牛支原体

摘要： 本文首先调查病牛的感染情况和发病症状,然后解剖死亡牛只,最后采集病牛肺脏组织进行细菌分离和PCR鉴定。结果发现,死亡牛只的胸膜与心包膜发生粘连,肺切面呈大理石样,是胸膜肺炎的典型特征。此外,牛支原体和多杀性巴氏杆菌PCR检测结果均为阳性。由此得出结论:该次疾病是牛支原体以及荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌引起的混合感染。

摘要： 为了解宁夏中南部地区牛支原体感染及遗传变异情况,采用PCR方法,对来自宁夏中南部9个县区规模场、屠宰场和交易市场的495份牛鼻拭子样本进行PCR检测及菌株分离鉴定。结果显示:495份样本中,经PCR检出阳性59份,总体阳性率为11.92%,9个县区的阳性率为1.82%~21.82%,规模场、屠宰场、交易市场阳性率分别为11.11%、13.33%、12.59%;共分离出16株疑似牛支原体菌株,经oppF基因特异性引物扩增、测序比对及建立分离株系统发育树,结果有4株被确定为牛支原体;进一步用分离株16S rRNA序列与支原体代表株构建系统发育树,结果发现分离菌株与国际标准株PG45、宁夏菌株Ningxia-1亲缘关系最近。药敏试验发现,分离菌株对苯唑西林、链霉素、环丙沙星、多黏菌素B、阿莫西林、哌拉西林、头孢唑林、氨苄西林不敏感。结果表明,宁夏中南部地区牛支原体流行较为普遍,流行菌株未发生较大的基因变异,但对部分抗生素产生了耐药。建议宁夏中南部地区加强对牛支原体病的防控,临床防治时要结合药敏试验,选用敏感药物,适当联合用药和穿插用药,避免产生耐药性。本研究为宁夏中南部地区牛支原体病防控和临床用药提供了参考。

摘要： 牛支原体是导致牛呼吸系统疾病、乳腺炎和关节炎的主要病原体,但经常被大家忽视。牛支原体在畜牧生产中,经常给养殖户造成严重的经济损失。它在世界各地都有被发现,并在过去十年中蔓延到了新的地区。像所有细菌一样,牛支原体天生对某些抗生素具有抗药性,因为它没有细胞壁;此外,越来越多的证据表明牛支原体菌株正在对抗生素(包括四环素)产生抗药性,如目前养殖户经常用的替米考星和壮观霉素。目前没有可用于控制牛支原体感染的疫苗。本文简介了牛支原体的特点,以期为研究人员提供参考,并有助于养殖户减少损失。

摘要： [目的]提高牛支原体病治疗效果。[方法]应用微量肉汤稀释法对宁夏地区分离鉴定的74株牛支原体进行药物敏感性分析。[结果]恩诺沙星的MIC分布范围最小,MIC50与MIC90最小,其次是大观霉素、庆大霉素和卡那霉素;试验菌株对大观霉素的耐药率最低(12%),其次为恩诺沙星(22%),对庆大霉素和卡那霉素的耐药率最高且相同(36%);肺分离株耐药性最强,关节液分离株次之,乳汁分离株最弱。[结论]恩诺沙星对牛支原体的体外抑菌效果最好,但易产生耐药性,应注意用药剂量和时长;肺分离株耐药性最强可能与呼吸道感染牛支原体的概率大且频繁使用抗生素有关。

摘要： 牛支原体最早于1961年被确认为感染牛的病原体;。2008年,我国首次从疑似肺炎牛的肺部分离出牛支原体;。支原体没有细胞壁,取而代之的是具有不同表面脂蛋白的细胞膜。它们用于生物附着并引起宿主的各种免疫反应。生物体也可以在生物膜中产生并存活,正是这种加上宿主免疫反应的可变逃避,使生物体得以存活并引起疾病;。牛支原体能引起牛的肺炎、关节炎、乳腺炎等疾病,危害养牛业健康发展。

