布鲁氏菌

摘要： 本试验旨在运用分子生物学与生物信息学方法对布鲁氏菌DnaJ蛋白进行分析;将该蛋白进行原核表达,并检验纯化蛋白在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应的能力。以布鲁氏菌M5-90为模板成功扩增目的基因DnaJ,构建重组表达载体pET-30a-DnaJ;利用SDS-PAGE检测DnaJ重组蛋白在大肠杆菌中的表达,并对其进行纯化;用DnaJ蛋白刺激RAW 264.7细胞和小鼠脾细胞,并用DnaJ蛋白免疫小鼠;利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-4及小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体水平的变化。结果显示,DnaJ蛋白二级结构以无规则卷曲结构为主,该蛋白有11个抗原决定簇;SDS-PAGE结果显示,重组菌在37.7 kDa大小的位置有特异表达条带,获得了DnaJ纯化蛋白;DnaJ蛋白可诱导宿主细胞和小鼠产生高水平IFN-γ、IL-4、IgG1和IgG2a抗体。鉴于DnaJ蛋白可在体外或体内诱导Th1和Th2型免疫反应,有望成为布鲁氏菌病的候选亚单位疫苗。

摘要： 布鲁氏菌病由布鲁氏菌引起,其可通过皮肤、黏膜、消化道和呼吸道侵入人体[1]。布鲁氏菌病的症状多种多样,最常见的临床特征是发热、多汗、乏力、肌肉关节疼痛。骨关节受累是其最常见的并发症,如多关节痛、脊柱炎、骶髂关节炎、髋关节炎、骨髓炎等[2]。布鲁氏菌引起的假体关节感染(periprosthetic infection, PJI)极其罕见[3]。

摘要： 旨在研究牛种布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统(T4SS)对巨噬细胞内质网应激和细胞凋亡的影响,深入探究布鲁氏菌的分子致病机制。本研究以牛种布鲁氏菌疫苗株A19及其T4SS启动子缺失株A19ΔVirB侵染小鼠巨噬细胞,分别在侵染的6、12、24 h收集细胞RNA和总蛋白,通过qRT-PCR以及Western blot检测内质网应激标志性分子(GRP78和CHOP)、凋亡相关分子(BAX和BCL-2)的转录水平和蛋白表达水平;通过流式细胞术检测不同时间点的细胞凋亡情况。结果显示,在侵染的6、12和24 h,缺失株A19ΔVirB组GRP78的转录水平及蛋白表达水平均显著低于亲本株A19组(P<0.05);在侵染后的6 h,缺失株组CHOP的转录水平及蛋白表达水平也显著低于亲本株(P<0.05),但到了24 h,出现了显著高于亲本株(P<0.05)的现象;在侵染的24 h,缺失株A19ΔVirB组BAX的转录水平及蛋白表达水平显著高于亲本株(P<0.05);而在侵染的24 h,缺失株组BCL-2的转录水平及蛋白表达水平显著低于亲本株(P<0.05);流式结果进一步显示,在侵染的24 h,缺失株组的细胞凋亡率显著高于亲本株(P<0.05);本试验的结果表明,T4SS缺失后,会导致牛种布鲁氏菌引起内质网应激的能力减弱,诱导细胞凋亡的能力增强。本研究为进一步解析布鲁氏菌的致病机制奠定了基础,也为今后布鲁氏菌T4SS的功能研究提供了科研依据。

摘要： 布鲁氏菌是一种革兰氏阴性短小杆菌,可以在很多种家畜体内存活,是一种人畜共患病原菌。该病给畜牧业和人类健康带来严重的危害,如果预防、治疗措施不当,会给养殖者带来经济损失。

