： 【目的】为了解中国板栗主产区(罗田)的板栗地下外生菌根真菌多样性,对罗田地区80年以上的代表性板栗园的板栗外生菌根真菌群落组成和形态特征进行研究,并在形态分类的基础上对其进行分离鉴定。【方法】共采集到300份板栗根系样品,根据形态、颜色和分叉程度等特征进行分类后获得55个外生菌根类型。每种类型选取3个重复根段制备混合样品,对混合样品进行ITS分析。【结果】前50位的OTU分属于34属、15个未分类种和其他类群。其中丰度前20的类群占95.99%:Basidiomycota约占60%,包含Lactarius、Guehomyces、Inocybe、Russula和unclassified_Thelephoraceae 5个主要属;Ascomycota约占30%;Mortierellomycota约占5%,其余5%则属于未分类的真菌。在分离得到的22种外生菌根真菌中,Trichoderma物种丰富度最高(6种),其次是Fusarium(4种)、Penicillium(3种)、Talaromyces(3种)、Pestalotiopsis(2种),Ilyonectria、Castanediella和Leptodontidium各1种。其中与Fusarium、Trichoderma、Talaromyces和Penicillium等4种真菌同源性较高的11株菌已被报道具有生防功能,分离得到11株菌也可能具有较好的生物防治潜力。【结论】本研究系统揭示了中国板栗主产区的板栗外生菌根真菌群落组成,分离得到具有生物防治功能的菌根真菌,为进一步提高板栗抗性奠定基础。

摘要： 为了解新疆薄皮核桃受霉菌污染情况及污染微生物种类,以新2核桃为试材,采用稀释涂布法和三点法对污染霉菌进行分离纯化,经形态学和ITS序列分子分析法相结合进行鉴定。结果表明,薄皮核桃污染霉菌共有10种,通过菌株的生长特性得出米根霉(Rhizopus oryzae)、深绿木霉(Trichoderma atroviride)、黑曲霉(Aspergillus niger)和黄曲霉(Aspergillus flavus)4种霉菌是影响核桃品质变化的优势霉菌,其他6种霉菌分别为扩展青霉(Penicillium expansum)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)、红贝俄氏孔菌(Earliella scabrosa)、歧皱青霉(Peni-cillium dierckxii)和交链格孢菌(Alternaria alternata)。研究结果可为薄皮核桃品质劣变问题的研究及防治提供参考。

摘要： 为了明确十字花科与茄果类蔬菜作物根肿菌侵染根细胞的变化特征,本试验选取十字花科蔬菜青花菜品种中青10号和中青16号(感病组),番茄品种中杂302和辣椒品种中椒115(对照组)进行比较试验,通过对两组试验对象进行根部染色及细胞学观察,揭示青花菜、番茄和辣椒在根肿菌侵染过程中的根部特征和差异变化。分子辅助鉴定结果表明,供试菌株(河南新野)为4号生理小种。以水培法培育青花菜、番茄和辣椒幼苗,在根肿菌接种后14 d内,根肿菌侵染途径基本一致:根肿菌最先进入3种蔬菜作物的根毛区,然后继续侵入根部皮层细胞,形成分生孢子或孢子囊。在根肿菌侵染率方面,青花菜与番茄、辣椒存在明显差异:根肿菌在接种后7 d和14 d能够快速侵染青花菜,并在14 d时的皮层细胞内形成大量的分生孢子和孢子囊;根肿菌侵染番茄的速率明显低于青花菜,且根肿菌侵染数量明显减少,仅在根毛区形成分生孢子,能侵染皮层细胞但不能形成孢子囊;辣椒根毛区根肿菌侵染速率最慢,且根肿菌侵染效率最低,只在根毛区形成少量的分生孢子,极少数孢子能进入皮层细胞,但不能形成孢子囊。本试验揭示了我国主要根肿病致病菌(4号生理小种)在水培环境下侵染青花菜、番茄和辣椒的变化特征,为科学解释茄果类蔬菜抗根肿病机理提供了依据,也为创制十字花科抗根肿病种质开辟了一条新途径。