摘要： 为了解广西马山县肉牛主要疫病的抗体检测情况,对马山县11个乡镇的400份牛血清进行口蹄疫O型抗体、布鲁氏菌抗体和牛支原体抗体检测,结果显示,口蹄疫O型抗体个体阳性率为98%(392/400),群体阳性率为100%(45/45);牛布鲁氏菌抗体均为阴性;牛支原体个体阳性率为2%(92/400),群体阳性率为60.0%(27/45)。结果表明,马山县肉牛没有布鲁氏菌病感染,但有牛支原体感染,其口蹄疫O型疫苗免疫覆盖度高,起到很好的免疫保护效果。

摘要： 牛支原体是世界养牛业的一种有害病原体,会引起肺炎、多发性关节炎和传染性乳腺炎等,还与脑膜炎、角结膜炎、中耳炎和流产的爆发有关。与牛支原体相关的大多数疾病往往是慢性的,会引起体重、牛肉品质和牛奶产量下降,增加发病率,在某些情况下还会导致死亡率升高。

摘要： 本研究旨在建立牛支原体Taqman探针实时荧光定量PCR方法,便于临床上快速检测、诊断牛支原体病。本研究根据牛支原体TU基因(登录号:CP002188.1)设计合成特异性引物及Taqman探针,并通过试验检验所建立的检测方法的特异性和灵敏性。本研究建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线的截距为46.20,斜率为-3.24,相关系数为-0.996,提示标准品的浓度与Ct值呈线性关系。方法性能评价显示,所建方法的组内及组间重复性变异系数均低于0.02,说明所建方法的重复性好;灵敏性试验中,目的基因最小检出浓度为19.1 copies/μL,敏感性是常规PCR(1.91×10^(4)copies/μL)的1 000倍。试验结果表明,本研究建立的牛支原体荧光定量PCR方法,具有精确、敏感、特异等优点,可为临床上快速检测牛支原体病提供技术支撑。

摘要： 牛支原体在全球范围内分布广泛,可引起动物呼吸道疾病、乳房炎、关节炎、中耳炎和生殖系统疾病等,给全球养牛业造成严重的经济损失。牛支原体疾病往往具有高度传染性,且用一般药物治疗的效果并不理想,加上现阶段尚无有效的牛支原体疫苗,因此需要快速准确的诊断来预防和控制牛支原体疾病。本文综述了各种可用于诊断牛支原体疾病的方法,并分析其优缺点,旨在为有效防控牛支原体疾病提供参考。

摘要： 为了确定牛支原体recA是否也具有介导DNA重组的活性,从牛支原体PG45菌株基因组中克隆recA基因片段,构建至原核表达质粒pET-28a中,摸索表达条件,采用Ni-NTA树脂纯化而获得纯度较高的重组recA蛋白,并进行DNA重组酶活性试验。结果表明,重组蛋白以可溶性表达的最优条件为16°C、800μmol/L IPTG、诱导30 h;而DNA重组酶活性试验结果表明,重组的牛支原体recA蛋白具有介导同源DNA重组酶活性。这将为构建牛支原体高效的定向遗传操作系统、探究recA基因在牛支原体DNA损伤修复中的生物学功能和机制等奠定基础。

摘要： 牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)是由细菌或病毒引起的牛肺炎、运输热、支气管肺炎等牛呼吸道疾病的统称,是目前危害中国肉牛产业的主要疫病之一.BRDC在全世界范围内普遍存在,据统计,65％的牛病与BRDC有关,其死亡率可达35％甚至更高,每年给畜牧业造成数十亿美元的损失.引起BRDC的主要细菌性病原有A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multoeida,PmA)、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mb)和牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)等.常规病原诊断方法包括病原分离鉴定、PCR检测等,其结果准确可靠,但易造成病原的漏检,且Mb营养要求高,生长较慢,体外培养困难.多重PCR是一种快速检测病原的方法,在国内外已经有广泛的研究,但是目前还没有用于同时检测牛呼吸道疾病PmA、Mh和Mb三种病原的PCR方法.由于临床上牛A型多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和牛支原体这三种病原常常发生混合感染,给疾病诊断和临床用药带来了困难,因此,建立一种同时检测这三种病原的便捷技术,对有效防控牛呼吸道疾病细菌性感染具有重要意义.