摘要： 为了研究和探讨布鲁氏菌核糖体L7/L12蛋白对鼠源树突状细胞(BM-DCs)分化和成熟的影响,用布鲁氏菌S2疫苗株为模板扩增L7/L12基因,构建重组质粒pET30a-L7/L12,用大肠埃希菌原核表达系统进行诱导表达,并用Ni柱对表达的蛋白进行纯化。用IL-4和GM-CSF诱导培养鼠源DCs,用脂多糖(LPS)和L7/L12蛋白刺激DCs后检测其表面共刺激分子和炎症因子的变化。结果表明,重组蛋白在1 mmol·L^(-1)的IPTG、16°C过夜的条件下以可溶性形式高效表达,其大小为18 ku,纯度达到93%以上并有一定的反应原性。流式细胞仪检测被刺激的BM-DCs细胞表面CD40、CD80等抗原分子的表达显著(P<0.05)高于空白对照组。qPCR结果显示,炎性细胞因子TNF-β、IL-1β、IL-12极显著(P<0.01)高于空白对照组。重组L7/L12蛋白具有刺激DCs细胞分化、成熟和促进炎症因子释放的功能。

摘要： 【目的】阐明牛体表寄生草原革蜱与牛羊布鲁氏菌病的相关性,为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查及防控提供基础数据。【方法】通过传统形态学及分子生物学相结合的方法,对呼伦贝尔地区采集的191只蜱虫进行种型鉴定;以牛体表采集的寄生蜱为材料,应用布鲁氏菌选择性培养基从蜱体内分离可疑细菌;将可疑细菌进行分离培养,菌落的形态学观察,以及革兰氏染色和柯氏染色镜检初步鉴定可疑细菌的种属;经PCR方法扩增布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,并应用MEGA 7.0软件构建系统遗传进化树;运用AMOS-PCR、单项特异性血清凝集试验、染料抑菌和噬菌体裂解试验对分离的可疑菌进行分型鉴定。【结果】该地区优势蜱种被鉴定为草原革蜱,并成功在其体内分离到4株可疑细菌;经革兰氏染色镜检发现该菌属于革兰氏阴性短杆菌,柯氏染色后菌体呈红色短杆菌,并通过PCR方法成功克隆出布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,经过基因序列测序及BLAST比对分析,发现与布鲁氏菌参考序列相似度均在99.0%以上。应用MEGA 7.0软件成功构建遗传进化树,分离菌株序列与布鲁氏菌属的已知序列聚类在同一分支;运用AMOS-PCR和布鲁氏菌常规分型鉴定试验,确定4株分离菌均属于羊种布鲁氏菌。【结论】成功在呼伦贝尔地区牛体表采集的草原革蜱体内分离到4株羊种布鲁氏菌,表明草原革蜱作为吸血节肢动物,可能在不同宿主之间的布病传播过程中发挥重要作用。本论文为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查和防控提供基础数据。

摘要： 【目的】分析布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的蛋白结构及细胞定位,筛选宿主细胞内与其存在相互作用的靶蛋白,为后续研究BPE005的生物学功能奠定基础。【方法】通过生物信息学软件对BPE0005的蛋白结构进行初步分析;构建PDRRED2-C1-BPE005重组荧光定位载体,转染人胚肾上皮细胞293T,通过扫描激光共聚焦显微镜观察BPE005的细胞定位;构建PGBKT7-BPE005诱饵载体,验证诱饵载体是否有细胞毒性和自激活现象;以小鼠巨噬细胞RAW264.7 mRNA的cDNA文库为AD文库菌液,检测文库滴度,通过酵母双杂交系统筛选宿主细胞内与BPE005相互作用的靶蛋白。【结果】布鲁氏菌分泌蛋白BPE005属于疏水性蛋白,内含有大量的无规则卷曲、α-螺旋和延伸链。成功构建PDRRED2-C1-BPE005荧光定位载体和PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体,BPE005定位于宿主细胞核。PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体无酵母细胞毒性和自激活现象,AD文库菌液滴度>2×10^(7)/mL,筛选出4个宿主细胞内与BPE0005存在相互作用的蛋白:RNA聚合酶Ⅱ多肽G、补体因子H、鸟苷酸环化酶2G及颗粒蛋白。经复筛、测序、BLAST比对、一对一验证后,最终筛选出1个在宿主细胞内与BPE005具有较强相互作用的靶蛋白(RNA聚合酶Ⅱ多肽G)。对该蛋白的作用网络分析表明,RNA聚合酶Ⅱ多肽G对宿主细胞内mRNA的转录和合成具有重大影响。【结论】布鲁氏菌分泌蛋白BPE005定位于宿主细胞核,在宿主细胞内可与RNA聚合酶Ⅱ多肽G产生较强相互作用,对进一步阐明布鲁氏菌感染过程中关键效应分子的作用机制具有指导意义。