摘要： 采用ITS2一级序列联合其二级结构对紫苏与其变种、紫苏子与其混伪品进行鉴定,为紫苏药材的使用提供更科学的分类方法。收集紫苏与其近缘种、紫苏子混伪品基源植物样本,提取DNA进行PCR扩增;并结合GenBank中的序列获得所有物种的ITS2序列。应用MEGA7.0软件进行序列分析、计算种内种间遗传距离、构建NJ树,利用ITS2数据库预测各物种的ITS2二级结构。利用4Sale软件进行一级结构联合二级结构矩阵的比对,运用ProfDistS软件构建PNJ树。ITS2序列的扩增成功率高。除白苏以外,紫苏与其他变种的ITS2序列具有明显的Barcoding gap;NJ树显示,ITS2可将紫苏、白苏与其他变种区分;紫苏和白苏在ITS2二级结构中有差异。紫苏子与其混伪品的ITS2序列差异较大,种间具有显著的遗传距离,NJ树和PNJ树显示紫苏子与各混伪品分别各自聚为一支,且有较高的自展支持率。因此,基于ITS2条形码可以准确鉴别紫苏子与其混伪品,为规范药材市场和保障临床用药安全提供可靠方法;但对于紫苏与其变种白苏的鉴别需要结合ITS2二级结构,或建议将白苏和紫苏合并为一个种,为紫苏属的植物分类提供参考。

摘要： 青海省刚察县吉尔孟乡某牧场发生牦牛犊牛腹泻疫病,为快速诊断发病犊牛腹泻的致病病原,保证及时采取防控治疗措施,特采集牦牛犊牛腹泻粪便样本8份,利用显微镜镜检方法和分子生物学方法进行鉴定分析。结果显示:此牧场中引发犊牛腹泻的病原是隐孢子虫(Cryptosporidium),贾第鞭毛虫(Giardia)和牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),测序结果显示样品中鉴定的为相同的病原。结果表明,刚察县吉尔孟乡牧场犊牛的腹泻是由隐孢子虫,贾第鞭毛虫和牛轮状病毒的混合感染造成的,该研究为犊牛腹泻的病原学研究和流行病学调查提供了参考数据,为针对性地对病原性致病因素的对症对因治疗和辅助支持治疗提供了参考。

摘要： 通过对草地贪夜蛾进行监测并对PCR扩增到的磷酸甘油醛异构酶(Tpi)基因片段进行序列分析,结果表明,兴义市8个疑似草地贪夜蛾样品经分子鉴定均为草地贪夜蛾,通过与“玉米型”和“水稻型”Tpi基因序列的特异位点比较分析,兴义市草地贪夜蛾亚型均为“玉米型”,具体亚型的确定对研究兴义市草地贪夜蛾发生规律及监测防控具有重要意义。

摘要： 从实验室筛选到3株真菌(代号分别为3-7、5-3、5-8),能在发酵过程中产生浓郁的香味,文章对3株菌株进行形态鉴定和分子鉴定,并对其挥发性成分进行分析。研究结果表明,3-7和5-8为霉菌,5-3为酵母菌,分子鉴定结果表明3-7和5-8为同一种菌株,属于地霉菌。菌株5-3与Saccharomycete的相似性是100%,为一株假丝酵母。以马铃薯葡萄糖琼脂液体培养基对菌株进行培养富集代谢挥发性成分,经气相色谱-质谱联用法检测,结果表明菌株5-3是一株代谢产醇能力较强的酵母;菌株3-7(5-8)代谢能产生一定量的酯类和醇类,具有一定的产香能力。该研究成果可为利用微生物发酵转化生产天然香精、香料提供参考,也为其进一步开发应用提供研究基础。

摘要： 目的：探讨从分子水平上快速、准确鉴定不同白纹伊蚊亚组的分子鉴定方法. 方法：采集不同地区白纹伊蚊,首先经人工形态学鉴定区分不同白纹伊蚊亚组,随后采用DNA条形码技术-mtDNA-COⅠ对蚊种进行分子鉴定,建立白纹伊蚊亚组mtDNA-COⅠ基因系统发育树. 结果：鉴定亚白纹伊蚊、黄斑伊蚊、伪白纹伊蚊、西伯利亚伊蚊和白纹伊蚊共5种蚊虫,得到白纹伊蚊亚组线粒体COⅠ基因序列长度709bp,碱基组成中A+T含量范围为67.55％～69.41％.从系统发育树中可以看出白纹伊蚊(或亚白纹伊蚊)、伪白纹伊蚊、黄斑伊蚊、西伯利亚伊蚊各自独立聚为一支,且各支置信度高. 结论：线粒体COⅠ基因分子鉴定技术能够快速有效地鉴别白纹伊蚊亚组,为国境口岸上捕获的不完整或难以鉴别的蚊种鉴定提供帮助.