摘要： 为了研究牛支原体广西分离株的致病性,试验采用10株牛支原体广西分离株(G12、BS2、LA、GL1、BS1、NN4、NN5、GL3、NN1和GG)进行同等剂量注射到7日龄的健康SPF鸡胚尿囊腔上,连续培养7天,观察胚体的生长变化情况,同时收集尿囊液进行PCR鉴定.结果表明,10株牛支原体分离株都表现为100％的感染率,鸡胚病死率为10％～50％,尤其以BS2攻毒的病死率最高;死亡胚中,其胚体表面有充血、出血的现象;与阴性对照组和空白对照组相比,大部分存活胚的胚体发育缓慢;10组感染组尿囊液中的DNA经PCR扩增得到相应的目的片段,说明鸡胚感染了牛支原体.综合以上数据,初步筛选出较强毒力的牛支原体广西分离株BS2株.

摘要： 本文对牛支原体免疫逃避方面的知识进行了总结，牛支原体膜表面蛋白的高频率相位和大小变异在其逃避宿主免疫应答过程中发挥了重要的作用。牛支原体与宿主免疫细胞相互作用能产生免疫增强及免疫抑制两种现象，其细胞成分能够调节单核细胞/巨噬细胞和自然杀伤性细胞的活性，诱导大量的负责上调或者下调免疫应答的细胞因子和趋化因子的产生。

摘要： 牛支原体(Mycoplasma bovis)是感染牛的一种重要的致病性病原体,可导致牛肺炎、耳炎、乳腺炎、关节炎、角膜炎、流产或不孕等多种疾病.本研究从湖北恩施爆发牛支原体的肉牛场(70头引种肉牛出现20％的死亡),分离得到一株牛支原体命名为HB2015,并对其进行了冻干保存以及进化分析,为牛支原体的防控提供理论依据.

摘要： 为了确定一步恒温检测试剂盒是否适用于牛支原体,将实验室保存的M.bovis分离株复苏培养物用固体培养、PCR和恒温检测法3种方法进行鉴定.结果显示:3种方法都可以鉴定培养物中支原体的存在;与固体培养法相比,一步恒温检测法的结果用肉眼就能清晰可见;与PCR法相比,一步恒温检测法操作简单,实验周期短,但恒温检测法的特异性较差,不能区分不同种间的支原体.因此应采用PCR和恒温检测法相结合的方法进行鉴定.

摘要： 牛支原体是危害养牛业的重要病原之一,导致以肺炎为主的多种临床症状,疫苗免疫是预防该病的重要手段,但目前我国尚无相关产品问世.本论文以地方临床分离株为亲本株,制备了牛支原体灭活疫苗,所用佐剂包括传统白油佐剂、ISCOM佐剂及Seppic 206佐剂等,利用犊牛模型评价了不同佐剂作用下灭活疫苗在牛体的免疫效果.评价方法综合考虑了临床症状、病理变化、排菌分菌情况、日增重水平和抗体水平等多项指标.结果显示,不同佐剂对疫苗的免疫效果产生较大影响,Seppic 206佐剂灭活疫苗的免疫保护最好,其次为ISCOMS,白油佐剂的免疫保护效果最差.

摘要： 牛支原体是一种主要引起任何月龄肉牛和奶牛呼吸系统疾病和关节炎的重要病原,给世界各国的肉牛和奶牛养殖业造成了巨大的经济损失.目前尚无有效的方法能够预防该病.本实验室前期通过体外传代成功已获得牛支原体外致弱株P150和P180.本研究通过动物试验对其进行保护效力评价,通过临床症状的观察,抗体和细胞因子检测,确定两者都对牛支原体有较好的保护效力,且P150更适合作为牛支原体弱毒疫苗候选株.

摘要： 本实验旨在建立一种多重PCR方法，用于同时鉴别牛支原体和两种常见混合感染菌。分别针对多杀性巴氏杆菌A型特异的hyaC—hyaD基因区段、化脓隐秘杆菌的16S rRNA基因上保守区段和牛支原体的UvrC基因设计特异性引物，多重PCR的最佳扩增条件确定为：95°C 10分钟预变性后;95°C 1min，56°C 50s，72°C 1min，循环30次;72°C 10分钟进行延伸反应。特异性试验证明，该多重PCR可同时扩增出以上三种致病菌的特异性片段，不能扩增出其他病原菌的相关片段;敏感性试验证明可检测到多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和牛支原体的最低浓度分别为8×105CFU／mL，8×105CFU／mL和4×106CFU／mL。用该方法检测了牛支原体肺炎患牛的鼻拭子与肺组织，发现12 h预增菌后肺组织检测与牛支原体培养的阳性符合率为92％。鉴于对临床样本进行牛支原体分离培养需要3-4天时间，而该多重PCR结合12h预增菌，能在24h内出结果，显著加快了临床诊断速度，具有推广应用价值。