摘要： 布鲁氏菌病是一种常见的牛羊等动物源传染性疾病,人与动物均可感染,属于人畜共患病,多发生于牧区,不仅会对牛羊造成极大的危害,还会严重影响人体健康和食品安全,传播速度快,范围广,且感染率较高,对牛羊养殖业经济效益造成严重威胁。对此,相关养殖场应全面了解牛羊布鲁氏菌病的流行病学,掌握诊断方法并根据当地疾病感染的情况,积极采取有效防控措施,加强对该种疾病的管理。本文详细阐述了牛羊布鲁氏菌的诊断与防控措施,以供参考。

摘要： 本文介绍了滕州市人畜间布鲁氏菌病概况及特点,指出2011~2015年间开展布鲁氏菌调查的抽样与检测方法,并对结果进行分析与讨论,提出防治措施。

摘要： 目的建立并评估基于微流控芯片(MC)技术检测布鲁氏菌(简称布氏菌)核酸的方法,以提高布鲁氏病(简称布病)的诊断能力。方法设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程。设计微流控全自动核酸检测(MC⁃PCR)与基因测序符合性测试、与实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)、TaqMan探针法检测比较实验;评估MC⁃PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最低检出限。结果研究组与对照组核酸溶解曲线图纵坐标峰值所对应的横坐标一致,呈现单一的溶解峰,温度相同,表示为相同的扩增产物。核酸不同提取方法之间Ct值差异有统计学意义(P0.05)。基因测序的Kappa值为0.659,与MC⁃PCR具有高度的一致性,MC⁃PCR与基因测序阳性结果符合率100%,总符合率82.5%。准确性:结果符合率为100%;特异性:结果阴性率100%;重复性:结果均可以检出布氏菌;检出限:浓度为825 copies/mL时,MC⁃PCR与qPCR、TaqMan探针法检出率差异有统计学意义(χ^(2)=24.699,P<0.05),经两两比较,MC⁃PCR检出率高于qPCR和TaqMan探针法。精密度:结果均可以检出布氏菌。结论MC⁃PCR检测布氏菌核酸的检测方法安全、快捷、及时、精准,可以应用于临床。这将提高布病诊断率,对布鲁氏菌病的防治起到重要作用。

摘要： 从某疑似感染布鲁氏菌宠物犬全血中分离到一株细菌,对其进行纯化培养、染色镜检,PCR扩增其16SrDNA基因片段,将扩增的产物纯化后测序,用NCBI软件对测序结果进行同源性检索,结果显示其与布鲁氏菌同源性达到100％;应用DNAStar软件进行16S rDNA序列相似性分析,结果分离菌株与布鲁氏菌16S rDNA核苷酸序列相似性达到了99.4％,表明分离菌株为布鲁氏菌.而分离菌株是犬型还是牛、羊型布鲁氏菌还需要进一步研究.

摘要： 近几年研究表明,在特定的生长条件下,布鲁氏菌能够形成一种护鞘鞭毛结构,这种鞭毛可能在布鲁氏菌于宿主内的持续感染中发挥重要作用.为了解布鲁氏菌鞭毛结构功能信息及其可能致病机理,探索其应用价值,通过查阅相关文献,从布鲁氏菌鞭毛镜下观察、基因表达调控、免疫原性及毒力、免疫逃避、群体感应等方面对其研究现状做综合阐述.