摘要： 为确诊山西省某獭兔养殖场病死獭兔的病原菌,本研究从病死獭兔肺脏中分离得到一株细菌,经16s分子鉴定为葡萄球菌,动物试验证实该菌株具有很强的致病性;为了确定该病原菌的来源,在该兔舍进行气溶胶样品采集,通过对气溶胶中葡萄球菌与脏器中分离出的葡萄球菌进行16s遗传进化分析,构建进化树.结果显示,病死獭兔体内的葡萄球菌与空气中的葡萄球菌在进化树的同一支上,其中獭兔体内的葡萄球菌与标准金黄色葡萄球菌的同源性达95％以上,空气中的葡萄球菌与标准金黄色葡萄球菌的同源性达94％以上,进一步揭示了环境空气中微生物对疾病的影响.

摘要： 以中国猕猴桃国家种质资源圃内的8个主要栽培品种为研究对象,进行了为期2周年的定点调查及样本采集(包括枝条、花蕾、叶片、果实等),并对不同时期分离的病菌进行生物学特性分析、显微结构观察及分子鉴定.研究结果显示:软腐病菌以菌丝体或子实体的形式在枝条上潜伏越冬,翌年春天气温回升后,子囊孢子或分生孢子释放,借风雨传播;在早春花期时侵染花蕾,幼果形成期由花蕾转移至幼果上,直至果实贮藏期表现软腐症状.因此,对该病的防治应侧重冬季彻底清园、花前及花期的施药预防.

摘要： 在屏边苗族自治县猕猴桃产业稳步发展的同时,为减少猕猴桃病害带来的经济损失,2017年4月及11月,2018年7月对屏边县共7个乡镇17个代表性猕猴桃栽培园区病害进行了全面调查.通过采集大量的典型病害样本,运用生物学特性、分子鉴定及致病力验证方法对纯化分离到的菌株进行全面鉴定,研究结果表明屏边县猕猴桃栽培园区春季主要病害为灰斑病、褐斑病和黑斑病,夏季为炭疽病、灰斑病和褐斑病,秋冬季以果实软腐病为主.本文调查结果为屏边县猕猴桃病害的预测及综合防治奠定了理论基础.

摘要： 滑刃线虫属大多数种类取食真菌,有14个种可以寄生植物,最常见的具破坏性的种类有贝西滑刃线虫、草莓芽叶线虫、菊花滑刃线虫以及次薄滑刃线虫等,寄主植物超过900种.滑刃属线虫形态特征存在高度的种内变异和较小的种间差异,利用分子鉴定可提高形态学鉴定的准确性,mtCOI、rDNA18S、28SD2-D3区和ITS分子标记均适用于滑刃线虫属种类的鉴定和系统进化分析.

摘要： 为监测广东省蓝舌病流行状况,2014年从广东省某一奶牛场采集血液样品,检测虫媒病病原,对经RT-PCR检测蓝舌病病毒核酸阳性的样品进行病毒分离并鉴定.经鸡胚静脉接种后取肝脏转接C6/36细胞和BHK-21细胞,出现CPE,RT-PCR检测蓝舌病病毒的VP7基因并进行序列比对,电镜观察病毒粒子,证实分离到蓝舌病病毒,命名为GD/ST2014.进一步扩增VP2基因,进行系统发育树分析,以及血清中和试验,表明此分离株为血清型7型.这是国内首次报道牛源蓝舌病病毒血清型7型的分离鉴定.

摘要： 紫葳科植物密花角蒿Lncarvillea compacta Maxim.是一种多年生草本,分布于甘肃、四川、青海、西藏.其保肝、护肝和抗肿瘤等作用受到广泛关注.本实验对密花角蒿从药材分子鉴定,活性筛选,化学结构分析,计算机模拟技术,肝保护活性作用的靶点,及抗活性验证等方面进行研究.

摘要： 近年来,在四川乐山地区凤尾菇(Pleurotus pulmonarius)栽培中,首次发现一种形态与草菇类似的大型真菌类污染菌.该菌在栽培场中的污染率可达60％以上,对凤尾菇的生产造成较大威胁.经初步鉴定为小包脚菇属的木生小包脚菇[Volvariella diplasia(Berk.&Broome)Singer].该菌子实体形态与草菇类似,菌丝耐低温,可在4°C冰箱中保藏;原基形成和子实体发育温度范围广(13°C～33°C);子实体丛生或单身,单粒种可达20g以上,具有一定的开发价值.

摘要： 短体线虫是一类重要的迁移性植物寄生线虫,破坏植物地下组织引起坏死和腐烂,还能诱发病原真菌或细菌的复合侵染,本文对短体线虫属的分类以及分子检测研究进展进行了综述.

摘要： 短体线虫是一类重要的迁移性植物寄生线虫,破坏植物地下组织引起坏死和腐烂,还能诱发病原真菌或细菌的复合侵染,本文对短体线虫属的分类以及分子检测研究进展进行了综述.