摘要： 牛支原体(mycoplasma bovis)是一种能够引起肉牛和奶牛多种疾病的重要病原体,也是牛呼吸道综合症的重要病原体之一。牛支原体除了导致肺炎、乳腺炎外,还可导致关节炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎症、流产与不孕等多种疾病。在临床病例中牛支原体引起的疾病没有典型症状,且常常与其他多种致病菌混合感染,与其他疾病难以区分,所以极易被忽视。文章从病原学和流行病学角度对牛支原体进行分析，介绍了临床症状和病理变化，探讨了病原体的分离鉴定、基因检测、血清学检测和免疫组化等诊断方法，分析了当今疫苗研究的进展，提出了治疗和预防的综合防治措施。

摘要： 牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重要的纤溶酶原结合蛋白从而与细菌粘附宿主细胞的能力相关。我们第一次证明了牛支原体细胞表面具有结合纤溶酶原的能力。并且我们在大肠杆菌中以可溶性形式表达出重组的牛支原体烯醇化酶。通过抗牛支原体烯醇化酶抗血清应用western blot与EusA方法牛支原体中烯醇化酶被证明同时存在于细胞的胞浆部分与胞膜部分。同时，牛支原体烯醇化酶被证明是牛支原体膜蛋白组分中的最主要的一种纤溶酶原结合蛋白。所有的实验数据表明与表面相关的牛支原体烯醇化酶能够加强牛支原体粘附宿主细胞的能力。

摘要： 本发明公开了一种牛支原体免疫相关性蛋白、含有该蛋白的检测试剂盒及其在牛支原体抗体检测中的用途。所述的牛支原体免疫相关性蛋白，命名为p28蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。敏感性实验证明，本发明的一种牛支原体血清抗体ELISA检测试剂盒(MbH试剂盒)其最低可以检测出为1：2560稀释倍数的阳性血清，特异性实验证明，该试剂盒的特异性为97.8％，与牛传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性血清、口蹄疫(FMD)阳性血清、牛结核(MB)阳性血清、牛病毒性腹泻(BVDV)阳性血清、牛传染性鼻气管炎(IBRV)阳性血清不发生发生特异性反应，并且具有良好的稳定性以及较高的准确性。本发明的提出为牛支原体抗体的检测提供了一种新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴定牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。本发明保护引物对甲和引物对乙和引物对丙组成的引物组合。引物对甲由序列1所示的引物F1和序列2所示的引物R1组成。引物对乙由序列3所示的引物F2和序列4所示的引物R2组成。引物对丙由序列5所示的引物F3和序列6所示的引物R3组成。采用引物对甲和引物对乙和引物对丙，通过三重二温式PCR检测牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒，具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点，可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明为牛病的防控提供了新的技术方法，具有很高的临床应用价值。

摘要： 本发明提供了一种牛传染性鼻气管炎病毒与牛支原体二联灭活疫苗及其制备方法与所用悬浮MDBK细胞。本发明提供了悬浮MDBK细胞，在此基础上建立了悬浮培养IBRV抗原病毒液的方法，采用该方法所得的IBRV抗原病毒液具有抗原含量高、抗原批量大、批次稳定等特点，而且避免了因培养基中加入的牛血清引起的副反应，在节约经济成本的同时又能生产出更加安全和高效的疫苗。同时本发明的IBRV与MB二联灭活疫苗一针可防两病，简化免疫程序，减少了动物的免疫次数，降低了动物的应激，也节省了劳动力，进一步降低了动物养殖的成本。