摘要： 为了探究自噬作用对布鲁氏菌(Brucella)在巨噬细胞(MΦ)内增殖活力的影响,本研究首先将体外培养的MΦ细胞分组,分别采用自噬激活剂-雷帕霉素(Ra)或抑制剂-3-MA处理细胞,并在不同处理的细胞组中接种表达绿色荧光的重组猪种布鲁氏菌(rB.suis-GFP),在接种后0.5～24h后,一方面通过细胞中LC3-Ⅱ含量及MΦ内B.suis数量的测定,另一方面通过激光共聚焦显微镜观察LC3-Ⅱ与B.suis共定位情况.结果显示,感染B.suis后0.5h,MΦ即可发生自噬作用,并且Ra+MΦ+B.suis组LC3-Ⅱ含量显著高于其他组,显示B.suis的感染能够促进MΦ内LC3-Ⅱ的形成,增强MΦ的自噬作用;另一方面,Ra+MΦ+B.suis组胞内B.suis数量均显著高于3-MA+MΦ+B.suis组与MΦ+B.suis组,显示自噬作用能够促进B.suis在MΦ内的增殖;但随着胞内B.suis数量的增加,各组LC3-Ⅱ的水平却逐渐下降,这表明MΦ感染B.suis数量达饱和后,MΦ虽然启动自噬作用而杀灭了部分B.suis,但却不能完全抑制B.suis在MΦ内大量增殖.

摘要： 巨噬细胞(Macrophage,MΦ)是布鲁氏菌(Brucella,Bru)的主要宿主细胞,为了探明Bru感染与MΦ泛素-蛋白酶体功能之间的关系,本研究在应用蛋白酶体抑制剂Lactacystin与促进剂IFN-γ的基础上,对MΦ感染Bru后细胞上清中泛素、蛋白酶体及胞内Bru数量进行了检测.结果显示,IFN-γ与Lactacystin对MΦ泛素的表达均有明显的促进作用,且IFN-γ效果显著优于Lactacystin;其次IFN-γ有效促进了MΦ蛋白酶体的表达,而Lactacystin显著抑制了MΦ蛋白酶体的表达.在此基础上,将Bru感染不同状态的MΦ,在0.5h～24h分别进行胞内Bru计数,研究表明,一方面Bru的感染促进了MΦ泛素及蛋白酶体的表达;另一方面,泛素蛋白酶体系统功能的增强,显著降低了Bru的早期感染,但对于Bru感染中后期作用不明显,而感染后期抑制MΦ蛋白酶体功能,却可显著降低Bru的胞内增殖能力.

摘要： 目的：检测与分析河南省2014-2016年登封市布鲁氏菌生物型别及PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征,为布鲁氏菌病的病原学监测,暴发预警、溯源提供基线数据. 方法：采集试管凝集试验(SAT)阳性病人静脉血10ml,双相血培养瓶分离培养,热裂解法制备DNA模板,AMOS-PCR鉴定4种布鲁氏菌型别;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术和BioNumerics6.0软件进行分子分型与聚类分析. 结果：阳性病例以青壮年男性职业和密接人群为主;分离培养的30株布鲁氏菌经鉴定28株为羊种,2株为牛种.羊种布鲁氏菌经XbaⅠ酶切与脉冲场凝胶电泳后,共获得了2种带型,带型相似度在97.7％-100％之间;牛种布鲁氏菌可分为2种带型,带型相似度96.3-100％. 结论：河南省监测哨点医院人感染布鲁氏菌存在羊种和牛种两种型别,羊种为优势型别;羊种与牛种菌株在PFGE带型特征上存在较大差异度.

摘要： 布鲁氏菌属为α-变形菌纲(α-proteobacteria)中的成员,是一种短小杆状、无鞭毛、无芽胞,兼性厌氧、胞内寄生的革兰氏阴性的病原菌.根据该病菌在生化、染色、噬菌体、宿主等特性上的差异,目前分为6个种,即马耳他或羊种(B.melitensis)、流产或牛种(B.abortus)、猪种(B.suis)、沙林鼠种(B.neotomae)、绵羊附睾种(B.ovis)和犬种(B.canis) 布鲁氏菌,其中有些还可再分成不同的生物变型;此后还分离到海洋哺乳类动物的布鲁氏菌,但没有明确其分类地位.一般地,羊种、牛种和猪种布鲁氏菌的致病性强,造成的危害大.布鲁氏菌脂多糖是革兰氏阴性菌细胞外壁层的主要成分，也是革兰氏阴性菌细胞壁中独有的成分，其化学组成因种而有一定差别。LPS作为布鲁氏菌的毒力基因，是其主要的致病因子，在对宿主细胞的侵袭、胞内生存繁殖、逃逸宿主先天免疫以及建立慢性持续感染等方面起到关键作用。同时，LPS又是布鲁氏菌细胞表面的主要抗原，一方面在诱导宿主机体产生免疫保护起到重要作用，另一方面实用的血清学检测技术在布鲁氏菌病诊断上目前仍是无可替代的办法。粗糙型突变菌株为布鲁氏菌病新型疫苗的研制开辟了一条新途径。