摘要： 本发明描述了鉴定所需分子的方法，以及编码它的核酸分子，和它的结合配体。制备了来自表达该靶的细胞的cDNA文库，并在宿主细胞中表达。用经处理除去了干扰结合配体的样品筛选宿主细胞的裂解物，所述的处理包括将样品与未转染的宿主细胞的裂解物接触，以及将样品与用制备cDNA文库的相同载体转染或转化的宿主细胞的裂解物接触。本发明还包括用该方法鉴定的抗原和cDNA。

摘要： 印度紫檀（

摘要： 小叶紫檀（

摘要： 本发明描述了鉴定所需分子的方法,以及编码它的核酸分子,和它的结合配体。制备了来自表达该靶的细胞的cDNA文库,并在宿主细胞中表达。用经处理除去了干扰结合配体的样品筛选宿主细胞的裂解物,所述的处理包括将样品与未转染的宿主细胞的裂解物接触,以及将样品与用制备cDNA文库的相同载体转染或转化的宿主细胞的裂解物接触。本发明还包括用该方法鉴定的抗原和cDNA。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴定红带锥蝽的分子特异性标记物及分子鉴定方法，所述分子特异性标记物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述分子鉴定方法包括如下步骤：S1.提取待测样本基因组DNA；S2.以步骤S1所述基因组DNA为模板，以SEQ ID NO：2～3所示引物对进行PCR扩增；S3.取适量步骤S2的PCR扩增产物电泳检测，若特异性扩增出大小约为615bp的条带，则对该PCR扩增产物进行测序；S4.若步骤S3的PCR扩增产物与SEQ ID NO.1的相似性在95%以上，即可判断待测样品为红带锥蝽。本发明的分子鉴定方法不需要传统分类相关领域的专业分类知识就可以简单快速有效的在分子生物学水平对红带锥蝽进行分子鉴定；且成本低廉、操作简单、鉴定准确率高。

摘要： 本发明公开了一种用于黄连分子鉴定的标准基因数据库，核苷酸序列为序列表中的序列，包括黄连属植物的ycf1序列矩阵，包含全球已知的19种黄连属植物，分子鉴定方法包括一：样品总DNA提取；二：PCR扩增ycf1基因片段；三：对ycf1序列测序结果进行拼接，获得ycf1基因片段；四：构建样品的ycf1序列NJ树；五：根据NJ树判断。本发明的优点：设计了适用于黄连属植物的ycf1序列扩增的特异性引物对，可以高效获取目标序列；无论伪品黄连来自于国内还是国外，都能准确鉴定；传统方法在黄连属中的鉴定效率仅为20％‑40％，而本发明的ycf1序列鉴定效率在95％以上，极大地提高了中药黄连分子鉴定的成功率。

摘要： 大果紫檀（Pterocarpus macarocarpus Kurz），其材质硬，密度高，被用作高级家具。因为心材生长速度慢，形成心材需要的时间较长，市场供不应求，市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，大果紫檀的假冒品泛滥，如何准确鉴定大果紫檀成为大果紫檀交易市场上的最大难题。本发明提供一种用于大果紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定大果紫檀，具有快速、准确、对样品损伤小等特点。

摘要： 大红酸枝（Dalbergia cochinchinensis Pierre ex Laness），又称交趾黄檀，是蝶形花科黄檀属植物，心材密度高、坚硬、细腻、花纹美观，被用作高级家具。因为心材生长速度慢，形成心材需要的时间较长，市场供不应求，市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，大红酸枝的假冒品泛滥，如何准确鉴定大红酸枝成为大红酸枝交易市场上的最大难题。本发明提供一种用于大红酸枝分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定大红酸枝，具有快速、准确、对样品损伤小等特点。

摘要： 海南黄花梨（Pterocarpus santalinus），又名降香黄檀，是蝶形花科黄檀属植物。因为材质优良，加之分布区域小、成材周期长、现存资源量少，其市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，海南黄花梨的假冒品泛滥，如何准确鉴定海南黄花梨成为海南黄花梨交易市场上的最大难题。本发明提供一种用于海南黄花梨分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定海南黄花梨，具有快速、准确、对样品损伤小等特点。

摘要： 檀香（Santalum album linn），是檀香科檀香属植物，其心材有强烈香气，是贵重的药材和名贵的香料。因为心材生长速度慢，形成心材需要的时间较长，市场供不应求，市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下，檀香的假冒品泛滥，如何准确鉴定檀香成为檀香交易市场上的最大难题。本发明提供一种用于檀香分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法，应用该方法来鉴定檀香，具有快速、准确、对样品损伤小等特点。