摘要： 本发明公开了牛支原体(Mycoplasma bovis)分泌蛋白MbovP725在制备防治牛支原体感染的药物中的用途，所述牛支原体分泌蛋白MbovP725的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述牛支原体分泌蛋白MbovP725能以剂量依赖性抑制脂多糖诱导的牛巨噬细胞和牛乳腺上皮细胞IL‑1β，IL‑6，TNF‑α的表达从而发挥抗炎作用，同时还能作为磷酸酶与底物进行酶促反应，从而抑制MAPK信号通路关键蛋白分子的磷酸化表达，在防治牛支原体感染方面具有很好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种牛支原体免疫相关性蛋白、含有该蛋白的检测试剂盒及其在牛支原体抗体检测中的用途。所述的牛支原体免疫相关性蛋白，命名为p28蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。敏感性实验证明，本发明的一种牛支原体血清抗体ELISA检测试剂盒(MbH试剂盒)其最低可以检测出为1：2560稀释倍数的阳性血清，特异性实验证明，该试剂盒的特异性为97.8％，与牛传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性血清、口蹄疫(FMD)阳性血清、牛结核(MB)阳性血清、牛病毒性腹泻(BVDV)阳性血清、牛传染性鼻气管炎(IBRV)阳性血清不发生发生特异性反应，并且具有良好的稳定性以及较高的准确性。本发明的提出为牛支原体抗体的检测提供了一种新的技术手段。

摘要： 本发明属于动物疫病病原快速诊断领域，尤其是一种牛支原体专用快速培养基及牛支原体的分离纯化方法，由牛支原体液体培养基和牛支原体固体培养基组成，在原有配方的基础上添加脱氧核糖核苷酸钠、牛心汤及牛肺消化液，增加了酵母浸出液的用量，减少了血清的添加量。改良后的牛支原体液体培养基接种牛支原体培养24h颜色即可变为黄色，且蛋白含量最高可达1.58‑1.69 mg/mL。将培养24h变黄的牛支原体液体培养基接种于牛支原体固体培养基后48h即可观察到典型的牛支原体“油煎蛋”样菌落。本发明的牛支原体培养基提高了牛支原体的生长效率，且提高了牛支原体分离纯化的成功率，为牛支原体的快速诊断、治疗和防控提供了宝贵的时间，并降低了牛支原体的培养成本。

摘要： 本发明提供了可重复的牛支原体刺激模型和方法，以可靠地诱导并建立牛支原体感染引起的疾病或失调，通过向动物施用有效量的牛支原体培养物。本发明刺激培养物的施用量足以引起牛支原体特异的细胞或体液免疫反应。本发明的牛支原体刺激模型可用来评价潜在的疫苗的效价。

摘要： 本发明涉及通过给药动物有效量的猪肺炎支原体疫苗来治疗或预防动物体内由牛支原体感染所致的疾病或病症的方法。所述猪肺炎支原体疫苗可以是灭活后的完整或部分的细胞，或者是经过修饰的活的制品，亚单位疫苗，或核酸，或DNA疫苗。依照本发明给药的猪肺炎支原体疫苗可以是合成的或重组制备的。

摘要： 本发明涉及一种牛支原体、牛结核分枝杆菌、牛多杀性巴氏杆菌的三重PCR快速诊断试剂盒。所述试剂盒的PCR引物为牛支原体oppD基因序列、牛多杀性巴氏杆菌Pm‑kmt基因序列、牛结核分枝杆菌IS6110基因序列的特异性引物。本发明通过对单一PCR进行优化后建立了三重PCR，通过优化试验，确定该三重PCR的最佳扩增条件为：94°C10min预变性；94°C1min，58°C50s,72°C1min，循环30次；72°C10min延伸。本发明提供的试剂盒，可用于牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌、牛结核分枝杆菌单一和混合感染的鉴别诊断。试验结果证明试剂盒具有准确、快速、特异强、灵敏度高的特点，能有效检出牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌、牛结核分枝杆菌，具有较好的重复性。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴定牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。本发明保护引物对甲和引物对乙和引物对丙组成的引物组合。引物对甲由序列1所示的引物F1和序列2所示的引物R1组成。引物对乙由序列3所示的引物F2和序列4所示的引物R2组成。引物对丙由序列5所示的引物F3和序列6所示的引物R3组成。采用引物对甲和引物对乙和引物对丙，通过三重二温式PCR检测牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒，具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点，可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明为牛病的防控提供了新的技术方法，具有很高的临床应用价值。