摘要： 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导途径之一,对炎症的发生、发展起重要调控作用,本文明确布鲁氏菌感染后对宿主细胞免疫系统的影响及其信号通路激活机制,为寻找新型的布鲁氏菌控制策略提供新的方向和奠定理论基础.结果表明粗糙型布鲁氏菌可以强烈的激活MAPK信号通路(ERK,P38和JNK，光滑型布鲁氏菌则很弱的或者不激活MAPK信号通路。细胞因子IL-1,TNF-α的表达量与P38的激活信号通路无关;LPS可能没有直接作用于MAPK通路。

摘要： Omp25与布鲁氏菌的毒力和免疫原性有密切关系，通过分析Omp25的结构分析及Omp25的研究进展，到目前为止，研究者们发现在布鲁氏菌导致病畜不孕不育及流产中都检测到Omp25蛋白发挥了重要的作用;利用Omp25基因构建的DNA疫苗对布鲁氏菌也有一定的免疫作用。Omp25蛋白不仅是布鲁氏菌的结构蛋白和功能蛋白，而且是布鲁氏菌致病的毒力因子之一，又有很好的免疫抗原性，因此对其及其基因的深人研究是十分有必要的，可以为布鲁氏菌病的诊断、分型和新型疫苗的研制提供理论上的支持。

摘要： 布鲁氏菌是一种兼性胞内寄生菌,能在宿主体内长期生存并引起世界范围内的流行病,严重危害公共卫生安全.有研究表明,与其他分离株相比,布鲁氏菌中国分离株存在一定的特异性.因此,利用比较基因组学分析中国分离株全基因组水平的变异性对菌株溯源、诊断和防控等方面具有重要的意义.本研究分析147株完整基因组序列,并与中国分离株比较,利用比较基因组学和生物信息学分析筛选中国分离株特异性SNPs位点.全基因组SNPs构建的进化树表明,羊种布鲁氏菌中国分离株处于同一进化分支,并存在9个特异性SNPs位点.9个特异性SNPs位点中,3个SNPs能引起错义突变.将特异性SNPs位点与其他分离地点明确的羊种布鲁氏菌比较,结果发现,47株羊种完整基因组布鲁氏菌分离株中,仅有分离地点离中国较近的5株中东地区分离株均存在中国特异性SNPs位点.进化分析表明,尽管羊种布鲁氏菌分离株存在多样性,但是中国分离株具有一定的特异性,且菌株来源相对单一.本研究表明羊种布鲁氏菌中国分离株的特异性和遗传特征,为羊种布鲁氏菌中国分离株的来源提供基础数据,有助于研究中国羊种布鲁氏菌的流行特征.

摘要： 布鲁氏菌是可以感染包括人类在内的多种哺乳动物的胞内病原,对发展中国家的畜牧业和人类健康构成威胁.迄今为止,在布鲁氏菌中已经鉴定出许多与细胞内运输和增殖有关的基因,然而,布鲁氏菌是如何使用转录后精细的基因表达调控从而适应环境的变化并逃避宿主细胞抵御尚不完全清楚.细菌sRNAs在转录后调控中起着重要作用,这在许多细菌中已经得到证实,但是sRNAs在布鲁氏菌中的作用仍然不明确.在本研究中,在布鲁氏菌中鉴定了多个sRNAs,发现,当过表达这些sRNAs后,其中一个sRNA,初步称为BASI74,可以导致布鲁氏菌在巨噬细胞内毒力改变.将牛种布鲁氏菌2308培养于酸性培养基中,其BASI74表达量增加.此外,BASI74影响布鲁氏菌细胞在最小营养培养基和缺铁培养基中的生长率.使用双质粒报告系统,鉴定了四个基因可能为BASI74的靶标.其中一个靶基因BABI1154被预测编码胞嘧啶-N4特异性DNA-甲基转移酶,该酶保护布鲁氏菌细胞DNA不受限制性内切酶的影响.这些结果提示BASRCⅠ74可能是通过调控环境应激相关基因或影响限制-修饰系统而对牛种布鲁氏菌在巨噬细胞内的毒力发挥调控作用.本研究为揭示sRNA相关的转录后调控及布鲁氏菌致病机理的解读提供了重要的依据.

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的基因及其在布鲁氏菌毒力评价以及制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明利用同源重组的方法，以卡那霉素基因替换布鲁氏菌M28核糖体基因L31，构建了布鲁氏菌L31基因缺失株M28ΔL31。利用巨噬细胞RAW264.7和Babl/c小鼠模型评价了布鲁氏菌L31基因对布鲁氏菌M28毒力的影响。结果显示：L31基因缺失后并不会对M28的生长产生影响，但能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞系RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力，M28ΔL31中将L31基因回补后其毒力能够恢复到野生株水平，证实该基因是布鲁氏菌M28的毒力相关基因。本发明的提出预示该毒力基因可能用于布鲁氏菌新疫苗的研发，具有潜在的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的small RNA及其在制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明应用Northern blot证明在布鲁氏菌强毒株M28中存在sRNA Clu7，利用同源重组的方法，构建了该sRNA缺失株M28ΔClu7，以鼠巨噬细胞RAW264.7和Balb/c小鼠为模型评估了该sRNA对M28毒力的影响。结果显示该sRNA缺失后能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力。在接种第5周时，M28ΔClu7从小鼠体内完全清除，与M28相比毒力显著下降。小鼠攻毒保护实验显示：免疫M28ΔClu7对小鼠抵抗强毒M28感染的保护效果达到了疫苗株M5‑90的保护力。以上结果预示着sRNA Clu7对布鲁氏菌的毒力有巨大的决定作用。本发明的提出对揭示布鲁氏菌毒力机制起到了巨大的推动作用。为布鲁氏菌新候选疫苗株的研发提供了新的技术手段。

摘要： 本发明提供了一种布鲁氏菌菌影菌株、布鲁氏菌菌影疫苗及制备方法，涉及生物技术领域，本发明提供的布鲁氏菌菌影菌株，包括含有噬菌体裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因的布鲁氏菌菌株。其中，噬菌体裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因在布鲁氏菌菌株内可分别表达噬菌体裂解蛋白E和金黄色葡萄球菌核酸酶A，二者均能够以生物灭活的方式得到布鲁氏菌抗原。与传统灭活方式相比，本发明提供的布鲁氏菌菌影菌株保留了细菌表面抗原决定簇的天然结构，接种后更能有效的激发机体的免疫反应。

摘要： 本发明公开了羊种布鲁氏菌疫苗株M5提取的脂多糖在作为人布鲁氏菌病诊断抗原中的应用。本发明发现从羊种布鲁氏菌疫苗株M5提取的LPS抗原作为诊断抗原的反应性明显优于目前市面上布病抗体快速检测试剂盒常用的布菌牛种S19株和布菌猪种S2株提取的LPS抗原，说明羊种布鲁氏菌疫苗株M5可以作为新的布病金标诊断LPS抗原的首选来源株，其提取的LPS对人感染布病具有较好的诊断价值，为人布病感染诊断抗原的选择提供了新的途径。本发明还发现无害化处理后的羊种布鲁氏菌疫苗株M5提取的LPS抗原并不影响其抗原性。

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的基因及其在布鲁氏菌毒力评价以及制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明利用同源重组的方法，以卡那霉素基因替换布鲁氏菌M28核糖体基因L31，构建了布鲁氏菌L31基因缺失株M28ΔL31。利用巨噬细胞RAW264.7和Babl/c小鼠模型评价了布鲁氏菌L31基因对布鲁氏菌M28毒力的影响。结果显示：L31基因缺失后并不会对M28的生长产生影响，但能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞系RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力，M28ΔL31中将L31基因回补后其毒力能够恢复到野生株水平，证实该基因是布鲁氏菌M28的毒力相关基因。本发明的提出预示该毒力基因可能用于布鲁氏菌新疫苗的研发，具有潜在的应用价值。

摘要： 本发明公开了区分犬布鲁氏菌和其它布鲁氏菌的PCR引物及检测方法，属于生物检测技术领域。所述引物包括：BSU：5'—GCAGGTCGTTACCGTCGATC—3'；BCD：5'—CAATATCCGCAACGCCTCTTG—3'；BSD：5'—CATCAAGCCGCATCGCAGC—3'。本发明利用特异性引物构建检测犬布鲁氏菌和其它布鲁氏菌的PCR检测方法，该方法可特异性地检测犬布鲁氏菌和其他布鲁氏菌，有利于对犬布鲁氏菌感染种类进行区分，更有效地进行布病的净化和防控。

摘要： 本发明提供一种用于鉴别牛种布鲁氏菌与其它种布鲁氏菌的试剂盒，该试剂盒包被有SEQ ID NO.2所示蛋白和布鲁氏菌BP26蛋白。本发明发现SEQ ID NO.2所述蛋白或其编码基因可用于区分牛种布鲁氏菌与其它种布鲁氏菌。本发明提供鉴别牛种布鲁氏菌与其它种布鲁氏菌感染血清的iELISA检测试剂，该试剂含有前述两种蛋白，或含有前述两种蛋白的N端或C端融合有His标签的重组蛋白。本发明提供的iELISA检测试剂能够快速鉴别家畜血清中牛种疫苗免疫或野毒与其它种(羊，猪，犬等)疫苗免疫或野毒的抗体，解决畜群中布鲁氏菌种型鉴定难的问题，为家畜布鲁氏菌病的病原鉴定、疫苗选择和畜群净化提供参考。

摘要： 本发明公开了羊种布鲁氏菌疫苗株M5提取的脂多糖在作为人布鲁氏菌病诊断抗原中的应用。本发明发现从羊种布鲁氏菌疫苗株M5提取的LPS抗原作为诊断抗原的反应性明显优于目前市面上布病抗体快速检测试剂盒常用的布菌牛种S19株和布菌猪种S2株提取的LPS抗原，说明羊种布鲁氏菌疫苗株M5可以作为新的布病金标诊断LPS抗原的首选来源株，其提取的LPS对人感染布病具有较好的诊断价值，为人布病感染诊断抗原的选择提供了新的途径。本发明还发现无害化处理后的羊种布鲁氏菌疫苗株M5提取的LPS抗原并不影响其抗原性。

摘要： 本发明提供了一种布鲁氏菌菌影菌株、布鲁氏菌菌影疫苗及制备方法，涉及生物技术领域，本发明提供的布鲁氏菌菌影菌株，包括含有噬菌体裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因的布鲁氏菌菌株。其中，噬菌体裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因在布鲁氏菌菌株内可分别表达噬菌体裂解蛋白E和金黄色葡萄球菌核酸酶A，二者均能够以生物灭活的方式得到布鲁氏菌抗原。与传统灭活方式相比，本发明提供的布鲁氏菌菌影菌株保留了细菌表面抗原决定簇的天然结构，接种后更能有效的激发机体的免疫反应。

摘要： 本申请提供了经修饰的布鲁氏菌菌株、其作为药物的用途、及其作为用于治疗和/或预防布鲁氏菌病的药物的用途。已通过使wzm基因失活对布鲁氏菌菌株进行了修饰。此外，本申请提供了包含经修饰的布鲁氏菌菌株的药物组合物、该药物组合物作为药物的用途、以及该药物组合物作为用于治疗和/或预防布鲁氏菌病的药物的用途。本申请还提供了包含经修饰的布鲁氏菌菌株和药学上可接受的载体或稀释剂的试剂盒，以及其在治疗和/或预防布鲁氏菌病中的用途。